磺胺苯甲醛衍生物制備方法
【專利摘要】本發(fā)明涉及一種抗原材料制備方法,具體為磺胺苯甲醛衍生物制備方法,取磺胺溶于溶劑中,配得溶液1;所述的溶劑為1,4?二氧六環(huán)、DMF或DMA中的一種;選取鄰苯二甲醛、香草醛、對羥基苯甲醛中一種溶解于1,4?二氧六環(huán)中,配得溶液2;溶液2加熱逐滴加入溶液1,保溫攪拌反應(yīng)1h;冷卻至室溫析晶、過濾干燥,提純。本發(fā)明提供的磺胺苯甲醛衍生物制備方法,在磺胺的芳氨基鏈接一個側(cè)臂后再制備磺胺抗原課得到高效的免疫原,以制備族特異性抗體。
【專利說明】
橫胺苯甲酵衍生物制備方法
技術(shù)領(lǐng)域
[0001] 本發(fā)明設(shè)及一種抗原材料制備方法,具體為橫胺苯甲醒衍生物制備方法。
【背景技術(shù)】
[0002] 由于橫胺分子量較小,必須將其與載體偶聯(lián)形成完全抗原后才能制備相應(yīng)抗體, 因此,合成高質(zhì)量的免疫原是小分子物質(zhì)免疫分析的關(guān)鍵。合成免疫原一般采用化學(xué)方法 使半抗原與載體蛋白偶聯(lián)??贵w通常對遠離聯(lián)結(jié)位點的半抗原部分具有較好的識別能力, 因此半抗原與載體蛋白的偶聯(lián)位置最好遠離重要的抗原決定簇。橫胺半抗原的合成必須從 N端構(gòu)建間隔臂和活性基團W連接載體蛋白,從而將它們的共同母核結(jié)構(gòu)暴露出來作為抗 原決定簇。
【發(fā)明內(nèi)容】
[0003] 針對上述技術(shù)問題本發(fā)明提供一種橫胺苯甲醒衍生物制備方法。
[0004] 橫胺苯甲醒衍生物制備方法,包括W下步驟:
[0005] (1)取橫胺溶于溶劑中,配得溶液1;所述的溶劑為1,4-二氧六環(huán)、DMF或DMA中的一 種;
[0006] (2)選取鄰苯二甲醒、香草醒、對徑基苯甲醒中一種溶解于1,4-二氧六環(huán)中,配得 溶液2;
[0007] (3)溶液巧日熱80°C攬拌,逐滴加入溶液1,保溫攬拌反應(yīng)化;溶液1中的溶質(zhì)和溶液 2中的溶質(zhì)摩爾量相同。
[000引(4)反應(yīng)結(jié)束后將反應(yīng)液冷卻至室溫析晶化,過濾干燥,得到橫胺衍生物粗品;
[0009] (5)通過制備液相制得橫胺衍生物純品。
[0010] 本發(fā)明提供的橫胺苯甲醒衍生物制備方法,在橫胺的芳氨基鏈接一個側(cè)臂后再制 備橫胺抗原課得到高效的免疫原,W制備族特異性抗體。
【附圖說明】
[0011] 圖1為實施例1的橫胺半抗原的ESI-MS質(zhì)譜之一;
[0012] 圖2為實施例1的橫胺半抗原的ESI-MS質(zhì)譜之二;
[001 ;3 ]圖3為實施例1的橫胺半抗原的iH-NMR;
[0014] 圖4為實施例1的橫胺半抗原的"C-NMR。
【具體實施方式】
[0015] 結(jié)合【附圖說明】本發(fā)明【具體實施方式】。
[0016] 實施例中所用的試劑與藥品:橫胺、鄰二苯甲醒、水溶性碳二亞胺化DC)、戊二醒、 N,N-二甲基甲酯胺(DMF)、1,4-二氧六環(huán)等均購自上海晶純生化科技股份有限公司;牛血清 蛋白(BSA)、雞卵清蛋白(OVA)、牛血清白蛋白(BSA,純度98% )、卵清蛋白(OVA,純度99 % )均 購自Si卵a公司。
[0017] 實施例中所用的儀器與設(shè)備:IRsolution紅外光譜儀舊本島津公司),AVANCE- 500核磁共振儀(瑞:t化uker公司),高效液相色譜儀(美國安捷倫公司),電噴霧電離質(zhì)譜 (美國安捷倫公司),751GW型紫外分光光度計(上海分析儀器廠),BS214D型電子天平(陜西 鵬展科技有限公司),各種玻璃儀器(天津玻璃儀器廠),RE-2000E旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀(上海亞榮生 儀器廠)。
[0018] 橫胺苯甲醒衍生物制備過程:
[0019] 取橫胺0.34g(2mmol),溶于5mll,4-二氧六環(huán)溶液中,配得溶液1,稱取鄰苯二甲醒 0.27g( 2mmol)溶于15ml 1,4-二氧六環(huán),配得溶液2,溶液巧日入至50ml錐形瓶中80°C攬拌,逐 滴加入溶液1,80°C攬拌反應(yīng)化,反應(yīng)結(jié)束后將反應(yīng)液冷卻至室溫析晶化,過濾干燥,得到橫 胺衍生物粗品。通過制備液相(Column: Sunf ire,( 3.加 m,150*4.6mm)流動相A:此0(0.01 % TFA)-B:乙臘(0.01%TFA)l-9min 5%B-95%B,9-14min,95%B,14-15min 95%B-5%B,流 速1.OmL/min,柱溫40°C)制得橫胺衍生物純品,用紅外光譜掃描儀、ESI-MS與核磁共振法進 行鑒定。
[0020] 反應(yīng)過程為:
[0021]
[0022] 對實施例的產(chǎn)物進行檢驗與分析:
[0023] 1.半抗原鑒定
[0024] (1)橫胺半抗原紅外光譜鑒定
[0025] 根據(jù)橫胺半抗原的紅外光譜,其中波數(shù)2820。111^2720細^醒基乂(:-即及收峰; 3518cm-i處吸收峰為半抗原中-N此吸收峰,1383-133。111-1,1161-1105(3111-1是¥3〇2吸收峰, 1503cm-i為vc = N的特征吸收;1668cm-i強吸收峰為幾基特征峰。由2820cm-i、2720cm-i、 1668cm-i醒基的特征吸收與1503cm-ic = N的特征吸收可推斷橫胺與鄰二苯甲醒連結(jié)成功。
[0026] (2)橫胺半抗原質(zhì)譜的鑒定
[0027] 橫胺半抗原的(+化SI-MS全掃描質(zhì)譜如圖1和圖2,出現(xiàn)m/z 289的[M+l]+準(zhǔn)分子離 子峰與半抗原分子質(zhì)量對應(yīng)。為了進一步確定其結(jié)構(gòu),對m/z 389.3的分子離子進行了( + ) ESI-MS2分析,m/z 289的分子離子裂解后出現(xiàn)m/z 272、224、208、178等碎牙離子峰,都能合 理歸屬,因此m/z289分子離子可歸屬為半抗原橫胺鄰二苯甲醒衍生物。
[0028] m/z289可能的碎裂機理:
[0029]
[0032] 圖 3是橫胺半抗原 1h-醒R: (500MHz,DMS0-d6)88.11 (d,2H,J = 8.5Hz,CHAr),7.86 (d,2H,J = 8.5Hz,CHAr),7.83(d,lH,J =細z,CH0) ,7.71 (dd,2H,J= 10Hz,7Hz,CSAr) ,7.57 (m,-N = 巧),7.35(s,2H,CpR),5.10(s,2H,NH2)。圖4是橫胺半抗原l3c-NMR:(500MHz,DMS0- d6)Sl67.1(CH0),142.2(C-l),141.1(C-4),138.9(C-2'),132.7(C-1'),131.9(C-3'), 128.3(C-6' ),126.7(C-3,5),123.4(04' ),123.5(C-5' ),118.6(C-2,6),50.4(N=CH)。從 碳原子與氨原子歸屬情況可推斷橫胺成功連接了鄰二苯甲醒。
[0033] 實施例2
[0034] 取橫胺0.34g (2mmo 1),溶于5ml 1,4-二氧六環(huán)溶劑中,配得溶液1,稱取鄰苯二甲醒 0.27g( 2mmol)溶于15ml 1,4-二氧六環(huán),配得溶液2,溶液巧日入至50ml錐形瓶中80°C攬拌,逐 滴加入溶液1,80°C攬拌反應(yīng)化,反應(yīng)結(jié)束后將反應(yīng)液冷卻至室溫析晶化,過濾干燥,得到橫 胺衍生物粗品。
[0035] 實施例3
[0036] 取橫胺0 . %g( 2mmol),溶于5ml DMF或DMA溶液中,配得溶液1,稱取鄰苯二甲醒 0.27g( 2mmol)溶于15ml 1,4-二氧六環(huán),配得溶液2,溶液巧日入至50ml錐形瓶中80°C攬拌,逐 滴加入溶液1,80°C攬拌反應(yīng)化,反應(yīng)結(jié)束后將反應(yīng)液冷卻至室溫析晶化,過濾干燥,得到橫 胺衍生物粗品。
[0037] 實施例4
[003引取橫胺0.34g(2mmol),溶于5ml 1,4-二氧六環(huán)溶液中,配得溶液1,稱取香草醒 0.24g( 2mmol)溶于15ml 1,4-二氧六環(huán),配得溶液2,溶液巧日入至50ml錐形瓶中80°C攬拌,逐 滴加入溶液1,80°C攬拌反應(yīng)化,反應(yīng)結(jié)束后將反應(yīng)液冷卻至室溫析晶化,過濾干燥,得到橫 胺衍生物粗品。
[0039] 實施例5
[0040] 取橫胺〇.34g(2mmol),溶于5mll,4-二氧六環(huán)溶液中,配得溶液1,稱取對徑基苯甲 醒0.24g (2mmol)溶于15ml 1,4-二氧六環(huán),配得溶液2,溶液巧日入至50ml錐形瓶中80°C攬拌, 逐滴加入溶液1,80°C攬拌反應(yīng)比,反應(yīng)結(jié)束后將反應(yīng)液冷卻至室溫析晶化,過濾干燥,得到 橫胺衍生物粗品。
【主權(quán)項】
1.磺胺苯甲醛衍生物制備方法,其特征在于,包括以下步驟: (1) 取磺胺溶于溶劑中,配得溶液1;所述的溶劑為1,4_二氧六環(huán)、DMF或DMA中的一種; (2) 選取鄰苯二甲醛、香草醛、對羥基苯甲醛中一種溶解于1,4_二氧六環(huán)中,配得溶液 2; (3) 溶液2加熱80 °C攪拌,逐滴加入溶液1,保溫攪拌反應(yīng)lh;溶液1中的溶質(zhì)和溶液2中 的溶質(zhì)摩爾量相同; (4) 反應(yīng)結(jié)束后將反應(yīng)液冷卻至室溫析晶2h,過濾干燥,得到磺胺衍生物粗品; (5) 通過制備液相制得磺胺衍生物純品。
【文檔編號】C07C311/39GK106083662SQ201610368335
【公開日】2016年11月9日
【申請日】2016年5月21日
【發(fā)明人】魏東, 馮亭亭, 黃智鴻, 邢艷安, 喬文珍, 張秀敏, 郭振慧, 栗慧, 金艷丹
【申請人】魏東