一種紅霉素混種發(fā)酵方法
【專(zhuān)利摘要】本發(fā)明涉及一種紅霉素混種發(fā)酵方法，該方法是在以紅霉素鏈霉菌為發(fā)酵菌種生產(chǎn)紅霉素的發(fā)酵過(guò)程中接入培養(yǎng)好的芽孢狀態(tài)的巨大芽孢桿菌繼續(xù)發(fā)酵。本發(fā)明利用巨大芽孢桿菌與紅色鏈霉菌混合發(fā)酵生產(chǎn)紅霉素，巨大芽孢桿菌和紅色鏈霉菌在發(fā)酵體系中混合培養(yǎng)，其代謝酶系和代謝中間體共用，對(duì)紅霉素的合成有明顯的促進(jìn)作用，從而有效提高發(fā)酵水平，改善發(fā)酵液組分。通過(guò)本發(fā)明的方法，可使紅霉素的發(fā)酵周期控制在160～170hr，發(fā)酵單位較原工藝提高20%以上，發(fā)酵液中紅霉素A效價(jià)提高20%以上，對(duì)發(fā)酵液過(guò)濾無(wú)影響。
【專(zhuān)利說(shuō)明】
一種紅霉素混種發(fā)酵方法
技術(shù)領(lǐng)域
[0001]本發(fā)明涉及生物與新醫(yī)藥技術(shù)，特別是涉及一種紅霉素混種發(fā)酵方法。
【背景技術(shù)】
[0002]紅霉素(erythromycin，Er)是一類(lèi)大環(huán)內(nèi)酯類(lèi)抗生素，主要包括紅霉素A(ErA)、紅霉素B(ErB)和紅霉素C(ErC)，其中以紅霉素A的抗菌活力最強(qiáng)，B、C抗菌活力較低?，F(xiàn)有技術(shù)中，紅霉素的發(fā)酵生產(chǎn)通常都是采用紅色鏈霉菌進(jìn)行純種發(fā)酵，通過(guò)種子培養(yǎng)、發(fā)酵過(guò)程控制等手段使菌體產(chǎn)生紅霉素，該方法紅霉素發(fā)酵單位低，發(fā)酵水平提高難度大，發(fā)酵工藝改變空間小。目前，我國(guó)已成為紅霉素生產(chǎn)的第一大國(guó)，發(fā)酵水平的提高問(wèn)題亟待解決，進(jìn)一步提高其工業(yè)發(fā)酵水平、節(jié)能降耗是當(dāng)前提高該產(chǎn)品的國(guó)際競(jìng)爭(zhēng)力的迫切需求。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0003]本發(fā)明的目的在于提供一種有效改善紅霉素發(fā)酵中紅霉素A組分的含量，提高發(fā)酵水平的紅霉素混菌發(fā)酵方法。
[0004]為實(shí)現(xiàn)上述發(fā)明目的所采取的技術(shù)方案為:
一種紅霉素混種發(fā)酵方法，其特征是:在以紅霉素鏈霉菌為發(fā)酵菌種生產(chǎn)紅霉素的發(fā)酵過(guò)程中接入培養(yǎng)好的芽孢狀態(tài)的巨大芽孢桿菌繼續(xù)發(fā)酵。
[0005]以紅色鏈霉菌為菌種發(fā)酵至70?90hr后接入巨大芽孢桿菌。
[0006]所述巨大芽孢桿菌接種量為0.05-0.1%。
[0007]所述巨大芽孢桿菌菌液的制備:將巨大芽孢桿菌菌液接種到滅菌好的搖瓶培養(yǎng)基中，置搖床150?200轉(zhuǎn)，溫度29?33 °C下培養(yǎng)8?15hr，鏡檢菌體成芽孢狀即可，
所述搖瓶培養(yǎng)基組成為:葡萄糖1.0?1.5%，玉米漿:0.8?1.2%，尿素0.1?0.4%，硫酸鎂0.05?0.1%，碳酸鈣0.05?0.1%，豆油適量。
[0008]上述發(fā)酵過(guò)程的控制以現(xiàn)有公開(kāi)的紅霉素發(fā)酵生產(chǎn)工藝為基礎(chǔ)進(jìn)行工藝控制。
[0009]本發(fā)明利用巨大芽孢桿菌與紅色鏈霉菌混合發(fā)酵生產(chǎn)紅霉素，巨大芽孢桿菌和紅色鏈霉菌在發(fā)酵體系中混合培養(yǎng)，其代謝酶系和代謝中間體共用，對(duì)紅霉素的合成有明顯的促進(jìn)作用，從而有效提高發(fā)酵水平，改善發(fā)酵液組分。通過(guò)本發(fā)明的方法，可使紅霉素的發(fā)酵周期控制在160?170hr，發(fā)酵單位較原工藝提高10%以上，發(fā)酵液中紅霉素A效價(jià)提高10%以上，對(duì)發(fā)酵液過(guò)濾無(wú)影響。
【具體實(shí)施方式】
[0010]下面用實(shí)例予以說(shuō)明本發(fā)明，應(yīng)該理解的是，實(shí)例是用于說(shuō)明本發(fā)明而不是對(duì)本發(fā)明的限制。本發(fā)明的范圍與核心內(nèi)容依據(jù)權(quán)利要求書(shū)加以確定。
[0011 ]下述實(shí)施例中搖瓶培養(yǎng)基組成為:葡萄糖1.0?1.5%，玉米漿:0.8?1.2%，尿素0.1?0.4%，硫酸鎂0.05?0.1%，碳酸鈣0.05?0.1%，豆油適量。
[0012]下述實(shí)施例中發(fā)酵過(guò)程及發(fā)酵過(guò)程控制與目前現(xiàn)有的以紅色鏈霉菌為發(fā)酵菌種生產(chǎn)紅霉素的工藝控制一致。
[0013]實(shí)施例1
1、巨大芽孢桿菌菌液的制備:
巨大芽孢桿菌培養(yǎng)基:葡萄糖1.2%，玉米漿:1.0%，尿素0.3%，硫酸鎂0.1%，碳酸鈣
0.08%，消沫劑適量。滅菌溫度118?121°C，保溫15?18分鐘，降溫待種。
[0014]將保存的巨大芽孢桿菌菌液挑取一環(huán)接種到滅菌好的搖瓶培養(yǎng)基中，置搖床180轉(zhuǎn)，溫度30 0C培養(yǎng)12hr，鏡檢菌體成芽孢狀，放置4 °C冰箱備用。
[0015]2、將巨大芽孢桿菌菌液接入紅霉素發(fā)酵液混種培養(yǎng)
以紅色鏈霉菌為發(fā)酵菌種，按照常規(guī)發(fā)酵方法進(jìn)行發(fā)酵(即紅色鏈霉菌孢子經(jīng)一級(jí)二級(jí)種子培養(yǎng)，再將二級(jí)種子液按20%接種量接種于滅菌好的發(fā)酵培養(yǎng)基中培養(yǎng)，控制培養(yǎng)溫度32-34°C，通氣量l:l.l-1.4v/v/min，攪拌發(fā)酵，發(fā)酵過(guò)程中根據(jù)pH補(bǔ)入葡萄糖和豆油，根據(jù)正丙醇?xì)埩粞a(bǔ)入正丙醇)，待發(fā)酵至90hr后接入培養(yǎng)好的芽孢狀態(tài)的巨大芽孢桿菌，接種量0.05-0.1%，此時(shí)發(fā)酵培養(yǎng)基中的營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)濃度較低，總糖1.0-1.5%，紅霉素含量4000-4500u/ml，芽孢桿菌接入后對(duì)紅霉素發(fā)酵有明顯促進(jìn)作用，紅霉素產(chǎn)生速率提高10%以上，放罐效價(jià)9082u/ml較對(duì)照提高13.5%，紅霉素A效價(jià)7468u/ml，提高14.5%以上。
[0016]實(shí)施例2
1、巨大芽孢桿菌菌液的制備:
巨大芽孢桿菌培養(yǎng)基:葡萄糖1.0%，玉米漿:0.8%，尿素0.1%，硫酸鎂0.05%，碳酸鈣
0.05%，消沫劑適量。滅菌溫度118?121°C，保溫15分鐘，降溫待種。
[0017]將保存的巨大芽孢桿菌菌液挑取一環(huán)接種到滅菌好的搖瓶培養(yǎng)基中，置搖床150轉(zhuǎn)，溫度29°C培養(yǎng)10hr，鏡檢菌體成芽孢狀，接入如下發(fā)酵液中。
[0018]2、將巨大芽孢桿菌菌液接入紅霉素發(fā)酵液混種培養(yǎng)
按實(shí)施例1進(jìn)行紅霉素發(fā)酵，生長(zhǎng)70hr將培養(yǎng)好的芽孢桿菌菌懸液按接種量0.1%接入發(fā)酵體系，生長(zhǎng)165hr放罐，放罐效價(jià)9295u/ml，較對(duì)照提高16.9%，發(fā)酵液A效價(jià)7584u/ml，較對(duì)照提高16.3%。
[0019]實(shí)施例3
1、巨大芽孢桿菌菌液的制備:
巨大芽孢桿菌培養(yǎng)基:葡萄糖:1.5%，玉米漿:1.2%，尿素0.4%，硫酸鎂0.1%，碳酸鈣
0.1%，消沫劑適量。滅菌溫度118?121°C，保溫18分鐘，降溫待種。
[0020]將保存的巨大芽孢桿菌菌液挑取一環(huán)接種到滅菌好的搖瓶培養(yǎng)基中，置搖床200轉(zhuǎn)，溫度29°C培養(yǎng)15hr，鏡檢菌體成芽孢狀，接入如下發(fā)酵液中。
[0021 ] 2、將巨大芽孢桿菌菌液接入紅霉素發(fā)酵液混種培養(yǎng)
按實(shí)施例1進(jìn)行紅霉素發(fā)酵，生長(zhǎng)80hr將培養(yǎng)好的芽孢桿菌菌懸液按接種量0.05%接入發(fā)酵體系，生長(zhǎng)165hr放罐，放罐效價(jià)9528u/ml，較對(duì)照提高16.04%，發(fā)酵液A效價(jià)7625u/ml，較對(duì)照提高16.95%。
[0022]對(duì)比實(shí)施例
紅霉素發(fā)酵菌種為放線(xiàn)菌中的紅色鏈霉菌，紅色鏈霉菌孢子經(jīng)一級(jí)、二級(jí)種子培養(yǎng)，再將二級(jí)種子液按20%接種量接種于滅菌好的發(fā)酵培養(yǎng)基中培養(yǎng)，培養(yǎng)溫度32-34°C，通氣量1:1.1-1.4v/v/min，攪拌，發(fā)酵過(guò)程溶氧30%以上，根據(jù)PH補(bǔ)入碳源、豆油，根據(jù)正丙醇?xì)埩粞a(bǔ)入正丙醇，經(jīng)160-170hr培養(yǎng)得含有紅霉素的發(fā)酵液，發(fā)酵過(guò)程為純種發(fā)酵，生長(zhǎng)165hr放罐，放罐效價(jià)8000u/ml，發(fā)酵液中A效價(jià)6520u/ml。
【主權(quán)項(xiàng)】
1.一種紅霉素混種發(fā)酵方法，其特征是:在以紅霉素鏈霉菌為發(fā)酵菌種生產(chǎn)紅霉素的發(fā)酵過(guò)程中接入培養(yǎng)好的芽孢狀態(tài)的巨大芽孢桿菌繼續(xù)發(fā)酵。2.按照權(quán)利要求1所述的紅霉素混種發(fā)酵方法，其特征是:以紅色鏈霉菌為菌種發(fā)酵至70?90hr后接入巨大芽孢桿菌。3.按照權(quán)利要求1或2所述的紅霉素混種發(fā)酵方法，其特征在于所述巨大芽孢桿菌接種量為 0.05-0.1%。4.按照權(quán)利要求1或2所述的紅霉素混種發(fā)酵方法，其特征在于所述巨大芽孢桿菌菌液的制備:將巨大芽孢桿菌菌液接種到滅菌好的搖瓶培養(yǎng)基中，置搖床150?200轉(zhuǎn)，溫度29?.33 °C下培養(yǎng)8?15hr，鏡檢菌體成芽孢狀即可， 所述搖瓶培養(yǎng)基組成為:葡萄糖1.0?1.5%，玉米漿:0.8?1.2%，尿素0.1?0.4%，硫酸鎂0.05?0.1%，碳酸鈣0.05?0.1%，豆油適量。
【文檔編號(hào)】C12P19/62GK106065412SQ201610690132
【公開(kāi)日】2016年11月2日
【申請(qǐng)日】2016年8月19日
【發(fā)明人】郭海燕, 孫瑞君, 胡曉玲, 張志
【申請(qǐng)人】寧夏啟元藥業(yè)有限公司