¹⁸F點(diǎn)擊標(biāo)記轉(zhuǎn)鐵蛋白受體靶向多肽T7及其制備方法和應(yīng)用
【專利摘要】本發(fā)明公開了18F點(diǎn)擊標(biāo)記轉(zhuǎn)鐵蛋白受體靶向多肽T7及其制備方法和應(yīng)用。本發(fā)明改良了點(diǎn)擊化學(xué)的合成步驟，減少輔基TsOTEGay的投量，同時(shí)適當(dāng)增加T7多肽的投量，把輔基與多肽的投料比調(diào)整為1:1?2；反應(yīng)合成18F?TEGay后不經(jīng)過HPLC純化，直接加入多肽前體進(jìn)行點(diǎn)擊反應(yīng)，采用“一鍋兩步”的方法合成18F?TEG?T7，最后再進(jìn)行HPLC的純化；減少了一次純化流程，整個(gè)合成純化時(shí)間大大減少，可以控制在120min內(nèi)完成，放化產(chǎn)率約28.26±7.43%（n=3）。經(jīng)過優(yōu)化的“兩步一鍋”點(diǎn)擊反應(yīng)可用于18F標(biāo)記多肽的研究中，制備新型的腫瘤靶向探針。
【專利說明】
18F點(diǎn)擊標(biāo)記轉(zhuǎn)鐵蛋白受體靶向多肽T7及其制備方法和應(yīng)用
技術(shù)領(lǐng)域
[0001] 本發(fā)明具體涉及18F點(diǎn)擊標(biāo)記轉(zhuǎn)鐵蛋白受體靶向多肽Τ7及其制備方法和應(yīng)用。
【背景技術(shù)】
[0002] 膠質(zhì)瘤是惡性度最高的腦腫瘤之一，起源于神經(jīng)膠質(zhì)細(xì)胞，是最常見原發(fā)性中樞 神經(jīng)系統(tǒng)的腫瘤，其發(fā)病率約占所有腦腫瘤的42%。膠質(zhì)瘤的高度增殖性、侵潤(rùn)性及侵略性 使它的治療仍相當(dāng)困難。膠質(zhì)瘤及時(shí)早期的準(zhǔn)確診斷是治療的關(guān)鍵。
[0003] 轉(zhuǎn)鐵蛋白受體(Transferrin Receptor，TfR)在腫瘤細(xì)胞的表面高度表達(dá)，特別是 膠質(zhì)瘤細(xì)胞以及腦毛細(xì)血管內(nèi)皮細(xì)胞。T7多肽（序列為HAIYPRH，Hi S-Ala-Ile-Tyr-Pr〇-Arg-His)是運(yùn)用噬菌體展示技術(shù)從表達(dá)人轉(zhuǎn)鐵蛋白受體TfR的細(xì)胞中篩選出來的靶向多 肽，具有特異性靶向TfR的作用。在體外細(xì)胞實(shí)驗(yàn)中，T7多肽對(duì)TfR具有高度親和力，Kd值可 達(dá)約10nM。因此對(duì)于高表達(dá)TfR的腫瘤，放射性核素標(biāo)記的T7多肽可成為潛在的腫瘤靶向分 子顯像探針。國(guó)內(nèi)學(xué)者用T7肽及TAT細(xì)胞穿膜肽共同修飾納米脂質(zhì)體，在細(xì)胞攝取對(duì)照實(shí)驗(yàn) 中，T7肽對(duì)bEnd. 3小鼠腦微血管內(nèi)皮細(xì)胞及C6膠質(zhì)瘤細(xì)胞均顯示出良好的靶向性，該特性 使T7肽更加有利于通過血腦屏障(Blood Brain Barrier,ΒΒΒ)而到達(dá)膠質(zhì)瘤細(xì)胞。但文獻(xiàn) 報(bào)導(dǎo)中，尚未有學(xué)者進(jìn)行通過影像學(xué)手段評(píng)價(jià)Τ7肽腫瘤靶向效果的實(shí)驗(yàn)研究。
[0004] 相對(duì)于傳統(tǒng)影像學(xué)方法如MRI、CT提供的解剖信息，正電子發(fā)射斷層成像 (positron emission tomography,PET)更加偏向于在分子水平上診斷疾病。正電子發(fā)射斷 層顯像(PET)具有高分辨率和高靈敏度，在神經(jīng)系統(tǒng)、腫瘤顯像等領(lǐng)域中具有廣闊的發(fā)展前 景。 18F是使用最廣泛的放射性核素，這取決于其優(yōu)良的核素性質(zhì)：半衰期適中（T1/2 = 109.8min);最大正電子能量較低(0.64MeV)而對(duì)人體正常組織的輻射損傷較??；正電子線 性范圍短(2.3mm )，分辨率高。
[0005] 18F-FDG為目前應(yīng)用最廣泛的PET顯像劑，但其在膠質(zhì)瘤的診斷中假陽性、假陰性均 較高。有研究顯示， 18F-FDG PET在神經(jīng)膠質(zhì)瘤診斷中的靈敏度、特異性及準(zhǔn)確率分別僅為 50.00%、75.00%及60.00% 1ET的發(fā)展取決于新顯像劑的合成探索。
[0006] 目前尚未有利用18F-標(biāo)記靶向TfR的T7肽的技術(shù)，一般情況下多肽分子不能直接標(biāo) 記18F，因?yàn)?18F標(biāo)記的反應(yīng)條件一般比較嚴(yán)苛，高溫、堿性環(huán)境等條件容易導(dǎo)致多肽分子結(jié) 構(gòu)發(fā)生變化而失活，此外，多肽分子上含有多種活潑的化學(xué)基團(tuán)，如氨基、羧基、巰基等，與 18F競(jìng)爭(zhēng)反應(yīng)，從而導(dǎo)致反應(yīng)失敗。在眾多標(biāo)記方法中，各有優(yōu)劣，其中尤以"點(diǎn)擊化學(xué)"方法 發(fā)展最為迅速，其概念由諾貝爾化學(xué)獎(jiǎng)獲得者Sharpless在2001年提出。根據(jù)文獻(xiàn)報(bào)導(dǎo)的方 法，需經(jīng)過兩次HPLC純化后才能完成多肽類放射性探針的制備，其放射性回收率不高，且花 費(fèi)時(shí)間較長(zhǎng)，不利于自動(dòng)化合成。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0007] 本發(fā)明的目的在于提供一種正電子標(biāo)記靶向腫瘤的肽探針及其制備方法和應(yīng)用。
[0008] 本發(fā)明所采取的技術(shù)方案是：
[0009] -種正電子標(biāo)記靶向腫瘤的肽探針，其結(jié)構(gòu)式為：
[0010]
[0011]其中R為靶向肽。
[0012]優(yōu)選的，R為轉(zhuǎn)鐵蛋白受體靶向多肽T7,其氨基酸序列為His-Ala-Ile-Tyr-Pro-Arg-His，所得多肽探針 18F-TEG-T7的結(jié)構(gòu)式為：
[0013]
[0014] -種靶向肽探針的制備方法，包括下列步驟：
[0015] 1)18F陰離子與含炔基的對(duì)甲苯磺酸酯TsOTEGay發(fā)生親核取代反應(yīng)合成標(biāo)記中間 體 18F_TEGay;
[0016] 2)中間體18F-TEGay不經(jīng)過純化處理直接與與修飾有疊氮基的靶向肽反應(yīng)生成 18f-teg-靶向肽探針。
[0017] 其中，含炔基的對(duì)甲苯磺酸酯(TsOTEGay)的結(jié)構(gòu)式為：
[0018]
[0019 ] 標(biāo)記中間體(18F-TEGay)的結(jié)構(gòu)式為：
[0020]
[0021]優(yōu)選的，步驟1)所加入反應(yīng)物的比例為每370~lllOMBq的18F陰離子中加入0.06~ 0 · 08mg含炔基的對(duì)甲苯磺酸酯TsOTEGay。
[0022]優(yōu)選的，步驟1)的反應(yīng)溶液為無水乙腈，每0.06~0.08mg含炔基的對(duì)甲苯磺酸酯 TsOTEGay溶于280~320yL的無水乙腈后加入到18F陰離子中進(jìn)行反應(yīng)。
[0023]因?yàn)?8F_TEGay是放射性小分子，其化學(xué)量是無法確定的，只能用放射性活度MBq來 表示;每0.06~0.08mg含炔基的對(duì)甲苯磺酸酯TsOTEGay參加反應(yīng)時(shí)，所對(duì)應(yīng)的反應(yīng)溶液無 水乙腈為280~320yL。
[0024] 如果加入的無水乙腈太多或者太少，都將影響反應(yīng)濃度，最終影響點(diǎn)擊反應(yīng)的放 化產(chǎn)率。
[0025] 優(yōu)選的，步驟2)在中間體18F_TEGay與修飾有疊氮基的靶向肽反應(yīng)前，還需對(duì)反應(yīng) 溶液中的無水乙腈進(jìn)行蒸發(fā)濃縮，使乙腈濃度不低于〇.〇〇〇7mmol/mL。通過濃縮，提高反應(yīng) 濃度，從而提高放化產(chǎn)率。
[0026]優(yōu)選的，所加入反應(yīng)物中，控制TsOTEGay的炔基與靶向肽的疊氮基的物質(zhì)的量之 比為1:(1~2)。
[0027]優(yōu)選的，所加入反應(yīng)物中，控制TsOTEGay的炔基與靶向肽的疊氮基的物質(zhì)的量之 比為1:(1~1.5)。
[0028] 優(yōu)選的，所加入反應(yīng)物中，控制TsOTEGay的炔基與靶向肽的疊氮基的物質(zhì)的量之 比為1:1。
[0029] 因?yàn)?8F-TEGay炔基會(huì)與未完全反應(yīng)的TsOTEGay炔基競(jìng)爭(zhēng)靶向肽疊氮基的反應(yīng)，所 以把將第一步參加反應(yīng)的TsOTEGay的炔基與第二步加入的靶向肽的疊氮基的物質(zhì)的量之 比控制在上述比例下，在這種狀態(tài)下，靶向肽疊氮基完全足夠與兩種炔基都反應(yīng)，而不會(huì)產(chǎn) 生競(jìng)爭(zhēng)作用。此外也不會(huì)浪費(fèi)反應(yīng)產(chǎn)物。
[0030] 優(yōu)選的，靶向肽為轉(zhuǎn)鐵蛋白受體靶向多肽T7,其氨基酸序列為His-Ala-Ile-Tyr-Pr〇-Arg-His〇
[0031] 上述所述方法在制備PET/CT分子探針中的應(yīng)用。
[0032]多肽探針18F-TEG-T7在轉(zhuǎn)鐵蛋白受體靶向的腫瘤PET/CT成像中的應(yīng)用。
[0033]多肽探針18F-TEG-T7在制備轉(zhuǎn)鐵蛋白受體介導(dǎo)的腫瘤治療藥物中的應(yīng)用。
[0034]本發(fā)明的有益效果是：
[0035]本發(fā)明改良了點(diǎn)擊化學(xué)的合成步驟，反應(yīng)合成18F_TEGay后不經(jīng)過HPLC純化，直接 加入多肽前體進(jìn)行點(diǎn)擊反應(yīng)，采用"一鍋兩步"的方法合成18F-TEG-T7，最后再進(jìn)行HPLC的純 化。本發(fā)明方法將第一步反應(yīng)中TsOTEGay(炔基）的投量縮小約為原來的1/40,增加 T7多肽 的投量，達(dá)到炔基：疊氮=1: (1~2)的水平；同時(shí)將反應(yīng)溶液由lmL減少到280~320yL以相 對(duì)提高反應(yīng)濃度。最后在120min內(nèi)完成了放射性藥物的標(biāo)記過程，第一步 18F-TEGay的放化 產(chǎn)率可達(dá)66.34±6.35%(n = 3)，第二步的放化產(chǎn)率約28.26 ± 7.43 % (η = 3)(均為衰減校 正），回收的放射性活度顯著提高并可用于進(jìn)一步的生物學(xué)實(shí)驗(yàn)中。
[0036]初步的酯水分配系數(shù)實(shí)驗(yàn)及正常小鼠體內(nèi)分布實(shí)驗(yàn)顯示，本發(fā)明制備的18F-TEG-T7為親水性多肽探針，在體內(nèi)主要通過腎臟排泄，肝臟及腸道的攝取均不高，并且在小鼠體 內(nèi)代謝過程中不會(huì)產(chǎn)生脫氟的現(xiàn)象。因此，經(jīng)過優(yōu)化的"兩步一鍋"點(diǎn)擊反應(yīng)可用于18F標(biāo)記 多肽的研究中，制備新型的腫瘤靶向探針。
[0037] 利用本發(fā)明優(yōu)化的"兩步一鍋"點(diǎn)擊反應(yīng)可用于18F標(biāo)記多肽的研究中，制備新型的 腫瘤靶向探針。
[0038] 本發(fā)明方法減少了一次純化流程，整個(gè)合成純化時(shí)間大大減少，所獲產(chǎn)物放化產(chǎn) 率高，可用于進(jìn)一步的生物學(xué)實(shí)驗(yàn)中。
【附圖說明】
[0039] 圖 1 為TEGay、TsOTEGay、和19F-TEG_T7 的核磁氫譜圖；
[0040] 圖2為多肽探針18F-TEG-T7與標(biāo)準(zhǔn)品19F-TEG-T7的HPLC對(duì)照結(jié)果；
[00411圖3為18F-TEG-T7的正常小鼠體內(nèi)分布實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)。
【具體實(shí)施方式】 [0042]試劑與材料：
[0043] 二縮三乙二醇(TEG)(純度大于99%)、3_溴丙炔，質(zhì)量分?jǐn)?shù)大于80%、氫化鈉(NaH) (60%，分散在石蠟油中）、對(duì)甲苯磺酰氯（PTSC)(純度大于99%)、二乙氨基三氟化硫 (DAST)，百靈威科技有限公司；四氫咲喃(Tetrahydrofuran，THF)、氫氧化鉀、無水碳酸鉀， 天津市大茂化學(xué)試劑廠;無水二氯甲烷、二氯甲烷、無水乙醇，廣州化學(xué)試劑廠;滅菌注射用 水，四川科倫藥業(yè)股份有限公司；冠醚（K222，Kryptof ix 222)、無水乙腈、美國(guó)Sigma-aldrich公司產(chǎn)品；18F離子，廣州原子高科有限公司；五水硫酸銅CuS〇4.5H2〇;抗壞血酸鈉 (ASC) ;T7多肽（CHAIYPRH)(純度大于95%)，杭州中肽有限公司（Chinese Peptide Company)〇
[0044] Sep-Pak QMA柱、Sep-Pak C18柱，美國(guó)Waters公司；微量反應(yīng)瓶（5mL，V底），北京欣 維爾玻璃儀器有限公司;玻璃點(diǎn)樣毛細(xì)管(〇. 3 X 100mm)，華西醫(yī)科大學(xué)儀器廠;柱層層析硅 膠(粗孔，200~300目），青島海洋有限公司；無菌注射器（11^、511^、1〇1^)，上?？档氯R有限 公司。
[0045] 儀器：
[0046]電子天平，上海婉源電子科技有限公司；RE-5299旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀，鞏義市予華儀器有 限責(zé)任公司；ZF-6型三用紫外線分析儀，上海嘉鵬科技有限公司;DF-101S集熱式恒溫加熱 磁力攪拌器，鞏義市予華儀器有限責(zé)任公司；86-2型磁力加熱攪拌器，嘉興市欣欣儀器設(shè)備 有限公司；高壓液相色譜儀(High Performance Liquid Chromatography，HPLC)，日本島津 公司。
[0047] HPLC分析條件：流動(dòng)相:A水相（含0.1% (體積分?jǐn)?shù)，下同）三氟乙酸乙腈（含 0.1 %三氟乙酸），紫外檢測(cè)波長(zhǎng)為220nm;C18柱5μL? 4.6 X 250mm;流速：lmL/min。分析梯度： 0-15-16-20min，15%-30% -15% -15%Buffer B。
[0048] 下面結(jié)合具體實(shí)施例對(duì)本發(fā)明作進(jìn)一步的說明，但并不局限于此。
[0049] 實(shí)施例1 18F-TEG-T7的化學(xué)合成
[0050] 1)標(biāo)記前體TsOTEGay的合成
[0051 ]在0 °C 的狀態(tài)下，把60 %NaH( 2g，0 · 050mol)緩慢加入TEG(11 · 6g，0 · 077mol)的THF (60mL)溶液中攪拌，待無氣泡冒出后，加入3-溴丙炔(2. lmL，0.039mo 1)，用TLC跟蹤反應(yīng)(石 油醚：乙酸乙酯= 1:2)。溶液由無色變?yōu)樽厣?，反?yīng)完成，將反應(yīng)液離心，濃縮溶劑，用石油 醚:乙酸乙酯=1:2~1:4進(jìn)行柱層析純化。得到黃色液體產(chǎn)物(TEGay) 3.58g，產(chǎn)率為49 %。
[0052] 將 TEGay (2.00g，0.01 Omo 1)對(duì)羥基苯甲酰氯(0.012mo 1)溶于50mL 無水 CH2C12，冷卻 至0°C。分10次加入2.988(0.053!11〇1)1(0!1固體，0°(：攪拌111。室溫下再攪拌511(孔(：跟蹤反應(yīng)， 石油醚：乙酸乙酯= 2:1)。反應(yīng)結(jié)束后用冷水萃取3次，濃縮有機(jī)層，用石油醚：乙酸乙酯= 2:1進(jìn)行柱層析純化，干燥后得到黃色液體產(chǎn)物為TsOTEGay。
[0053] 2)18F_TEGay 的合成
[0054] 18F離子由180(p，n)18F核反應(yīng)產(chǎn)生，然后吸附在預(yù)處理后的陰離子交換樹脂柱(QMA 柱）上，用K222/K2CO3溶液（0.5mL 24:lACN/water，7mg K222，1.5mg K2⑶3)將 18F(370~ 950MBq)洗脫進(jìn)一個(gè)5mL的V底微量反應(yīng)瓶中，與300yL無水乙腈在110°C共沸蒸干3次。加入 TsOTEGay溶液(0.07mg溶于300yL無水乙腈），110°C下密閉反應(yīng)15min，取20yL反應(yīng)原液稀釋 后，進(jìn)行HPLC標(biāo)記率的測(cè)定。 18F-TEGay的放化產(chǎn)率可達(dá)66.34±6.35% (n = 3)。在進(jìn)行點(diǎn)擊 反應(yīng)前，把300yL無水乙腈蒸發(fā)剩余約100yL，使無水乙腈在點(diǎn)擊反應(yīng)中的濃度也達(dá)到 0.00074mmol/mL的水平以上。
[0055] 3)18F_TEGay與T7多肽的點(diǎn)擊標(biāo)記
[0056] 將0.22ymol修飾有疊氮基的T7多肽溶于100yL H20中，在氮?dú)獗Ｗo(hù)下加入混合后 的催化體系（9·0μL?〇1 CuS〇4.5H20、66.90ymol ASC及 1·12μL?〇1 THPTA溶于lOOyL H20中），轉(zhuǎn) 移至18F-TEGay的微量反應(yīng)瓶中，密閉，50°C反應(yīng)15min。反應(yīng)結(jié)束后，用半制備Radio-HPLC檢 測(cè)放化產(chǎn)率，約28.26 ± 7.43% (η = 3)，并分離產(chǎn)物。將接收的HPLC流出液旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)干燥，溶 解于9%NaCl生理鹽水中，0.22μπι微孔濾膜過濾滅菌，用于進(jìn)一步的生物學(xué)實(shí)驗(yàn)。
[0057]本發(fā)明方法采用"一鍋兩步"的方法:18F_TEGay的合成結(jié)束后，不進(jìn)行純化處理，直 接在原反應(yīng)瓶中加入T7多肽，進(jìn)行點(diǎn)擊反應(yīng)，點(diǎn)擊合成產(chǎn)物18F-TEG-T7后再進(jìn)行HPLC純化。 進(jìn)行該方式的關(guān)鍵環(huán)節(jié)是，把第一步反應(yīng)中TsOTEGay (炔基）的投量縮小為原來的1/40,達(dá) 到炔基:疊氮=1:1的水平。為了保證第一步18F_TEGay的放化產(chǎn)率，同時(shí)把反應(yīng)溶液有l(wèi)mL減 少為300yL以相對(duì)提高反應(yīng)濃度。最后在120min內(nèi)完成了放射性藥物的標(biāo)記過程，第一步 18F-TEGay的放化產(chǎn)率可達(dá)66.34±6.35%(n = 3)，第二步的放化產(chǎn)率約28.26±7.43%(n = 3)(均為衰減校正），回收的放射性活度顯著提高并可用于進(jìn)一步的生物學(xué)實(shí)驗(yàn)中。
[0058] 實(shí)施例2標(biāo)準(zhǔn)品19F-TEG_T7的化學(xué)合成
[0059] H-TEGay (100mg，0.5mmo 1)溶于2.5mL無水二氯甲烷中，冷卻至0 °C。緩慢加入DAST (132yL，lmmol)，0°C反應(yīng)lh后，在常溫下繼續(xù)反應(yīng)5h。反應(yīng)結(jié)束后，用硅膠柱分離產(chǎn)物(洗脫 劑為乙酸乙酯:石油醚= 1:6~1:3)，干燥溶劑后得到淺黃色油狀產(chǎn)物。
[0060] 收集產(chǎn)物經(jīng)核磁氫譜表征為19F-TEGay，用于進(jìn)行第二步點(diǎn)擊反應(yīng)合成標(biāo)準(zhǔn)品％-TEG-TTc^F-TEGayO.Sdmg，1 ·79μπιο1)溶于400yL乙腈中，T7多肽（2mg，1 ·79μπιο1)、 CuS〇4 · 5Η20 (2 · 2mg，8 · 9μπιο 1)及ASC(14 · 2mg，7 Ιμπιο 1)溶于800yL Η20中，混合乙腈與水溶液， 密封，60°C反應(yīng)30min。反應(yīng)結(jié)束后，用HPLC進(jìn)行檢測(cè)及分離，分離后進(jìn)行LC-MS表征。
[0061 ] 上述合成路線如下：
[0062]
[0063] 上述合成產(chǎn)物均經(jīng)過核磁氫譜表征，結(jié)果見圖1。
[0064] 圖1中顯示：三甘醇炔（TEGay)經(jīng)過核磁氫譜表征結(jié)構(gòu)，1H匪R(300MHz，CDC13W 4.13(d,J = 2.5Hz,2H) ,3.61-58(m,10H) ,3.52-3.50(m,2H) ,2.75(br,lH) ,2.38(t,J = 2.5他，1!1)。炔甲苯磺酸鹽〇8(1^637)，1!1匪1?(40冊(cè)!^，〇0(：13)57.75((1，了 = 8.4!^，2!1)， 7.30(d，J=8.4Hz，2H)，4.14-4.06(m，4H)，3.65-3.58(m，6H),3.55-3.52(m，4H)，2.38(s， 3H),2.37(t ,J = 2.5Hz,lH)〇
[0065] 19F-TEGay經(jīng)核磁氫譜表征見圖 1，氟三甘醇炔(19F-TEGay)，1H NMR(300MHz，CDC13) 54.67-4.49(m,2H),4.22(d ,J = 2.5Hz,2H),3.83-3.69(m,10H),2.44(t ,J = 2.5Hz,1H)〇19F-TEGay與T7多肽點(diǎn)擊反應(yīng)，經(jīng)HPLC純化后進(jìn)行LC-MS表征，MS: 1311.8 (M+H)。結(jié)果顯示，19F-TEG-T7的結(jié)構(gòu)正確，相對(duì)分子質(zhì)量為1310.5。
[0066] 對(duì)18F-TEG-T7和標(biāo)準(zhǔn)品19F-TEG-T7進(jìn)行HPLC分析，見圖2，結(jié)果顯示： 18F-TEG-T7的 放射性檢測(cè)峰保留時(shí)間為1 2.40miη，與標(biāo)準(zhǔn)品19F-TEG-T7的紫外檢測(cè)峰保留時(shí)間 (12 · 33min) -致。說明18F-TEG-T7的分子結(jié)構(gòu)正確。
[0067]實(shí)施例3 18F-TEG-T7的脂水分配系數(shù)實(shí)驗(yàn)
[0068]取l〇〇yL 18F-TEG-T7PBS制劑于 1.5mL離心管中（含有500yL正丁醇和400yL PBS)， 密封，室溫下充分禍旋2min后，高速離心3min( 10000r/min)，至兩相平衡。用移液槍從有機(jī) 相和水相各取樣l〇〇yL分置于兩支伽瑪計(jì)數(shù)管中，測(cè)定伽瑪計(jì)數(shù)。重復(fù)取樣測(cè)定3次。根據(jù)下 列公式計(jì)算得到平均lg D7.4值。
[0069] lg 〇7.4=4況/他）；其中:Ni，每毫升正辛醇的放射性計(jì)數(shù)率，min-1 · mL-SN2,每毫 升緩沖溶液PBS的放射性計(jì)數(shù)率，mirT1 · ml/1。
[0070] 經(jīng)過測(cè)量計(jì)算得出，18F-TEG-T7的脂水分配系數(shù)為-0.51 ±0.01，祀向多肽更加傾 向于親水性，可以初步推斷其在生物體內(nèi)主要通過泌尿系統(tǒng)排泄，而肝臟攝取則較低。
[0071] 實(shí)施例4 18F-TEG-T7的正常小鼠體內(nèi)分布實(shí)驗(yàn)
[0072] KM小鼠異氟烷氧氣吸入麻醉后，尾靜脈注射30yCi(50yL)放射性ros制劑60min后， 處死小白鼠，取出血液、心、肺、肝、脾、腎、胃、腸道、胰腺、皮毛、腦、肌肉、骨骼，置于伽瑪計(jì) 數(shù)管底部，進(jìn)行放射性計(jì)數(shù)檢測(cè)，最后稱量臟器重量。經(jīng)衰減校正后計(jì)算各組織的每克組織 的放射性攝取率（％ID/g)。
[0073] 18F-TEG-T7在正常小鼠體內(nèi)的生物分布結(jié)果示于圖3，由圖中可以看出， 18F-TEG-T7在正常小鼠體內(nèi)腎臟的攝取最高，60min時(shí)為4.61 % ID/g，而肝臟的攝取率為0.93% ID/ g，腎與肝臟的攝取比約為4.9:1，結(jié)果顯示多肽探針主要通過腎臟代謝。股骨的放射性攝取 率僅為〇. 33% ID/g，由此可推斷18F-TEG-T7在60min代謝時(shí)間內(nèi)未出現(xiàn)明顯的脫氟現(xiàn)象。
[0074] 對(duì)比例1
[0075] l)18F_TEGay 的合成
[0076] 18F離子由180(p，n)18F核反應(yīng)產(chǎn)生，然后吸附在預(yù)處理后的陰離子交換樹脂柱(QMA 柱）上，用K222/K2CO3溶液（0.5mL 24:lACN/water，7mg K222，1.5mg K2⑶3)將 18F(370~ 950MBq)洗脫進(jìn)一個(gè)5mL的V底微量反應(yīng)瓶中，與0.3mL無水乙腈在110°C共沸蒸干3次。加入 TsOTEGay溶液（2mg溶于500yL無水乙腈），110°C下密閉反應(yīng)15min。取少量產(chǎn)物進(jìn)行HPLC標(biāo) 記率的測(cè)定。然后經(jīng)過C18柱純化，純化后取少量產(chǎn)物進(jìn)行HPLC標(biāo)記率的測(cè)定。
[0077]實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)：第一步的放化產(chǎn)率可達(dá)到86.37 %，但經(jīng)過HPLC純化后，放射性的18F-TEGay僅能回收5%，標(biāo)記中間體的放射性活度損失超過95%以上，大部分吸附于C18柱和 HPLC管道上。若按此投量，經(jīng)過兩次HPLC純化后，最后的產(chǎn)物18F-TEG-T7將基本無法回收。 [0078] 2) 18F_TEGay與T7多肽的點(diǎn)擊標(biāo)記
[0079] 鑒于步驟1)中所獲得標(biāo)記中間體太少，且放射性活度低，所以無法進(jìn)行下一步點(diǎn) 擊化學(xué)的實(shí)驗(yàn)，從而無法得到符合標(biāo)準(zhǔn)的終產(chǎn)物 18F_TEGay。
[0080] 對(duì)比例2
[0081] l)18F_TEGay 的合成
[0082] 18F離子由180(p，n)18F核反應(yīng)產(chǎn)生，然后吸附在預(yù)處理后的陰離子交換樹脂柱(QMA 柱）上，用K222/K2CO3溶液（0.5mL 24:lACN/water，7mg K222，1.5mg K2⑶3)將 18F(370~ 950MBq)洗脫進(jìn)一個(gè)5mL的V底微量反應(yīng)瓶中，與0.3mL無水乙腈在110°C共沸蒸干3次。加入 TsOTEGay溶液(2mg溶于500yL無水乙腈），110°C下密閉反應(yīng)15min。HPLC檢測(cè)放化產(chǎn)率后，不 經(jīng)過純化，直接進(jìn)行第二步點(diǎn)擊反應(yīng)。
[0083] 2)18F_TEGay與T7多肽的點(diǎn)擊標(biāo)記
[0084]修飾有疊氮基的T7多肽的投量為0.223μπιο1，其他同實(shí)施例1的方法。
[0085] 因?yàn)榈谝徊街蠺sOTEGay的投量為5.8ymol，Ts0TEGay炔基與Τ7多肽的疊氮基兩者 投料比為26:1，若不經(jīng)過純化除去第一步反應(yīng)后剩余的TsOTEGay，則其會(huì)與18F-TEGay的炔 基競(jìng)爭(zhēng)T7多肽上的疊氮基的反應(yīng)，最終18F-TEG-T7產(chǎn)物的產(chǎn)率低于3.8%。
[0086]上述實(shí)施例為本發(fā)明較佳的實(shí)施方式，但本發(fā)明的實(shí)施方式并不受上述實(shí)施例的 限制，其他的任何未背離本發(fā)明的精神實(shí)質(zhì)與原理下所作的改變、修飾、替代、組合、簡(jiǎn)化， 均應(yīng)為等效的置換方式，都包含在本發(fā)明的保護(hù)范圍之內(nèi)。
【主權(quán)項(xiàng)】
1. 一種正電子標(biāo)記祀向腫瘤的膚探針，其結(jié)構(gòu)式為：其中R為祀向膚。2. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的膚探針，其特征在于:R為轉(zhuǎn)鐵蛋白受體祀向多膚T7，其氨基酸 序列為His-Ala-Ile-Tyr-Pro-Arg-His，所得多膚探針1SF-TEG-T7的結(jié)構(gòu)式為：3. -種祀向膚探針的制備方法，其特征在于，包括下列步驟： 1 )1中陰離子與含烘基的對(duì)甲苯橫酸醋rsOTEGa/發(fā)生親核取代反應(yīng)合成標(biāo)記中間體1中- TEGay； 2)中間體"F-TEGaj不經(jīng)過純化處理直接與修飾有疊氮基的祀向膚反應(yīng)生肋中-TEG-祀 向膚探針。4. 根據(jù)權(quán)利要求3所述的制備方法，其特征在于：步驟1)所加入反應(yīng)物的比例為每370 ~11 lOM^i的"F陰離子中加入0.06~0.08 mg含烘基的對(duì)甲苯橫酸醋rsOTEfej。5. 根據(jù)權(quán)利要求3所述的制備方法，其特征在于：步驟1)的反應(yīng)溶液為無水乙臘，每 0.06~0.08 mg含烘基的對(duì)甲苯橫酸醋7?饑Efej溶于280~32化L的無水乙臘后加入到1申陰 離子中進(jìn)行反應(yīng)。6. 根據(jù)權(quán)利要求3所述的制備方法，其特征在于:步驟2)在中間體"F-TEGay與修飾有疊 氮基的祀向膚反應(yīng)前，還需對(duì)反應(yīng)溶液中的無水乙臘進(jìn)行蒸發(fā)濃縮，使乙臘濃度不低于 0.0007mmol/mL。7. 根據(jù)權(quán)利要求3所述的制備方法，其特征在于:所加入反應(yīng)物中，控制rsOTEfej的烘 基與祀向膚的疊氮基的物質(zhì)的量之比為1:(1~2)。8. 根據(jù)權(quán)利要求3所述的制備方法，其特征在于:祀向膚為轉(zhuǎn)鐵蛋白受體祀向多膚T7。9. 多膚探針i8F-TEG-T7在轉(zhuǎn)鐵蛋白受體祀向的腫瘤PET/CT成像中的應(yīng)用。10. 多膚探針i8F-TEG-T7在制備轉(zhuǎn)鐵蛋白受體介導(dǎo)的腫瘤治療藥物中的應(yīng)用。
【文檔編號(hào)】C07K1/13GK106084004SQ201610423507
【公開日】2016年11月9日
【申請(qǐng)日】2016年6月15日 公開號(hào)201610423507.7, CN 106084004 A, CN 106084004A, CN 201610423507, CN-A-106084004, CN106084004 A, CN106084004A, CN201610423507, CN201610423507.7
【發(fā)明人】王欣璐, 尹吉林, 黃偉耀
【申請(qǐng)人】廣州軍區(qū)廣州總醫(yī)院