一種l?苯丙氨酸取代去甲斑蝥素衍生物及其制備方法與應(yīng)用
【專利摘要】本發(fā)明公開了一種L?苯丙氨酸取代去甲斑蝥素衍生物及其制備方法與應(yīng)用，其特征在于：通過1,3?偶極環(huán)加成方法在L?苯丙氨酸取代去甲斑蝥素結(jié)構(gòu)中C5和C6位引入吡唑環(huán)，與色酮衍生物反應(yīng)導(dǎo)入色酮結(jié)構(gòu)，合成含有色酮結(jié)構(gòu)的吡唑類L?苯丙氨酸取代去甲斑蝥素衍生物，該衍生物對于腫瘤細胞株具有良好的抑制作用，其中對于人肝癌細胞具有更好的抑制率和選擇性，在制備抗腫瘤藥物等方面，具有非常好的工業(yè)應(yīng)用前景。
【專利說明】
一種L-苯丙氨酸取代去甲斑蝥素衍生物及其制備方法與應(yīng)用
技術(shù)領(lǐng)域：
[0001] 本發(fā)明屬于醫(yī)藥技術(shù)領(lǐng)域，是涉及含有色酮結(jié)構(gòu)的吡唑類L-苯丙氨酸取代去甲斑 蝥素衍生物及其制備方法與應(yīng)用。
【背景技術(shù)】：
[0002] L-苯丙氨酸取代去甲斑蝥素，化學(xué)結(jié)構(gòu)式如下：
[0003]
[0004] L-苯丙氨酸取代去甲斑蝥素 R=(S)-CH2Ph;
[0005] 1，3-偶極環(huán)加成反應(yīng)以其良好的區(qū)域和主體選擇性而成為合成五元雜環(huán)化合物 最主要的方法，也是雜環(huán)藥物化學(xué)研究中較為活躍的一類反應(yīng)。近幾年來，由于色酮廣泛的 生物活性，諸如抗癌、抗菌、抑制血小板凝聚等而倍受關(guān)注。所以，無論是從藥理學(xué)還是從合 成角度考慮，這類雜環(huán)化合物都有很高的合成價值。

【發(fā)明內(nèi)容】
：
[0006] 本發(fā)明的第一方面目的是提供一種L-苯丙氨酸取代去甲斑蝥素衍生物。
[0007] 本發(fā)明采取的技術(shù)方案如下：
[0008] 一種L-苯丙氨酸取代去甲斑蝥素衍生物，其結(jié)構(gòu)式如下：
[0009]
[0010]式中：R=(s)_CH2Ph。
[0011] 該化合物相關(guān)實驗數(shù)據(jù)如下：
[0012]
[0013]
【申請人】經(jīng)研究發(fā)現(xiàn):在L-苯丙氨酸取代去甲斑蝥素引入五元吡唑環(huán)的基礎(chǔ)上導(dǎo)入 了色酮的結(jié)構(gòu)可以改變藥理活性。通過進一步實驗確定:使用色酮衍生物在吡唑的結(jié)構(gòu)上 進行取代，對L-苯丙氨酸取代去甲斑蝥素進行結(jié)構(gòu)改造，制備的含色酮結(jié)構(gòu)吡唑類L-苯丙 氨酸取代去甲斑蝥素衍生物，具有非常好的藥物活性。
[0014]本發(fā)明的第二方面目的是提供一種上述L-苯丙氨酸取代去甲斑蝥素衍生物的制 備方法，其特征在于，包括以下步驟：
[0015] (1)、去甲去氫斑蝥素的合成：
[0016] 將順丁烯二酸酐研細，加入乙醚，室溫條件下攪拌至溶解，滴入呋喃，室溫攪拌24 ~48小時，呋喃與順丁烯二酸酐發(fā)生Diels-Alder反應(yīng)，制得去甲去氫斑蝥素(化合物1);
[0017] (2)、L_苯丙氨酸取代去甲斑蝥素的合成：
[0018] 將去甲去氫斑蝥素4 · 2克(25mmol)和L-苯丙氨酸4 · 13克(25mmol)加入經(jīng)過分子篩 干燥的DMF溶劑15毫升中，攪拌回流12小時，冷卻至室溫后加入乙酸乙酯60毫升稀釋，飽和 氯化銨溶液洗滌6次，每次30毫升，有機相用無水硫酸鎂干燥，過濾后的有機相減壓蒸餾旋 干，用乙酸乙酯重結(jié)晶得白色固體產(chǎn)物(化合物3);
[0019] (3)、6_溴代色酮苯腙的合成：
[0020] 采用6-溴代色酮與苯肼脫水反應(yīng)生成席夫堿的方法，具體操作:取2mmol的苯肼加 入盛有1 OmL四氫呋喃的燒瓶中，沸水浴回流攪拌至溶解，然后緩慢滴加入20mL溶有2mmo 16-溴代色酮的無水乙醇溶液，繼續(xù)沸水浴回流攪拌lh，滴加10滴鹽酸，有淡黃色沉淀出現(xiàn)。連 續(xù)沸水浴回流攪拌5h，停止水浴，加人20mL蒸餾水攪拌，淡黃色沉淀顏色變深，抽濾得6-溴 代色酮苯腙，黃紅色針狀產(chǎn)物；用無水乙醚沖洗多次，真空干燥得產(chǎn)物6-溴代色酮苯腙(化 合物4);
[0021] (4)、導(dǎo)入色酮結(jié)構(gòu)：
[0022] 將lmmol L-苯丙氨酸取代去甲斑蜜素和1. lmmol6_溴代色酮苯腙于20mL乙醇中， 再加入1.2mL氯胺T，回流9小時，TLC檢測反應(yīng)完成后，得到淡黃色沉淀，減壓過濾出沉淀，沉 淀用甲醇重結(jié)晶，真空干燥后得到產(chǎn)物(化合物5)。
[0023]本發(fā)明涉及的反應(yīng)方程式如下：
[0024]
[0025]本發(fā)明的第三方面目的是提供一種L-苯丙氨酸取代去甲斑蝥素衍生物在制備抗 腫瘤藥物方面的應(yīng)用。通過實驗驗證:上述化合物，對于不同瘤株如人肝癌細胞、口腔癌細 胞、胃癌細胞、卵巢癌細胞、白血病細胞、腸癌細胞等，均具有抑制作用，其中對于Bel7402 (人肝癌細胞)具有更佳的抑制率和選擇性，可單獨制備抗腫瘤藥物、也可以作為活性成分 與其他抗腫瘤藥物制備抗腫瘤組合物，具有非常好的工業(yè)應(yīng)用前景。
[0026]本發(fā)明的有益效果如下：
[0027]
【申請人】通過研究發(fā)現(xiàn):在L-苯丙氨酸取代去甲斑蝥素引入五元吡唑環(huán)的基礎(chǔ)上導(dǎo) 入了色酮的結(jié)構(gòu)，產(chǎn)生的衍生物，具有良好的藥物活性，經(jīng)進一步實驗及分析，研究不同雜 環(huán)在同一分子中聚集而對藥理活性所產(chǎn)生的影響，用1，3-偶極環(huán)加成方法在L-苯丙氨酸取 代去甲斑蝥素結(jié)構(gòu)中C5和C6位引入吡唑環(huán)，與色酮衍生物反應(yīng)導(dǎo)入色酮結(jié)構(gòu)，合成含有色酮 結(jié)構(gòu)的吡唑類L-苯丙氨酸取代去甲斑蝥素衍生物，該衍生物在制備抗腫瘤藥物方面，具有 非常好的工業(yè)應(yīng)用前景。
【具體實施方式】：
[0028]以下結(jié)合實施例對本發(fā)明做進一步描述，但實施例不應(yīng)解釋為限定本發(fā)明的范 圍。
[0029] 實施例1:
[0030] (1 )、去甲去氫斑蝥素的合成：
[0031] 將順丁烯二酸酐研細，加入乙醚，室溫條件下攪拌至溶解，滴入呋喃，室溫攪拌24 ~48小時，呋喃與順丁烯二酸酐發(fā)生Diels-Alder反應(yīng)，制得去甲去氫斑蝥素(化合物1);
[0032] (2)、L_苯丙氨酸取代去甲斑蝥素的合成：
[0033] 將去甲去氫斑蝥素4 · 2克(25mmol)和L-苯丙氨酸4 · 13克(25mmol)加入經(jīng)過分子篩 干燥的DMF溶劑15毫升中，攪拌回流12小時，冷卻至室溫后加入乙酸乙酯60毫升稀釋，飽和 氯化銨溶液洗滌6次，每次30毫升，有機相用無水硫酸鎂干燥，過濾后的有機相減壓蒸餾旋 干，用乙酸乙酯重結(jié)晶得白色固體產(chǎn)物(化合物3);
[0034] (3)、6_溴代色酮苯腙的合成：
[0035] 采用6-溴代色酮與苯肼脫水反應(yīng)生成席夫堿的方法，具體操作:取2mmol的苯肼加 入盛有1 OmL四氫呋喃的燒瓶中，沸水浴回流攪拌至溶解，然后緩慢滴加入20mL溶有2mmo 16-溴代色酮的無水乙醇溶液，繼續(xù)沸水浴回流攪拌lh，滴加10滴鹽酸，有淡黃色沉淀出現(xiàn)。連 續(xù)沸水浴回流攪拌5h，停止水浴，加人20mL蒸餾水攪拌，淡黃色沉淀顏色變深，抽濾得苯腙， 黃紅色針狀產(chǎn)物。用無水乙醚沖洗多次，真空干燥得產(chǎn)物6-溴代色酮苯腙(化合物4)。
[0036] (4)、導(dǎo)入色酮結(jié)構(gòu)：
[0037] 將lmmol L-苯丙氨酸取代去甲斑蝥素和1. lmm〇16-溴代色酮苯腙于20mL乙醇中， 再加入1.2mL氯胺T，回流9小時，TLC檢測反應(yīng)完成后，得到淡黃色沉淀，減壓過濾出沉淀，沉 淀用甲醇重結(jié)晶，真空干燥后得到產(chǎn)物(化合物5)。
[0038] 化合物5名稱:L-苯丙氨酸取代去甲斑蝥素衍生物；
[0039] 化學(xué)式：C33H23BrN3〇7;
[0040] 物化參數(shù):黃色結(jié)晶，產(chǎn)率71.5%，m.p.l05-106°C;
[0041 ]結(jié)構(gòu)確認：
[0042] 咕匪R(CD30D)S :7.32-7 · 16(m，13H，Ar-H)，6.47(s，lH，C = C-H)，5· 16(d，J = 9·60Ηζ，1Η，Η5)，4.74(d，J= 17.60Hz，1H，H4)，4.56(d，J= 17.60Hz，1H，H1)，4.02(d，J = 9.60Hz，1H，H6)，3.43((1, J = 7.20Hz，lH，H3)，3.29(d，J = 7.20Hz，lH，H2)，3.17-3.27(m，2H， PhCH2)；
[0043] IR 3457(N-C = 0)，3085(ArH)，1720(C = 0)，1575(C = N)，1293(C-0-C)cm_1;
[0044] m/e :652( 100.0% ), 654(97.5%)；
[0045] Anal.calcd.for C33H23BrN3〇7:C，60.65;H，3.57;N，6.41 〇
[0046] 應(yīng)用實施例:采用MTT法檢測受試化合物對不同瘤株的的抗腫瘤活性。
[0047]將上述實施例制備的化合物（5)，分別以不同瘤株（腫瘤細胞Bel_7402、KB、 SGC7901、H08901、HL-60、ECA109)為實驗對象，測試化合物（5)對于不同瘤株的體外抑制作 用:實驗采用四甲基偶氮唑鹽微量酶反應(yīng)比色法(MTT法），活性用半數(shù)抑制濃度表示（IC50)。
[0048]具體實驗步驟如下：
[0049] 將化合物5用DMS0溶解，稀釋，腫瘤細胞Bel-7402(人肝癌細胞）、KB(口腔癌細 胞）、SGC7901 (胃癌細胞）、H08901 (卵巢癌細胞）、HL-60(白血病細胞）、ECA109(腸癌細胞)在 96孔板上種入4000個/200yL/孔，每孔加入化合物2yL，終濃度為12. ΟμΜ，6. ΟμΜ，3. ΟμΜ，1.5μ Μ，共同于37°C、5%C02細胞培養(yǎng)箱中孵育72小時，以DMS0(1 % )為空白對照。72小時后，加入 終濃度為〇. 25mg/mL的MTT，置于37°C、5 %C02細胞培養(yǎng)箱中4小時，之后吸干溶劑，每孔加入 100μ1 DMS0，用酶聯(lián)免疫儀于570nm處測定吸光度(0D值），所得數(shù)據(jù)用于計算IC5Q值。不同濃 度的受試化合物用96孔板進行粗篩，根據(jù)所得的抑制率，計算IC 5Q值，結(jié)果見下表。
[0050] 表1、L-苯丙氨酸取代去甲斑蝥素衍生物對六種腫瘤細胞株的1(：50值
[0051]
[0052]通過上表數(shù)據(jù)可以看出：本發(fā)明制備的化合物，對于多種腫瘤細胞株均具有抑制 作用，其中對于Bel7402(人肝癌細胞)具有更好的抑制率和選擇性，可以單獨制備抗腫瘤藥 物、也可以作為活性成分與其他抗腫瘤藥物制備抗腫瘤組合物，具有非常好的工業(yè)應(yīng)用前 景。
【主權(quán)項】
1. 一種z-苯丙氨酸取代去甲斑莖素衍生物，其結(jié)構(gòu)式如下：式中：.:R=(S>CH評h。2. -種苯丙氨酸取代去甲斑莖素衍生物的制備方法，其特征在于，包括W下步驟:將 順下締二酸酢和乙酸反應(yīng)合成去甲去氨斑莖素，去甲去氨斑莖素和苯丙氨酸反應(yīng)合成 苯丙氨酸取代去甲斑莖素，然后采用6-漠代色酬與苯阱脫水反應(yīng)合成6-漠代色酬苯腺，最 后將苯丙氨酸取代去甲斑莖素和6-漠代色酬苯腺進行偶極加成反應(yīng)，合成苯丙氨酸取 代去甲斑莖素衍生物。3. 根據(jù)權(quán)利要求2所述的一種苯丙氨酸取代去甲斑莖素衍生物的制備方法，其特征 在于，包括W下步驟： (1) 、去甲去氨斑莖素的合成： 將順下締二酸酢研細，加入乙酸，室溫條件下攬拌至溶解，滴入巧喃，室溫攬拌24~48小 時，巧喃與順下締二酸酢發(fā)生Diels-Alder反應(yīng)，制得去甲去氨斑莖素； (2) α-苯丙氨酸取代去甲斑莖素的合成： 將去甲去氨斑莖素4.2克和苯丙氨酸4.13克加入經(jīng)過分子篩干燥的DMF溶劑15毫升 中，攬拌回流12小時，冷卻至室溫后加入乙酸乙醋60毫升稀釋，飽和氯化錠溶液洗涂6次，每 次30毫升，有機相用無水硫酸儀干燥，過濾后的有機相減壓蒸饋旋干，用乙酸乙醋重結(jié)晶得 白色固體產(chǎn)物； (3) 、6-漠代色酬苯腺的合成： 取2mmol的苯阱加入盛有10 mL四氨巧喃的燒瓶中，沸水浴回流攬拌至溶解，然后緩慢 滴加入20mL溶有2mmol 6-漠代色酬的無水乙醇溶液，繼續(xù)沸水浴回流攬拌化，滴加10滴鹽 酸，有淡黃色沉淀出現(xiàn);連續(xù)沸水浴回流攬拌化，停止水浴，加人20mL蒸饋水攬拌，淡黃色沉 淀顏色變深，抽濾得6-漠代色酬苯腺，黃紅色針狀產(chǎn)物；用無水乙酸沖洗多次，真空干燥得 產(chǎn)物6-漠代色酬苯腺； (4) 、導(dǎo)入色酬結(jié)構(gòu)： 將Immol 苯丙氨酸取代去甲斑莖素和1. Immoie-漠代色酬苯腺于20mL乙醇中，再加 入1.2mL氯胺T，回流9小時，TLC檢測反應(yīng)完成后，得到淡黃色沉淀，減壓過濾出沉淀，沉淀用 甲醇重結(jié)晶，真空干燥后得到產(chǎn)物苯丙氨酸取代去甲斑莖素衍生物。4. 一種苯丙氨酸取代去甲斑莖素衍生物在制備抗腫瘤藥物方面的應(yīng)用。
【文檔編號】A61P35/02GK106083873SQ201610539747
【公開日】2016年11月9日
【申請日】2016年7月6日
【發(fā)明人】鄧莉平, 王瑋, 陳國慶, 楊群, 高曉忠, 周玉波, 胡純琦, 吳春雷, 沈潤溥, 吳永華
【申請人】紹興文理學(xué)院