新型紫杉類化合物及其制備方法和應用
【專利摘要】本發(fā)明公開了一種新型紫杉類化合物及其制備方法和應用，該新型紫杉類化合物的制備方法具有以下步驟：先對吉西他濱中的兩個羥基進行保護，然后與氯甲酸烷基酯進行縮合反應，接著脫除羥基保護基團，得到中間體G1；先對中間體G1其中一個羥基進行保護，然后再對另一個羥基進行保護，接著脫除第一個羥基脫保基團，得到中間體G2；將7,10?二（三氯乙氧基甲酰）多西他賽與二酸酐反應得到中間體D1；將中間體D1與中間體G2進行縮合反應得到中間體D2；對中間體D2進行羥基脫保護得到目標產物。本發(fā)明的新型紫杉類化合物毒性較小，抗腫瘤活性較高，尤其是對于胃腸道癌、肺癌、乳腺癌以及白血病等實體腫瘤具有很好的抑制率。
【專利說明】
新型紫杉類化合物及其制備方法和應用
技術領域
[0001] 本發(fā)明涉及一種新型紫杉類化合物及其制備方法和應用。
【背景技術】
[0002] 現(xiàn)有的紫杉類化合物大多存在毒性較大、抗腫瘤活性較低等不足，尤其是對于胃 腸道癌、肺癌、乳腺癌以及白血病等實體腫瘤的抑制效果不佳。

【發(fā)明內容】

[0003] 本發(fā)明的目的在于解決現(xiàn)有技術的不足，提供一種毒性較小、抗腫瘤活性較高、尤 其是對于胃腸道癌、肺癌、乳腺癌以及白血病等實體腫瘤具有很好的抑制率的新型紫杉類 化合物及其制備方法和應用。
[0004] 實現(xiàn)本發(fā)明上述目的的技術方案是:一種新型紫杉類化合物，其結構如通式（I)所 示：
(1)0
[0005] 通式（I)中，R1為心~(：6烷基或取代烷基，優(yōu)選為乙基、正丁基或者正己基，更優(yōu)選 為正丁基。
[0006] η為0~6,優(yōu)選為0~2,更優(yōu)選為1。
[0007] 上述新型紫杉類化合物的制備方法具有以下步驟： S1:先對吉西他濱中的兩個羥基進行保護，然后與氯甲酸烷基酯進行縮合反應，接著脫 除羥基保護基團，得到中間體G1; S2:先對步驟S1制得的中間體G1其中一個羥基進行保護，然后再對另一個羥基進行保 護，接著脫除第一個羥基脫?；鶊F，得到中間體G2; S3:將7,10-二(三氯乙氧基甲酰)多西他賽與二酸酐反應得到中間體D1; S4:將步驟S3制得的中間體D1與步驟S2制得的中間體G2進行縮合反應得到中間體D2; S5:對步驟S4制得的中間體D2進行羥基脫保護得到目標產物。
[0008] 上述步驟si中采用的羥基保護試劑為六甲基二硅氮烷、六甲基二硅氧烷、三甲基 氯硅烷或者三甲基碘硅烷，優(yōu)選為六甲基二娃氮燒。
[0009] 上述步驟si中所述的氯甲酸烷基酯為氯甲酸甲酯、氯甲酸乙酯、氯甲酸正丙酯、氯 甲酸異丙酯、氯甲酸正丁酯、氯甲酸正戊酯、氯甲酸正己酯中的一種，優(yōu)選為氯甲酸乙酯、氯 甲酸正丁酯或者氯甲酸正己酯，更優(yōu)選為氯甲酸正丁酯。
[0010] 上述步驟S2中第一個羥基保護采用的保護試劑為叔丁基二甲基氯硅烷、異丙基二 甲基氯硅烷、乙基二甲基氯硅烷或者三甲基氯硅烷，優(yōu)選為叔丁基二甲基氯硅烷。
[0011] 上述步驟S2中第二個羥基保護采用的保護試劑為氯甲酸-2,2,2-三氯乙酯。
[0012]上述步驟S3中采用的二酸酐為丁二酸酐、戊二酸酐或者己二酸酐，優(yōu)選為戊二酸 酐。
[0013] 上述步驟S4中采用的縮合試劑為1-(3-二甲氨基丙基）-3-乙基碳二亞胺鹽酸鹽 (EDCI)、1-乙基-(3-二甲基氨基丙基)碳二亞胺鹽酸鹽(EDC)、二環(huán)己基碳二亞胺(DCC)或者 N，N-二異丙基碳二亞胺(DIC)，優(yōu)選為1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亞胺鹽酸鹽或者1-乙基-(3-二甲基氨基丙基)碳二亞胺鹽酸鹽，更優(yōu)選為1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亞 胺鹽酸鹽。
[0014] 上述步驟S4的縮合反應優(yōu)選在4-二甲氨基吡啶的存在下進行。
[0015] 上述步驟S5的羥基脫保護是在鋅粉和乙酸鈉的存在下進行的。
[0016] 上述新型紫杉類化合物在制備抗腫瘤藥物中的應用。
[0017] 上述腫瘤為血液瘤或者惡性實體瘤；具體來說，上述腫瘤包括結腸癌、直腸癌、胃 癌、肺癌、乳腺癌、前列腺癌、胰腺癌、肝癌、食道癌、腦腫瘤、卵巢癌、子宮癌、腎癌、頭頸癌、 皮膚癌、膀胱癌、外陰癌、睪丸瘤、絨毛癌、生殖細胞瘤、惡性淋巴瘤、白血病和多發(fā)性骨髓 瘤;優(yōu)選包括結腸癌、直腸癌、胃癌、肺癌、乳腺癌以及白血病。
[0018] -種藥物組合物，其含有作為活性成分的上述新型紫杉類化合物以及一種或者多 種藥用載體/賦形劑。
[0019] 上述藥物組合物的劑型為注射劑型或者是口服劑型，其中注射劑型為溶液型注射 劑、混懸型注射劑、乳劑型注射劑、或注射用無菌粉末；口服劑型為片劑、散劑、顆粒劑、膠囊 劑、微丸制劑、溶液劑、混懸劑、乳劑、糖漿劑或者酏劑。
[0020] 本發(fā)明具有的積極效果：本發(fā)明的新型紫杉類化合物毒性較?。∕TD劑量只有 250mg/kg)，抗腫瘤活性較高，尤其是對于胃腸道癌、肺癌、乳腺癌以及白血病等實體腫瘤具 有很好的抑制率(結腸癌TGI可達85.69%)。
【附圖說明】
[0021] 圖1為中間體G1的1H-NMR譜圖。
[0022] 圖2為中間體G2的1H-NMR譜圖。
[0023] 圖3為中間體D1的1H-NMR譜圖。
[0024] 圖4為中間體D2的1H-NMR譜圖。
[0025] 圖5為新型紫杉類化合物Z1的1H-NMR譜圖。
[0026] 圖6為新型紫杉類化合物Z1的13C_NMR譜圖。
[0027]圖7為新型紫杉類化合物Z1的HSQC圖（異核單量子相關譜圖）。 【具體實施方式】 [0028](實施例1) 本實施例的新型紫杉類化合物Z1的結構式如下：
§
[0029]該新型紫杉類化合物Z1的制備方法具有以下步驟： S1:制備中間體G1，合成路線如下：
[0030」具體方法如下：
S11:在1L的圓底燒瓶中加入30g的吉西他濱（0.11411101)、14311^的六甲基二硅氮烷 (0.68mol、6eq. )、0· 569g的硫酸銨(4mmol、0.038eq.)以及143mL的二氧六環(huán)，然后將混合物 至于130°C的油浴中，回流1.5h，直至不再有氨氣產生。
[0031]待揮發(fā)物蒸發(fā)后，先將半結晶固體真空干燥lOmin，剩余物用干燥的甲苯共蒸發(fā)二 次后于60°C真空干燥，得到53.99g的白色結晶固體。
[0032] S12:0°C的溫度下，向含有28.05g上述S11制得的白色結晶固體(59mmol)和8.02mL 的N-甲基咪唑（101mmol、l .7eq.)的296mL二氯甲燒溶液中加入11.3mL的氯甲酸正丁酯 (89mmol、1.5eq.)，此時無沉淀產生，將反應混合物室溫（15~25°C，下同）下攪拌4h，然后在 30°C的溫度下蒸除溶劑，向剩余物中加入197mL的甲醇和41mL的三乙胺(0.27m 〇l、5eq)，將 反應混合物室溫下攪拌過夜，第二天TLC表明幾乎都是產物。
[0033]將反應混合物蒸除溶劑，剩余物溶解在500mL的乙酸乙酯/二氯甲烷混合溶液（1: 3 )中，然后與300mL的檸檬酸溶液(含42g檸檬酸)在分液漏斗中混合搖晃，將有機層直接倒 入含有100g硅膠的過濾漏斗中，將水相用200mL的乙酸乙酯/二氯甲烷混合溶劑（1:3)提取3 次，再依次用100mL的乙酸乙酯/二氯甲烷混合溶劑（1:3)和300mL的甲醇/二氯甲烷混合溶 劑（1:20)進行洗脫，產物用1300mL的甲醇/二氯甲烷混合溶劑（1:20)洗脫。蒸除溶劑后于60 °C真空干燥，得到19.8g白色固體泡沫中間體G1，收率為92.0%(以吉西他濱計）。
[0034] 中間體G1的1H-NMRi普圖見圖1。
[0035] 4 匪R (399.86 MHz, DMS〇-c/6): δ = 0.90 (t，3H，5 / = 7.42 Hz, CH3)， 1.30-1.41 (m, 2H, CH2CH2CH2CH3), 1.54-1.64 (m, 2H, CH2CH2CH2CH3), 3.65 (dm, 1H, 2 J = 12.69 Hz, 3 J = 3.22 Hz, H-Sa'), 3.81 (dm, 1H, 2 J = 12.69 Hz, H-Sb'), 3.86-3.91 (m, 1H, H-4'), 4.12 (t, 2H, 3 J = 6.64 Hz, CH2CH2CH2CH3), 4.13-4.25 (m, 1H, H-3'), 5.30 (t, 1H, 5/= 5.37 Hz, 0H-5'), 6.17 (t, 1H, 3 J (h-f) = ? .^>2 Hz, Η-Γ), 6.32 (d, 1H, 5 / = 6.45 Hz, 0H-3'), 7.10 (d, 1H, 5 / = 7.71 Hz, H-5), 8.22 (d, 1H, 3 J= 7.71 Hz, H-6), 10.84 (br s, 1H, NH)〇
[0036] 1^：/]\^化51)[]\1+!1]+理論值：364.13，實測值 ：364.17。
[00371 ? 9.制么·由伙r; 9 _合f#敗姥fm下.
[00Lw」 片丨干yj仏》:
將1 · 5g步驟S1制得的中間體Gl(4. lmmol)、0 · 653g的叔丁基二甲基氯硅烷(4 · 3mmol、 1.0569.)和0.765!1^的吡啶（9.511111101，2.369.)溶解在151^的二氯甲烷中，室溫攪拌111，1^ 表明反應進行了一半。將反應混合物攪拌過夜，仍有較多中間體G1存在，再添加0.187g的叔 丁基二甲基氯硅烷（1.24mmo 1、0.3eq.)，將反應混合物室溫攪拌6h，TLC表明仍然存在中間 體G1，再加入0.124g的叔丁基二甲基氯硅烷(0.83臟01、0.269.)，繼續(xù)攪拌過夜，第二天110 表明沒有中間體G1，隨后加入0.2-33mL的吡啶（2.9mmo 1、0.7eq .)，接著在0 °C下加入 0.625mL的氯甲酸-2，2，2-三氯乙酯（4.5mmol、1. leq.)，將反應混合物室溫攪拌0.5h，TLC表 明反應完全。
[0039] 將反應混合物與3.90g的檸檬酸（18.6mmol，4.5eq.)-起搖晃，蒸除溶劑后的提取 物無需干燥，將剩余物在40°C下進行高真空干燥，然后溶解在27mL的四氫呋喃中，將溶液冷 卻至〇°C，加入三乙胺以及3倍的氫氟酸，將溶液置于5°C的冰箱中過夜，第二天將反應混合 物置于20°C保持3h，然后在該溫度下蒸除溶劑。將剩余物經硅膠柱層析(含55g硅膠），然后 依次用500mL的乙酸乙酯/二氯甲烷混合溶劑（1:5)以及450mL的乙酸乙酯/二氯甲烷混合溶 劑（1:2)洗脫。合并相同組分，蒸除溶劑后于60°C真空干燥，得到1.904g的白色固體泡沫中 間體G2,收率為86%。
[0040] 中間體G2的1H-NMR譜圖見圖2。
[0041] ΧΗ NMR (399.86 MHz, DMS〇-c/ β) : δ = 0.90 (t, 3Η,= 7.32 Ηζ, CH2CH2CH2CH3), 1.30-1.41 (m, 2Η, CH2CH2CH2CH3), 1.55-1.64 (m, 2Η, CH2CH2CH2CH3), 3.68-3.76 (m, 1Η, H-5a，），3.78-3.85 (m, 1Η, H-5b，），4.12 (t, 2Η, 5 / = 6.64 Hz, CH2CH2CH2CH3), 4.34-4.39 (m, 1H, H-4'), 5.01 (d, 1H, 2 J = 12.20 Hz, Troc), 5.09 (d, 1H, 2 J = 12.20 Hz, Troc), 5.31-5.41 (m, 2H, H-3', OH-5'), 6.34 (t, 1H, 5 J (h-f) = 8.60 Hz, Η-Γ), 7.13 (d, 1H, 5 / = 7.62 Hz, H-5), 8.15 (d, 1H, 5 /= 7.62 Hz, H-6), 10.87 (br s, 1H, NH) 〇
[0042] LC/MS(ESI)[M+H]+ 理論值：538.0,實測值：538.2。
[00431 H制客由1'團優(yōu)D1 .合成路錢加 T.
[0044」 具體萬法如卜：
將0.95g的7，10-二（三氯乙氧基甲酰）多西他賽（0.8211111101)和0.9358的戊二酸酐 (8.2mmol、10eq.)溶解在10.6mL的吡啶（131mmol、160eq.)中，將反應混合物室溫攪拌2.5h， 然后置于_20°C的冰箱中過夜，第二天再將反應混合物室溫攪拌3h以上，TLC表明反應基本 完成。
[0045]在30°C下蒸除吡啶，并將剩余物在該溫度下真空干燥，將剩余物溶解在5.5g的檸 檬酸（26mm〇l、32eq.)溶液中，然后用二氯甲烷提取，將提取物直接倒入硅膠柱（含20g硅 膠），將雜質用110mL的甲醇/二氯甲烷混合溶劑（1:100)洗去，將產物用143mL的甲醇/二氯 甲烷混合溶劑（1:100)以及102mL的甲醇/二氯甲烷混合溶劑（1:50)洗出，蒸除溶劑后于40 °(：真空干燥，得到1.055g白色固體中間體D1粗品。
[0046] 將粗品經硅膠柱層析(含35g硅膠），然后依次用50mL的二氯甲烷、210mL的乙酸乙 酯/二氯甲烷混合溶劑（1:20)以及220mL的乙酸乙酯/二氯甲烷混合溶劑（1:10)洗去雜質， 將洗脫后的組分收集于試管中，并用乙酸乙酯/二氯甲烷混合溶劑（1:5)進行柱洗脫。合并 相同組分，蒸除溶劑后于40°C真空干燥，得到0.623g白色固體中間體D1成品，收率為60%。
[0047] 中間體D1的1Η-NMR譜圖見圖3。
[0048] ΧΗ NMR (399.86 MHz, OMSO-de)： δ = 0.98 (s, 3H, CH3), 1.03 (s, 3H, CH3), 1.38 (s, 9H, BOC), 1.51-1.65 (m, 1H), 1.68 (s, 3H, CH3), 1.72-1.91 (m, 4H), 1.80 (s, 3H, CH3), 2.26 (s, 3H, OAc), 2.28 (t, 2H, 3 J= 7.42 Hz, COCH2CH2CH2COOH)，2.46 (t, 2H, 5 /= 7.23 Hz, COCH2CH2CH2⑶OH), 2.56-2.50 (m, 1H), 3.65 (d, 1H, 5 /= 6.83 Hz, CH), 4.03-4.10 (m, 2H), 4.77 (d, 1H, 2 J = 12.01 Hz, Troc-a), 4.81 (s, 1H), 4.93 (d, 1H, 2 J = 12.01 Hz, Troc-a), 4.95 (d, 1H, 2 J= 12.10 Hz, Troc-b), 4.98-5.02 (m, 1H), 5.00 (d, 1H, 2 J= 12.10 Hz, Troc-b), 5.01-5.07 (m, 1H), 5.09 (d, 1H, 3 J = 8.40 Hz), 5.38-5.47 (m, 2H), 5.79 (t, 1H, 3 J= 8.89 Hz, CH), 6.09 (s, 1H), 7.18 (t, lH,5/= 7.32 Hz, CH^ph), 7.37 (d, 2H,5 / = 7.62 Hz, CH^ph), 7.41-7.47 (m, 2H, CHrfh), 7.65-7.72 (m, 2H, CHrfz), 7.76 (t, 1H,5 / = 7.32 Hz, CH^bz), 7.88 (d, 1H, 5/ = 8.98 Hz, NH-BOC), 7.99 (d, 2H,5/= 7.22 Hz, CH^bz), 12.13 (br s, 1H, C00H)〇
[0049] LC/MS(ESI)[M+Na]+ 理論值：1292.2,實測值：1292.2。
[0050] S4:制備中間體D2,合成路線如下：
[005?」 具體萬沄如卜：
0°C的溫度下，將0 · 277mg步驟S2制得的中間體G2(0 · 51mmol、1 · leq · )、0 · 594mg步驟S3 制得的中間體01(0.471111]1〇1、169)、9811^的碳化二亞胺（0.511]11]1〇1、1.169.)以及11.411^的4-二甲氨基吡啶(95 · 10 6 mol、0.2eq.)溶解在0.934mL的二氯甲烷中，將反應混合物緩慢加 熱至室溫，攪拌過夜，第二天，TLC表明為主要產品和一些輕微的雜質。
[0052] 將反應混合物直接倒入硅膠柱(含35g硅膠）中，依次用50mL的二氯甲烷、205mL的 乙酸乙酯/二氯甲烷混合溶劑（1:40)、210mL的乙酸乙酯/二氯甲烷混合溶劑（1:20)以及 220mL的乙酸乙酯/二氯甲烷混合溶劑（1:10)將雜質洗去，將洗脫后的組分收集于試管中， 用360mL的乙酸乙酯/二氯甲烷混合溶劑（1:5)進行柱洗脫，合并相同組分，蒸除溶劑后于40 °(：真空干燥，得到0.636g無色透明中間體D2，收率為76%。
[0053] 中間體D2的1H-NMR譜圖見圖4。
[0054] 4 匪R (399.86 MHz, DMSO-c/i；): δ = 4 NMR (399.86 MHz, DMSO-c/i；): δ = 0.90 (t, 3H, 5 / = 7.32 Hz, CH2CH2CH2CH3), 0.98 (s, 3H, CH3), 1.02 (s, 3H, CH3), 1.30-1.41 (m, 2H, CH2CH2CH2CH3), 1.37 (s, 9H, BOC), 1.51-1.66 (m, 4H, CH2CH2CH2CH3, CH2-a, CH2-a), 1.68 (s, 3H, CH3), 1.75-1.89 (m, 4H), 1.80 (s, 3H, CH3), 2.26 (s, 3H, OAc), 2.43 (t, 2H, 3 J = 7.52 Hz, COCH2CH2CH2CO), 2.46 (t, 2H, 3 J = 8.01 Hz, COCH2CH2CH2CO), 3.65 (d, 1H, 3 J = 6.64 Hz, CH), 4.03-4.10 (m, 2H), 4.12 (t, 2H, 5 /= 6.64 Hz, CH2CH2CH2CH3), 4.43 (dd, 1H, 2 J = 12.10 Hz, 3 J = 6.25 Hz, H-5'a), 4.51 (dd, 1H, 2 J = 12.10 Hz, 3 J = 2.84 Hz, H-5' b), 4.55-4.62 (m, 1H, H-4'), 4.77 (d, 1H, 2 J = 12.11 Hz, Troc-a), 4.80 (s, 1H), 4.93 (d, 1H, 2 J = 12.11 Hz, Troc-a), 4.94 (d, 1H, 2 J = 12.10 Hz, Troc- b) , 4.97-5.20 (m, 3H), 5.01-5.10 (m, 2H), 5.09 (d, 1H, 2 J = 12.30 Hz, Troc- c) , 5.37-5-57 (m, 3H), 5.80 (t, 1H, 3 J = 8.98 Hz, CH), 6.09 (s, 1H), 6.36 (t, 2H, 5 J (h-f) = 8.30 Hz, Η-Γ), 7.16 (d, 1H, 3 J = 7.61 Hz, H-5), 7.18 (t, m,3 J = 7.42 Hz, CH^ph), 7.37 (d, 2H,5/= 7.62 Hz, CH^ph), 7.40-7.47 (m, 2H, CHrfh), 7.65-7.72 (m, 2H, CH^bz), 7.76 (t, lH,5/= 7.42 Hz, CH^bz), 7.87 (d, 1H, 3 J = 8.98 Hz, NH-BOC), 7.99 (d, 2H,5/= 7.42 Hz, CH^bz), 8.07 (d, 1H, 5 /= 7.42 Hz, H-6), 10.90 (br s, 1H, NH) 〇
[0055] LC/MS(ESI)[M+H-Troc]+理論值：1617.3,實測值：1617.6。
[0056] S5:制備新型紫杉類化合物Zl，合成路線如下：
[0057] 具體方法如下： 將1. l〇lg的乙酸鈉（13.4mm〇l、4〇eq.)溶解在12mL甲醇和12mL醋酸的混合溶液中，然后 將該溶液加入到裝有ο. 602g步驟S4制得的中間體D2(0.34mmol)的燒瓶中，待其完全溶解 后，加入1.756g的鋅粉（27mmol、40eq.)，將反應混合物在5°C超聲振動15min并劇烈搖晃， TLC表明中間體D2消失，只有微量的二(三氯乙氧基甲酰)產物和一定量的單(三氯乙氧基甲 酰)產物，絕大部分是目標產物。繼續(xù)超聲振動并劇烈搖晃持續(xù)15min，TLC顯示沒有二(三氯 乙氧基甲酰)產物，但仍有一部分單(三氯乙氧基甲酰)存在，將反應混合物第三次超聲振動 并劇烈搖晃15min，然后倒入50mL含有19.44g的碳酸氫鈉(0.23mol)水懸浮液中，接著加入 乙酸乙酯，過濾，濾液用乙酸乙酯提取，提出物于25°C蒸干。
[0058]將剩余物溶于二氯甲烷后經硅膠柱層析（含35g硅膠），然后依次用203.3mL的甲 醇/二氯甲烷混合溶劑（1:60)以及615mL的甲醇/二氯甲烷混合溶劑（1:40)洗脫，將洗脫后 的組分收集于試管中，依次用206.7mL的甲醇/二氯甲烷混合溶劑（1:30)以及208mL的甲醇/ 二氯甲烷（1:25)混合溶劑進行洗脫。合并相同組分，蒸除溶劑后于40°C真空干燥，得到 0.244g無色透明目標產物Z1，收率為57%，純度為95.0%(HPLC)。
[0059] 目標產物Z1的1H-NMR譜圖、13C-NMR譜圖以及HSQC譜圖分別見圖5~圖7。
[0060] ΧΗ NMR (399.86 MHz, DMS〇-c/ β) : δ = 0.90 (t, 3Η, 5 / = 7. 13 Hz, CH2CH2CH2CH3), 0.97 (s, 6H, CH3X2), 1.29-1.41 (m, 2H, CH2CH2CH2CH3), 1.36 (s, 9H, BOC), 1.51 (s, 3H, CH3), 1.53-1.67 (m, 4H, CH2CH2CH2CH3, CH2-a, CH2-a), 1.70 (s, 3H, CH3), 1.76-1.89 (m, 3H, COCH2CH2CH2CO, CH2-b), 2.23 (s, 3H, OAc), 2.25-2.33 (m, 1H, CH2-b), 2.38-2.48 (m, 4H, COCH2CH2CH2CO), 3.63 (d, 1H, 3 J = 6.44 Hz, CH), 3.97-4.07 (m, 3H, CH, CH2O), 4.06-4.12 (m, 1H, H-4'), 4.12 (t, 2H, 3 J = 6.44 Hz, CH2CH2CH2CH3), 4.18-4.31 (m, 1H, H-3'), 4.32-4.47 (m, 3H, H-5，，i-〇H), 4.86-4.95 (m, 2H, CH, OH), 5.00 (d, 1H, 5/= 6.64 Hz, OH), 5.03-5.14 (m, 3H, CHX3), 5.40 (d, 1H, 5 / = 6.83 Hz, CH), 5.77 (t, 1H, 5 / = 8.59 Hz, CH), 6.22 (t, 2H, 5 J (h-f) = 7.52 Hz, Η-Γ), 6.49 (d, 1H, 3 J = 6.06 Hz, 0H-3，），7.10-7.20 (m, 2H, H-5, HP-ph)，7.31-7.45 (m, 4H, H0-phX2, H?-phX2), 7.61-7.69 (m, 2H, Hffl-ph), 7.73 (t, 1H, 5/ = 7.42 Hz, H^ph), 7.85 (d, 1H, 3 J = 8.98 Hz, NH-B0C), 7.93-8.04 (m, 3H, H^phX2, H-6), 10.86 (br s, 1H, NH)〇
[0061] 13C NMR (100.56 MHz, DMSO-c/i；): δ = 9.8 (CH3), 13.5 (CH2CH2CH2CH3)，13.6 (CH3), 18.4 (CH2CH2CH2CH3)，19.7 (COCH2CH2CH2⑶），20.7 (CH3)，22.4 (OAc)，26.4 (CH3)，28.1 (i-BOC，primary), 30.2 (CH2CH2CH2CH3)，32.1 (COCH2CH2CH2⑶），32.3 (COCH2CH2CH2CO), 34.7 (CH2), 36.4 (CH2), 42.9, 45.9 (CH), 55.1 (CH), 57.0, 62.8 (CH2-5'), 65.1 (CH2CH2CH2CH3), 70.1 (t, 2 J (c-f) = 23.0 Hz, CH-3'), 70.7 (CH), 71.2 (CH), 73.7 (CH), 74.8 (CH), 75.0 (CH), 75.4 (CH2), 76.8, 77.9 (CH-4'), 78.5, 80.3 (t -B0C, quaternary), 83.7 (CH), 84.5 (br s, CH-Γ), 95.2 (CH-5), 122.5 (t, 1 J (c-f) = 259.2 Hz, C-2'), 127.3 (CH0-ph), 128.0 (CHP-ph), 128.5 (CH?-ph), 128.6 (CH?-ph), 129.5 (CH0-ph), 130.0，133.3 (CHP-ph)，135.9，136.9， 137.5， 144.9 (CH-6)， 153.1 (NHC00)， 153.9 (C0Ar)， 155.1 (NHC00)， 163.5 (C-4)， 165.3 (COO), 169.0 (COO), 169.5 (COO), 171.8 (COCH2CH2CO), 172.1 (COCH2CH2CO), 209.3 (CO)〇
[0062] LC/MS(ESI) [M+H]+理論值：1267 · 5，實測值：1267 · 8。
[0063] (實施例2~實施例9) 各實施例的制備方法與實施例1基本相同，不同之處在于步驟S1中采用的氯甲酸烷基 酯、步驟S3中采用的二酸酐以及最后得到的新型紫杉類化合物，具體見表1。
[0064] 表 1 _____
[0065](實施例10) 本實施例為含有實施例1的新型紫杉類化合物Z1的藥物組合物的制備方法。
[0066] 其中，注射劑型以凍干粉針劑為例，包括：30g的新型紫杉類化合物Z1、甘露醇 (20%，W/v)300g、緩沖劑二水合磷酸二氫鈉7g、表面活性劑泊洛沙姆188(F68)4.0g。
[0067] 將按照上述處方量準確稱取的二水合磷酸二氫鈉、泊洛沙姆188(F68)、甘露醇 (20%，w/v)加入300g預冷至10°C以下的注射用水中溶解后，用0 · lmol/L的NaOH調節(jié)溶液pH 值為7.3~7.5 ;再向上述溶液中加入30g的新型紫杉類化合物ΖΓ混合均勻，用0 . lmol/L的 NaOH溶液或0. lmol/L的HC1調節(jié)pH值為7.3±0.2(本實施例為7.5);加水至2000g，溶液用 0.22μπι微孔濾膜過濾除菌;按每瓶2.0g將濾液分裝于管制瓶中，半加塞后置于冷凍干燥機 中凍干，待干燥后真空壓塞，乳蓋，貼標簽，即得凍干粉針劑1〇〇〇支，保存在2~8°C溫度下。
[0068] 除了上述凍干粉針劑即注射用無菌粉末外，本發(fā)明的新型紫杉類化合物還可制備 成其他形式的注射劑型，如溶液型注射劑、混懸型注射劑、乳劑型注射劑。
[0069] 藥物組合物的適用劑型除了上述涉及的片劑形式外，還可以被制成口服的散劑、 顆粒劑、膠囊劑、微丸制劑、溶液劑、混懸劑、乳劑、糖漿劑或者酏劑，或者是口服形式的緩釋 及控釋制劑，或者是其他口服形式的藥物組合物，這些口服劑型含有常見的相應的輔料(根 據(jù)不同的作用分為添加劑、附加物等），如添加劑有藥物等級的甘露醇、乳糖、淀粉、硬脂酸 鎂、糖精鹽、纖維素或硫酸鎂等。
[0070] 在實現(xiàn)上述口服劑型中，可以選擇藥學上的附加物作為藥物活性組分的載體，包 括已有技術成熟的物質，例如:惰性固體稀釋液、水溶劑、脂質體、微球體或/和無毒有機溶 劑等;優(yōu)選的附加物有:加濕劑、乳化劑、pH緩沖液、人血清白蛋白、抗氧化劑、防腐劑、抑菌 劑、葡萄糖、蔗糖、海藻糖、麥芽糖、卵磷脂、甘氨酸、山梨酸、丙烯醇、聚乙烯、魚精蛋白、硼 酸、氯化鈉、或者氯化鉀、礦物油、植物油等;可從中選擇一種或幾種組合作為藥物載體。 [0071 ]本發(fā)明的藥物組合物的靶腫瘤包括血液瘤或者惡性實體瘤。具體的，靶腫瘤包括 結腸癌、直腸癌、胃癌、肺癌、乳腺癌、前列腺癌、胰腺癌、肝癌、食道癌、腦腫瘤、卵巢癌、子宮 癌、腎癌、頭頸癌、皮膚癌、膀胱癌、外陰癌、睪丸瘤、絨毛癌、生殖細胞瘤、惡性淋巴瘤、白血 病和多發(fā)性骨髓瘤，并且甚至更優(yōu)選的靶腫瘤可包括結腸癌、直腸癌、胃癌、肺癌、胰腺癌、 肝癌、卵巢癌、腎癌、惡性淋巴瘤、乳腺癌以及白血病，但本發(fā)明不限于此。
[0072] (應用例1、單次腹腔給藥新型紫杉類化合物在ICR小鼠的最大耐受量實驗） 本應用例是研究實施例1的新型紫杉類化合物Z1單次腹腔給藥對ICR小鼠的毒性反應， 以確其最大耐受量(maximal tolerance dose，MTD)〇
[0073] 最大耐受量是指動物不會發(fā)生死亡，動物的體重降低不會超過10%(與Day 0相 比），或者不產生明顯毒副作用的劑量。
[0074] 1、受試物的配制。
[0075]受試物溶解所用溶劑來源如下： 無水乙醇，批號10009218,廠商：國藥集團化學試劑有限公司。
[0076] Cremophor EL，批號27963,廠商：Sigma。
[0077] 0.9%生理鹽水，批號13083004,廠商:華裕制藥有限公司。
[0078]稱取定量對應的受試物于5mL玻璃試管中，在5mm的磁力攪拌子攪拌下溶解于乙醇 中，全部溶解后加入Cremophor EL，保持攪拌，臨用前加入標示量的生理鹽水攪拌均勻，配 置時乙醇、Cremophor EL、生理鹽水的體積比為5:5:90。
[0079] 2、實驗動物。
[0080] 品種和品系：ICR小鼠。
[0081] 級別：SPF。
[0082] 性別：雌性。
[0083]來源:上海斯萊克實驗動物有限公司。
[0084]合格證號：0130749。
[0085]實驗開始動物體重：18_20g。
[0086] 數(shù)量和性別:41只。
[0087] 適應環(huán)境時間：5_7天，與實驗時相同飼養(yǎng)條件。
[0088] 動物房環(huán)境保持溫度18-26°C，相對濕度30-70%，12小時光照。
[0089] 實驗動物用水采用過濾滅菌水，動物自由飲食及飲水。
[0090] 3、實驗方法。
[0091 ]給藥方式：IP。如動物死亡則減低劑量，直至動物存活，如無動物死亡，則增加劑 量;如在給給定高劑量下動物正常存活則實驗結束。最終根據(jù)實驗結果確定小鼠對受試物 的MTD;急性給藥后連續(xù)觀察動物7天。
[0092] 實驗過程中所有動物，對所有的受試動物進行詳細臨床觀察，給藥后每天兩次(上 10:00、下午16:00各一次），連續(xù)觀察14天，觀察包括但不僅限于:皮膚，毛，眼，耳，鼻，口腔， 胸腔，腹部，外生殖器，四肢和腳，呼吸道及循環(huán)系統(tǒng)，自主效應（如流涎），神經系統(tǒng)（如震 顫，抽搐，應激反應以及反常行為）。
[0093] 給藥前稱重動物的體重，隨后每天在同一時間稱量動物的體重并記錄。
[0094] 每天詳細記錄觀察結果、動物體重以及給藥一周后動物存活情況。
[0095] 4、實驗結果。
[0096]新型紫杉類化合物Z1的MTD劑量為250mg/kg。
[0097](應用例2、單次腹腔注射新型紫杉類化合物對腫瘤的生長抑制作用） 本應用例是研究單次腹腔注射實施例1的新型紫杉類化合物Z1對結腸癌HCT-116荷瘤 裸小鼠移植瘤的生長抑制作用。
[0098] 1、受試物的配制。
[0099]受試物溶解所用溶劑來源如下： 無水乙醇，批號10009218,廠商：國藥集團化學試劑有限公司。
[0100] Cremophor EL，批號27963,廠商：Sigma。
[0101] 0.9%生理鹽水，批號13083004,廠商:華裕制藥有限公司。
[0102]稱取定量對應的受試物于5mL玻璃試管中，在5mm的磁力攪拌子攪拌下溶解于乙醇 中，全部溶解后加入Cremophor EL，保持攪拌，臨用前加入標示量的生理鹽水攪拌均勻，配 置時乙醇、Cremophor EL、生理鹽水的體積比為5:5:90。
[0103] 2、實驗動物。
[0104] 品種和品系：Balb/c Nude小鼠。
[0105] 級別：SPF。
[0106] 性別:雌性。
[0107] 來源:上海西普爾-畢凱實驗動物有限公司。
[0108] 動物合格證號：0123627。
[0109] 實驗開始時動物年齡:7_9周齡。
[0110] 實驗開始時動物體重：18-22克。
[0111] 適應環(huán)境時間：5-7天，與實驗時相同飼養(yǎng)條件。
[0112] 動物房環(huán)境保持溫度23±2°C，濕度40-70%，12小時明暗交替。
[0113] 動物飼料(SLAC-M01)購自北京科澳協(xié)力有限公司。
[0114] 實驗動物用水采用過濾滅菌水，動物自由飲食和飲水。
[0115] 3、實驗方法。
[0116] 3.1、腫瘤細胞:結腸癌HCT-116細胞，購于中科院細胞生物研究所。用F-12培養(yǎng)基 (含10%的FBS)培養(yǎng)在37°C，飽和濕度，含體積分數(shù)為5%C0 2、95%空氣的二氧化碳培養(yǎng)箱內。 接種前取對數(shù)生長期細胞，以〇 . 25%胰蛋白酶消化后，PBS洗滌1次，PBS重新懸浮計數(shù)，用不 含血清的培養(yǎng)基重新懸浮細胞，調整細胞濃度至約3 X 107cel 1/mL。
[0117] 3.2、動物接種及分組:每個裸鼠在無菌狀態(tài)下，右側后肢皮下接種O.lmL細胞懸液 (3X 106cell/mouse)。待腫瘤長至體積60-150mm3左右時，選出腫瘤體積相近、形狀較好的裸 鼠（形狀盡量為單一圓球形，無不規(guī)則的形狀或多個腫瘤聚在一起），每組6只。
[0118] 3.3、動物給藥和觀察。
[0119] (1)觀察各組裸鼠接種部位腫瘤的形成狀況，每周3次用圓洞尺測量腫瘤結節(jié)的直 徑(D)，并按如下公式計算腫瘤結節(jié)的體積(V): V =3/43i(D/2)3〇
[0120] (2)抗腫瘤活性的評價指標為腫瘤生長抑制率TGI(%)，其計算公式為： TGI(%) = (Vcontrol_VTreatment)/Vcontrol) X 100%〇
[0121] 每周3次稱量小鼠體重。
[0122] 3.4、臨床癥狀。
[0123] 在實驗開始和實驗過程中每個動物所有的臨床癥狀都應記錄。觀察應在每天的同 一時間進行。
[0124] 給予受試物后如出現(xiàn)體重減低>20%，瀕死動物或腫瘤體積超過2800mm3，則C0 2處 死，分離腫瘤并稱重，尸檢，肉眼觀察是否有病變器官并記錄。
[0125] 3.5、數(shù)據(jù)統(tǒng)計。
[0126] 實驗數(shù)據(jù)除特別指出外，均以Mean土SEM表示;兩組間數(shù)據(jù)采用非配對T檢驗，P< 0.05認為有顯著性差異。
[0127] 4、實驗結果。
[0128] 新型紫杉類化合物Z1對人結腸癌HCT-116荷瘤小鼠腫瘤的生長抑制率(TGI%)為 85.69%〇
【主權項】
1. 一種新型紫杉類化合物，其特征在于其結構如通式(I)所示;通式（I)中，Ri為Cl~C6烷基或取代烷基;η為0~6。2. 根據(jù)權利要求1所述的新型紫杉類化合物，其特征在于:通式（I)中，Ri為乙基、正下基 或者正己基;η為0~2。3. 根據(jù)權利要求2所述的新型紫杉類化合物，其特征在于:通式（I)中，Ri為正下基;η為 1〇4. 權利要求1至3之一所述的新型紫杉類化合物的制備方法，其特征在于具有W下步 驟： S1:先對吉西他濱中的兩個徑基進行保護，然后與氯甲酸烷基醋進行縮合反應，接著脫 除徑基保護基團，得到中間體G1; S2:先對步驟S1制得的中間體G1其中一個徑基進行保護，然后再對另一個徑基進行保 護，接著脫除第一個徑基脫保基團，得到中間體G2; S3:將7，10-二(Ξ氯乙氧基甲酯)多西他賽與二酸酢反應得到中間體D1; S4:將步驟S3制得的中間體D1與步驟S2制得的中間體G2進行縮合反應得到中間體D2; S5:對步驟S4制得的中間體D2進行徑基脫保護得到目標產物。5. 根據(jù)權利要求1所述的新型紫杉類化合物的制備方法，其特征在于:步驟S1中所述的 氯甲酸烷基醋為氯甲酸正下醋。6. 根據(jù)權利要求1所述的新型紫杉類化合物的制備方法，其特征在于:步驟S3中所述的 二酸酢為戊二酸酢。7. 根據(jù)權利要求1所述的新型紫杉類化合物的制備方法，其特征在于:步驟S1中采用的 徑基保護試劑為六甲基二娃氮燒;步驟S2中第一個徑基保護采用的保護試劑為叔下基二甲 基氯硅烷，第二個徑基保護采用的保護試劑為氯甲酸-2，2，2-Ξ氯乙醋。8. 權利要求1至3之一所述的新型紫杉類化合物在制備抗腫瘤藥物中的應用。9. 根據(jù)權利要求8所述的應用，其特征在于:所述腫瘤包括結腸癌、直腸癌、胃癌、肺癌、 乳腺癌、前列腺癌、膜腺癌、肝癌、食道癌、腦腫瘤、卵巢癌、子宮癌、腎癌、頭頸癌、皮膚癌、膀 脫癌、外陰癌、睪丸瘤、絨毛癌、生殖細胞瘤、惡性淋己瘤、白血病和多發(fā)性骨髓瘤。10. 根據(jù)權利要求9所述的應用，其特征在于：所述腫瘤包括結腸癌、直腸癌、胃癌、肺 癌、膜腺癌、肝癌、卵巢癌、腎癌、惡性淋己瘤、乳腺癌W及白血病。
【文檔編號】A61P35/00GK106083960SQ201610426133
【公開日】2016年11月9日
【申請日】2016年6月15日
【發(fā)明人】達麗亞楊, 王慧娟
【申請人】內蒙古普因醫(yī)藥科技有限公司