一類嘧啶并萘酰亞胺衍生物及其制備方法和應(yīng)用
【專利摘要】一類嘧啶并萘酰亞胺衍生物及其制備方法和應(yīng)用，所述衍生物具有式I至III 所示結(jié)構(gòu)：式Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ中，a為0、1或2；m為2、3或4；n為2、3或4；x為0至6的整數(shù)；R1為、、、、、、，R2為C1?C4的烷基、、、或者；R3為、、、或者。本發(fā)明提供了一種以苊為原料，通過引入鄰氨基氰，構(gòu)建嘧啶并萘酰亞胺的制備方法。根據(jù)已有數(shù)據(jù)看出，經(jīng)具有靶向運載能力的多胺修飾后，萘酰亞胺的抗腫瘤活性有明顯提升，且對腫瘤轉(zhuǎn)移有較強的抑制作用。根據(jù)這一發(fā)現(xiàn)，我們設(shè)計合成一系列嘧啶并萘酰亞胺衍生物。初測結(jié)果顯示，該類萘酰亞胺衍生物對多種腫瘤細(xì)胞株表現(xiàn)出良好的體外抗腫瘤活性。對于發(fā)展新的抗腫瘤藥具有重要意義。
【專利說明】
一類嘧啶并萘酰亞胺衍生物及其制備方法和應(yīng)用
技術(shù)領(lǐng)域
[0001] 本發(fā)明屬于藥物化學(xué)領(lǐng)域，特別涉及一類嘧啶并萘酰亞胺衍生物及其制備方法和 應(yīng)用。
【背景技術(shù)】
[0002] 萘酰亞胺是一類具有潛在抗腫瘤活性的有機小分子化合物。多個萘酰亞胺衍生物 如氨萘非特(Amonafide)、米托萘胺(Mitonafide)、Azonafide等做為抗腫瘤藥物曾進(jìn)入到 臨床試驗階段，但是由于其較強的神經(jīng)毒性和骨髓抑制，最終未獲準(zhǔn)上市。
[0003；
[0004] 為了降低萘酰亞胺類化合物的毒性
，提高其生物活性，各國研宄者做了多方面的 努力。文獻(xiàn)調(diào)研發(fā)現(xiàn)基于萘酰亞胺的結(jié)構(gòu)修飾主要集中在兩個方面，一是對萘酰亞胺側(cè)鏈 進(jìn)行取代修飾;二是對萘酰亞胺的芳環(huán)進(jìn)行取代或者并環(huán)修飾。雖然得到了一些活性較好 的化合物，但是由于擴環(huán)的目的性不強，并不能有效解決萘酰亞胺高毒性的問題。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0005] -類嘧啶并萘酰亞胺衍生物，所述衍生物具有式I至III所示結(jié)構(gòu)：
[0006]
式I、n、m中，a為0、1或2;m為2、3或4;n為2、3或4;x為0至6的整數(shù)為!一CH3、
>R2為C1-C4的烷基
或者
> 或者
[0008] 上述的嘧啶并萘酰亞胺衍生物的制備方法，合成路線如下：
[0009]
[0021] (3)將步驟(2)的化合物與不同的胺進(jìn)行取代；
[0022] 上述（1)(2)(3)三種情況均可得到化合杉
?七合書 再與鹽酸在乙醇中攪拌反應(yīng)得到化合物10;

[0023] (i)將化合物8在甲苯中與三氯氧磷回流反應(yīng)，得到化合物11;
[0024] (j)化合物11與R3NH2反應(yīng)后得到化合？ 化合半 ? 與鹽酸在乙醇中攪拌反應(yīng)得到化合物12。
[0025] 上述的嘧啶并萘酰亞胺衍生物在制備預(yù)防、治療腫瘤藥物中的應(yīng)用。
[0026] 上述的嘧啶并萘酰亞胺衍生物在制備抗腫瘤藥物先導(dǎo)化合物方面的應(yīng)用。
[0027] 上述的嘧啶并萘酰亞胺衍生物在制備預(yù)防、治療腫瘤藥物中的應(yīng)用，所述預(yù)防、治 療腫瘤藥物為預(yù)防、治療肝癌、乳腺癌的藥物.
[0028] 上述嘧啶并萘酰亞胺衍生物在制備預(yù)防、治療腫瘤藥物中的應(yīng)用，所述藥物劑型 為片劑、丸劑、膠囊、注射劑、懸浮劑或乳劑。
[0029] 本發(fā)明提供了一種以苊為原料，通過引入鄰氨基氰，構(gòu)建新型嘧啶并萘酰亞胺的 制備方法。根據(jù)已有數(shù)據(jù)看出，經(jīng)具有靶向運載能力的多胺修飾后，萘酰亞胺的抗腫瘤活性 有明顯提升，且對腫瘤轉(zhuǎn)移有較強的抑制作用。根據(jù)這一發(fā)現(xiàn)，我們設(shè)計合成一系列嘧啶并 萘酰亞胺衍生物。初測結(jié)果顯示，該類萘酰亞胺衍生物對多種腫瘤細(xì)胞株表現(xiàn)出良好的體 外抗腫瘤活性。因此，對該類嘧啶并萘酰亞胺類化合物進(jìn)行進(jìn)一步研究，設(shè)計合成具有更高 抗腫瘤活性、毒副作用小的衍生物，對于發(fā)展新的抗腫瘤藥具有重要意義。
【具體實施方式】
[0030] 以下通過實施例進(jìn)行詳細(xì)說明，以便更好理解本發(fā)明的內(nèi)容。
[0031] 下述實施例中的合成路線如下，具體合成步驟見各個具體實施例。
[0032；
[0033] 實施例1
[0034] 5-(2-(二甲氨基）乙基）-4H-異喹啉[4,5-gh]喹唑啉-4,6,8(5H，9H)_三酮鹽酸鹽 (9a)的制備：
[0035]
[0036] (a)取10g苊（即化合物1)置于1 OOmL冰乙酸中，冰浴下攪拌，逐滴加入7. lmL質(zhì)量分 數(shù)約為65 %的濃硝酸，4h后有大量黃色沉淀生成，TLC監(jiān)測，反應(yīng)完全后倒入500mL冰水中， 抽濾，用蒸餾水將濾餅洗至中性，45°C烘干，即得16.3g黃色化合物2，收率84% ;
[0037] (b)取20g化合物2置于100mL冰乙酸中，再加入10g重鉻酸鈉，回流5h后，冷卻至室 溫，倒入500mL冰水中，抽濾，用蒸餾水洗滌至中性，烘干，得亮黃色粉末狀化合物3，收率 82% ；
[0038] (c)取10g化合物3置于50mL無水乙醇中，依次加入40g氯化亞錫，50mL質(zhì)量分?jǐn)?shù)為 37%的濃鹽酸溶液，70°C回流2h，TLC監(jiān)測原料消失后，冷卻至室溫，抽濾，用冰乙醇和無水 乙醚各80mL洗滌濾餅，將濾餅放入真空干燥器中抽干，即得紅褐色化合物4，收率85% ; [0039] (d)取18.3g化合物4置于碾缽中，碾成粉末狀固體后加入到100mL二氯甲烷中，冰 水浴中邊攪拌，邊用恒壓滴液漏斗滴加9mL液溴，加畢，室溫攪拌3h，TLC監(jiān)測原料反應(yīng)完全 后，在通風(fēng)櫥中快速抽濾，用無水乙醇和二氯甲烷各200mL交替洗滌濾餅，直至濾出液為亮 黃色透明液體，將濾餅放入干燥器中抽干，即得橙黃色粉末狀化合物5，收率87 % ;
[0040] (e)取0.3g中間體5于lOmL的微波反應(yīng)管中，依次加入0.12g四（三苯基磷）合鈀， 0. 12g氰化鋅，放入磁子后，加入5mL N，N-二甲基-乙酰胺，密封后置于微波反應(yīng)器中，功率 設(shè)為150W，溫度調(diào)至100°C，反應(yīng)30min，待冷卻后加入100mL蒸餾水中，抽濾，用20mL質(zhì)量分 數(shù)為5%的氨水溶液洗滌濾餅，60°C烘干，即得含較少雜質(zhì)的化合物6(化合物6粗品），收率 73% ；
[0041 ] (f)取化合物6粗品3g于1 OOmL圓底燒瓶中，加入甲酸50mL、質(zhì)量分?jǐn)?shù)為98 %的濃硫 酸6mL，回流3h，TLC監(jiān)測原料消失以后，冷卻至室溫，倒入200mL蒸餾水，有大量棕黃色固體 生成，抽濾，用蒸餾水將濾餅洗滌至中性，60°C烘干，得含有少量雜質(zhì)的紅棕色固體化合物 7,收率70 %;
[0042] (g)依次將2mol化合物7、2mol N，N-二甲基乙二胺、20mL的無水乙醇置于50mL圓底 燒瓶中，回流3h，TLC監(jiān)測原料消失后，冷卻，蒸干溶劑，直接將粗品干法拌樣，柱層析，用二 氯甲烷：甲醇= 30:1(體積比）洗脫，得到相應(yīng)的中間體化合物8a，經(jīng)核磁鑒定無雜質(zhì)后，將 其置于l〇mL無水乙醇中，逐滴加入1.5mL質(zhì)量分?jǐn)?shù)為37%的濃鹽酸，室溫攪拌24h，離心，沉 淀依次用無水乙醇、二氯甲烷、無水乙醚各20mL交替洗滌，在干燥器中將其抽干，即得純凈 的鹽酸鹽目標(biāo)產(chǎn)品9a，收率84%。白色粉末狀固體， 1H Mffi(300MHz，Deuterium Oxide% 8.22(d，J = 7.6Hz，2H)，7.97(s，lH)，7.74(s，lH)，7.55(t，J = 8.1Hz，lH)，4.27(t，2H) ,3.41 (t，J = 6.9Hz，2H)，2.96(s，6H) .13C 匪R(75MHz，DMS0)Sl63.12，162·42，160·20，150·51， 149.46,132.42,130.62,129.24,127.91,127.76,127.32,122.02,119.49,119.33,29.92, 20.33,14.18.Elemental Analysis for C18H17CIN4O3 · 3.2H20:C,50.23；H,5.48；N,13.02； found:C,49.77;H,5.091;N,12.72·
[0043] 實施例2
[0044] 5-正丁基-4H-異喹啉[4,5-gh ]喹唑啉-4,6,8 (5H, 9H)-三酮(8b)的制備：
[0045]
123 除第(g)步中用正丁胺替代N，N_二甲基乙二胺外，其他步驟及提純方法同實施例 1。 收率91%，白色粉末狀固體，1H NMR(300MHz，DMS0-d6)Sl2.85(s，lH)，8.66(d，J = 8.1Hz, 1H) ,8.37(d,J = 3.7Hz,lH),8.31(s,lH) ,8.27(d,J = 7.3Hz,lH) ,7.67(t,J = 7.9Hz,lH), 3.87(t,J = 7.5Hz,2H) ,1.56(p,J = 7.3Hz,2H),1.35(h,J = 7.3Hz,2H),0.93(t,J = 7.3Hz, 3H).13C 匪R(75MHz，DMS0)Sl63.61，162.98，160.90，151.04，150.22，132.75，131.04, 129.77,128.25,128.21,127.84,122.44,119.78,119.57,56.42,45.32,37.68.Elemental Analysis for C18H15N3O3:C,67.28；H,4.71；N,13.08；found:C,67.66；H,4.616；N,12.98. 2 實施例3 3 5-(4-氨基丁基)-4H-異喹啉[4,5-gh]喹唑啉-4,6,8(5!1，9!1)-三酮鹽酸鹽(9(3)的 制備：
[0049]
[0050] 除第(g)步中用N-叔丁氧羰基-1，4_ 丁二胺替代N，N_二甲基乙二胺外，其他步驟及 提純方法同實施例1。收率58%，白色粉末狀固體，1H 300MHz，DMS〇-d6)δ9.05(d，J = 8.4Hz,lH),8.78(s,lH),8.59-8.47(m,2H),7.94(t ,J = 8.0Hz,lH),4.03(d ,J = 7.4Hz,2H), 2.95(d,J = 6.4Hz ,2H),1.61(d,J = 7.8Hz , 2H), 1.45 (s , 2H). Elemental Analysis for C18H17CIN4O3 · 0.4H2〇:C,56.89；H,4.72；N,14.74；found:C,57.07；H,4.73；N,14.97.
[0051 ] 實施例4
[0052] 5-(4-嗎啉基丁基)-4H-異喹啉[4,5-gh]喹唑啉-4,6,8(5H，9H)_三酮鹽酸鹽(9d) 的制備：
[0053]
[0054] 除第(g)步中用1-氨基-4-嗎啉基-丁烷替代N，N_二甲基乙二胺外，其他步驟及提 純方法同實施例1。收率68%，白色粉末狀固體， 1!1匪1?(30010^，〇6此6411111(^丨(16)57.89-7.66(m,3H) ,7.17(q ,J = 7.9,7.2Hz,2H) ,4.06(s , 2H), 3.79( s , 2H), 3.52(d, J = 25.7Hz , 4H),3.17(d,J = 8.2Hz,4H),1.72(s,2H) ,1.51 (d,J = 9.3Hz,2H).Elemental Analysis for C22H23CIN4O4 · 0.4H2〇:C,58.71；H,5.33；N,12.45；found:C,58.97；H,5.303；N,12.48.
[0055] 實施例5
[0056] 5-(3-((3-氨丙基）氨基）丙基)-紐-異喹啉[4,5111]喹唑啉-4,6,8(5!1，9!〇-三酮 二鹽酸鹽(9e)的制備：
[0057]
[0058] 除第(g)步中用叔丁基(3-氨丙基）（3-((叔丁氧羰基)氨基)丙基)氨基甲酸酯替代 N，N-二甲基乙二胺外，其他步驟及提純方法同實施例1。收率78 %，白色粉末狀固體，1H NMR (300MHz, Deuterium 0xide)58.20-7.93(m, 3H), 7.64(d ,J = 38.1Hz , 1H), 7.50-7.37(m, lH),3.95-3.64(m,2H),3.05(tq,J=17.5,7.5Hz,5H),2.02(dd,J=19.0,11.4Hz,2H) ,1.65 (d,J = 26.8Hz,3H).Elemental Analysis for C20H23CI2N5O3 · H20 · 0.3C2H60:C,51.10；H, 5.58；N,14.46；found:C,51.20；H,5.614；N,14.12.
[0059] 實施例6
[0060] 5-丁基-9-(3-(吡咯烷-1-yl)丙基）-4H-異喹啉[4,5-gh]喹唑啉-4,6,8(5H，9H)_ 三酮鹽酸鹽（l〇a)的制備：
[0061]
[0062] (h)將0.5g化合物8b置于50mL圓底燒瓶中，加入0.5g的無水碳酸鉀、:L25g 1,3-二 溴丙烷、25mL乙腈中，回流5h，TLC監(jiān)測原料反應(yīng)完全后，冷卻至室溫，蒸干溶劑后加入30mL 蒸餾水充分震蕩，再用二氯甲烷萃取(3 X30mL)，合并有機層，無水硫酸鈉干燥，蒸干，柱層 析，用二氯甲烷：甲醇= 60:1(體積比)洗脫，即得溴代中間體。
[0063 ] 將1 mmo 1的溴代中間體置于2 5mL圓底燒瓶中，依次加入4mo 1無水碳酸鉀，1.2mo 1P比 咯烷，10mL乙腈，回流5h，TLC監(jiān)測原料反應(yīng)完全后，冷卻至室溫，蒸干溶劑后加入30mL蒸餾 水充分震蕩，再用二氯甲烷萃取(3 X 20mL)，合并有機層，無水硫酸鈉干燥，蒸干，柱層析，用 二氯甲烷：甲醇= 40:1(體積比）洗脫，即得目標(biāo)產(chǎn)品，再將其置于25mL的圓底燒瓶中，加入 10mL無水乙醇，滴加1.5mL質(zhì)量分?jǐn)?shù)為37 %的濃鹽酸，室溫攪拌24h，將相應(yīng)的沉淀離心，并 用20mL無水乙醇洗滌三遍，在干燥器中將其抽干，即得純凈的鹽酸鹽目標(biāo)化合物10a。收率 46%，白色粉末狀固體， 1H NMR(300MHz，Chloroform-d)Sl2.49(s，lH)，8.92(d，J=11.6Hz， 2H) ,8.83(s,lH) ,8.56(d,J = 7.3Hz,lH) ,7.79(t,J = 7.7Hz,lH) ,4.55-4.40(m,2H) ,4.14 (tJ = 7.7Hz,2H),3.93(s,2H),3.43(d,J = 7.0Hz,2H),2.99(s,2H),2.63(s,2H),2.41-2.06(m,4H),1.70(q ,J = 7.7Hz,2H),1.46(dd ,J=15.1,7.5Hz,2H),1.00(t ,J = 7.3Hz,3H) .Elemental Analysis for C25H29CIN4O3 · 0.4H2〇:C,63.06；H,6.31；N,11.77；found:C, 62.89；H,6.184；N,11.72.
[0064] 實施例7
[0065] 5-(2-(二甲氨基）乙基)-8-( (2-(二甲氨基）乙基)氨基)-4H-異喹啉[4,5-gh]喹唑 啉-4,6(5H)_二酮三鹽酸鹽（12a)的制備：
[0066]
[0067] ⑴將lg化合物8a置于lOOmL甲苯中，加入lOmL三氯氧磷，氮氣保護(hù)，回流12h后，冷 卻至室溫，蒸干溶劑，直接將粗品混合物11下一步。
[0068] (j)將步驟（i)的混合物11加入0 · 3g N，N-二甲基乙二胺于30mL四氫呋喃中，再加 入0.5mL三乙胺，回流3h后，TLC監(jiān)測原料反應(yīng)完全后，冷卻至室溫，蒸干溶劑，直接加入適量 硅膠干法拌樣，柱層析，用二氯甲烷：甲醇= 30:1+0.5%氨水(體積比）洗脫，經(jīng)核磁鑒定無 雜質(zhì)后，將其置于25mL的圓底燒瓶中，加入10mL無水乙醇、2mL質(zhì)量分?jǐn)?shù)37%的濃鹽酸，室溫 攪拌24h，離心，沉淀依次用無水乙醇、二氯甲烷、無水乙醚各15mL洗滌三遍，在干燥器中將 其抽干，即得純凈的12a。收率74%，黃色粉末狀固體， 1H NMR(300MHz,Deuterium OxideW 8.82-8.61(m,3H) ,8.54(d ,J = 7.6Hz , 1H), 7.89(d ,J = 7.7Hz , 1H) ,4.44(d ,J = 6.1Hz , 2H), 4.15(t ,J = 5.8Hz,2H), 3.57-3.52(m,2H), 3.49(t,J = 6.6Hz,2H), 2.97(s,12H).Elemental Analysis for C22H29CI3N6O2 · 2H20:C,47.88；H,6.03；N,15.23；found:C,47.49；H,6.041；N, 14.96.實施例8
[0069] 5-(2-(二甲氨基）乙基)-8-( (3-嗎啉基丙基)氨基)-4H-異喹啉[4，5-gh]喹唑啉-4,6(5H)_二酮三鹽酸鹽（12b)的制備：
[0070]
[0071]除第（j)步中用1-氨基-3-嗎啉基-丙烷替代N，N_二甲基乙二胺外，其他步驟及提 純方法同實施例7。收率85%，黃色粉末狀固體，1!1匪1?(30010^，〇6此6411111(^丨(16)58.73-8.65(m,lH) ,8.63(d ,J = 8.4Hz,lH) ,8.53(d ,J = 7.4Hz , 1H), 7.89(t ,J = 8.0Hz , 1H) ,4.45 (t ,J = 6.1Hz,lH),4.06(d ,J=13.3Hz,lH),3.86-3.70(m,2H),3.59-3.48(m,3H),3.32(t ,J =8.3Hz, 1H), 3.25-3.12(m, 1H), 2.98(d,J=1.7Hz,3H), 2.21 (t,J = 8.2Hz,lH).Elemental Analysis for C25H33CI3N6O3 · 3H20:C,47.97 ；H,6.28；N, 13.43；found:C,47.59 ；H,5.89；N, 13.10.
[0072] 實施例9
[0073] 8-( (4-氨基丁基)氨基)-5-(2-(二甲氨基）乙基)-4H-異喹啉[4,5-gh]喹唑啉-4,6 (5H)-二酮三鹽酸鹽（12c)的制備：
[0074]
[0075] 除第(j)步中用N-叔丁氧羰基-1，4_ 丁二胺替代N，N_二甲基乙二胺外，其他步驟及 提純方法同實施例7。收率88 %，白色粉末狀固體，1H NMR(300MHz，Deuterium Oxide) δ8.70 (d，J= 10.2Hz，2H) ,8.63-8.52(m，2H)，7.90(t，J = 7.9Hz，lH)，4.42(d，J = 6.9Hz，2H) ,3.69 (s，2H)，3.46((1, J = 6.8Hz，2H)，3.03-2.89(m，8H)，1.75(s，4H) .13C 匪R(75MHz，D20)S 164.37,163.28,159.96,153.07,142.27,134.08,129.53,129.21,128.72,125.64,122.39， 121.54,120.22,109.89,55.20,43.36,41.75,39.07,35.59,24.88,24.24.Elemental Analysis for C22H29CI3N6O2 · 2H20:C,47.88；H,6.03；N,15.23；found:C,48.22；H,5.829；N, 15.19.
[0076] 實施例10
[0077] 5-(2-(二甲氨基）乙基)-8-( (3-甲氧基苯基)氨基)-4H_異喹啉[4，5-gh]喹唑啉-4,6(5!〇-二酮三鹽酸鹽（12(1)的制備：
[0078]
[0079]除第（j)步中用3-甲氧基苯胺替代N，N_二甲基乙二胺外，其他步驟及提純方法同 實施例7。收率62%，黃色粉末狀固體，1H MlR(300MHz，Deuterium 0xide)S8.14(d，J = 8·2Ηζ，1Η)，8.01(d，J=7.3Hz，lH)，7.92(s，lH)，7.74(s，1H),7.48-7.39(m，lH)，6.94(t，J = 8.2Hz,lH),6.54(s,lH) ,6.47(d ,J = 7.4Hz, 2H), 3.88(s, 2H), 3.51 (s , 3H), 3.04(s, 2H), 2.81(s,5H).13C NMR(75MHz,D2〇_salt)5l63.61,162.50,158.67,156.83,154.95,147.05, 137.09,133.26,129.93,129.74,128.60,127.55,124.80,120.40,118.55,114.52,110.56, 109.14,108.02,55.10,54.32,43.17,34.98.Elemental Analysis for C25H25CI2N5O3 · H2O: C,56.40；H,5.11；N,13.15；found:C,56.01；H,4.975；N,12.99.
[0080] 實施例11
[0081 ] 8-( (3-( (3-氨基丙基)氨基）丙基)氨基)-5-(2-(二甲氨基）乙基)_4H_異喹啉[4, 5-gh ]喹唑啉-4，6 (5H)-二酮四鹽酸鹽（12e)的制備：
[0082]
[0083] 除第(j)步中用叔丁基(3-氨丙基）（3-((叔丁氧羰基)氨基)丙基)氨基甲酸酯替代 N，N-二甲基乙二胺外，其他步驟及提純方法同實施例7。收率32 %，白色粉末狀固體，1H NMR (300MHz,Methanol-d4)59.37(s,lH) ,9.15(d,J = 8.5Hz,lH) ,9.01(s,lH) ,8.88(d,J = 7.3Hz,lH) ,8.19(t,J = 8.1Hz,lH),4.63(s,2H),4.02(d,J = 7.0Hz,2H) ,3.67(s,3H),3.23 (dd,J = 17.6,8.3Hz,2H) ,3.10(s,9H) ,2.30(d,J = 9.2Hz,2H) ,2.16(d,J = 9.7Hz,2H) .Elemental Analysis for C24H35CI4N7O2 · 2H2O:C,45.65；H,6.23；N,15.53；found:C, 45.96；H,6.345；N,15.20.
[0084] 實施例12
[0085] 體外抗腫瘤活性實驗
[0086] 實驗材料：
[0087]采用MTT法對實施例1~11的化合物進(jìn)行體外腫瘤細(xì)胞生長抑制實驗，對照藥物為 氨萘非特(Amonafide)，腫瘤細(xì)胞株為:!fepG2(人肝癌細(xì)胞）、SMMC-7721(人肝癌細(xì)胞）、 [0088] MDA-MB-231(人乳腺癌細(xì)胞)三種腫瘤細(xì)胞，均購自中國科學(xué)院上海細(xì)胞庫。
[0089]實驗方法：
[0090]將實施例1~11中的目標(biāo)化合物和對照藥物為氨萘非特，分別取對數(shù)生長期的 HepG2(人肝癌細(xì)胞）、SMMC-7721(人肝癌細(xì)胞）、MDA-MB-231(人乳腺癌細(xì)胞)三種腫瘤細(xì)胞 株，以每孔5000-8000個細(xì)胞埋入96孔板，90yL/孔。培養(yǎng)24h后，加入已知濃度的樣品，對每 個細(xì)胞株，每個濃度都有四個復(fù)孔，在37°C，5 %⑶2條件下培養(yǎng)48h后，加 MTT 50yL，繼續(xù)培 養(yǎng)4h后棄上清，每孔加入lOOyL DSM0，輕輕振蕩15min，用酶標(biāo)儀在570nm波長處測其吸光度 A值。按下面的公式計算被不同測物對腫瘤細(xì)胞生長的抑制率(腫瘤細(xì)胞生長抑制率（％ )= (0D對照-0D實驗)/(0D對照-0D空白）X 100% )，實驗重復(fù)三次，并由統(tǒng)計軟件求出IC5Q值。結(jié) 果見表1。
[0091 ]表1各實施例化合物對不同腫瘤細(xì)胞的生長抑制活性
[0092]
[0093]
[0094] 注:表中ND表示未測
[0095] 由表1可知，本發(fā)明中制備的嘧啶并萘酰亞胺類化合物具有一定的體外抗腫瘤活 性，特別是化合物9a、12a、12b、12c、12e相比對照藥物氨萘非特有更好的抑制腫瘤細(xì)胞增殖 能力，因此可以將其應(yīng)用于制備預(yù)防和治療腫瘤的藥物。
[0096] 上述實施例為本發(fā)明優(yōu)選的實施方式，但本發(fā)明的實施方式并不受上述實施例的 限制，其他的任何未背離本發(fā)明所作的改變均應(yīng)為等效的置換方式，都包含在本發(fā)明的保 護(hù)范圍之內(nèi)。
【主權(quán)項】
1. 一類喀晚并糞酷亞胺衍生物，其特征在于，所述衍生物具有式I至π I所示結(jié)構(gòu)：式I、Π 、虹中，a為0、1或2;m為2、3或4;n為2、3或4;x為0至6的整數(shù)；Ri為hcHs、2. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的喀晚并糞酷亞胺衍生物的制備方法，其特征在于，合成路線如 下：具體制備步驟如下： (a) 將起溶于冰乙酸中，冰浴下滴加濃硝酸進(jìn)行硝化反應(yīng)，反應(yīng)結(jié)束后將反應(yīng)液加入冰 水中，有黃色沉淀生成，經(jīng)抽濾，蒸饋水洗涂濾餅至中性，干燥后得到硝化產(chǎn)物化合物2; (b) 將化合物2溶于冰乙酸中后，加入重銘酸鋼，回流至反應(yīng)完全后，將混合液倒入冰水 中，有黃色固體析出，經(jīng)抽濾、洗涂至中性，干燥濾餅得到氧化產(chǎn)物化合物3; (C)化合物3置于無水乙醇中，加入氯化亞錫、濃鹽酸，回流至反應(yīng)完全后，冷卻至室溫， 抽濾、用冰乙醇洗涂濾餅，干燥后得到還原產(chǎn)物化合物4; (d) 將化合物4置于二氯甲燒中，滴加液漠，反應(yīng)結(jié)束后經(jīng)后處理即得化合物5; (e) 將化合物5溶于N，N-二甲基-乙酷胺中，在四（Ξ苯基憐)合鈕催化作用下，在微波條 件下，與氯化鋒反應(yīng)，得到化合物6; (f) 化合物6與甲酸在濃硫酸催化下關(guān)環(huán)，生成化合物7; (g) 化合物7溶于乙醇中，加入等摩爾RiN此，回流3~4h后得到化合物8,將化合物8與鹽 酸在乙醇中攬拌反應(yīng)即得化合物9; 化)將化合物8溶于乙臘中，在無水碳酸鐘作用下，艦化鐘作為催化劑： (1) 與單取代的C1-C4面代燒控反應(yīng)； (2) 與1，3-二漠丙烷、1，2-二漠乙燒或者1，4-二漠下燒發(fā)生取代反應(yīng)； (3) 將步驟(2)的化合物與不同的胺進(jìn)行取代； 上述（1)(2)(3)Ξ種情況均可得到化合彩旱 與鹽酸在乙醇中攬拌反應(yīng)得到化合物10; (i) 將化合物8在甲苯中與Ξ氯氧憐回流反應(yīng)，得到化合物11; (j) 化合物11與R3N也反應(yīng)后得到化合彩與鹽酸在乙醇中攬拌反應(yīng)得到化合物12。3. 權(quán)利要求1所述的喀晚并糞酷亞胺衍生物在制備預(yù)防、治療腫瘤藥物中的應(yīng)用。4. 權(quán)利要求1所述的喀晚并糞酷亞胺衍生物在制備抗腫瘤藥物先導(dǎo)化合物方面的應(yīng) 用。5. 權(quán)利要求4所述的喀晚并糞酷亞胺衍生物在制備預(yù)防、治療腫瘤藥物中的應(yīng)用，其特 征在于，所述預(yù)防、治療腫瘤藥物為預(yù)防、治療肝癌、乳腺癌的藥物。6. 根據(jù)權(quán)利要求5所述喀晚并糞酷亞胺衍生物在制備預(yù)防、治療腫瘤藥物中的應(yīng)用，其 特征在于，所述藥物劑型為片劑、丸劑、膠囊、注射劑、懸浮劑或乳劑。
【文檔編號】A61K31/5377GK106083850SQ201610548327
【公開日】2016年11月9日
【申請日】2016年7月13日
【發(fā)明人】王超杰, 張鑫, 王玉霞, 羅穩(wěn), 常麗萍, 李小敏, 吳笑笑, 王君
【申請人】河南大學(xué)