含吖丙啶環(huán)側(cè)鏈的芳胺嘧啶衍生物及制備和應(yīng)用
【專利摘要】本發(fā)明公開了一種如式I所示的含吖丙啶環(huán)側(cè)鏈的芳胺嘧啶衍生物或其對映異構(gòu)體，主要是以芳胺嘧啶為母核，通過與吖丙啶甲酸一步縮合得到目標(biāo)化合物。實驗證明，在細(xì)胞水平上對與EGFR酪氨酸激酶活性相關(guān)的腫瘤細(xì)胞(過表達(dá)EGFR的人表皮癌細(xì)胞株A431、對Gefitinib耐藥的人肺腺癌細(xì)胞株H1975)具有顯著的增殖抑制作用，特別是對耐藥細(xì)胞株H1975有較好的選擇性，同時對EGFR激酶也有較好的抑制效果，可制備相應(yīng)抗腫瘤細(xì)胞藥物。結(jié)構(gòu)通式：。
【專利說明】
含口丫丙暗環(huán)側(cè)鏈的芳胺略暗衍生物及制備和應(yīng)用
技術(shù)領(lǐng)域
[0001] 本發(fā)明屬于制藥領(lǐng)域，具體設(shè)及一種含叮丙晚環(huán)側(cè)鏈的芳胺喀晚衍生物、制備方 法、中間體、及其應(yīng)用。
【背景技術(shù)】
[0002] 表皮生長因子受體（邱idermal growth factor receptor,EGFR)是目前備受矚目 的腫瘤治療祀點。EGFR抑制劑更是晚期非小細(xì)胞肺癌(NSCLC)治療的重要組成部分。在經(jīng)歷 了第一代EGFR抑制劑和第二代EGFR抑制劑之后，W喀晚為骨架的第Ξ代EGFR抑制劑橫空出 世。該類抑制劑是高度選擇性、有效對抗EGFR-TKI獲得性T790M耐藥的新一代抑制劑，毒副 反應(yīng)相對較小，尤其不似W往EGFR-TKI治療，該類抑制劑出現(xiàn)的皮膚副反應(yīng)較低。
[0003] 叮丙晚是一類Ξ元雜環(huán)，由于高度的環(huán)張力，其可W接受多種親核試劑的進(jìn)攻從 而生成各種具有區(qū)域選擇性和立體選擇性的開環(huán)產(chǎn)物。有研究報道，在生理環(huán)境下，叮丙晚 環(huán)能與半脫氨酸殘基發(fā)生溫和的共價加成反應(yīng)。因此叮丙晚環(huán)相對丙締酷胺較弱的共價加 成能力既可W保持與EGFR激酶上的相關(guān)部位(切S797)發(fā)生作用，同時較低的反應(yīng)活性可W 使藥物在維持甚至增加藥效的同時有效地降低其毒副作用。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0004] 本發(fā)明的目的是提供一種含叮丙晚環(huán)側(cè)鏈的芳胺喀晚衍生物及其對映異構(gòu)體，該 化合物具有較佳的抗腫瘤活性，同時可W規(guī)避傳統(tǒng)的雙鍵不可逆片段的不良反應(yīng)。具有W 下結(jié)構(gòu)通式I:
[0005]
[0006] 其中：
[0007] Ri為Ξ氣甲基、氯、氨，
[000引R2為氨、甲基、甲氧基、氣、氯，
[0009] R3為乙酷贓嗦基、甲基贓嗦基、嗎嘟基、贓晚基、二甲胺基。
[0010] 本發(fā)明所述的含叮丙晚環(huán)側(cè)鏈的芳胺喀晚衍生物或其對應(yīng)異構(gòu)體為如下任一化 合物：
[0011] (R)-N-(3-( (2-((4-(4-乙酷贓嗦-1-基)-2-甲氧基苯基)氨基)-5-(Ξ氣甲基）喀 晚-4-基)氨基)苯基)叮丙晚-2-甲酯胺(化合物1);
[0012] (R)-N-(3-((2-((4-(4-乙酷贓嗦-1-基)苯基)氨基)-5-(立氣甲基)喀晚-4-基)氨 基)苯基)叮丙晚-2-甲酯胺(化合物2);
[0013] (R)-N-(3-((2-((4-(4-嗎嘟-1-基)-2-甲氧基苯基)氨基)-5-氯喀晚-4-基)氨基） 苯基)叮丙晚-2-甲酯胺(化合物3);
[0014] (R)-N-(3-( (2-((4-(4-乙酷贓嗦-1-基)苯基)氨基)-5-氯喀晚-4-基)氨基)苯基） 叮丙晚-2-甲酯胺(化合物4);
[0015] (R)-N-(3-( (2-((4-(4-乙酷贓嗦-1-基)-2-甲氧基苯基)氨基)-5-氯喀晚-4-基） 氨基)苯基)叮丙晚-2-甲酯胺(化合物5);
[0016] (R)-N-(3-((2-((4-(4-甲基贓嗦-1-基)苯基)氨基)-5-氯喀晚-4-基)氨基)苯基） 叮丙晚-2-甲酯胺(化合物6);
[0017] (R)-N-(3-( (2-((4-(4-甲基贓嗦-1-基)-2-甲氧基苯基)氨基)-5-氯喀晚-4-基） 氨基)苯基)叮丙晚-2-甲酯胺(化合物7);
[0018] (S)-N-(3-((2-((4-(4-贓晚-1-基)-2-甲氧基苯基)氨基)-5-氯喀晚-4-基)氨基） 苯基)叮丙晚-2-甲酯胺(化合物8);
[0019] (R)-N-(3-( (2-((4-(4-乙酷贓嗦-1-基)-2-甲氧基苯基)氨基）喀晚-4-基)氨基） 苯基)叮丙晚-2-甲酯胺(化合物9);
[0020] (R)-N-(3-((2-((4-(4-乙酷贓嗦-1-基)苯基)氨基）喀晚-4-基)氨基)苯基）日丫丙 晚-2-甲酯胺(化合物10);
[0021] (S)-N-(3-((2-((4-(4-乙酷贓嗦-1-基)-2-甲氧基苯基)氨基)-5-(Ξ氣甲基）喀 晚-4-基)氨基)苯基)叮丙晚-2-甲酯胺(化合物11);
[0022] (S)-N-(3-( (2-((4-(4-乙酷贓嗦-1-基)-2-甲氧基苯基)氨基)-5-氯喀晚-4-基） 氨基)苯基)叮丙晚-2-甲酯胺(化合物12);
[0023] (S)-N-(3-( (2-((4-(4-乙酷贓嗦-1-基)苯基)氨基)-5-氯喀晚-4-基)氨基)苯基） 叮丙晚-2-甲酯胺(化合物13);
[0024] (S)-N-(3-( (2-((4-(4-甲基贓嗦-1-基)-2-甲氧基苯基)氨基)-5-氯喀晚-4-基） 氨基)苯基)叮丙晚-2-甲酯胺(化合物14);
[0025] (R)-N-(3-( (2-((4-(4-乙酷贓嗦-1-基)-3-氯苯基)氨基)-5-氯喀晚-4-基)氨基） 苯基)叮丙晚-2-甲酯胺(化合物15);
[00%] (R)-N-(3-( (2-((4-(4-乙酷贓嗦-1-基)-3-氣苯基)氨基)-5-氯喀晚-4-基)氨基） 苯基)叮丙晚-2-甲酯胺(化合物16);
[0027] (S)-N-(3-( (2-((4-(4-乙酷贓嗦-1-基)-3-甲基苯基)氨基)-5-氯喀晚-4-基)氨 基)苯基)叮丙晚-2-甲酯胺(化合物17);
[0028] (R)-N-(3-( (2-((4-(4-乙酷贓嗦-1-基)-3-甲基苯基)氨基)-5-氯喀晚-4-基)氨 基)苯基)叮丙晚-2-甲酯胺(化合物18);
[0029] (R)-N-(3-((2-((4-(4-贓晚-1-基)-2-甲氧基苯基)氨基)-5-氯喀晚-4-基)氨基） 苯基)叮丙晚-2-甲酯胺(化合物19);
[0030] (S)-N-(3-((2-((4-(4-嗎嘟-1-基)-2-甲氧基苯基)氨基)-5-氯喀晚-4-基)氨基） 苯基)叮丙晚-2-甲酯胺(化合物20);
[0031] (S)-N-(3-( (2-( (4-(4-乙酷贓嗦-1-基)-3-氣苯基)氨基)-5-氯喀晚-4-基)氨基） 苯基)叮丙晚-2-甲酯胺(化合物21);
[0032] (S)-N-(3-( (2-((4-(4-乙酷贓嗦-1-基)-3-氯苯基)氨基)-5-氯喀晚-4-基)氨基） 苯基)叮丙晚-2-甲酯胺(化合物22);
[0033] (r)-n-(3-((5-氯-2-((4-(二甲氨基)-2-甲氧基苯基)氨基）喀晚-4-基)氨基）苯 基)叮丙晚-2-甲酯胺(化合物23);
[0034] (s)-N-(3-((5-氯-2-((4-(二甲氨基)-2-甲氧基苯基)氨基）喀晚-4-基)氨基）苯 基)叮丙晚-2-甲酯胺(化合物24);
[0035] (s)-N-(3-( (2-((4-(4-嗎嘟-1-基)苯基)氨基)-5-氯喀晚-4-基)氨基)苯基)叮丙 晚-2-甲酯胺(化合物25);
[0036] (s)-N-(3-( (2-((4-(4-贓晚-1-基)苯基)氨基)-5-氯喀晚-4-基)氨基)苯基)叮丙 晚-2-甲酯胺(化合物26)。
[0037] 本發(fā)明的另一個目的是提供所述的含叮丙晚環(huán)側(cè)鏈的芳胺喀晚衍生物或其對應(yīng) 異構(gòu)體的制備方法，通過W下步驟實現(xiàn)：
[0038] W5-位取代尿喀晚1為起始原料，在N，N-二異丙基乙胺為堿Ξ氯氧憐作溶劑條件 1 l〇°C回流生成5-位取代2，4-二氯喀晚2，中間體2與單Boc保護(hù)的間苯二胺在正下醇中反應(yīng) 生成4,5-位取代的2-氯喀晚3,中間體3與取代的苯胺在1N HC1催化下生成2,4,5-位取代的 喀晚4,中間體4在Ξ氣乙酸條件下脫保護(hù)得到中間體5,中間體5再與Ξ苯亞甲基保護(hù)的叮 丙晚-2-酸縮合生成化合物6，化合物6最后脫保護(hù)基得到目標(biāo)產(chǎn)物I。反應(yīng)式如下：
[0039]
[0040] 其中，各基團(tuán)的定義同前通式I所述。
[0041] 本發(fā)明所設(shè)及的原料或中間體，可直接購買，或按照實施例部分提及的文獻(xiàn)方法 制備。
[0042] 本發(fā)明制備方法中所述的式I化合物，可W用有機合成和藥物化學(xué)領(lǐng)域及技術(shù)人 員熟知的多種方法制備，可W使用上面所描述的方法來制備本發(fā)明的化合物，將理解的是 當(dāng)給出典型的或優(yōu)選的工藝操作條件（即反應(yīng)溫度、時間、反應(yīng)物的摩爾比、溶劑、壓力等 等），還可W使用其他工藝操作條件，除非另有說明。最佳反應(yīng)條件可W隨所用的具體反應(yīng) 物或溶劑而變化，但運些條件可W由本領(lǐng)域技術(shù)人員通過常規(guī)最佳化過程加 W確定。通常， 可W使用如上所述的反應(yīng)路線及工藝制備本發(fā)明化合物，但并不限于反應(yīng)條件中的試劑和 溶劑。
[0043] 本發(fā)明的再一個目的是提供了所述的含叮丙晚環(huán)側(cè)鏈的芳胺喀晚衍生物或其對 應(yīng)異構(gòu)體在制備抗腫瘤藥物中的應(yīng)用，所述腫瘤細(xì)胞是指過表達(dá)EGi^R的人表皮癌細(xì)胞株 A431、對Gefitinib耐藥的人肺腺癌細(xì)胞株H1975,所述EGFR激酶是指野生型EGFR激酶和 L858R/T790M雙突變型EGFR激酶。其藥效學(xué)實施例實驗數(shù)據(jù)顯示，其在分子水平對突變型的 EGFR酪氨酸激酶具有較好抑制作用，在細(xì)胞水平對EGFR突變型的腫瘤細(xì)胞也具有顯著的增 殖抑制作用，可制備相應(yīng)的抗腫瘤藥物。
[0044] 本發(fā)明提供了一類全新的芳胺喀晚衍生物，其中的叮丙晚環(huán)可作為新型的非可逆 共價反應(yīng)官能團(tuán)，可W規(guī)避不飽和雙鍵的脫祀標(biāo)等副作用，其藥效學(xué)實施例實驗數(shù)據(jù)顯示， 在細(xì)胞水平對與EGFR酪氨酸激酶活性相關(guān)的腫瘤細(xì)胞（過表達(dá)EGFR的人表皮癌細(xì)胞株 A431、對Gefitin化耐藥的人肺腺癌細(xì)胞株H1975)具有顯著的增殖抑制作用，特別是對耐藥 細(xì)胞株化975有較好的抑制效果，在分子水平對突變型的EGFR酪氨酸激酶具有抑制作用，可 W為設(shè)計新型克服Gefitinib耐藥的EGFR抑制劑提供可能。
【具體實施方式】
[0045] 下面通過實施例的方式進(jìn)一步說明本發(fā)明，但并不因此將本發(fā)明限制在所述的實 施例范圍之中，下列實施例中未注明具體條件的實驗方法，按照常規(guī)方法和條件，或按照商 品說明書選擇。
[0046] 實施例l(R)-N-(3-( (2-((4-(4-乙酷贓嗦-1-基）-2-甲氧基苯基）氨基)-5-氯喀 晚-4-基)氨基)苯基)叮丙晚-2-甲酯胺
[0047]
[004引原料1:3-[2-[ [2-甲氧基-4-(4-乙酷基-1-贓嗦基）苯基]氨基]-5-(氯)-4-喀晚 基]甲酸叔下醋氨基苯按照文獻(xiàn)化ncer Discov. 2013,12,1404-1415的方法制備；
[00例步驟:將(R) -1-;苯甲基日丫丙晚-2-簇酸(0.38g，1.15mmol)溶于干燥的四氨巧喃 中（15mL)，在-10°C下，加入Ξ乙胺(0.3221^，2.31臟01)，攬拌15分鐘后，滴加氯甲酸異下醋 (0.125血，0.98mmol)，繼續(xù)-10°C反應(yīng)45分鐘。將2-((2-甲氧基-4-(4-乙酷基贓嗦-1基)-苯 基)氨基)-4(((3-氨基)苯基)氨基)-5-氯喀晚(0.27旨，0.57511111101)溶于干燥的四氨巧喃中 (lOmL)，冷至-10°C加入到上述反應(yīng)體系中，由-10°C自然升溫至室溫反應(yīng)過夜。待反應(yīng)完 畢，加入乙酸乙醋，用飽和碳酸氨鋼溶液洗涂Ξ次，有機層減壓旋干，經(jīng)柱層析純化得到棟 色固體。將該固體溶解在二氯甲燒(2.5mL)和甲醇(4.7mL)中，冷卻至0°C-2°C，滴入Ξ氣乙 酸(0.896mL，12mmo 1)的二氯甲燒溶液（2mL)，繼續(xù)低溫反應(yīng)約2小時。待反應(yīng)完全，減壓旋 蒸，然后加入乙酸乙醋，用冷的飽和碳酸氨鋼中和Ξ次，合并有機相，減壓旋干，硅膠柱層析 純化(流動相為C此Cb:Me0H = 20:l)，回收、干燥即得固體產(chǎn)物，兩步反應(yīng)產(chǎn)率為41.6%。 m.p. :206-208°C;1h-NMR(500MHz，DMS0)S10.54(s，1H)，8.84(s，1H)，8.00(s，1H)，7.93(s, lH)，7.70(s，lH)，7.69(s，lH)，7.39(d，J = 7.7Hz，lH)，7.31(d，J = 7.甜z，lH)，7.24(t，J = 8.0Hz，lH)，6.65(d，J = 2.1Hz，lH)，6.34(d，J = 8.1Hz，lH)，3.80(s，3H)，3.59(m，4H)，3.07 (m，4H)，2.58(s，lH)，2.06(s，3H)，1.77(m，2H)，1.24(s，lH).HRMS化SI)calcd.for C26出9C1N803[M+H] + = 537.2129，found 537.2128。
[0050]按照實施例1相同方法，采用不同原料，制備W下化合物。
[0051 ] 實施例2(R)-N-(3-( (2-((4-(4-乙酷贓嗦-1-基)苯基)氨基)-5-(Ξ氣甲基)喀晚- 4-基)氨基)苯基)叮丙晚-2-甲酯胺；
[0052] 參照實施例1的方法，只是將2-((2-甲氧基-4-(4-乙酷基贓嗦-1-基）-苯基）氨 基)-4(((3-氨基)苯基)氨基)-5-氯喀晚替換成2-((4-(4-乙酷基贓嗦-1-基)-苯基)氨基)- 4(((3-氨基）苯基）氨基）-5-^氣甲基喀晚。產(chǎn)率為38.4%。111.9.:147-150°(：;1^應(yīng)1? (500MHz，DMS0)Sl0.61(s，lH)，9.55(s，lH)，8.75(s，lH)，8.32(s，lH)，7.72(s，lH)，7.56(d, J=6.2Hz,lH),7.37(m,3H),7.12(m,lH),6.69(m,2H),3.57(m,4H),2.98(m,4H),2.55(s, lH)，1.78(s，lH)，1.67(s，lH)，1.24(s，2H).HRMS(ESI)calcd.for C2抽27F3N802[M+H] + = 541.2287,found 541.2286〇
[0053] 實施例3(R)-N-(3-( (2-( (4-(4-嗎嘟-1-基)-2-甲氧基苯基)氨基)-5-氯喀晚-4- 基)氨基)苯基)叮丙晚-2-甲酯胺；
[0054] 參照實施例1的方法，只是將2-((2-甲氧基-4-(4-乙酷基贓嗦-1-基）-苯基）氨 基)-4(((3-氨基)苯基)氨基)-5-氯喀晚替換成2-((2-甲氧基-4-(4-嗎嘟-1-基)-苯基)氨 基)-4(((3-氨基)苯基)氨基)-5-氯喀晚。產(chǎn)率為45.4 %。111. P. : 138-14rC ; 1h-NMR( 500MHz， DMS0)Sl0.55(s，lH)，8.84(s，lH)，8.07(s，lH)，7.93(s，lH)，7.69(s，lH)，7.67(s，lH)，7.38 (d，J = 7.9Hz，lH)，7.31(m，lH)，7.25(m，lH)，6.62(d，J=1.8Hz，lH)，6.33(d，J = 8.2Hz, lH)，3.80(s，3H)，3.76-3.73(m，4H)，3.09-3.03(m，4H)，2.58(s，lH)，1.80(s，lH)，1.68(s， IH)，1.24(s，IH). HRMS(ESI)calcd. for C24H26CI化03[M+扣+ = 496.1864，found 496.1865。
[0055] 實施例4(R)-N-(3-((2-((4-(4-乙酷贓嗦-1-基)苯基)氨基)-5-氯喀晚-4-基)氨 基)苯基)叮丙晚-2-甲酯胺；
[0056] 參照實施例1的方法，只是將2-((2-甲氧基-4-(4-乙酷基贓嗦-1-基）-苯基）氨 基)-4(((3-氨基)苯基)氨基)-5-氯喀晚替換成2-((4-(4-乙酷基贓嗦-1-基)-苯基)氨基)- 4(((3-氨基）苯基）氨基）-5-氯喀晚。產(chǎn)率為39.4%。111.9.:145-147°(：;1護(hù)匪1?(50(^化， DMS0)Sl0.57(s，lH)，9.11(s，lH)，8.86(s，lH)，8.10(s，lH)，7.83(s，lH)，7.47(m，3H)，7.30 (m，2H)，6.77(d，J=8.7Hz，2H)，3.61-3.54(m，4H)，3.05-2.93(m，4H)，2.58(s，lH)，2.05(s, 3H)，1.79(s，lH)，1.68(s，lH)，1.24(s，lH).HRMS(ESI)calcd.for C2出27C1N802[M+H] + = 507.2024,found 507.2025。
[0057] 實施例5(R)-N-(3-((2-((4-(4-乙酷贓嗦-1-基)-2-甲氧基苯基)氨基)-5-(Ξ氣 甲基)喀晚-4-基)氨基)苯基)叮丙晚-2-甲酯胺；
[005引參照實施例1的方法，只是將2-((2-甲氧基-4-(4-乙酷基贓嗦-1-基）-苯基）氨 基)-4(( (3-氨基)苯基)氨基)-5-氯喀晚替換成2-((2-甲氧基-4-(4-乙酷基贓嗦-1-基)-苯 基)氨基)-4(( (3-氨基)苯基)氨基)-5-Ξ氣甲基喀晚。產(chǎn)率為39.2% em.p. :155-156 NMR巧00MHz，DMS0)Sl0.55(s，lH)，8.64(s，lH)，8.29(s，lH)，8.11(s，lH)，7.73(s，lH)，7.50 (d，J = 8.6Hz，lH)，7.46(d，J = 7.7Hz，lH)，7.28-7.24(m，lH)，7.17(s，lH)，6.62(d，J = 1.9Hz，lH)，6.26(s，lH)，3.78(s，3H)，3.58(m，4H)，3.07(m，4H)，2.55(m，lH)，2.06(s，3H)， 1.80(dJ = 9.7Hz，lH)，1.68(s，lH)，1.24(s，lH).HRMS(ESI)calcd.for C27出9F3N803[M+H] + = 571.2393,found 571.2395〇
[0059] 實施例6(R)-N-(3-((2-((4-(4-甲基贓嗦-1-基)苯基)氨基)-5-氯喀晚-4-基)氨 基)苯基)叮丙晚-2-甲酯胺；
[0060]參照實施例1的方法，只是將2-((2-甲氧基-4-(4-乙酷基贓嗦-1-基）-苯基）氨 基)-4(((3-氨基)苯基)氨基)-5-氯喀晚替換成2-((4-(4-甲基贓嗦-1-基)-苯基)氨基)-4 (((3-氨基）苯基）氨基)-5-氯喀晚。產(chǎn)率為45.4% em.p. :164-166°C;1h-NMR(500MHz，DMS0) 5l0.45(s，lH)，9.11(s，lH)，8.85(s，lH)，8.09(s，lH)，7.86(s，lH)，7.45(m，3H)，7.29(d，J = 4.5Hz，2H)，6.75(d，J = 8.6Hz，2H)，3.05(m，4H)，2.59(m，5H)，2.32(s，3H)，1.74(m，2H) ,HRMS(ESI)calcd.for C24出7C1N80[M+H] + = 479.2025,found 479.2027。
[0061 ] 實施例7(R)-N-(3-( (2-( (4-(4-甲基贓嗦-1-基）-2-甲氧基苯基）氨基)-5-氯喀 晚-4-基)氨基)苯基)叮丙晚-2-甲酯胺；
[0062] 參照實施例1的方法，只是將2-((2-甲氧基-4-(4-乙酷基贓嗦-1-基）-苯基）氨 基)-4(( (3-氨基）苯基）氨基)-5-氯喀晚替換成2-((2-甲氧基-4-(4-甲基贓嗦-1-基）-苯 基）氨基）-4(((3-氨基）苯基）氨基）-5-氯喀晚。產(chǎn)率為46.5%。111.9.:140-142°(：;1護(hù)匪1? (500MHz，DMS0)Sl0.52(s，lH)，8.82(s，lH)，8.06(s，lH)，7.93(s，lH)，7.68(s，lH)，7.65(d, J = 8.細(xì)z，2H)，7.38(d，J = 8.0Hz，lH)，7.31(d，J = 7.7Hz，lH)，7.23(t，J = 8.0Hz，lH)，6.60 (d J = 2.5Hz,lH),6.32(d J = 7.9Hz,lH),3.79(s,3H),3.11-3.06(m,4H),2.58(s,2H), 2.48(m，4H)，2.24(s，3H)，1.76(m，2H)，1.24(s，lH).HRMS(ESI)calcd.for C25出9C1Ns〇2[M+ H]" = 509.2180,found 509.2179〇
[0063] 實施例8(S)-N-(3-( (2-( (4-(4-贓晚-1-基)-2-甲氧基苯基)氨基)-5-氯喀晚-4- 基)氨基)苯基)叮丙晚-2-甲酯胺；
[0064] 參照實施例1的方法，只是將2-((2-甲氧基-4-(4-乙酷基贓嗦-1-基）-苯基）氨 基)-4(((3-氨基)苯基)氨基)-5-氯喀晚替換成2-((2-甲氧基-4-(4-贓晚-1-基)-苯基)氨 基)-4(( (3-氨基）苯基）氨基)-5-氯喀晚，只是將(R)-1-S苯甲基叮丙晚-2-簇酸替換成 (S)-1-S苯甲基日丫丙晚-2-簇酸。產(chǎn)率為48.7%em.p. :123-126°C;1h-NMR(500MHz，DMS0)S 10.54(s，lH)，8.83(s，lH)，8.06(s，lH)，7.93(s，lH)，7.64(m，2H)，7.39(d，J=7.7Hz，lH)， 7.32(d J = 7.3Hz，lH)，7.27-7.21(m，lH)，6.58(d J = 2.5Hz，lH)，6.32(d J = 7.細(xì)z，lH), 3.79(s，3H)，3.10-3.01(m，4H)，2.57(s，lH)，2.03(d，J = 74.8Hz，lH)，1.81(d，J = 9.5Hz， lH),1.68(s,lH),1.67-1.61(m,4H),1.53(m,2H),1.24(s,lH).HRMS(ESI)calcd.for 仿已出8C1N702[M+H] + = 494.2071，found 494.2074。
[0(?5] 實施例9(r)-n-(3-((2-((4-(4-乙酷贓嗦-1-基）-2-甲氧基苯基）氨基）喀晚-4- 基)氨基)苯基)叮丙晚-2-甲酯胺；
[0066] 參照實施例1的方法，只是將2-((2-甲氧基-4-(4-乙酷基贓嗦-1-基）-苯基）氨 基)-4(( (3-氨基)苯基)氨基)-5-氯喀晚替換成2-((2-甲氧基-4-(4-乙酷基贓嗦-1-基)-苯 基）氨基）-4(((3-氨基）苯基）氨基）-喀晚。產(chǎn)率為31.3%。m.p.:161-163°C;lH-匪R (500MHz，DMS0)Sl0.49(s，lH)，9.37(s，lH)，7.96(s，lH)，7.95(s，lH)，7.91(d，J=8.7Hz, 1H) ,7.53( s，lH) ,7.43(m，lH) ,7.20 (m，2H) ,6.68 (d，J = 2.4Hz，1H), 6.47(dd，J = 8.8， 2.4Hz，lH)，6.19(d，J = 5.Wz，lH)，3.84(s，3H)，3.60(dd，J=10.3,6.1Hz，4H)，3.09(m， 4H)，2.59(s，lH)，2.06(s，3H)，1.78(m，2H)，1.24(s，lH).HRMS(ESI)calcd.for C26出oN8〇3[M +H] + = 503.化 19，found 503.2521。
[0067] 實施例10(R)-N-(3-((2-((4-(4-乙酷贓嗦-1-基)苯基)氨基)喀晚-4-基)氨基)苯 基)叮丙晚-2-甲酯胺；
[006引參照實施例1的方法，只是將2-((2-甲氧基-4-(4-乙酷基贓嗦-1-基）-苯基）氨 基)-4(((3-氨基)苯基)氨基)-5-氯喀晚替換成2-((4-(4-乙酷基贓嗦-1-基)-苯基)氨基)- 4(((3-氨基）苯基）氨基）-喀晚。產(chǎn)率為29.5%。111.9.:169-171°(：;1護(hù)醒1?(5001化，0150)5 10.51(s,lH),9.34(s,lH),8.92(s,lH),7.97(d J = 5.5Hz,2H),7.80(s,lH),7.59(m,3H), 7.23(m,2H),6.87(d J = 8.4Hz,2H),6.18(d J = 5.5Hz,lH),3.58(m,4H),3.02(m,4H),2.58 (s，lH)，2.05(s，3H)，1.75(m，2H)，1.27(s，lH).HRMS(ESI)calcd.for C2出28N802[M+H] + = 473.2413,found 473.2412〇
[0069] 實施例n(s)-N-(3-((2-((4-(4-乙酷贓嗦-1-基)-2-甲氧基苯基)氨基)-5-(Ξ氣 甲基)喀晚-4-基)氨基)苯基)叮丙晚-2-甲酯胺；
[0070] 參照實施例1的方法，只是將2-((2-甲氧基-4-(4-乙酷基贓嗦-1-基）-苯基）氨 基)-4(( (3-氨基)苯基)氨基)-5-氯喀晚替換成2-((2-甲氧基-4-(4-乙酷基贓嗦-1-基)-苯 基)氨基)-4(((3-氨基)苯基)氨基)-5-Ξ氣甲基喀晚，只是將(R)-1-S苯甲基叮丙晚-2-簇 酸替換成（S)-1-ミ苯甲基日丫丙晚-2-簇酸。產(chǎn)率為37.8%。m.p.:145-146°C;lH-匪R (500MHz，DMS0)Sl0.58(s，lH)，8.68(s，lH)，8.29(s，lH)，8.13(s，lH)，7.73(s，lH)，7.50(d, J = 8.7Hz，lH)，7.47(d，J = 8.1Hz，lH)，7.22(m，2H)，6.63(d，J=1.9Hz，lH)，6.25(m，lH)， 3.79(s，3H)，3.62-3.55(m，4H)，3.07(m，4H)，2.56(m，lH)，1.80(m，lH)，1.69(m，lH)，1.25 (s, lH).HRMS(ESI)calcd.for C2 訊 29 的 N803[M+H] + = 571.2393, found 571.2394。
[0071] 實施例12(S)-N-(3-((2-((4-(4-乙酷贓嗦-1-基)-2-甲氧基苯基)氨基)-5-氯喀 晚-4-基)氨基)苯基)叮丙晚-2-甲酯胺；
[0072] 參照實施例1的方法，只是將(R)-1-S苯甲基叮丙晚-2-簇酸替換成(S)-1-S苯甲 基叮丙晚-2-簇酸。產(chǎn)率為42.8%。m.p.:149-150°C;lH-NMR(500MHz，DMS0)δl0.56(s，lH)， 8.87(s，lH)，8.08(s，lH)，7.93(s，lH)，7.69(d J = 8.細(xì)z，2H)，7.40(dJ = 7.甜z，lH)，7.31 (m，lH)，7.27-7.21(m，lH)，6.65(d，J = 2.3Hz，lH)，6.：M(d，J = 7.4Hz，lH)，3.80(s，3H)， 3.58(dd，J=10.2,5.7Hz，4H)，3.11-2.96(m，4H)，2.56(m，lH)，1.81(d，J = 8.9Hz，lH)，1.68 ,1.25(s,lH).HRMS(ESI)calcd.for C26H29C1N803[M+H] + = 537.2129, found 537.21230。
[0073] 實施例13(s)-N-(3-((2-((4-(4-乙酷贓嗦-1-基)苯基)氨基)-5-氯喀晚-4-基)氨 基)苯基)叮丙晚-2-甲酯胺；
[0074] 參照實施例1的方法，只是將2-((2-甲氧基-4-(4-乙酷基贓嗦-1-基）-苯基）氨 基)-4(((3-氨基)苯基)氨基)-5-氯喀晚替換成2-((4-(4-乙酷基贓嗦-1-基)-苯基)氨基)- 4(((3-氨基)苯基)氨基)-5-氯喀晚，只是將(R)-1-S苯甲基叮丙晚-2-簇酸替換成（S)-1- Ξ苯甲基日丫丙晚-2-簇酸。產(chǎn)率為39.7 %。111. P. : 204-206°C ; 1h-醒R( 500MHz，DMS0) δ 10.58 (s，lH)，9.13(s，lH)，8.88(s，lH)，8.10(s，lH)，7.83(s，lH)，7.47(m，3H)，7.30(m，2H)，6.77 (d，J=8.4Hz，2H)，3.60-3.54(m，4H)，2.97(m，4H)，2.58(s，lH)，1.79(s，lH)，1.68(s，lH)， 1.24(s，IH).HRMS(ESI)calcd. for C25出7C1Ns〇2[M+扣+ = 507.2024，found 507.2026。
[0075] 實施例14(S)-N-(3-((2-((4-(4-甲基贓嗦-1-基)-2-甲氧基苯基)氨基)-5-氯喀 晚-4-基)氨基)苯基)叮丙晚-2-甲酯胺；
[0076] 參照實施例1的方法，只是將2-((2-甲氧基-4-(4-乙酷基贓嗦-1-基）-苯基）氨 基)-4( ((3-氨基）苯基）氨基)-5-氯喀晚替換成2-( (2-甲氧基-4-(4-甲基贓嗦-1-基）-苯 基)氨基)-4(((3-氨基)苯基)氨基)-5-氯喀晚，只是將(Κ)-1-Ξ苯甲基叮丙晚-2-簇酸替換 成（S)-1-S苯甲基日丫丙晚-2-簇酸。產(chǎn)率為44.5%em.p. :189-19rC;iH-NMR(500MHz，DMS0) 5l0.56(s，lH)，8.83(s，lH)，8.07(s，lH)，7.94(s，lH)，7.69(s，lH)，7.65(d，J=8.7Hz，lH)， 7.39(d J = 8.0Hz,lH),7.31(d J = 7.7Hz,lH),7.23(t J = 8.0Hz,lH),6.60(d J = 2.4Hz, lH),6.32(d J = 8.1Hz,lH),3.79(s,3H),3.13-3.02(m,4H),2.59(m,lH),2.48(m,4H),2.24 (s，3H)，1.76(m，2H)，1.24(s，lH).HRMS(ESI)calcd.for C2出29C1N802[M+H] + = 509.2180, found 509.2185。
[0077] 實施例15(R)-N-(3-((2-((4-(4-乙酷贓嗦-1-基)-3-氯苯基)氨基)-5-氯喀晚-4- 基)氨基)苯基)叮丙晚-2-甲酯胺；
[007引參照實施例1的方法，只是將2-((2-甲氧基-4-(4-乙酷基贓嗦-1-基）-苯基）氨 基)-4(((3-氨基)苯基)氨基)-5-氯喀晚替換成2-((3-氯-4-(4-乙酷基贓嗦-1-基)-苯基） 氨基）-4(((3-氨基）苯基）氨基）-5-氯喀晚。產(chǎn)率為39.4%。111.9.:220-221 °(：;1^應(yīng)1? (500MHz，DMS0)Sl0.59(s，lH)，9.42(s，lH)，8.99(s，lH)，8.16(s，lH)，7.82(s，lH)，7.75(s, lH)，7.52(dd，J = 8.8,2.5Hz，lH)，7.48(d，J = 7.5Hz，lH)，7.32(m，2H)，6.92(d，J = 8.7Hz， lH),3.60-3.54(m,4H),2.89-2.76(m,4H),2.56(m,lH),2.04(s,3H),1.80-1.73(m,lH), 1.67(m，lH)，l. 23( s，IH) .HRMS(ESI)calcd. for C2 出 26Cl2N802[M+H] + = 541.16:34, found 541.1633。
[0079] 實施例16(R)-N-(3-((2-((4-(4-乙酷贓嗦-1-基)-3-氣苯基)氨基)-5-氯喀晚-4- 基)氨基)苯基)叮丙晚-2-甲酯胺；
[0080] 參照實施例1的方法，只是將2-((2-甲氧基-4-(4-乙酷基贓嗦-1-基）-苯基）氨 基)-4(((3-氨基)苯基)氨基)-5-氯喀晚替換成2-((3-氣-4-(4-乙酷基贓嗦-1-基)-苯基） 氨基）-4(( (3-氨基）苯基）氨基）-5-氯喀晚。產(chǎn)率為38.5 % em.p. :215-216 °C;1h-應(yīng)R (500MHz，DMS0)Sl0.58(s，lH)，9.40(s，lH)，8.98(s，lH)，8.15(s，lH)，7.84(s，lH)，7.58(d, J=14.8Hz，lH)，7.48(d，J = 7.3Hz，lH)，7.29(m，3H)，6.83(t J = 9.3Hz，lH)，3.62-3.52(m, 4H)，2.87(dt，J=31.2,4.5Hz，4H)，2.56(m，lH)，2.04(s，3H)，1.77(m，lH)，1.67(m，lH)， 1.23(s，IH).HRMS(ESI)calcd. for C25出6C1FNs〇2[M+扣+ = 525.1930，found 5化.1933。
[0081 ] 實施例17(S)-N-(3-((2-((4-(4-乙酷贓嗦-1-基)-3-甲基苯基)氨基)-5-氯喀晚- 4-基)氨基)苯基)叮丙晚-2-甲酯胺；
[0082] 參照實施例1的方法，只是將2-((2-甲氧基-4-(4-乙酷基贓嗦-1-基）-苯基）氨 基)-4(( (3-氨基）苯基）氨基)-5-氯喀晚替換成2-((3-甲基-4-(4-乙酷基贓嗦-1-基）-苯 基)氨基)-4(((3-氨基)苯基)氨基)-5-氯喀晚，只是將(Κ)-1-Ξ苯甲基叮丙晚-2-簇酸替換 成（5)-1-^苯甲基日丫丙晚-2-簇酸。產(chǎn)率為43.6%。111.9.:189-190°(：;1護(hù)匪1?(5001化， Acetic)Sl0.55(s，lH)，9.15(s，lH)，8.88(s，lH)，8.11(s，lH)，7.80(s，lH)，7.48(s，lH), 7.38(m，2H)，7.30(m，2H)，6.79(d，J = 8.4Hz，lH)，3.56-3.51(m，5H)，2.76-2.65(m，W)， 2.54(m,lH),2.11(s,3H),2.04(s,3H),1.78(d,J=9.2Hz,lH),1.66(m,lH),1.23(s,lH) ,HRMS(ESI)calcd.for C26出9C1N802[M+H] + = 521.2180,found 521.2184。
[0083] 實施例18(R)-N-(3-((2-((4-(4-乙酷贓嗦-1-基)-3-甲基苯基)氨基)-5-氯喀晚- 4-基)氨基)苯基)叮丙晚-2-甲酯胺；
[0084]參照實施例1的方法，只是將2-( (2-甲氧基-4-(4-乙酷基贓嗦-1-基）-苯基）氨 基)-4(( (3-氨基）苯基）氨基)-5-氯喀晚替換成2-((3-甲基-4-(4-乙酷基贓嗦-1-基）-苯 基）氨基）-4(((3-氨基）苯基）氨基）-5-氯喀晚。產(chǎn)率為46.8%。111.9.:211-212°(：;1護(hù)匪1? (500MHz，DMS0)Sl0.56(s，lH)，9.16(s，lH)，8.89(s，lH)，8.11(s，lH)，7.81(s，lH)，7.49(s, lH),7.39(m,2H),7.31(m,2H),6.80(d J = 8.3Hz,lH),3.55(m,4H),2.71(m,4H),2.56(m, lH),2.12(s,3H),2.04(s,3H),1.78(m,lH),1.67(m,lH),1.24(s,lH).HRMS(ESI)calcd.for C26出9C1N802[M+H] + = 521.2180，found 521.2185。
[00化]實施例i9(r)-n-(3-((2-((4-(4-贓晚-1-基)-2-甲氧基苯基)氨基)-5-氯喀晚-4- 基)氨基)苯基)叮丙晚-2-甲酯胺
[0086] 參照實施例1的方法，只是將2-((2-甲氧基-4-(4-乙酷基贓嗦-1-基）-苯基）氨 基)-4(((3-氨基)苯基)氨基)-5-氯喀晚替換成2-((2-甲氧基-4-(4-贓晚-1-基)-苯基)氨 基)-4(((3-氨基）苯基）氨基)-5-氯喀晚。產(chǎn)率為43.7%。1護(hù)醒1?(5001化，0150)510.54(3， lH)，8.83(s，lH)，8.06(s，lH)，7.93(s，lH)，7.65(m，2H)，7.39(d，J=7.7Hz，lH)，7.32(d，J = 7.0Hz，lH)，7.24(t，J = 8.0Hz，lH)，6.58(d，J = 2.5Hz，lH)，6.32(d，J = 7.8Hz，lH)，3.79 (s，3H)，3.09-3.02(m，4H)，2.57(m，lH)，1.81(d，J=9.7Hz，lH)，1.68(m，lH)，1.67-1.60(m， 4H)，1.52(dt，J=ll.l，5.7Hz，2H)，1.23(s，lH).HRMS(ESI)calcd.for C2出28C1N702[M+H] + = 494.2071，found 494.2075。
[0087] 實施例20(S)-N-(3-((2-((4-(4-嗎嘟-1-基)-2-甲氧基苯基)氨基)-5-氯喀晚-4- 基)氨基)苯基)叮丙晚-2-甲酯胺；
[008引參照實施例1的方法，只是將2-((2-甲氧基-4-(4-乙酷基贓嗦-1-基）-苯基）氨 基)-4(((3-氨基)苯基)氨基)-5-氯喀晚替換成2-((2-甲氧基-4-(4-嗎嘟-1-基)-苯基)氨 基)-4(( (3-氨基）苯基）氨基)-5-氯喀晚，只是將(R)-1-S苯甲基叮丙晚-2-簇酸替換成 (S)-1-S 苯甲基日丫丙晚-2-簇酸。產(chǎn)率為 43.7%</H-NMR(500MHz，DMS0)S10.53(s，1H)，8.83 (s，lH)，8.07(s，lH)，7.94(s，lH)，7.69(m，2H)，7.38(d，J = 7.9Hz，lH)，7.32(d，J = 7.細(xì)z， lH)，7.24(t J = 7.9Hz，lH)，6.62(d J = 2.5Hz，lH)，6.33(d J = 7.8Hz，lH)，3.80(s，3H), 3.77-3.73(m，4H)，3.08-3.04(m，4H)，2.58(m，lH)，1.80(m，lH)，1.69(m，lH)，1.24(s，lH) ,HRMS(ESI)calcd.for C24出6C1N703[M+H] + = 496.1864,found 496.1868。
[0089] 實施例21 (S)-N-(3-( (2-( (4-(4-乙酷贓嗦-1-基)-3-氣苯基)氨基)-5-氯喀晚-4- 基)氨基)苯基)叮丙晚-2-甲酯胺；
[0090] 參照實施例1的方法，只是將2-((2-甲氧基-4-(4-乙酷基贓嗦-1-基）-苯基）氨 基)-4(((3-氨基)苯基)氨基)-5-氯喀晚替換成2-((3-氣-4-(4-乙酷基贓嗦-1-基)-苯基） 氨基)-4(( (3-氨基)苯基)氨基)-5-氯喀晚，只是將(R)-1-S苯甲基叮丙晚-2-簇酸替換成 (S)-1-S 苯甲基叮丙晚-2-簇酸。產(chǎn)率為 37.4%d1h-NMR(500MHz，DMS0)S10.57(s，1H)，9.38 (s，lH)，8.92(m，lH)，8.14(s，lH)，7.89-7.78(m，lH)，7.59(m，2H)，7.46(m，2H)，7.：M-7.20 (m,3H),6.82(t J = 9.3Hz,lH),3.56(m,4H),2.92-2.81(m,4H),2.56(m,lH),2.06(s,3H), 1.77(m，lH)，1.66(m，lH)，1.23(s，lH).HRMS(ESI)calcd.for C25H26C1FN802[M+H]+= 525.1930,found 525.1934〇
[0091] 實施例22(S)-N-(3-( (2-( (4-(4-乙酷贓嗦-1-基)-3-氯苯基)氨基)-5-氯喀晚-4- 基)氨基)苯基)叮丙晚-2-甲酯胺；
[0092] 參照實施例1的方法，只是將2-( (2-甲氧基-4-(4-乙酷基贓嗦-1-基）-苯基）氨 基)-4(((3-氨基)苯基)氨基)-5-氯喀晚替換成2-((3-氯-4-(4-乙酷基贓嗦-1-基)-苯基） 氨基)-4(( (3-氨基)苯基)氨基)-5-氯喀晚，只是將(R)-1-S苯甲基叮丙晚-2-簇酸替換成 (S)-1-S 苯甲基叮丙晚-2-簇酸。產(chǎn)率為 36.2%d1h-NMR(500MHz，DMS0)S10.56(s，1H)，9.38 (s，lH)，8.96(s，lH)，8.15(s，lH)，7.82(s，lH)，7.74(s，lH)，7.51(dd，J=8.8,2.5Hz，lH), 7.47(d，J = 7.7Hz，lH)，7.35-7.23(m，2H)，6.92(d，J = 8.8Hz，lH)，3.59-3.52(m，4H)，2.85 (m，4H)，2.54(m，lH)，2.04(s，3H)，1.77(d，J=10.0Hz，lH)，1.66(m，lH)，1.27(s，lH).HRMS 化SI)calcd.for C25出6Cl2N8〇2[M+H] + = 541.16：M，found 541.1636。
[0093] 實施例23(R)-N-(3-((5-氯-2-((4-(二甲氨基)-2-甲氧基苯基)氨基）喀晚-4-基） 氨基)苯基)叮丙晚-2-甲酯胺；
[0094] 參照實施例1的方法，只是將2-((2-甲氧基-4-(4-乙酷基贓嗦-1-基）-苯基）氨 基)-4(((3-氨基)苯基)氨基)-5-氯喀晚替換成2-((2-甲氧基-4-二甲氨基-苯基)氨基)-4 (((3-氨基）苯基）氨基）-5-氯喀晚。產(chǎn)率為31.2%。lH-醒R(500MHz，DMS0)δl0.51(s，lH)， 8.76(s，lH)，8.04(s，lH)，7.94(s，lH)，7.65(s，lH)，7.55(d，J = 8.7Hz，lH)，7.36(d，J = 7.3Hz，2H)，7.22(t J = 8.0Hz，lH)，6.38(d J = 2.5Hz，lH)，6.16(d J = 7.7Hz，lH)，3.79(s, 3H)，2.87(s，6H)，2.57(m，lH)，1.81(d，J = 9.細(xì)z，lH)，1.68(m，lH)，1.24(s，lH).HRMS(ESI) calcd.for C22出4CI化02[M+H] + = 454.1758,found 454.1756。
[OOM] 實施例24(S)-N-(3-((5-氯-2-((4-(二甲氨基)-2-甲氧基苯基)氨基）喀晚-4-基） 氨基)苯基)叮丙晚-2-甲酯胺；
[0096] 參照實施例1的方法，只是將2-((2-甲氧基-4-(4-乙酷基贓嗦-1-基）-苯基）氨 基)-4(((3-氨基)苯基)氨基)-5-氯喀晚替換成2-((2-甲氧基-4-二甲氨基-苯基)氨基)-4 (((3-氨基)苯基)氨基)-5-氯喀晚，只是將(R)-1-S苯甲基叮丙晚-2-簇酸替換成(S)-1-S 苯甲基日丫丙晚-2-簇酸。產(chǎn)率為 29.3%</H-NMR(500MHz，DMS0)S10.51(s，1H)，8.76(s，1H), 8.04(s，lH)，7.94(s，lH)，7.65(s，lH)，7.55(d J = 8.7Hz，lH)，7.36(d J = 7.3Hz，2H)，7.22 (t，J = 8.0Hz，lH)，6.38(d，J = 2.5Hz，lH)，6.16(d，J = 7.7Hz，lH)，3.79(s，3H)，2.87(s, 6H)，2.57(m，lH)，1.81(d，J=9.8Hz，lH)，1.68(m，lH)，1.24(s，lH).HRMS(ESI)calcd.for C22出4C1N702[M+H] + = 454.1758，found 454.1757。
[0097] 實施例25(S)-N-(3-((2-((4-(4-嗎嘟-1-基）苯基)氨基)-5-氯喀晚-4-基)氨基） 苯基)叮丙晚-2-甲酯胺；
[009引參照實施例1的方法，只是將2-((2-甲氧基-4-(4-乙酷基贓嗦-1-基）-苯基）氨 基)-4(( (3-氨基)苯基)氨基)-5-氯喀晚替換成2-((4-(4-嗎嘟-1-基)-苯基)氨基)-4(( (3- 氨基)苯基)氨基)-5-氯喀晚，只是將(R)-1-S苯甲基叮丙晚-2-簇酸替換成(S)-1-S苯甲 基叮丙晚-2-簇酸。產(chǎn)率為40.7 %。1h-NMR( 500MHz，DMS0)δ 10.57 (S，1H)，9.09(S，1H)，8.86 (s，lH)，8.09(s，lH)，7.83(s，lH)，7.45(d，J = 8.細(xì)z，3H)，7.30(d，J = 3.6Hz，2H)，6.74(d，J = 8.7Hz，2H)，3.74-3.69(m，4H)，3.02-2.94(m，4H)，2.56(m，lH)，1.79(d，J = 9.7Hz，lH)， 1.67(m，lH) ,1.22( s，lH) .HRMS(ESI)calcd. for C2 油 24CI 化 02[M+H] + = 466.1758'found 466.1756。
[0099] 實施例26(S)-N-(3-((2-((4-(4-贓晚-1-基）苯基)氨基)-5-氯喀晚-4-基)氨基） 苯基)叮丙晚-2-甲酯胺；
[0100]參照實施例1的方法，只是將2-( (2-甲氧基-4-(4-乙酷基贓嗦-1-基）-苯基）氨 基)-4(( (3-氨基)苯基)氨基)-5-氯喀晚替換成2-((4-(4-贓晚-1-基)-苯基)氨基)-4(( (3- 氨基)苯基)氨基)-5-氯喀晚，只是將(R)-1-S苯甲基叮丙晚-2-簇酸替換成(S)-1-S苯甲 基叮丙晚-2-簇酸。產(chǎn)率為47.7 %。1h-NMR( 500MHz，DMS0)δ 10.56(S，1H)，9.04(S，1H)，8.84 (s，lH)，8.08(s，lH)，7.83(s，lH)，7.45(d，J = 3.2Hz，lH)，7.42(d，J = 8.9Hz，2H)，7.29(m， lH)，6.72(d，J = 8.7Hz，2H)，3.00-2.95(m，4H)，2.56(s，lH)，1.79(d，J = 9.4Hz，lH)，1.67 (s，lH)，1.64-1.58(m，4H)，1.49(dt，J=11.2,5.7Hz，2H)，1.22(s，lH).HRMS化SI) calcd.for C24H26CI化02[M+H] + = 464.1966,found 464.1968。
[0101 ]實施例27:本發(fā)明部分化合物對EGH?酪氨酸激酶活性的抑制作用
[0102] 受試化合物對激酶的抑制活性用半抑制濃度IC50值來表示。該類試驗采用均相時 間分辨巧光化TRF)技術(shù)進(jìn)行測定，方法如下:將一系列梯度濃度的化合物，在室溫條件下與 特定濃度的酶溶液共同解育5分鐘，之后加入適量的酶反應(yīng)底物、ATP，啟動酶反應(yīng)過程，30 分鐘后，向酶反應(yīng)體系中加入適量的反應(yīng)終止液和檢測液，解育1小時后，在Mo 1 eCU1 ar device公司的Flexstation III多功能酶標(biāo)儀上，測定特定化合物濃度下的酶活力，并計算 不同濃度的化合物對酶活力的抑制活性，之后根據(jù)四參數(shù)方程，對不同濃度化合物下酶活 力的抑制活性進(jìn)行擬合，計算出ICso值。本實施例所采用的激酶EGFR購自Sigma A1化ich，檢 測試劑盒HTRF KinEA沈-TK購自Cisbio Bioassays公司，ATP購自Sigma A1化ich公司。本發(fā) 明受試化合物的IC50數(shù)據(jù)見表1。
[0103] 表1
[0104]
[0105] 實施例28:化合物對A43UH1975細(xì)胞增殖抑制活性測定
[0106] 本例用于測定本發(fā)明化合物對于EGFR野生型高表達(dá)細(xì)胞株A431及T790M點突變細(xì) 胞株H1975的增殖抑制活性，化合物對細(xì)胞增殖的抑制活性用半數(shù)抑制濃度IC50來表示。試 驗方案如下:EGFR野生型高表達(dá)細(xì)胞株A431及T790M點突變細(xì)胞株H1975細(xì)胞均購于ATCC， W適宜的細(xì)胞濃度(A431:20000個細(xì)胞/ml培養(yǎng)基;H1975:15000個細(xì)胞/ml培養(yǎng)基)將細(xì)胞 接種于白色不透明的384孔培養(yǎng)板上；之后將細(xì)胞放置于37°C，5%C02的環(huán)境中進(jìn)行培養(yǎng)， 24小時后，向培養(yǎng)的細(xì)胞培養(yǎng)基中加入一系列濃度梯度的藥物，一般選擇10個濃度，之后將 細(xì)胞放回原培養(yǎng)環(huán)境中繼續(xù)培養(yǎng)48小時，之后按照CellTiter-Glo Luminescent Cell Viability Assay的方法，測定受試化合物對A431及H1975細(xì)胞增殖的影響，并計算不同濃 度的化合物對細(xì)胞增殖的抑制活性，CellTiter-Glo Luminescent Cell Viability Assay 檢測試劑購自Promega。之后對不同濃度的化合物下A431及H1975細(xì)胞增殖抑制活性進(jìn)行四 參數(shù)擬合，本發(fā)明受試化合物的IC50數(shù)據(jù)如下表2。
[0107] 表2
[010 引
[0109]
[0110] 本發(fā)明化合物結(jié)構(gòu)上具有新穎性，是首次提出的新型非可逆共價結(jié)合片段，同時 體外生物活性評價結(jié)果顯示，本發(fā)明的化合物對過表達(dá)EGFR的人表皮癌細(xì)胞株A431、對 Gefitinib耐藥的人肺腺癌細(xì)胞株化975及突變型EGFR激酶具有明顯的抑制增殖活性。
【主權(quán)項】
1. 一種含叮丙晚環(huán)側(cè)鏈的芳胺喀晚衍生物或其對映異構(gòu)體，其特征在于，結(jié)構(gòu)通式I如 下所示： 其中：化為Ξ氣甲基、氯、氨， 化為氨、甲基、甲氧基、氣、氯， 化為乙酷贓嗦基、甲基贓嗦基、嗎嘟基、贓晚基、二甲胺基。2. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種含叮丙晚環(huán)側(cè)鏈的芳胺喀晚衍生物或其對應(yīng)異構(gòu)體，其 特征在于:所述的式I化合物為如下任一化合物： (R)-N-(3-((2-((4-(4-乙酷贓嗦-1-基)-2-甲氧基苯基)氨基)-5-(Ξ氣甲基）喀晚-4- 基)氨基)苯基)叮丙晚-2-甲酯胺(化合物1); (R)-N-(3-((2-((4-(4-乙酷贓嗦-1-基）苯基)氨基)-5-(Ξ氣甲基）喀晚-4-基)氨基） 苯基)叮丙晚-2-甲酯胺(化合物2); (R)-N-(3-( (2-((4-(4-嗎嘟-1-基）-2-甲氧基苯基）氨基）-5-氯喀晚-4-基）氨基）苯 基)叮丙晚-2-甲酯胺(化合物3); (R)-N-(3-((2-((4-(4-乙酷贓嗦-1-基)苯基)氨基)-5-氯喀晚-4-基)氨基)苯基）叮丙 晚-2-甲酯胺(化合物4); (R)-N-(3-((2-((4-(4-乙酷贓嗦-1-基)-2-甲氧基苯基)氨基)-5-氯喀晚-4-基)氨基） 苯基)叮丙晚-2-甲酯胺(化合物5); (R)-N-(3-((2-((4-(4-甲基贓嗦-1-基)苯基)氨基)-5-氯喀晚-4-基)氨基)苯基）叮丙 晚-2-甲酯胺(化合物6); (R) -N-(3-((2-((4-(4-甲基贓嗦-1-基)-2-甲氧基苯基)氨基)-5-氯喀晚-4-基)氨基） 苯基)叮丙晚-2-甲酯胺(化合物7); (S) -N-(3-( (2-((4-(4-贓晚-1-基）-2-甲氧基苯基）氨基）-5-氯喀晚-4-基）氨基）苯 基)叮丙晚-2-甲酯胺(化合物8); (R)-N-(3-((2-((4-(4-乙酷贓嗦-1-基)-2-甲氧基苯基)氨基）喀晚-4-基)氨基)苯基） 叮丙晚-2-甲酯胺(化合物9); (R) -N-(3-((2-((4-(4-乙酷贓嗦-1-基)苯基)氨基)喀晚-4-基)氨基)苯基）日丫丙晚-2- 甲酯胺(化合物10); (S) -N-(3-((2-((4-(4-乙酷贓嗦-1-基)-2-甲氧基苯基)氨基)-5-(Ξ氣甲基）喀晚-4- 基)氨基)苯基)叮丙晚-2-甲酯胺(化合物11); (S)-N-(3-((2-((4-(4-乙酷贓嗦-1-基)-2-甲氧基苯基)氨基)-5-氯喀晚-4-基)氨基） 苯基)叮丙晚-2-甲酯胺(化合物12); (S)-N-(3-((2-((4-(4-乙酷贓嗦-1-基)苯基)氨基)-5-氯喀晚-4-基)氨基)苯基）叮丙 晚-2-甲酯胺(化合物13); (S)-N-(3-((2-((4-(4-甲基贓嗦-1-基)-2-甲氧基苯基)氨基)-5-氯喀晚-4-基)氨基） 苯基)叮丙晚-2-甲酯胺(化合物14); (R)-N-(3-( (2-((4-(4-乙酷贓嗦-1-基）-3-氯苯基）氨基）-5-氯喀晚-4-基）氨基）苯 基)叮丙晚-2-甲酯胺(化合物15); (R) -N-(3-( (2-((4-(4-乙酷贓嗦-1-基）-3-氣苯基）氨基）-5-氯喀晚-4-基）氨基）苯 基)叮丙晚-2-甲酯胺(化合物16); (S) -N-(3-((2-((4-(4-乙酷贓嗦-1-基)-3-甲基苯基)氨基)-5-氯喀晚-4-基)氨基)苯 基)叮丙晚-2-甲酯胺(化合物17); (R)-N-(3-((2-((4-(4-乙酷贓嗦-1-基)-3-甲基苯基)氨基)-5-氯喀晚-4-基)氨基)苯 基)叮丙晚-2-甲酯胺(化合物18); (R) -N-(3-( (2-((4-(4-贓晚-1-基）-2-甲氧基苯基）氨基）-5-氯喀晚-4-基）氨基）苯 基)叮丙晚-2-甲酯胺(化合物19); (S) -N-(3-( (2-((4-(4-嗎嘟-1-基）-2-甲氧基苯基）氨基）-5-氯喀晚-4-基）氨基）苯 基)叮丙晚-2-甲酯胺(化合物20); (S)-N-(3-( (2-((4-(4-乙酷贓嗦-1-基）-3-氣苯基）氨基）-5-氯喀晚-4-基）氨基）苯 基)叮丙晚-2-甲酯胺(化合物21); (S)-N-(3-( (2-((4-(4-乙酷贓嗦-1-基）-3-氯苯基）氨基）-5-氯喀晚-4-基）氨基）苯 基)叮丙晚-2-甲酯胺(化合物22); (R) -N-(3-( (5-氯-2-((4-(二甲氨基)-2-甲氧基苯基)氨基)喀晚-4-基)氨基)苯基）口丫 丙晚-2-甲酯胺(化合物23); (S) -N-(3-( (5-氯-2-((4-(二甲氨基)-2-甲氧基苯基)氨基)喀晚-4-基)氨基)苯基）口丫 丙晚-2-甲酯胺(化合物24); (S)-N-(3-( (2-((4-(4-嗎嘟-1-基)苯基）氨基)-5-氯喀晚-4-基）氨基）苯基）叮丙晚- 2-甲酯胺(化合物25); (S)-N-(3-( (2-((4-(4-贓晚-1-基)苯基）氨基)-5-氯喀晚-4-基）氨基）苯基）叮丙晚- 2-甲酯胺(化合物26)。3.根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的一種含叮丙晚環(huán)側(cè)鏈的芳胺喀晚衍生物或其對應(yīng)異構(gòu)體 的制備方法，其特征在于，通過W下步驟實現(xiàn)： W5-位取代尿喀晚1為起始原料，在N，N-二異丙基乙胺為堿，Ξ氯氧憐作溶劑條件下 ll〇°C回流生成5-位取代2,4-二氯喀晚2,中間體2與單側(cè)Boc保護(hù)的間苯二胺在正下醇中反 應(yīng)生成4，5-位取代的2-氯喀晚3，中間體3與取代的苯胺在1N HC1催化下生成2，4，5-位取代 的喀晚4,中間體4在Ξ氣乙酸條件下脫保護(hù)得到中間體5,中間體5再與Ξ苯亞甲基保護(hù)的 叮丙晚-2-酸縮合生成化合物6，化合物6最后脫保護(hù)基得到目標(biāo)產(chǎn)物式I化合物;反應(yīng)式如 下：其中取代基的定義同權(quán)利要求1。4.根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的一種含叮丙晚環(huán)側(cè)鏈的芳胺喀晚衍生物或其對應(yīng)異構(gòu)體 在制備抗腫瘤細(xì)胞和祀向EGFR激酶藥物中的應(yīng)用，其特征在于，所述腫瘤細(xì)胞是指過表達(dá) EGFR的人表皮癌細(xì)胞株A431、對Gefitin化耐藥的人肺腺癌細(xì)胞株H1975,所述EGFR激酶是 指野生型EGFR激酶、L858R/T790M雙突變型EGFR激酶。
【文檔編號】C07D403/12GK106083828SQ201610532950
【公開日】2016年11月9日
【申請日】2016年6月30日
【發(fā)明人】陳文騰, 黃衛(wèi), 邵加安, 俞永平
【申請人】浙江大學(xué)