樹鼩mhc?drb1*1101基因序列及其應(yīng)用
【專利摘要】本發(fā)明公開樹鼩MHC?DRB1*1101基因序列及其應(yīng)用，其核苷酸基因序列如SEQ ID No.1所示；該樹鼩MHC?DRB1*1101基因序列應(yīng)用于建立HCV模型，大大提高建立樹鼩HCV模型的效率，并且減少資源的損失。結(jié)合已經(jīng)建立成功的HCV樹鼩模型，可能為該疾病的治療找到一個(gè)新的靶點(diǎn)，為下一步開展HCV樹鼩模型的治療研究提供一個(gè)最基本資料，為開展的樹鼩其它等位基因研究提供一個(gè)開始。
【專利說明】
樹鼠句MHC-DRB1 *1101基因序列及其應(yīng)用
技術(shù)領(lǐng)域
[0001 ] 本發(fā)明設(shè)及生物技術(shù)領(lǐng)域，具體設(shè)及樹駒MHC-DRB1* 1101基因序列及其應(yīng)用。
【背景技術(shù)】
[0002] 丙型肝炎病毒(Aepatitis C Wrt/s，肥V)感染在中國和世界范圍內(nèi)已成為慢性肝 炎、肝硬化和肝細(xì)胞癌的主要病因之一。目前全球約有1.7億肥V感染者，中國有3700~4000 萬。HCV感染的主要危險(xiǎn)因素是靜脈注射吸毒和輸血。每年新增病例約300~400萬，其中80% 的感染者會發(fā)展為慢性肝炎，30%進(jìn)展為終末期肝病，包括肝硬化、肝癌等。HCV急性感染后 可引起機(jī)體一系列固有及適應(yīng)性免疫反應(yīng)。15~25%的HCV感染可被宿主免疫反應(yīng)所自限清 除，而大多數(shù)則呈慢性持續(xù)性感染，發(fā)展為慢性活動(dòng)性肝炎、肝硬化及肝細(xì)胞癌。HCV的高度 變異性、泛嗜性、免疫耐受、免疫損傷等因素，是導(dǎo)致HCV感染慢性化的重要原因。
[0003] 雖然目前聚乙二醇干擾素和利己韋林的聯(lián)合應(yīng)用明顯提高了對慢性丙型肝炎患 者的治療效果，但仍有近50%的患者表現(xiàn)出持續(xù)性的病毒反應(yīng)。運(yùn)可能與不同個(gè)體的遺傳學(xué) 差異有關(guān)，此種差異可能是導(dǎo)致機(jī)體對HCV感染表現(xiàn)出不同的免疫反應(yīng)的原因。近年來國內(nèi) 外有關(guān)宿主遺傳基因與疾病關(guān)系的研究表明，人類白細(xì)胞抗原（At/man ieucocjte an tigen，HLA)在宿主免疫基因系統(tǒng)的免疫應(yīng)答中起著舉足輕重的作用，編碼HLA抗原的主 要組織相容性復(fù)合體(major 是脊椎動(dòng)物中一個(gè)與免 疫相關(guān)的多基因家族，是生物體重要的免疫遺傳系統(tǒng)，也是目前已知的多態(tài)性最豐富的一 個(gè)基因系統(tǒng)，擁有極大數(shù)量的等位基因，賦予種群巨大潛力W適應(yīng)多變的內(nèi)外環(huán)境，其豐富 的等位基因水平被認(rèn)為是生物體識別外來寄生物(細(xì)菌、病毒、原生動(dòng)物及其他寄生蟲和隧 菌體)能力的重要部分。目前關(guān)于HCV感染的宿主遺傳背景研究主要有4個(gè)方面，目陽CV清除、 HCV易感性、肥V持續(xù)性、HCV進(jìn)展至肝硬化。就目前而言，HCV感染的宿主遺傳背景的研究主 要集中在HCV的清除方面。
[0004] 已經(jīng)有眾多的研究結(jié)果表明HLA等位基因與HCV清除有關(guān)，雖然其它許多等位基因 存在爭議，但HLA-DQBl*0301、DRBl*ll(n和DRB1*1301是S個(gè)已為不同研究者在多個(gè)種族的 研究中所證實(shí)的慢性丙型肝炎患者中有利于HCV清除的保護(hù)性基因位點(diǎn)，其可能的機(jī)制是 DQB1*0301、DRB1*1101和DRB1*1301基因能有效地將HCV遞呈給T淋己效應(yīng)細(xì)胞，激活或介導(dǎo) 細(xì)胞免疫反應(yīng)，從而發(fā)揮對HCV感染的保護(hù)作用。
[0005] 樹駒（tree shrews, 7Y/j〇aia beJangeri)是一類樹棲的攀駒目（Scanc/entia)樹駒 科（rwaiinae)，外型酷似松鼠的小型哺乳動(dòng)物，進(jìn)化上接近靈長類，分布與菲律賓、印度和 我國西南部地區(qū)，我國主要分布于云南、廣西、海南等地。我國有2個(gè)種、6個(gè)亞種，云南省最 豐富。昆明地區(qū)主要分布的是濱西亞種（化oaia公eJangeri CAinaosis)，由于樹駒其特殊 的分類地位和體型小，經(jīng)濟(jì)易得，易馴養(yǎng)，繁殖能力強(qiáng)，方便實(shí)驗(yàn)操作、飼養(yǎng)成本低，新陳代 謝等生理特征和解剖結(jié)構(gòu)比犬、鼠等動(dòng)物更接近于非人靈長類動(dòng)物，W及存在諸多自發(fā)性 疾病等特性，自上世紀(jì)80年代開始，就相繼用于替代或減少一些非人靈長類動(dòng)物的使用，用 W作為某些人類重大疾病研究的動(dòng)物模型，在醫(yī)學(xué)實(shí)驗(yàn)中已被廣泛應(yīng)用。如丙型肝炎動(dòng)物 模型、乙型肝炎模型、手足口病模型、內(nèi)分泌系統(tǒng)疾病等。
[0006] 近幾年對樹駒開發(fā)利用已進(jìn)入了一個(gè)新的發(fā)展時(shí)期，在建立HCV動(dòng)物模型方面也 取得了較好的進(jìn)展，然而，目前對樹駒的群體遺傳結(jié)構(gòu)還知之甚少，特別是關(guān)于樹駒MHC方 面研究的國內(nèi)還沒有報(bào)道，運(yùn)極大地限制了其在疾病動(dòng)物模型研究的應(yīng)用，也是其品系資 源創(chuàng)制的瓶頸。故有必要發(fā)掘和利用樹駒對HCV易感、抗病的基因，為開展人類HCV模型建 立、藥物篩選、安全性評價(jià)W及濱西亞種樹駒的遺傳監(jiān)測等提供科學(xué)依據(jù)。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0007] 本發(fā)明目的在于提供樹駒MHC-DRB1*1101基因序列及其應(yīng)用，為高效建立理想的 HCV樹駒模型提供保障。
[000引本發(fā)明通過下列技術(shù)方案實(shí)現(xiàn):樹駒MHC-DRB1*1101基因序列，其核巧酸基因序列 如沈Q ID No. 1所示。
[0009] 所述樹駒MHC-DRB 1*1101基因序列，其引物序列為： 引物序列上：5'-GTT TCT TGG AGT ACT CTA CGT C-3' 引物序列下：5'-CTG CAC TGT GAA GCT CTC AC-3'。
[0010] 本發(fā)明的另一個(gè)目的在于提供所述樹駒MHC-DRB1*1101基因序列在HCV模型建立 上的應(yīng)用。
[0011] 本發(fā)明的核巧酸序列能用多種方法獲得。例如，用本領(lǐng)域熟知的雜交技術(shù)分離核 巧酸序列。運(yùn)些技術(shù)包括但不局限于：（1)用探針與基因組或cDNA文庫雜交W檢出同源的核 巧酸序列;和(2)表達(dá)文庫的抗性篩選W檢出具有共同結(jié)構(gòu)特征的克隆的核巧酸序列片段。
[0012] 本發(fā)明具備的優(yōu)點(diǎn)及效果： 人HLA-DRB1*1101基因與肥V病毒清除感染有關(guān)，即攜帶HLA-DRB1*1101等位基因的人 群不容易感染HCV病毒;而現(xiàn)在用樹駒建立HCV模型效率仍很低，一些樹駒不容易感染HCV病 毒，鑒于此，發(fā)掘樹駒體內(nèi)與HCV病毒清除有關(guān)的DRB1*1101基因，在建模之前對樹駒DRB1* 1101基因進(jìn)行檢測，如果結(jié)果為陽性，則不用來感染肥V病毒，而篩選DRB1*1101基因呈陰性 的樹駒來感染HCV，運(yùn)樣將會大大提高建立樹駒HCV模型的效率，并且減少資源的損失。另 夕h本發(fā)明提供基因序列是與HCV清除有關(guān)的有效基因，序列大小為267bp，在本物種是第一 次被檢測發(fā)現(xiàn)，本序列對運(yùn)個(gè)群體的遺傳背景提供了很重要的信息，為開展其他疾病動(dòng)物 模型研究提供一個(gè)最基本資料，并且為大量高效建立HCV動(dòng)物模型提供最首要信息。
[0013]另外HCV急性感染后可引起機(jī)體一系列固有及適應(yīng)性免疫反應(yīng)。15~25%的HCV感 染可被宿主免疫反應(yīng)所自限清除，而大多數(shù)則呈慢性持續(xù)性感染，發(fā)展為慢性活動(dòng)性肝炎、 肝硬化及肝細(xì)胞癌。其中被宿主自限清除的原因和機(jī)制迄今尚不完全清楚，特別DRB1*1101 對HCV的清除的調(diào)控機(jī)制知之甚少，用現(xiàn)代分子遺傳學(xué)，尋找運(yùn)些疾病相關(guān)的具體基因或相 關(guān)DNA序列，是病因?qū)W研究的切入點(diǎn)之一。本基因序列的發(fā)現(xiàn)就起到了運(yùn)樣一個(gè)作用。
[0014]本發(fā)明提供的基因序列在人類已被明確證實(shí)是HCV有效清除的一個(gè)基因，即也是 一個(gè)抗病的基因，W該基因入手，結(jié)合已經(jīng)建立成功的HCV樹駒模型，可能為該疾病的治療 找到一個(gè)新的祀點(diǎn)，為下一步開展HCV樹駒模型的治療研究提供一個(gè)最基本資料，為開展的 樹駒其它等位基因研究提供一個(gè)開始。
【附圖說明】
[001引圖1為本發(fā)明所得樹駒MHC-DRB1*1101基因序列與genebank中最相似的序列 (AC234247.1)的比對圖。
【具體實(shí)施方式】
[0016]下面結(jié)合附圖和實(shí)施例對本發(fā)明作進(jìn)一步詳細(xì)說明，但本發(fā)明保護(hù)范圍不局限于 所述內(nèi)容，實(shí)施例中使用的試劑和方法，如無特殊說明，均采用常規(guī)試劑和使用常規(guī)方法。 [0017]實(shí)施例1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物:濱西亞種樹駒（rt/jOaia beJangeri cAinaosis)，由中國醫(yī)學(xué)科學(xué)院醫(yī)學(xué)生 物學(xué)研究所樹駒種質(zhì)資源中屯、提供。
[0018] 主要試劑：SanPrep柱式DNA提取試劑盒(購自生工生物工程有限公司）；SanPr邱柱 式DNA膠回收試劑盒(購自生工生物工程有限公司）;D冊a菌種(購自北京百泰克生物技術(shù)有 限公司）；PMD19-T載體（購自寶生物工程有限公司）；化i s-base、化2抓TA ? 2此0、冰乙酸、10 XPCR Buffer、dNTP MixtureUXTAE緩沖液、瓊脂糖、花青素（核酸染料）、DNA Marker (DL2000)、無菌雙蒸水、無水乙醇、0. lMCaCl2溶液、NaCl (重慶川東化工有限公司）、 P;rptone、Yeast Extract(生工生物工程有限公司）、Aga;r(日本）、瓊脂糖（香港）。
[0019 ] 引物：參照人類已知的HLA-DRB 1*1101基因序列引物對樹駒MHC-DRB1 * 1101進(jìn)行了 擴(kuò)增。
[0020] 引物序列上：5'-GTT TCT TGG AGT ACT CTA CGT C-3' 引物序列下：5'-CTG CAC TGT GAA GCT CTC AC-3' 根據(jù)上述材料，樹駒MHC-DRB 1 * 1101基因序列獲取的步驟如下： (1)取200ul新鮮、冷凍或加入各種抗凝劑的血液，放入1.5ml離屯、管。（對如果全血起始 量小于200ul，則用緩沖液BB補(bǔ)足到200ul。如果起始量介于200~300ul之間，則后續(xù)操作需 要按比例增加試劑用量。） (2 )加入20u 1蛋白酶K( 20mg/ml)溶液，室溫15分鐘（期間顛倒混勻幾次），加入200ul結(jié) 合液CB，立刻劇烈顛倒輕搖，充分混勻，70°C放置10分鐘，溶液變清亮。
[0021] (3)加入lOOul異丙醇（陳舊血加200ul異丙醇），劇烈顛倒輕搖，充分混勻，此時(shí)可 能會出現(xiàn)絮狀沉淀。
[0022] (4)將上一步所得溶液和絮狀沉淀都加入一個(gè)吸附柱中，（吸附柱放入收集管中） 100(K)巧m離屯、30秒，倒掉收集管中的廢液。
[0023] 巧)加入500ul抑制物去除液IR，12000巧m離屯、30秒，棄掉廢液。
[0024] (6)加入700ul漂洗液WB，12000巧m離屯、30秒，棄掉廢液。
[00巧](7)加入500111漂洗液州8)，12000巧111離屯、30秒，棄掉廢液。
[0026] (8)將吸附柱放回空收集管中，13000rpm離屯、2分鐘，盡量出去漂洗液，W免漂洗液 中殘留乙醇抑制下游反應(yīng)。
[0027] (9)取出吸附柱，放入一個(gè)干凈的離屯、管中，在吸附膜的中間部位加 lOOul洗脫緩 沖液EB(洗脫緩沖液事先在65~70°C水浴中預(yù)熱），室溫放置3~5分鐘，12000巧m離屯、1分 鐘。將得到的溶液重新加入離屯、柱中，室溫放置2分鐘，12000rpm離屯、1分鐘。
[00%] (10)采用分光光度法測定其含量和吸光度值，存放在2~8°C下備用。
[0029] 其DNA擴(kuò)增步驟如下： (11 )PCR的體系：將PCR緩沖液80ul、雙蒸水105.8ul和化q酶巧U/ul) 1.2ul混勻，取混勻 液體lOul加至PC時(shí)式劑板的污染監(jiān)控孔中（即陰性對照孔）。向剩余的混合液中加 DNA樣品 (50ng/ul)化1，混勻。除污染監(jiān)控孔外，每孔加上述混合液lOul。貼上封板膜，標(biāo)記樣品號。 lOXbuffer 5ul、dNTP 4ul、引物上下各化 1、DNA樣本各 16ul、Taq 0.4u1、H2〇 20.6ul，總共 配成50ul體系進(jìn)行PCR擴(kuò)增;標(biāo)記樣本號。
[0030] (12)熱循環(huán)條件如下：
最后72°C延伸12min。
[0031 ] (13)瓊脂糖凝膠電泳:2.0%瓊脂糖凝膠電泳后在紫外燈下觀察。
[0032] 其瓊脂糖凝膠回收步驟如下： (14)通過瓊脂糖凝膠電泳盡可能將目的DNA片段與其他片段分開，用干凈的手術(shù)刀片 將含目的DNA片段的瓊脂糖凝膠塊切下，放入1.5ml離屯、管中，稱重。
[0033] (15)根據(jù)膠塊的重量和濃度，按每lOOmg瓊脂糖（如膠塊不足lOOmg則用水補(bǔ)充至 lOOmg)加300-600U1 的比例加入Buffer B2。
[0034] 凝膠濃度《1%，每lOOmg凝膠加入300ul Buffer B2; 凝膠濃度>1%，《1.5%，每10〇111旨凝膠加入40〇1118證'6'62; 凝膠濃度>1.5%，《2%，每lOOmg凝膠加入500ul Buffer B2; 凝膠濃度>2%，每lOOmg凝膠加入600ul Buffer B2; (16)將離屯、管置于50°C水浴5-lOmin，間或混勻，直至膠塊完全融化。
[00巧](17)將融化好的溶液全部移入吸附柱，80000 X g離屯、30sec。倒掉收集管中的液 體，將吸附柱放入同一個(gè)收集管中。
[0036] (18)向吸附柱中加入300ul Buffer B2,9000Xg離屯、30sec，倒掉收集管中的液 體，將吸附柱放入同一個(gè)收集管中。（注:Wash Solution首次使用前請檢查是否已加入正確 的無水乙醇。） (19)向吸附柱中加入500ulWash Solution,9000 Xg離屯、30sec。倒掉收集管中的液體， 將吸附柱放入同一個(gè)收集管中。
[0037] (20)重復(fù)步驟6-次。
[0038] (21)將空吸附柱和收集管放入離屯、機(jī)，9000 Xg離屯、Imin。
[0039] (22)在吸附膜中央加入15-40U化lution Buffer，室溫靜置l~2min，9000Xg離屯、 Imin。將所得到的DM溶液置于-20°C保存或用于后續(xù)試驗(yàn)。
[0040] 其基因克隆及測序的步驟為： (23)連接：取膠回收到的PCR產(chǎn)物4ul與pMD19-Tvector 1u1、H2〇 luUsolution I 加1，配成llul的連接體系在16°C進(jìn)行過夜連接。
[0041 ] (24)1~80°C冰箱中取出預(yù)先制備好的DH5a感受態(tài)細(xì)胞懸浮液（lOOul/支），立即 置于冰上解融。
[0042] (25)等DH5a感受態(tài)細(xì)胞懸浮液解融后，立即將連接好的lOul全量連接產(chǎn)物加入 lOOul/支（1.5ml離屯、管)D冊a感受態(tài)細(xì)胞懸浮液中，標(biāo)記樣本號，置冰上冰浴30分鐘。
[0043] (26)42 °C水浴中熱激90秒或37 °C水浴熱激3~5分鐘后，迅速置冰上冰浴3~5分 鐘。
[0044] (27)按上述處理后，分別向上述1.5ml的離屯、管中加入自制的1ml不含氨節(jié)(AMP) 的LB培養(yǎng)基，輕輕震蕩混勻后，在37°C的恒溫震蕩搖床上37°C、250rpm震蕩培養(yǎng)1小時(shí)(使細(xì) 菌恢復(fù)正常生長狀態(tài)，并表達(dá)質(zhì)粒編碼的抗生素，抗性基因 AMPr)。
[0045] (28)將上述培養(yǎng)的菌液，在4000rpm離屯、5分鐘，棄上清液保留400ul左右，混勻菌 液，取200ul涂布于含50ug/mlAMP的篩選LB培養(yǎng)基培養(yǎng)皿上，正面向上放置半小時(shí)，待菌液 完全被培養(yǎng)基吸收后，倒置培養(yǎng)皿，放在細(xì)菌培養(yǎng)箱中，37°C恒溫培養(yǎng)16小時(shí)，細(xì)菌生長良 好，單個(gè)較大菌落比較多，取出，置4°C冰箱保存。同時(shí)做對照組，W相同體積的無菌雙蒸水 代替菌液，其他操作和上述操作相同，對照組正常情況下在含有50ug/ml氨節(jié)的LB培養(yǎng)基培 養(yǎng)皿上應(yīng)無任何菌落出現(xiàn)。
[0046] (29)培養(yǎng)16小時(shí)后，LB培養(yǎng)基平皿上菌落生長良好，雙蒸水代替菌落的培養(yǎng)皿上 無菌落出現(xiàn)。每個(gè)培養(yǎng)平皿中挑5個(gè)單個(gè)較大的圓滑菌落于預(yù)先準(zhǔn)備好的5mlLB液體培養(yǎng)基 (含50ug/ml的氨節(jié)AMP)管中，在恒溫培養(yǎng)搖床，37°C、250巧m恒溫震蕩培養(yǎng)16小時(shí)后，培養(yǎng) 基變得很渾濁，菌液很稠，證明細(xì)菌生長良好，將中管中的菌液取出，80(K)rpm離屯、5分鐘濃 縮菌液，棄上清，保留1.5ml，混勻菌液，標(biāo)記樣本號，送上海生工生物工程有限公司做測序。
[0047] 經(jīng)過上述步驟后，其PCR檢測結(jié)果為MHC-DRB1*1101基因片段的大小分別為267bp， 用分子量DL2000 Marker標(biāo)準(zhǔn)檢測，與預(yù)計(jì)片段符合。
[004引采用測序儀器為：3730x1 DNA Analyzer，測序試劑為：BigDye terminator v3.1， 得到大小片段為26化p的長序列如下： tgtg曰曰get etc曰CC曰曰gt g曰ttctgc曰曰曰ct曰gt曰g曰曰曰曰曰t曰曰曰C曰t 曰曰gc曰曰g曰tt 曰ttg曰cgt曰曰tt曰ttccc曰曰g曰曰曰t曰CC曰t曰曰曰gg曰tggt曰曰tgc曰tgtt曰曰曰曰gg曰tt曰gtgctttt曰C aaaggggttt ttagaagaca ttgeatatet ccacttaaca tatactgactc tctgcactgt cgtagagact g曰曰曰g曰ctgg曰g曰曰c曰t曰曰曰曰gt曰tt曰曰曰曰曰ttgt曰曰tgg曰ctet曰g曰gt c曰曰曰gtgg曰曰曰g曰g曰gt 本次獲得的樹駒MHC-DRB1*1101基因與genebank中沒有找到完全相同的序列，即是樹 駒的一條新的序列，并且通過5個(gè)W上單克隆證實(shí)無誤，并且除了人類外，運(yùn)個(gè)等位基因序 列在其它物種被發(fā)現(xiàn)的也很少。與genebank中最相似的序列（北方樹駒，the northern tree s虹ew，AC234247.1)比對，相似度為90%(見圖1)。
[0049]黑猩猩是迄今為止HCV感染最好的動(dòng)物模型，但由于資源的稀缺，找尋一種經(jīng)濟(jì)、 簡便、容易飼養(yǎng)的動(dòng)物將可能替代運(yùn)個(gè)動(dòng)物成為HCV較好的替代模型，本發(fā)明所得樹駒MHC- DRB1*1101基因的同源性比對得知與genebank中黑猩猩MHC-DRB1*1001(M94942.1)同源性 達(dá) 34.17%、人類化4-〇1?81*1101(41689932.1)的同源性均達(dá)36.53〇/〇。
[(K)加] 將上述樹駒MHC-DRB 1*1101基因序列應(yīng)用于HCV模型的建立，具體步驟如下： (1)挑選濱西亞種樹駒200只（由中國醫(yī)學(xué)科學(xué)院醫(yī)學(xué)生物學(xué)研究所樹駒種質(zhì)資源中屯、 提供）,4-8周齡，雌、雄各半。
[0051] (2)尾部靜脈采血(抗凝處理），按上述常規(guī)方法提取血液DNA樣本。
[0化2] (3)用之前設(shè)計(jì)好的樹駒MHC-DRB1*1101引物和建立好的PCR反應(yīng)體系及反應(yīng)條 件，來擴(kuò)增運(yùn)些DNA樣本。
[0053] (4)跑膠驗(yàn)證結(jié)果：如果樹駒MHC-DRB1*1101基因顯示陽性，貝喊b選出該樣本重新 PCR，進(jìn)行再驗(yàn)證。
[0化4] (5 )只有在至少兩次的重復(fù)性條件下驗(yàn)證為MHC-DRB1 * 1101基因陽性的樣本不用 來感染HCV病毒，而挑選MHC-DRB1 * 1101陰性(也是經(jīng)過重復(fù)性驗(yàn)證為陰性）的樹駒用來建立 HCV模型。
[0055] (6)結(jié)果:樹駒HCV感染模型效果更穩(wěn)定，成模效率更高。
[0化6] 序列表 沈卵ENCE LISTING <110〉
【申請人】名稱中國醫(yī)學(xué)科學(xué)院醫(yī)學(xué)生物學(xué)研究所 < 120〉發(fā)明名稱樹駒MHC-DRB 1*1101基因序列及其應(yīng)用 <160〉 1 <170〉 Patentin version 3.3 <210〉 1 <211〉 267 <212〉 DNA <213〉 Tupaia belangeri <400〉 1 tgtg曰曰get etc曰cc曰曰gt g曰ttctgc曰曰曰ct曰gt曰g曰曰曰曰曰t曰曰曰c曰t曰曰gc曰曰g曰tt 60 曰ttg曰cgt曰曰tt曰ttccc曰曰g曰曰曰t曰cc曰t曰曰曰gg曰tggt曰曰tgc曰tgtt曰曰曰曰gg曰tt曰 120 gtgcttttac aaaggggttt ttagaagaca ttgeatatet ccacttaaca tatactgactc 180 tctgc曰ctgt cgt曰g曰g曰ct g曰曰曰g曰ctgg曰g曰曰c曰t曰曰曰曰gt曰tt曰曰曰曰曰ttgt曰曰tgg 240 曰ctet曰g曰gt c曰曰曰gtgg曰曰曰g曰g曰gt 267 <210〉 2 <213〉 Tupaia belangeri <400〉 2 gtttcttgga gtactctacg tc 22 <210〉 3 <213〉 Tupaia belangeri <400〉 3 ctgcactgtg aagctctcac 20
【主權(quán)項(xiàng)】
1. 樹駒MHC-DRB1*1101基因序列，其核苷酸基因序列如SEQ ID No.l所示。2. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的樹駒MHC-DRB1 * 1101基因序列，其特征在于：所述樹駒MHC-DRB1*1101基因序列的引物序列為： 引物序列上：5'-GTT TCT TGG AGT ACT CTA CGT C-3' 引物序列下:5'-CTG CAC TGT GAA GCT CTC AC-3'。3. -種權(quán)利要求1所述樹駒MHC-DRB1 * 1101基因序列在HCV模型建立上的應(yīng)用。
【文檔編號】C12Q1/68GK106047870SQ201610426258
【公開日】2016年10月26日
【申請日】2016年6月16日
【發(fā)明人】馬開利, 黃璋瓊, 魯帥堯, 吳正存, 江勤芳, 高家紅, 李云, 李聰, 杜廷福
【申請人】中國醫(yī)學(xué)科學(xué)院醫(yī)學(xué)生物學(xué)研究所