一種那西肽的提取方法
【專利摘要】本發(fā)明涉及一種那西肽提取方法，其工藝步驟包括：將那西肽發(fā)酵液經(jīng)噴霧干燥,復(fù)合溶媒浸提，離心，大孔樹脂吸附，酸水解析，鹽水沉淀，洗滌、減壓干燥得到那西肽成品。本發(fā)明利用復(fù)合溶媒浸提，大孔樹脂脫色純化提取那西肽工藝，該方法可提高提取收率6.5%以上，產(chǎn)品純度達(dá)到96%以上，有利于經(jīng)濟(jì)效益提高。本方法減少廢水排放量，有利于環(huán)保處理。本方法采用溶媒腐蝕性小、毒性小，有利于設(shè)備維護(hù)，有利于職業(yè)健康。
【專利說明】
一種那西肽的提取方法
技術(shù)領(lǐng)域
[0001] 本發(fā)明屬于抗生素提取技術(shù)領(lǐng)域，特別是涉及一種那西肽粗品的制備方法。
【背景技術(shù)】
[0002] 那西肽(Nosiheptide)是由活躍鏈霉菌（Streptomy-ces actuosus)產(chǎn)生的一種含 硫多肽類抗生素，是次級代謝產(chǎn)物，屬硫鏈絲菌素(Thiostrepton)類。因它能明顯的促進(jìn)畜 禽生長、改善飼料的利用率，同時用量低，在機(jī)體內(nèi)無殘留，對環(huán)境影響小，無交叉耐藥性， 而被稱為環(huán)保型飼料添加劑。
[0003] 那西肽是一種酯溶性抗生素，主要存在菌體細(xì)胞內(nèi)，僅有少量分泌到細(xì)胞外。
[0004] 那西肽常溫下呈結(jié)晶性粉狀末，顏色為淡黃色至淡褐色，可溶于氯仿、吡啶、二甲 基甲酰胺，微溶于甲醇、乙醇、乙酸乙酯和苯，對水和石油醚表現(xiàn)為不溶，其熔點為310~320 °C，溶解時伴隨分解。
[0005] 對于那西肽粗品的制備，現(xiàn)有技術(shù)中公開的報道有： 1、乙醇浸提法，該方法采用首先將那西肽發(fā)酵液離心分離菌絲體，然后用乙醇浸提，正 丁醇反萃，正丁醇萃取液濃縮得到那西肽粗品。該工藝中，正丁醇萃取液進(jìn)行濃縮過程，需 較高溫度，易造成那西肽高溫分解，影響那西肽提取產(chǎn)量和質(zhì)量。
[0006] 2、二氯甲烷浸提法，該方法采用首先將那西肽發(fā)酵液離心分離菌絲體，用二氯甲 烷反復(fù)3次浸提，得到的浸提液進(jìn)行減壓濃縮得到那西肽粗品的工藝。該工藝中，浸提過程 繁瑣，二氯甲烷易腐蝕設(shè)備，高溫下易分解，溶媒損耗較大。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0007] 本發(fā)明的目的在于克服上述現(xiàn)有技術(shù)的缺陷，提供一種有效提高那西肽收率及產(chǎn) 品質(zhì)量，工藝簡單，溶媒腐蝕小、損耗少，同時可降低環(huán)境污染的那西肽的提取方法。
[0008] 為實現(xiàn)上述目的所采取的技術(shù)方案為： 一種那西肽的提取方法，其特征在于其工藝步驟為:首先將那西肽菌絲粉用復(fù)合溶媒 浸提，離心分離，所得浸提液經(jīng)大孔樹脂吸附，酸水解析，鹽水沉淀后洗滌、減壓干燥即可得 到那西肽成品； 所述復(fù)合溶媒組成為:二甲基甲酰胺：乙醇:水=2.5~3.5:4.5~5.5:1.5~2.5，以體積 比計。
[0009] 所述那西肽菌絲粉是將那西肽發(fā)酵液經(jīng)噴霧干燥后所得。
[0010]所述復(fù)合溶媒的用量為那西肽菌絲粉質(zhì)量的2~3倍，浸提時間4~6hr，浸提溫度 25 ~35°C。
[0011] 所述大孔樹脂吸附時，控制進(jìn)料溫度20~25°C，進(jìn)料速度2.0~6.0BV/h。
[0012] 所述酸水解析過程為:在大孔樹脂吸附結(jié)束后，先用90~95%(w/w)乙醇頂洗至無 色，再僅限使用乙酸(50~55%，w/w)進(jìn)行洗脫，洗脫速度1.5~3.5BV/h，高效液相檢查那西 肽峰出現(xiàn)后，收集洗脫液，液相檢測那西肽濃度小于30ug/ml時，停止洗脫，合并洗脫液。
[0013] 所述鹽水沉淀過程為:將酸水解析所得的洗脫液，在攪拌狀態(tài)下，僅限加入碳酸鈉 溶液(35~40%，w/w)，攬摔2 · 0~2 · 5hr，靜置6~8 hr。
[0014] 所述碳酸鈉的用量為洗脫液體積的3~5倍。
[0015] 所述攪拌轉(zhuǎn)速60~80轉(zhuǎn)/min。
[0016] 所述洗滌是指將那西肽沉淀液母液抽干后，得到那西肽濕品，按濕品體積，加入1 ~1.5倍體積丙酮，使丙酮浸透那西肽沉淀，將那西肽沉淀翻洗若干遍后，抽濾得到那西肽 濕品，經(jīng)減壓干燥，得到那西肽成品。
[0017] 本發(fā)明的技術(shù)優(yōu)勢體現(xiàn)在： 1本發(fā)明提供了一種利用復(fù)合溶媒浸提，大孔樹脂脫色純化提取那西肽的工藝，該方 法可提尚提取收率6%以上，廣品純度達(dá)到96%以上。
[0018] 2本發(fā)明用鹽水沉淀那西肽洗脫液，避免高溫濃縮造成那西肽的降解，產(chǎn)品質(zhì)量 好、產(chǎn)量高。
[0019] 3本發(fā)明操作流程簡捷，可操作性強(qiáng)。
[0020] 4本發(fā)明廢水量少，減輕環(huán)保處理強(qiáng)度。
[0021] 5本發(fā)明采用溶媒腐蝕性小、毒性小，有利于設(shè)備維護(hù)，有利于職業(yè)健康。
[0022]具體實施方法 下面用實例予以說明本發(fā)明，應(yīng)該理解的是，實例是用于說明本發(fā)明而不是對本發(fā)明 的限制。本發(fā)明的范圍與核心內(nèi)容依據(jù)權(quán)利要求書加以確定。
[0023] 下述實施例中的那西肽發(fā)酵液來源:依據(jù)以下工藝流程得到： 冷凍管 ............................................斜面孢子 .........................................絶.種子液 .........................................修'發(fā)酵 液。
[0024] 采用二級發(fā)酵模式生產(chǎn)那西肽，其生產(chǎn)菌種為活躍鏈霉菌，培養(yǎng)基中的碳源主要 是淀粉和葡萄糖，氮源是豆餅粉、玉米漿、酵母膏，經(jīng)240h的發(fā)酵培養(yǎng)，其效價一般在 1500ug/ml 左右。
[0025] 準(zhǔn)備那西肽發(fā)酵液500L(效價1200u/ml、菌絲濃度38%，發(fā)酵十億0.6X109U)，進(jìn)行 噴霧干燥，進(jìn)風(fēng)溫度140±5°C，出風(fēng)溫度55±2°C，得到那西肽菌絲粉207kg(水份8.2%)，均 分成5份，每份41.4 kg(水份8.2%，總億0.12 X 109u)，備用。
[0026] 實施例1 取那西肽菌絲粉41.4 kg(堆密度0.6t/m3，總億0.12 X 109u)，用138L復(fù)合溶媒(二甲基 甲酰胺(V):乙醇(V):水(V)=2.5:4.5:1.5)浸提，浸提時間4hr，浸提溫度25°C，離心分離，得 到浸提液 137 · 6L(效價865 u/ml，0 · 119 X 109u)，收率99 · 21%。
[0027] 將以上浸提液，進(jìn)大孔樹脂LSA-700吸附脫色，進(jìn)料溫度20°C，進(jìn)料速度2 . OBV/h， 至料液進(jìn)完。
[0028] 料液進(jìn)完后，先用90%(w/w)乙醇頂洗至無色，再用50%(w/w)乙酸進(jìn)行洗脫，洗脫速 度以1.5BV/h進(jìn)行，高效液相檢查那西肽峰出現(xiàn)后，收集洗脫液，液相檢測那西肽濃度小于 30ug/ml時，停止洗脫，得到洗脫液206L(效價560 u/ml，0.115 X 109u)，收率96.64%。
[0029] 洗脫液在攪拌下加入35%(w/w)碳酸鈉溶液，加量618L，攪拌2. Ohr，攪拌轉(zhuǎn)速60轉(zhuǎn)/ min，靜置6 hr，析出那西肽沉淀，抽濾，加入0.6L丙酮，使溶媒浸透那西肽沉淀，將那西肽沉 淀翻洗若干遍后，抽濾得到那西肽濕品，經(jīng)減壓干燥，得到那西肽成品162g，產(chǎn)品純度 96 · 61%，收率96 · 59%。提煉收率92 · 59%。
[0030] 實施例2 取那西肽菌絲粉41.4 kg(堆密度0.6t/m3，總億0.12 X 109u)，用172.5L復(fù)合溶媒(二甲 基甲酰胺(V):乙醇(V):水(V)=3:5:2)浸提，浸提時間4.5hr，浸提溫度30°C，離心分離，得到 浸提液 170 · 8L(效價690 u/ml，0 · 119 X 109u)，收率98 · 20%。
[0031] 將以上浸提液，進(jìn)大孔樹脂LSA-700吸附脫色，進(jìn)料溫度21°C，進(jìn)料速度3 . OBV/h， 至料液進(jìn)完。
[0032] 料液進(jìn)完后，先用92%(w/w)乙醇頂洗至無色，再用52%(w/w)乙酸進(jìn)行洗脫，洗脫速 度以2.OBV/h進(jìn)行，高效液相檢查那西肽峰出現(xiàn)后，收集洗脫液，液相檢測那西肽濃度小于 30ug/ml時，停止洗脫，得到洗脫液256L(效價450u/ml，0.115 X 109u)，收率97.75%。
[0033] 洗脫液在攪拌下加入36%(w/w)碳酸鈉溶液，加量896L，攪拌2.2hr，攪拌轉(zhuǎn)速65轉(zhuǎn)/ min，靜置6.5 hr，析出那西肽沉淀，抽濾，加入0.72L丙酮，使溶媒浸透那西肽沉淀，將那西 肽沉淀翻洗若干遍后，抽濾得到那西肽濕品，經(jīng)減壓干燥，得到那西肽成品164g，產(chǎn)品純度 96 · 56%，收率96 · 56%。提煉收率92 · 68%。
[0034] 實施例3 取那西肽菌絲粉41.4 kg(堆密度0.6t/m3，總億0.12 X 109u)，用207L復(fù)合溶媒(二甲基 甲酰胺(V):乙醇(V):水(￥)=3.5:5.5:2.5)浸提，浸提時間51^，浸提溫度35°(：，離心分離，得 到浸提液205L(效價580 u/ml，0 · 119 X 109u)，收率99 · 29%。
[0035] 將以上浸提液，進(jìn)大孔樹脂LSA-700吸附脫色，進(jìn)料溫度22°C，進(jìn)料速度4. OBV/h， 至料液進(jìn)完。
[0036] 料液進(jìn)完后，先用93%(w/w)乙醇頂洗至無色，再用53%(w/w)乙酸進(jìn)行洗脫，洗脫速 度以2.5BV/h進(jìn)行，高效液相檢查那西肽峰出現(xiàn)后，收集洗脫液，液相檢測那西肽濃度小于 30ug/ml時，停止洗脫，得到洗脫液307L(效價375u/ml，0.115 X 109u)，收率96.82%。
[0037] 洗脫液在攪拌下加入37%(w/w)碳酸鈉溶液，加量1228L，攪拌2.3hr，攪拌轉(zhuǎn)速70 轉(zhuǎn)/min，靜置7 hr，析出那西肽沉淀，抽濾，加入0.78L丙酮，使溶媒浸透那西肽沉淀，將那西 肽沉淀翻洗若干遍后，抽濾得到那西肽濕品，經(jīng)減壓干燥，得到那西肽成品165g，產(chǎn)品純度 96 · 67%，收率 96 · 67%。提煉收率 92 · 93%。
[0038] 實施例4 取那西肽菌絲粉41.4 kg(堆密度0.6t/m3，總億0.12 X 109u)，用172.5L復(fù)合溶媒(二甲 基甲酰胺(V):乙醇(V):水(V)=3:5:2)浸提，浸提時間5.5hr，浸提溫度30°C，離心分離，得到 浸提液 137 · 6L(效價867 u/ml，0 · 119 X 109u)，收率99 · 49%。
[0039] 將以上浸提液，進(jìn)大孔樹脂LSA-700吸附脫色，進(jìn)料溫度24°C，進(jìn)料速度5 . OBV/h， 至料液進(jìn)完。
[0040] 料液進(jìn)完后，先用94%(w/w)乙醇頂洗至無色，再用54%(w/w)乙酸進(jìn)行洗脫，洗脫速 度以3.OBV/h進(jìn)行，高效液相檢查那西肽峰出現(xiàn)后，收集洗脫液，液相檢測那西肽濃度小于 30ug/ml時，停止洗脫，得到洗脫液206.2L(效價560 u/ml，0.115 X 109u)，收率96.67%。
[00411 洗脫液在攪拌下加入39%(w/w)碳酸鈉溶液，加量928L，攪拌2.4hr，攪拌轉(zhuǎn)速75轉(zhuǎn)/ min，靜置7.5hr，析出那西肽沉淀，抽濾，加入0.84L丙酮，使溶媒浸透那西肽沉淀，將那西肽 沉淀翻洗若干遍后，抽濾得到那西肽濕品，經(jīng)減壓干燥，得到那西肽成品166g，產(chǎn)品純度 96.89%，收率96.76%。提煉收率93.06%。
[0042] 實施例5 取那西肽菌絲粉41.4 kg(堆密度0.6t/m3，總億0.12 X 109u)，用173L復(fù)合溶媒(二甲基 甲酰胺(V):乙醇(V):水(V)=3:5:2)浸提，浸提時間6hr，浸提溫度30°C，離心分離，得到浸提 液 172L(效價695 u/ml，0 · 119 X 109u)，收率99 · 62%。
[0043] 將以上浸提液，進(jìn)大孔樹脂LSA-700吸附脫色，進(jìn)料溫度25°C，進(jìn)料速度6BV/h，至 料液進(jìn)完。
[0044] 料液進(jìn)完后，先用95%(w/w)乙醇頂洗至無色，再用55%(w/w)乙酸進(jìn)行洗脫，洗脫速 度以3.5BV/h進(jìn)行，高效液相檢查那西肽峰出現(xiàn)后，收集洗脫液，液相檢測那西肽濃度小于 30ug/ml時，停止洗脫，得到洗脫液260L(效價445 u/ml，0.115 X 109u)，收率96.78%。
[0045] 洗脫液在攪拌下加入40%(w/w)碳酸鈉溶液，加量1300L，攪拌2.5hr，攪拌轉(zhuǎn)速80 轉(zhuǎn)/min，靜置8 hr，析出那西肽沉淀，抽濾，加入0.9L丙酮，使溶媒浸透那西肽沉淀，將那西 肽沉淀翻洗若干遍后，抽濾得到那西肽濕品，經(jīng)減壓干燥，得到那西肽成品167g，產(chǎn)品純度 96.76%，收率96.61%。提煉收率93.14%。
【主權(quán)項】
1. 一種那西肽的提取方法，其特征在于其工藝步驟為：首先將那西肽菌絲粉用復(fù)合溶 媒浸提，離心分離，所得浸提液經(jīng)大孔樹脂吸附，酸水解析，鹽水沉淀后洗滌、減壓干燥即可 得到那西肽成品； 所述復(fù)合溶媒組成為:二甲基甲酰胺：乙醇:水=2.5~3.5:4.5~5.5:1.5~2.5，以體積 比計。2. 按照權(quán)利要求1所述的那西肽的提取方法，其特征在于所述那西肽菌絲粉是將那西 肽發(fā)酵液經(jīng)噴霧干燥后所得。3. 按照權(quán)利要求1所述的那西肽的提取方法，其特征在于所述復(fù)合溶媒的用量為那西 肽菌絲粉質(zhì)量的2~3倍，浸提時間4~6hr，浸提溫度25~35°C。4. 按照權(quán)利要求1所述的那西肽的提取方法，其特征在于所述大孔樹脂吸附時，控制進(jìn) 料溫度20~25°C，進(jìn)料速度2 · 0~6 · OBV/h。5. 按照權(quán)利要求1所述的那西肽的提取方法，其特征在于所述酸水解析過程為:在大孔 樹脂吸附結(jié)束后，先用90~95%乙醇頂洗至無色，再用乙酸50~55%進(jìn)行洗脫，洗脫速度1.5 ~3.5BV/h，高效液相檢查那西肽峰出現(xiàn)后，收集洗脫液，液相檢測那西肽濃度小于30ug/ml 時，停止洗脫，合并洗脫液。6. 按照權(quán)利要求1所述的那西肽的提取方法，其特征在于所述鹽水沉淀過程為:將酸水 解析所得的洗脫液，在攪拌狀態(tài)下，加入35~40碳酸鈉溶液，攪拌2.0~2.5hr，靜置6~8 hr〇7. 按照權(quán)利要求6所述的那西肽的提取方法，其特征在于所述碳酸鈉的用量為洗脫液 體積的3~5倍。8. 按照權(quán)利要求1所述的那西肽的提取方法，其特征在于所述攪拌轉(zhuǎn)速60~80轉(zhuǎn)/min 〇9. 按照權(quán)利要求1所述的那西肽的提取方法，其特征在于所述洗滌是指將那西肽沉淀 液母液抽干后，得到那西肽濕品，按濕品體積，加入1~1.5倍體積丙酮，使丙酮浸透那西肽 沉淀，將那西肽沉淀翻洗若干遍后，抽濾得到那西肽濕品，經(jīng)減壓干燥，得到那西肽成品。
【文檔編號】C07K5/078GK106083995SQ201610728229
【公開日】2016年11月9日
【申請日】2016年8月26日
【發(fā)明人】裴立忠, 王勇平
【申請人】寧夏泰益欣生物科技有限公司