一種金槍魚碎肉蛋白肽的制備方法
【專利摘要】本發(fā)明涉及一種金槍魚碎肉蛋白肽的制備方法，將金槍魚碎肉進(jìn)行預(yù)處理，然后加入添加劑制成粗提物，最后酶解而制得。本發(fā)明的制備方法生產(chǎn)周期短，得率高，產(chǎn)品純度高，去除了苦腥味，口感好，并利于人體吸收；為補(bǔ)硒保健食品與藥物開發(fā)提供了一種技術(shù)支持。
【專利說明】
一種金槍魚碎肉蛋白肽的制備方法
技術(shù)領(lǐng)域
[0001]本發(fā)明屬于水產(chǎn)品精深加工技術(shù)領(lǐng)域，尤其涉及一種提高純度與提取率，去除苦腥味、提高口感、利于人體吸收的金槍魚碎肉蛋白肽的制備方法。【背景技術(shù)】
[0002]金槍魚(Tunas)又叫鮪魚、吞拿魚，屬鱸形目鯖科，作為一種深海魚類，金槍魚不僅肉味鮮美，而且營(yíng)養(yǎng)價(jià)值非常高，富含蛋白質(zhì)，不飽和脂肪酸和維生素，以純天然，營(yíng)養(yǎng)價(jià)值高而享譽(yù)國(guó)際市場(chǎng)。金槍魚的主要加工種類有藍(lán)鰭金槍魚，長(zhǎng)鰭金槍魚，黃鰭金槍魚和大眼金槍魚。浙江省是我國(guó)金槍魚加工中心，擁有全國(guó)最大的金槍魚加工基地，金槍魚除了鮮銷夕卜，其加工產(chǎn)品的附加值非常高，一般經(jīng)過冷凍處理用于制作壽司及罐裝食品。
[0003]魚類制備的蛋白肽是一種重要的功能性基料，不僅營(yíng)養(yǎng)豐富，而且具有抗腫瘤、抗衰老、增強(qiáng)機(jī)體免疫、抗氧化等多種保健功能。目前食品、保健品、生物醫(yī)藥以及功能化妝品等領(lǐng)域?qū)︳~類蛋白肽需求日益旺盛。
[0004]傳統(tǒng)魚類蛋白肽的制備工藝是將新鮮的魚清洗干凈，去內(nèi)臟后，采用魚肉直接進(jìn)行勻漿與酶解，然后通過固液分離、膜分離、濃縮與干燥等步驟而獲得，該制備過程得到的產(chǎn)品往往帶有濃重的腥臭味，不僅會(huì)影響消費(fèi)者對(duì)產(chǎn)品的接受性，而且也會(huì)顯著降低其經(jīng)濟(jì)效益。
[0005]為了解決魚類蛋白肽產(chǎn)品腥臭味的問題，有的現(xiàn)有技術(shù)采用魚皮、魚鱗等進(jìn)行蛋白肽的制備，由此獲得的產(chǎn)品雖然腥臭味有所減少，但營(yíng)養(yǎng)價(jià)值大打折扣;有的現(xiàn)有技術(shù)則通過采用多次酶解或?qū)γ附夂蟠之a(chǎn)物進(jìn)行柱層析吸附等技術(shù)以去除腥臭味，該方法在容易造成營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)損失的同時(shí)，還增加了蛋白肽產(chǎn)品的加工難度及生產(chǎn)成本，影響其經(jīng)濟(jì)效益。
【發(fā)明內(nèi)容】

[0006]本發(fā)明的目的在于為了解決傳統(tǒng)蛋白肽制備工藝得到的產(chǎn)品腥臭嚴(yán)重、營(yíng)養(yǎng)價(jià)值不尚的缺陷而提供一種提尚純度與提取率，去除苦腫味、提尚口感、利于人體吸收的金槍魚碎肉蛋白肽的制備方法。
[0007]為了實(shí)現(xiàn)上述目的，本發(fā)明采用以下技術(shù)方案:一種金槍魚碎肉蛋白肽的制備方法，所述制備方法包括以下步驟:a)將金槍魚去污、去魚皮、去骨后的魚肉清洗，攪碎得到碎肉，將碎肉浸入浸泡液中，溫度45-55°C，浸泡時(shí)間3_6h，撈出后用去離子水清洗，用去離子水制成魚漿液；b)將步驟a)得到的魚漿液加入至l-3mol/L的檸檬酸溶液中，溫度4°C，并通入臭氧，超聲震蕩40-60min，13000-15000r/min離心15min后取上清液，加入添加劑，靜置2-4h后 15000r/min離心15min得到沉淀物，沉淀物干燥后在-15°C下保存6-9h，得到粗提物；c)向步驟b)得到的粗提物中加入去離子水，調(diào)節(jié)pH至3.3-4.3，加入復(fù)合酶A，酶解反應(yīng) l-2h后滅酶活，然后調(diào)節(jié)pH至8.5-9.5，加入復(fù)合酶B，酶解反應(yīng)5-6h，得到酶解產(chǎn)物；d)將步驟c)得到的酶解產(chǎn)物采用2200Da超濾膜進(jìn)行超濾處理，收集分子量小于2200Da部分，得到超濾酶解液;玻璃吸附柱中裝填質(zhì)量比為4:3的活性炭與納米銀，超濾酶解液以 30-50mL/min的流速進(jìn)行循環(huán)層析，層析次數(shù)2-4次，然后以12000-150001'/111；[11離心2-4111；[11， 收集上清液，噴霧干燥得到金槍魚碎肉蛋白肽。在本技術(shù)方案中，本發(fā)明以金槍魚魚肉為原材料，工藝步驟簡(jiǎn)單，克服了膠原蛋白傳統(tǒng)工藝缺點(diǎn)產(chǎn)品的生產(chǎn)周期長(zhǎng)、酶解液除雜不徹底、成品具有苦腥味、口感差、產(chǎn)品分子量分布廣，不利于人體吸收的缺點(diǎn)，本發(fā)明的制備方法生產(chǎn)周期短，得率高，產(chǎn)品純度高，去除了苦腥味，口感好，并利于人體吸收。
[0008]本發(fā)明從腥臭味來源上對(duì)海洋魚蛋白肽的制備工藝進(jìn)行分析發(fā)現(xiàn)，其腥臭味的形成除了與海洋魚生長(zhǎng)環(huán)境、新鮮度情況有關(guān)之外，還與海洋魚在加工貯藏過程中脂肪氧化、 蛋白降解后的氨基酸的脫羧與脫氨等有著緊密的聯(lián)系，以新鮮的海洋魚為原料生產(chǎn)的蛋白肽類產(chǎn)品，其腥臭味物質(zhì)主要是脂肪氧化的產(chǎn)物以及蛋白質(zhì)降解成的氨基酸在各種腐敗微生物快速生長(zhǎng)與大量繁殖的情況下進(jìn)一步脫羧、脫氨形成的各種產(chǎn)物。
[0009]本發(fā)明酶解前采用對(duì)碎肉進(jìn)行浸泡，不僅能有效地防止了酶解過程中的脂肪氧化，而且具有抑制腥味臭的功能，采用臭氧對(duì)魚漿液進(jìn)行處理，殺死了微生物，避免了酶解時(shí)微生物、尤其是腐敗微生物的大量繁殖與生長(zhǎng)，防止了蛋白肽在酶解過程中的脫羧、脫氨作用，從而抑制了腥臭味物質(zhì)的生成;魚肉首先用水進(jìn)行多次漂洗，除去魚肉表面的油脂； 酶解產(chǎn)物進(jìn)行循環(huán)層析，促使酶解液中的膠質(zhì)快速沉淀，使油水兩相充分分層，有效除去酶解過程中釋放出來的油脂，脂質(zhì)去除更干凈，防止了油脂的氧化，抑制了腥臭味物質(zhì)的形成。[0〇1〇]作為優(yōu)選，步驟a)中浸泡液由以下重量份的原料組成:色氨酸80-100份、山楂20-25份、兒茶酚14-26份、槲皮素15-25份、沒食子兒茶素30-40份、殼聚糖15-18份、海藻酸鈉 12-15份與水200-350份，魚漿液與浸泡液的質(zhì)量比為1:10。在本技術(shù)方案中，浸泡液主要是為了去除苦腥味。
[0011]作為優(yōu)選，步驟b)中添加劑由以下重量份的原料組成:食鹽3-5份、葡萄糖5-7份、 富硒酵母3-10份、天冬酰胺10-15份、蛋氨酸12-15份，添加劑的加入量為魚漿液質(zhì)量的10-15倍，魚漿液與檸檬酸溶液的料液比為lg: 60mL。在本技術(shù)方案中，硒有抗癌作用、抗氧化作用，能夠增強(qiáng)人體免疫力，科學(xué)界研究發(fā)現(xiàn)，血硒水平的高低與癌的發(fā)生息息相關(guān)。大量的調(diào)查資料說明，一個(gè)地區(qū)食物和土壤中硒含量的高低與癌癥的發(fā)病率有直接關(guān)系，例如:此地區(qū)的食物和土壤中的硒含量高，癌癥的發(fā)病率和死亡率就低，反之，這個(gè)地區(qū)的癌癥發(fā)病率和死亡率就高，事實(shí)說明硒與癌癥的發(fā)生有著密切關(guān)系。同時(shí)科學(xué)界也認(rèn)識(shí)到硒具有預(yù)防癌癥作用，是人體微量元素的“防癌之王”。[0〇12]作為優(yōu)選，步驟d)中活性炭的粒度為600目、比表面積1450m2。[〇〇13]作為優(yōu)選，循環(huán)層析時(shí)在外部施加磁場(chǎng)，磁場(chǎng)的強(qiáng)度為2-2.4T。
[0014]作為優(yōu)選，步驟c)中復(fù)合酶A為胃蛋白酶與胰蛋白酶的混合物，質(zhì)量比為1.5:1，復(fù)合酶B為風(fēng)味蛋白酶與菠蘿蛋白酶的混合物，質(zhì)量比為1:3.2，復(fù)合酶A的加入量為粗提物重量的0.8-1.2%，復(fù)合酶B的加入量為第一次得到的上清液質(zhì)量的1.1-2.3%。[0〇15]作為優(yōu)選，其特征在于，臭氧的濃度為2.5_4ppm。[〇〇16] 作為優(yōu)選，步驟b)中超聲波功率為55-65kw。
[0017]本發(fā)明的有益效果是:本發(fā)明的制備方法生產(chǎn)周期短，得率高，產(chǎn)品純度高，去除了苦腥味，口感好，并利于人體吸收;為補(bǔ)硒保健食品與藥物開發(fā)提供了一種技術(shù)支持。【具體實(shí)施方式】
[0018]以下結(jié)合具體實(shí)施例，對(duì)本發(fā)明作進(jìn)一步的解釋:若未特指，其工藝為現(xiàn)有工藝;本發(fā)明所用原料均可從市場(chǎng)購(gòu)得。
[0019]富硒酵母購(gòu)自武漢能仁醫(yī)藥化工有限公司；胰蛋白酶，胃蛋白酶購(gòu)自國(guó)藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司;風(fēng)味蛋白酶、菠蘿蛋白酶購(gòu)自廣西南寧龐博生物工程有限公司。
[0020]實(shí)施例1一種金槍魚碎肉蛋白肽的制備方法，所述制備方法包括以下步驟:a)將金槍魚去污、去魚皮、去骨后的魚肉清洗，攪碎得到碎肉，將碎肉浸入浸泡液中，溫度45°C，浸泡時(shí)間3h，撈出后用去離子水清洗，用去離子水制成魚漿液;浸泡液由以下重量份的原料組成:色氨酸80份、山楂20份、兒茶酚14份、槲皮素15份、沒食子兒茶素30份、殼聚糖15份、海藻酸鈉12份與水200份，魚漿液與浸泡液的質(zhì)量比為1:10;b)將步驟a)得到的魚漿液加入至lmo 1/L的檸檬酸溶液中，溫度4 °C，并通入臭氧，臭氧的濃度為2.5ppm，超聲震蕩40min，超聲波功率為55kw，13000r/min離心15min后取上清液， 加入添加劑，靜置2h后15000r/min離心15min得到沉淀物，沉淀物干燥后在-15 °C下保存6h， 得到粗提物;添加劑由以下重量份的原料組成:食鹽3份、葡萄糖5份、富硒酵母3份、天冬酰胺10份、蛋氨酸12份，添加劑的加入量為魚漿液質(zhì)量的10倍，魚漿液與檸檬酸溶液的料液比為lg:6〇mL;c)向步驟b)得到的粗提物中加入去離子水，調(diào)節(jié)pH至3.3,加入復(fù)合酶A，酶解反應(yīng)lh后滅酶活，然后調(diào)節(jié)pH至8.5，加入復(fù)合酶B，酶解反應(yīng)5h，得到酶解產(chǎn)物;復(fù)合酶A為胃蛋白酶與胰蛋白酶的混合物，質(zhì)量比為1.5:1，復(fù)合酶B為風(fēng)味蛋白酶與菠蘿蛋白酶的混合物，質(zhì)量比為1:3.2，復(fù)合酶A的加入量為粗提液重量的0.8%，復(fù)合酶B的加入量為第一次得到的上清液質(zhì)量的1.1%;d)將步驟c)得到的酶解產(chǎn)物采用2200Da超濾膜進(jìn)行超濾處理，收集分子量小于2200Da 部分，得到超濾酶解液;玻璃吸附柱中裝填質(zhì)量比為4:3的活性炭與納米銀，活性炭的粒度為600目、比表面積1450m2，超濾酶解液以30mL/min的流速進(jìn)行循環(huán)層析，層析次數(shù)2次，循環(huán)層析時(shí)在外部施加磁場(chǎng)，磁場(chǎng)的強(qiáng)度為2T，然后以12000r/min離心2min，收集上清液，噴霧干燥得到金槍魚碎肉蛋白肽。金槍魚碎肉蛋白肽的得率92%，純度81 %。[〇〇21] 實(shí)施例2一種金槍魚碎肉蛋白肽的制備方法，所述制備方法包括以下步驟:a)將金槍魚去污、去魚皮、去骨后的魚肉清洗，攪碎得到碎肉，將碎肉浸入浸泡液中，溫度50°C，浸泡時(shí)間4h，撈出后用去離子水清洗，用去離子水制成魚漿液;浸泡液由以下重量份的原料組成:色氨酸90份、山楂22份、兒茶酚21份、槲皮素18份、沒食子兒茶素37份、殼聚糖16份、海藻酸鈉13份與水280份，魚漿液與浸泡液的質(zhì)量比為1:10;b)將步驟a)得到的魚漿液加入至2〇 1/L的檸檬酸溶液中，溫度4 °C，并通入臭氧，臭氧的濃度為3.lppm，超聲震蕩50min，超聲波功率為58kw，14000r/min離心15min后取上清液，加入添加劑，靜置3h后15000r/min離心15min得到沉淀物，沉淀物干燥后在-15 °C下保存7h，得到粗提物;添加劑由以下重量份的原料組成:食鹽4份、葡萄糖6份、富硒酵母6份、天冬酰胺 12份、蛋氨酸14份，添加劑的加入量為魚漿液質(zhì)量的11倍，魚漿液與檸檬酸溶液的料液比為lg:60mL；C)向步驟b)得到的粗提物中加入去離子水，調(diào)節(jié)pH至3.8,加入復(fù)合酶A，酶解反應(yīng)1.5h 后滅酶活，然后調(diào)節(jié)pH至8.9，加入復(fù)合酶B，酶解反應(yīng)5.5h，得到酶解產(chǎn)物;復(fù)合酶A為胃蛋白酶與胰蛋白酶的混合物，質(zhì)量比為1.5:1，復(fù)合酶B為風(fēng)味蛋白酶與菠蘿蛋白酶的混合物， 質(zhì)量比為1: 3.2，復(fù)合酶A的加入量為粗提液重量的1.1 %，復(fù)合酶B的加入量為第一次得到的上清液質(zhì)量的1.7%;d)將步驟c)得到的酶解產(chǎn)物采用2200Da超濾膜進(jìn)行超濾處理，收集分子量小于2200Da 部分，得到超濾酶解液;玻璃吸附柱中裝填質(zhì)量比為4:3的活性炭與納米銀，活性炭的粒度為600目、比表面積1450m2，超濾酶解液以40mL/min的流速進(jìn)行循環(huán)層析，層析次數(shù)3次，循環(huán)層析時(shí)在外部施加磁場(chǎng)，磁場(chǎng)的強(qiáng)度為2.3T，然后以13000r/min離心3min，收集上清液， 噴霧干燥得到金槍魚碎肉蛋白肽。金槍魚碎肉蛋白肽的得率95%，純度85%。[〇〇22] 實(shí)施例3一種金槍魚碎肉蛋白肽的制備方法，所述制備方法包括以下步驟:a)將金槍魚去污、去魚皮、去骨后的魚肉清洗，攪碎得到碎肉，將碎肉浸入浸泡液中，溫度55°C，浸泡時(shí)間6h，撈出后用去離子水清洗，用去離子水制成魚漿液;浸泡液由以下重量份的原料組成:色氨酸100份、山楂25份、兒茶酚26份、槲皮素25份、沒食子兒茶素40份、殼聚糖18份、海藻酸鈉15份與水350份，魚漿液與浸泡液的質(zhì)量比為1:10;b)將步驟a)得到的魚漿液加入至3mo 1/L的檸檬酸溶液中，溫度4 °C，并通入臭氧，臭氧的濃度為4ppm，超聲震蕩60min，超聲波功率為65kw，15000r/min離心15min后取上清液，加入添加劑，靜置4h后15000r/min離心15min得到沉淀物，沉淀物干燥后在-15 °C下保存9h，得到粗提物;添加劑由以下重量份的原料組成:食鹽5份、葡萄糖7份、富硒酵母10份、天冬酰胺 15份、蛋氨酸15份，添加劑的加入量為魚漿液質(zhì)量的15倍，魚漿液與檸檬酸溶液的料液比為 lg:60mL；C)向步驟b)得到的粗提物中加入去離子水，調(diào)節(jié)pH至4.3，加入復(fù)合酶A，酶解反應(yīng)2h后滅酶活，然后調(diào)節(jié)pH至9.5，加入復(fù)合酶B，酶解反應(yīng)6h，得到酶解產(chǎn)物;復(fù)合酶A為胃蛋白酶與胰蛋白酶的混合物，質(zhì)量比為1.5:1，復(fù)合酶B為風(fēng)味蛋白酶與菠蘿蛋白酶的混合物，質(zhì)量比為1:3.2，復(fù)合酶A的加入量為粗提液重量的1.2 %，復(fù)合酶B的加入量為第一次得到的上清液質(zhì)量的2.3%;d)將步驟c)得到的酶解產(chǎn)物采用2200Da超濾膜進(jìn)行超濾處理，收集分子量小于2200Da 部分，得到超濾酶解液;玻璃吸附柱中裝填質(zhì)量比為4:3的活性炭與納米銀，活性炭的粒度為600目、比表面積1450m2，超濾酶解液以50mL/min的流速進(jìn)行循環(huán)層析，層析次數(shù)4次，循環(huán)層析時(shí)在外部施加磁場(chǎng)，磁場(chǎng)的強(qiáng)度為2.4T，然后以15000r/min離心4min，收集上清液， 噴霧干燥得到金槍魚碎肉蛋白肽。金槍魚碎肉蛋白肽的得率94%，純度82%。
[0023]以上所述實(shí)施例僅表達(dá)了本發(fā)明的幾種實(shí)施方式，其描述較為具體和詳細(xì)，但并不能因此而理解為對(duì)發(fā)明專利范圍的限制。應(yīng)當(dāng)指出的是，對(duì)于本領(lǐng)域的普通技術(shù)人員來說，在不脫離本發(fā)明構(gòu)思的前提下，還可以做出若干變形和改進(jìn)，這些都屬于本發(fā)明的保護(hù)范圍。因此，本發(fā)明專利的保護(hù)范圍應(yīng)以所附權(quán)利要求為準(zhǔn)。
【主權(quán)項(xiàng)】
1.一種金槍魚碎肉蛋白肽的制備方法，其特征在于，所述制備方法包括以下步驟:a)將金槍魚去污、去魚皮、去骨后的魚肉清洗，攪碎得到碎肉，將碎肉浸入浸泡液中，溫 度45-55°C，浸泡時(shí)間3-6h，撈出后用去離子水清洗，用去離子水制成魚漿液；b)將步驟a)得到的魚漿液加入至l-3mol/L的檸檬酸溶液中，溫度4°C，并通入臭氧，超 聲震蕩40-60min，13000-15000r/min離心15min后取上清液，加入添加劑，靜置2-4h后 15000r/min離心15min得到沉淀物，沉淀物干燥后在-15°C下保存6-9h，得到粗提物；c)向步驟b)得到的粗提物中加入去離子水，調(diào)節(jié)pH至3.3-4.3,加入復(fù)合酶A，酶解反應(yīng) l-2h后滅酶活，然后調(diào)節(jié)pH至8.5-9.5，加入復(fù)合酶B，酶解反應(yīng)5-6h，得到酶解產(chǎn)物；d)將步驟c)得到的酶解產(chǎn)物采用2200Da超濾膜進(jìn)行超濾處理，收集分子量小于2200Da 部分，得到超濾酶解液;玻璃吸附柱中裝填質(zhì)量比為4:3的活性炭與納米銀，超濾酶解液以 30-50mL/min的流速進(jìn)行循環(huán)層析，層析次數(shù)2-4次，然后以12000-150001'/111；[11離心2-4111；[11， 收集上清液，噴霧干燥得到金槍魚碎肉蛋白肽。2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種金槍魚碎肉蛋白肽的制備方法，其特征在于，步驟a)中浸 泡液由以下重量份的原料組成:色氨酸80-100份、山楂20-25份、兒茶酚14-26份、槲皮素15-25份、沒食子兒茶素30-40份、殼聚糖15-18份、海藻酸鈉12-15份與水200-350份，魚漿液與 浸泡液的質(zhì)量比為1:10。3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種金槍魚碎肉蛋白肽的制備方法，其特征在于，步驟b)中添 加劑由以下重量份的原料組成:食鹽3_5份、葡萄糖5-7份、富硒酵母3-10份、天冬酰胺10-15 份、蛋氨酸12-15份，添加劑的加入量為魚漿液質(zhì)量的10-15倍，魚漿液與檸檬酸溶液的料液 比為 lg:60mL。4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種金槍魚碎肉蛋白肽的制備方法，其特征在于，步驟d)中活 性炭的粒度為600目、比表面積1450m2。5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種金槍魚碎肉蛋白肽的制備方法，其特征在于，循環(huán)層析時(shí) 在外部施加磁場(chǎng)，磁場(chǎng)的強(qiáng)度為2-2.4T。6.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種金槍魚碎肉蛋白肽的制備方法，其特征在于，步驟c)中復(fù) 合酶A為胃蛋白酶與胰蛋白酶的混合物，質(zhì)量比為1.5:1，復(fù)合酶B為風(fēng)味蛋白酶與菠蘿蛋白 酶的混合物，質(zhì)量比為1:3.2，復(fù)合酶A的加入量為粗提液重量的0.8-1.2%，復(fù)合酶B的加入 量為第一次得到的上清液質(zhì)量的1.1-2.3%。7.根據(jù)權(quán)利要求1或2或3或4或5所述的一種金槍魚碎肉蛋白肽的制備方法，其特征在 于，臭氧的濃度為2.5-4ppm。8.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種金槍魚碎肉蛋白肽的制備方法，其特征在于，步驟b)中超 聲波功率為55-65kw。
【文檔編號(hào)】C12P21/06GK106047969SQ201610392478
【公開日】2016年10月26日
【申請(qǐng)日】2016年6月3日
【發(fā)明人】謝超
【申請(qǐng)人】浙江海洋大學(xué)