含有環(huán)己基的不對稱二硫醚類化合物及其在制備抗菌藥物中的用圖
【專利摘要】本發(fā)明涉及一類含有環(huán)己基的不對稱二硫醚類化合物及其在制備抗菌藥物中的用途。本發(fā)明的含有環(huán)己基的不對稱二硫醚類化合物對耐甲氧西林金黃色葡萄球菌(MRSA)、金黃色葡萄球菌和白色念珠菌具有很強(qiáng)的抑制作用，可用于制備新型的抗菌藥物。這些藥物可以制成注射劑、片劑、丸劑、膠囊、懸浮劑或乳劑的形式使用。其給藥途徑可為口服、經(jīng)皮，靜脈或肌肉注射。
【專利說明】
含有環(huán)己基的不對稱二硫離類化合物及其在制備抗菌藥物中 的用途
技術(shù)領(lǐng)域
[0001] 本發(fā)明設(shè)及一類含有環(huán)己基的不對稱二硫酸類化合物及其在制備抗菌藥物中的 用途，特別是對耐甲氧西林金黃色葡萄球菌（methici 11 in-resistant Staphylococcus aureus，MRSA)、金黃色葡萄球菌等革蘭氏陽性菌有很強(qiáng)的抑制作用，對白色念珠菌 (化ndida a化icans)等真菌有很強(qiáng)的抑制作用。 技術(shù)背景
[0002] 耐甲氧西林金黃色葡萄球菌(methicillin-resis1:ant Staphylococ州S aureus, MRSA)是一種超級(jí)耐藥菌細(xì)菌，其對多種抗生素的抗藥性在不斷增強(qiáng)。目前對MRSA真正起效 的抗生素已為數(shù)不多，臨床常用的僅萬古霉素(vancomycin)、達(dá)托霉素(daptomycin)、利奈 挫胺（linezolid)、替加環(huán)素（tigecycline)和頭抱R比普（ceftobip;role)等藥物。研究開發(fā) 化學(xué)結(jié)構(gòu)新穎，毒性較低的新型抗耐藥菌藥物成為刻不容緩。
[0003] 當(dāng)今時(shí)代，由白色念珠菌、隱球菌和曲霉菌等入侵型真菌引起的感染是影響人類 健康的重大問題。目前，醫(yī)治真菌感染的藥劑依賴于類型為數(shù)不多的化學(xué)藥物，如酬康挫為 代表的挫類，多締類抗生素和兩性霉素 B等等。由于運(yùn)些抗真菌藥物長期使用產(chǎn)生的抗性問 題日益明顯，設(shè)計(jì)合成新的有效藥物迫在眉睫。
[0004] 不對稱二硫酸類化合物及其生物活性研究較少，20 12年王建國等人在 CN102775360A和CN102702130B公開了不對稱芳香二硫酸類化合物可W抑制植物中的乙酷 乳酸合成酶，從而提出了不對稱芳香二硫酸類化合物在制備除草劑中的應(yīng)用。2016年張立 新和王建國等人發(fā)現(xiàn)不對稱芳香二硫酸類化合物通過抑制病毒3C蛋白酶而具有抗病毒活 性(專利申請?zhí)枺?01610104430.7)。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0005] 本發(fā)明的目的在于提供一類含有環(huán)己基的不對稱二硫酸類化合物及其在制備制 備抗革蘭氏陽性菌藥物中和抗真菌藥物中的用途，特別是抗耐甲氧西林金黃色葡萄球菌 (MRSA)藥物和抗白色念珠菌的應(yīng)用。
[0006] 本發(fā)明的不對稱二硫酸類化合物如所示：
[0007]
[000引通過體外抑制細(xì)菌實(shí)驗(yàn)表明，本發(fā)明的含有環(huán)己基的不對稱二硫酸類化合物對耐 甲氧西林金黃色葡萄球菌(MRSA)和金黃色葡萄球菌具有很強(qiáng)的抑制作用，因此本發(fā)明的含 有環(huán)己基的不對稱二硫酸類化合物可用于制備治療抗革蘭氏陽性菌感染的活性化合物。
[0009] 通過體外抑制真菌實(shí)驗(yàn)表明，本發(fā)明的含有環(huán)己基的不對稱二硫酸類化合物對白 色念珠菌(Candida a化icans)具有很強(qiáng)的抑制作用。因此本發(fā)明的含有環(huán)己基的不對稱二 硫酸類化合物可用于制備治療抗真菌感染的活性化合物。
[0010] 本發(fā)明還提供一種抗菌藥物，特別是治療抗耐甲氧西林金黃色葡萄球菌(MRSA)感 染和治療抗白色念珠菌感染的藥物;該藥物含有上述的含有環(huán)己基的不對稱二硫酸類化合 物W及一種或多種藥學(xué)上可接受的載體。所述載體包括藥學(xué)領(lǐng)域常規(guī)的稀釋劑、賦形劑、填 充劑、粘合劑、濕潤劑、崩解劑、吸收促進(jìn)劑、表面活性劑、吸附載體、潤滑劑、增效劑。該藥物 可W制成注射劑、片劑、丸劑、膠囊、懸浮劑或乳劑的形式使用。其給藥途徑可為口服、經(jīng)皮， 靜脈或肌肉注射。
[0011] 本發(fā)明實(shí)質(zhì)性特點(diǎn)可W從下述實(shí)施例中得W體現(xiàn)，但運(yùn)些實(shí)施例僅作為說明，而 不是對本發(fā)明進(jìn)行限制。
【具體實(shí)施方式】
[0012] 下面將詳細(xì)描述本發(fā)明的【具體實(shí)施方式】，運(yùn)僅用于解釋本發(fā)明，而不能解釋為對 本發(fā)明的限制。
[0013] 下述實(shí)施例中所使用的實(shí)驗(yàn)方法如無特殊說明，均為常規(guī)方法。
[0014] 下述實(shí)施例中所用的材料、試劑等，如無特殊說明，均可從普通商業(yè)途徑得到。
[0015] 下述實(shí)施例用于合成不對稱二硫酸類化合物所使用的化學(xué)原料及試劑2-琉基-4- 甲氧幾基咪挫、2-琉基-5-乙酷氨基嚷挫、2-琉基-4-乙氧幾基咪挫、3-琉基-[1，2，4 ]-Ξ挫、 3-琉基-5-(3,-化晚)-基-[1，2,4]-Ξ挫、3-琉基-5-(4'-化晚)-基-[1，2,4]-Ξ挫、環(huán)己硫 醇、硫脈購自Alfa Aesar(天津)化學(xué)品公司、上海晶純試劑有限公司或美國Aurora化學(xué)品 公司，其余常規(guī)化學(xué)原料均為天津本地市售。
[0016] 實(shí)施例1:化合物1的合成
[0017]
[001 引 100111]^的^口瓶中加入4.0邑（34111111〇1)環(huán)己硫醇巧1]1.9邑(251111]1〇1)硫脈11，加入1〇1111^ 水和30mL醇溶解，冰鹽浴攬拌下慢慢同時(shí)滴加3mL濃鹽酸和3.5mL 30%的出化，繼續(xù)攬拌化， 減壓脫溶，殘余物用lOmL乙醇溶解，并用乙酸稀釋，冷卻過夜，次日過濾，固體用乙醇-水重 結(jié)晶，得5.2g白色中間體III(產(chǎn)率90% )。
[0019] 50mL的單口瓶中加入0.56g(2.5mmol)中間體ΙΠ 和0.34g(2mmol )2-琉基-4-甲酸 乙醋基咪挫，加6mL甲醇溶解，冰水浴攬拌，慢慢滴加含0.25g碳酸氨鋼的lOmL碳酸氨鋼的水 溶液，反應(yīng)化，冷凍過夜，過濾得白色固體，柱分離，最終得0.4始化合物1，產(chǎn)率85 %。
[0020] 用同樣方法可W合成化合物2-6。
[0021] 化合物1-6的結(jié)構(gòu)式和物化參數(shù)見表l，iH NMR、i3C NMR及高分辨質(zhì)譜見表2。
[0022] 實(shí)施例2:不對稱二硫酸類化合物抗菌活性測定。
[0023] 1.試驗(yàn)材料
[0024] Mueller-Hinton化oth(北京奧博星生物技術(shù)有限責(zé)任公司），膜蛋白腺（英國 0X0ID公司），酵母浸出粉(英國0X0ID公司），氯化鋼（國藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司），96孔細(xì) 胞培養(yǎng)板(flat bottom)(美國康寧公司），陽性對照藥物萬古霉素和酬康挫，二甲基亞諷 DMS0(國藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司），YPD Agar(美國抓Difco公司），RPMI Media 1640(美 國Gibco公司），M皿培養(yǎng)基（使用電子天平稱取24克Mueller-Hinton Broth干粉，溶解于 1000毫升蒸饋水，調(diào)節(jié)抑至7.2,使用高壓蒸汽滅菌鍋在12rC下滅菌20分鐘制備所得）。耐 甲氧西林金黃色葡萄球菌MRSA(代號(hào)USA300)菌株，金黃色葡萄球菌菌株(代號(hào)ATCC6538)， 白色念珠菌(Candida a化icans)標(biāo)準(zhǔn)菌株(代號(hào)SC5314)，所有菌株W凍存甘油管方式保存 于-80 °C冰箱，化合物1-6，LB瓊脂平板（使用電子天平稱取10克Tryptone、5克Yeast extract、5克氯化鋼，溶解于1000毫升蒸饋水，調(diào)節(jié)抑至7.0，加入20克瓊脂粉，使用高壓蒸 汽滅菌鍋在12rC下滅菌20分鐘，分裝至無菌培養(yǎng)皿(30mL/培養(yǎng)皿)待冷卻凝固后備用）。
[0025] 2.菌液準(zhǔn)備
[0026] 測定時(shí)取出保藏MRSA菌株的甘油凍存管，在室溫下解凍，劃線法接種于LB瓊脂平 板上進(jìn)行活化，于37°C培養(yǎng)箱培養(yǎng)20小時(shí)；用無菌接種環(huán)挑取3個(gè)MRSA單菌落于3mL Μ皿培 養(yǎng)基中，使用滿旋振蕩器充分混勻成為菌液母液，使用血球計(jì)數(shù)板檢測菌濃;使用Μ!證培養(yǎng) 基將菌液母液稀釋至2 X 104細(xì)胞/mL，成為待用菌液。
[0027] 3.藥液準(zhǔn)備
[0028] 用電子分析天平稱取待測化合物，W無菌DMSO為溶劑配制為Img/mL的化合物溶 液；陽性對照藥物萬古霉素使用無菌DMS0配制為320yg/血的溶液，并用DMS0依次稀釋為160 yg/mL、80yg/mL、40yg/mL、20yg/mL、1 Oyg/mL、f5yg/mL、2. f5yg/mL 等 8 個(gè)濃度梯度。
[0029] 4.測定藥物抑制MRSA的最小抑菌濃度
[0030] 取無菌96孔細(xì)胞培養(yǎng)板，使用8道微量移液器移取40μΙ MHB培養(yǎng)基至96孔細(xì)胞培 養(yǎng)板各孔;使用微量移液器吸取化L步驟3中所述的8個(gè)濃度梯度的萬古霉素溶液，加入96孔 細(xì)胞培養(yǎng)板第一列的8個(gè)孔中，為陽性對照組;使用微量移液器吸取化L無菌DMS0,加入96孔 細(xì)胞培養(yǎng)板第十二列的8個(gè)孔中，為陰性對照組;使用微量移液器吸取化L待檢測化合物溶 液，依次加入96孔細(xì)胞培養(yǎng)板第二列至第十一列各孔中；使用8道微量移液器移取40化步驟 2中所述的待用菌液，加入96孔細(xì)胞培養(yǎng)板各孔中；將上述96孔細(xì)胞培養(yǎng)板置于37°C培養(yǎng) 箱，培養(yǎng)16小時(shí)后，觀察96孔板各孔中的MRSA生長狀況，呈混濁狀態(tài)的孔中所加的化合物無 抗MRSA活性，呈澄清狀態(tài)的孔中所加的化合物初步判斷具有抗MRSA活性。將所檢測到的各 個(gè)具有抗MRSA活性的化合物從Img/mL的初始濃度依次進(jìn)行2倍梯度稀釋為lmg/mL，50化g/ mL，250yg/血，125yg/mL，62.5yg/mL，31.25yg/mL，15.625yg/mL，7.8125yg/mL 8個(gè)不同濃度 的化合物溶液；用同樣的方法測定，使用酶標(biāo)儀讀取各孔的吸光值ODsoo。對于每個(gè)化合物， MRSA生長被完全抑制的孔所對應(yīng)的化合物終濃度(化合物溶液濃度/40)即為該化合物對 MRSA的最低抑菌濃度MIC。
[0031] 同樣，可W測定化合物1-6抑制金黃色葡萄球菌和白色念珠菌的生物活性。
[0032] 目標(biāo)化合物抗菌活性的測試結(jié)果見表3。
[0033] 表1.化合物1-6的物化參數(shù)
[0034]
[0035] 表2、化合物1-6的iH NMR、i3C NMR及高分辨質(zhì)譜數(shù)據(jù)
[0036]
[0037] 表3.化合物1-6抗MRSA、金黃色葡萄球菌和白色念珠菌的生物活性結(jié)果
[00；3 引
【主權(quán)項(xiàng)】
1. 一種含有環(huán)己基的不對稱二硫醜類化合物，其特征在于該類化合物為：2. 權(quán)利要求1所述含有環(huán)己基的不對稱二硫酸類化合物作為制備抗耐甲氧西林金黃色 葡萄球菌、金黃色葡萄球菌和抗白色念珠菌藥物中的用途。3. -種抗菌藥物，其特征在于它含有權(quán)利要求1所述的含有環(huán)己基的不對稱二硫酸類 化合物W及一種或多種藥學(xué)上可接受的載體;所述載體包括藥學(xué)領(lǐng)域常規(guī)的稀釋劑、賦形 劑、填充劑、粘合劑、濕潤劑、崩解劑、吸收促進(jìn)劑、表面活性劑、吸附載體、潤滑劑、增效劑。4. 根據(jù)權(quán)利要求3所述的抗菌藥物，其特征在于它是含有所述抗菌藥物的注射劑、片 劑、丸劑、膠囊、懸浮劑或乳劑。
【文檔編號(hào)】A61P31/04GK106083726SQ201610444077
【公開日】2016年11月9日
【申請日】2016年6月20日
【發(fā)明人】王建國, 張緒猛, 盧偉
【申請人】南開大學(xué)