用于提高殺真菌鏈霉菌產(chǎn)恩拉霉素的發(fā)酵培養(yǎng)基的制作方法
【專利摘要】本發(fā)明公開了一種提高殺真菌鏈霉菌產(chǎn)恩拉霉素的發(fā)酵培養(yǎng)基，涉及微生物發(fā)酵領(lǐng)域。本發(fā)明中用于提高殺真菌鏈霉菌產(chǎn)恩拉霉素的發(fā)酵培養(yǎng)基，其含有玉米粉水解產(chǎn)物和絲素粉。本發(fā)明創(chuàng)造性的確定了水解玉米粉和絲素粉可以替代玉米淀粉和玉米蛋白粉在發(fā)酵過程中作為有機碳源和有機氮源供菌體利用，該方法省去了淀粉廠的加工玉米，生產(chǎn)淀粉和玉米蛋白粉的過程，降低了發(fā)酵的原料成本成品，并且經(jīng)水解處理的玉米粉，其被淀粉被水解，淀粉支鏈更短，其蛋白被蛋白酶水解成短肽類，這樣均有利于菌體的代謝利用，降低干固量，并且經(jīng)過水解的玉米粉，更有利于發(fā)酵罐進行徹底的滅菌，降低染菌風險。
【專利說明】
用于提高殺真菌鏈霉菌產(chǎn)恩拉霉素的發(fā)酵培養(yǎng)基
技術(shù)領(lǐng)域
[0001 ]本發(fā)明涉及微生物發(fā)酵領(lǐng)域，具體地說，涉及一種提高殺真菌鏈霉菌產(chǎn)恩拉霉素的發(fā)酵培養(yǎng)基。
【背景技術(shù)】
[0002]恩拉霉素(Enramycin)，又名恩來霉素、恩霉素、持久霉素，是由殺真菌素鏈霉菌發(fā)酵產(chǎn)生的一種多肽類抗生素，主要由恩拉霉素A和恩拉霉素B組成。1966年日本武田藥品工業(yè)株式會社研發(fā)成功，在日本1974年正式注冊，其后在許多國家被注冊和廣泛使用。恩拉霉素能改變腸道內(nèi)的細菌群落分布，有利于飼料營養(yǎng)成分的消化吸收，促進動物增重和提高飼料利用率。具有廣譜、無殘留、不產(chǎn)生耐藥性等優(yōu)點。作為肽類抗生素，即使在胃液的低pH條件下恩拉霉素也表現(xiàn)出很高的穩(wěn)定性，能抑制革蘭氏陽性菌的活性，而且具有抑制梭狀芽孢桿菌和桿菌類菌屬形成芽孢的能力。
[0003]據(jù)發(fā)表的專利和文獻報道，恩拉霉素的發(fā)酵培養(yǎng)基有機氮源和有機碳源大多數(shù)為玉米粉、玉米淀粉、玉米蛋白粉，這些都是玉米來源的產(chǎn)物，在進行了多種有機碳源和有機氮源的考察和實驗篩選之后，我們確定了使用一定量的，經(jīng)過淀粉酶和蛋白酶水解的玉米粉以及絲素粉作為配合的碳源和氮源用于恩拉霉素的發(fā)酵培養(yǎng)基，一定量水解的玉米粉可以為菌體提供比較容易利用的營養(yǎng)成分，縮短前期菌體擴增時期，較迅速的轉(zhuǎn)入次級代謝產(chǎn)生恩拉霉素，作為多肽類的抗生素，在其發(fā)酵培養(yǎng)基里面添加絲素粉，絲素粉中豐富的氨基酸和豐富多樣的多肽類物質(zhì)，可在恩拉霉素肽鏈組裝的過程中提供相對比較容易利用的短肽鏈，并且在恩拉霉素生物合成途徑中關(guān)鍵的限速步驟，絲素粉也可提供相應(yīng)的合成原料，這樣可以大幅度的提高恩拉霉素的產(chǎn)量。
[0004]而使用玉米蛋白粉等其他蛋白類的氮源，菌體利用這樣物質(zhì)，首先要將大的蛋白分子水解成長的肽鏈，長肽鏈再被菌體分解成短肽，或者分解成氨基酸，然后才能被菌體用于恩拉霉素肽鏈的合成過程，然后玉米蛋白粉的蛋白含量較絲素粉低很多，可提供的有用物質(zhì)少很多，所以，絲素粉具有蛋白含量高，容易被菌體利用合成恩拉霉素，可提供關(guān)鍵的短肽和氨基酸，等優(yōu)于玉米蛋白粉等氮源的優(yōu)勢，所以可以大幅度的提高恩拉霉素的效價。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0005]本發(fā)明所要解決的技術(shù)問題是提供一種成本低、用于提高殺真菌鏈霉菌產(chǎn)恩拉霉素的發(fā)酵培養(yǎng)基。
[0006]為解決上述技術(shù)問題，本發(fā)明所采取的技術(shù)方案是:一種用于提高殺真菌鏈霉菌產(chǎn)恩拉霉素的發(fā)酵培養(yǎng)基，其特征在于:其含有玉米粉水解產(chǎn)物和絲素粉。
[0007]進一步的技術(shù)方案在于，所述玉米粉水解產(chǎn)物為玉米粉在pH=7.0，恒溫35 °C條件下用中性蛋白酶和淀粉酶進行水解處理40分鐘所得產(chǎn)物。
[0008]進一步的技術(shù)方案在于，所述玉米粉水解產(chǎn)物干重含量占比80-120g/L，絲素粉占比l-20g/L。
[0009]進一步的技術(shù)方案在于，其還包括如下無機鹽類:硫酸銨、輕質(zhì)碳酸鈣、硫酸鎂、硫酸鋅、磷酸二氫鉀、氯化鈉、氯化鉀、硫酸亞鐵。
[0010]進一步的技術(shù)方案還在于，由下述干重含量占比的組分組成:玉米粉水解產(chǎn)物80-120g/L，絲素粉l_20g/L，硫酸銨18g/L，輕質(zhì)碳酸鈣1.5g/L，硫酸鎂13g/L，硫酸鋅2.5g/L，磷酸二氫鉀6.5g/L，氯化鈉13g/L，氯化鉀I lg/L，硫酸亞鐵3.lg/L，氯化鈷2.2g/L，氯化錳
3.7g/L。
[0011]采用上述技術(shù)方案所產(chǎn)生的有益效果在于:本發(fā)明創(chuàng)造性的確定了水解玉米粉和絲素粉可以替代玉米淀粉和玉米蛋白粉在發(fā)酵過程中作為有機碳源和有機氮源供菌體利用的導(dǎo)向，該方法省去了淀粉廠的加工玉米，生產(chǎn)淀粉和玉米蛋白粉的過程，降低了發(fā)酵的原料成本成品，并且經(jīng)水解處理的玉米粉，其被淀粉被水解，淀粉支鏈更短，其蛋白被蛋白酶水解成短肽類，這樣均有利于菌體的代謝利用，降低干固量，并且經(jīng)過水解的玉米粉，更有利于發(fā)酵罐進行徹底的滅菌，降低染菌風險。絲素粉蛋白含量高，容易被菌體利用合成恩拉霉素，可提供恩拉霉素生物合成關(guān)鍵限速步驟的短肽和氨基酸。
[0012]發(fā)酵搖瓶7天效價13743u/mL，對比培養(yǎng)基發(fā)酵搖瓶7天效價10572u/mL，效價提高3000單位，將近30 %。
【具體實施方式】
[0013]下面對本發(fā)明實施例中的技術(shù)方案進行清楚、完整地描述，顯然，所描述的實施例僅僅是本發(fā)明的一部分實施例，而不是全部的實施例?；诒景l(fā)明中的實施例，本領(lǐng)域普通技術(shù)人員在沒有做出創(chuàng)造性勞動前提下所獲得的所有其他實施例，都屬于本發(fā)明保護的范圍。
[0014]在下面的描述中闡述了很多具體細節(jié)以便于充分理解本發(fā)明，但是本發(fā)明還可以采用其他不同于在此描述的其它方式來實施，本領(lǐng)域技術(shù)人員可以在不違背本發(fā)明內(nèi)涵的情況下做類似推廣，因此本發(fā)明不受下面公開的具體實施例的限制。
[0015]本發(fā)明所說的培養(yǎng)基其含有玉米粉水解產(chǎn)物和絲素粉。
[0016]其中，玉米粉水解產(chǎn)物為玉米粉在pH=7.0，恒溫35 °C條件下用中性蛋白酶和淀粉酶進行水解處理40分鐘所得產(chǎn)物。
[0017]其中，玉米粉水解產(chǎn)物干重含量占比80_120g/L，絲素粉占比l_20g/L。
[0018]其中，其還包括如下無機鹽類:硫酸銨、輕質(zhì)碳酸鈣、硫酸鎂、硫酸鋅、磷酸二氫鉀、氯化鈉、氯化鉀、硫酸亞鐵。
[0019]其中，由下述干重含量占比的組分組成:玉米粉水解產(chǎn)物80_120g/L，絲素粉1-20g/L，硫酸錢18g/L，輕質(zhì)碳酸媽1.5g/L，硫酸鎂13g/L，硫酸鋅2.5g/L，磷酸二氫鉀6.5g/L，氯化鈉13g/L，氯化鉀11 g/L，硫酸亞鐵3.1 g/L，氯化鈷2.2g/L，氯化錳3.7g/L。
[0020]實施例1
[0021]水解玉米粉80g/L、絲素粉lg/L、硫酸銨8g/L、輕質(zhì)碳酸鈣0.5g/L、硫酸鎂3g/L、硫酸鋅2g/L、磷酸二氫鉀2g/L、氯化鈉3g/L、氯化鉀lg/L硫酸亞鐵0.lg/L,其余為水，pH 7.0-7.1，發(fā)酵搖瓶培養(yǎng)7天，效價10119u/mL。
[0022]實施例2
[0023]水解玉米粉120g/L、絲素粉20g/L、硫酸銨8g/L、輕質(zhì)碳酸鈣0.5g/L、硫酸鎂3g/L、硫酸鋅2g/L、磷酸二氫鉀2g/L、氯化鈉3g/L、氯化鉀lg/L硫酸亞鐵0.lg/L，其余為水，pH
7.0-7.1,發(fā)酵搖瓶培養(yǎng)7天，效價11321u/mL。
[0024]實施例3
[0025]水解玉米粉100g/L、絲素粉12g/L、硫酸銨8g/L、輕質(zhì)碳酸鈣0.5g/L、硫酸鎂3g/L、硫酸鋅2g/L、磷酸二氫鉀2g/L、氯化鈉3g/L、氯化鉀lg/L硫酸亞鐵0.1g/L，其余為水，pH
7.0-7.1,發(fā)酵搖瓶培養(yǎng)7天，效價13743u/mL。
[0026]對比實施例1
[0027]玉米粉120g/L、玉米蛋白粉35g/L、硫酸銨8g/L、輕質(zhì)碳酸鈣0.5g/L、硫酸鎂3g/L、硫酸鋅2g/L、磷酸二氫鉀2g/L、氯化鈉3g/L、氯化鉀lg/L硫酸亞鐵0.1g/L，其余為水，pH
7.0-7.1,發(fā)酵搖瓶培養(yǎng)7天，效價10572u/mL。
[0028]對比實施例2
[0029]玉米淀120g/L、玉米蛋白粉35g/L、硫酸錢8g/L、輕質(zhì)碳酸|i50.5g/L、硫酸鎂3g/L、硫酸鋅2g/L、磷酸二氫鉀2g/L、氯化鈉3g/L、氯化鉀lg/L硫酸亞鐵0.1g/L，其余為水，pH
7.0-7.1,發(fā)酵搖瓶培養(yǎng)7天，效價10241u/mL。
[0030]從對比例I和2與實施例3的對比可以看出，本發(fā)明在使用水解玉米粉和絲素粉作為發(fā)酵培養(yǎng)基的碳源和氮源之后，搖瓶發(fā)酵效價至少提高了3000u/mL，因此應(yīng)用水解玉米粉和絲素粉在恩拉霉素發(fā)酵生產(chǎn)中是有明顯的提高產(chǎn)量的作用的。
【主權(quán)項】
1.一種用于提高殺真菌鏈霉菌產(chǎn)恩拉霉素的發(fā)酵培養(yǎng)基，其特征在于:其含有玉米粉水解產(chǎn)物和絲素粉。2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的用于提高殺真菌鏈霉菌產(chǎn)恩拉霉素的發(fā)酵培養(yǎng)基，其特征在于:所述玉米粉水解產(chǎn)物為玉米粉在pH=7.0，恒溫35°C條件下用中性蛋白酶和淀粉酶進行水解處理40分鐘所得產(chǎn)物。3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的用于提高殺真菌鏈霉菌產(chǎn)恩拉霉素的發(fā)酵培養(yǎng)基，其特征在于:所述玉米粉水解產(chǎn)物干重含量占比80-120g/L，絲素粉占比1-20g/L。4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的用于提高殺真菌鏈霉菌產(chǎn)恩拉霉素的發(fā)酵培養(yǎng)基，其特征在于:其還包括如下無機鹽類:硫酸銨、輕質(zhì)碳酸鈣、硫酸鎂、硫酸鋅、磷酸二氫鉀、氯化鈉、氯化鉀、硫酸亞鐵。5.根據(jù)權(quán)利要求3或4所述的用于提高殺真菌鏈霉菌產(chǎn)恩拉霉素的發(fā)酵培養(yǎng)基，其特征在于:由下述干重含量占比的組分組成:玉米粉水解產(chǎn)物80-120g/L，絲素粉l_20g/L，硫酸錢18g/L，輕質(zhì)碳酸媽1.5g/L，硫酸鎂13g/L，硫酸鋅2.5g/L，磷酸二氫鉀6.5g/L，氯化鈉13g/L，氯化鉀11 g/L，硫酸亞鐵3.1 g/L，氯化鈷2.2g/L，氯化錳3.7g/L。
【文檔編號】C12N1/20GK106086125SQ201610471267
【公開日】2016年11月9日
【申請日】2016年6月23日
【發(fā)明人】郭耀光
【申請人】河北圣雪大成制藥有限責任公司