一種評估兒童稟賦能力的基因檢測方法
【專利摘要】本發(fā)明公開一種評估兒童稟賦能力的基因檢測方法，其包括如下步驟：1)根據(jù)大量文獻(xiàn)調(diào)研確定兒童稟賦能力與SNP位點的相關(guān)性；2)提取受檢者樣本DNA；3)采用核酸質(zhì)譜檢測法，通過對樣本稀釋劑編排、PCR反應(yīng)、SAP反應(yīng)、延伸反應(yīng)、調(diào)節(jié)、點樣至芯片將每個樣本所需檢測的所有SNP位點放在同一個檢測孔內(nèi)；4)根據(jù)步驟3)得到的數(shù)據(jù)進(jìn)行基因分型，并將基因型與相關(guān)兒童稟賦能力對應(yīng)；以及5)根據(jù)大量文獻(xiàn)調(diào)研及人群基因檢測和問卷調(diào)查得出基因型兒童稟賦能力算法，采用5分制法對每一種基因型做出0?5的打分標(biāo)準(zhǔn)。
【專利說明】
一種評估兒童稟賦能力的基因檢測方法
技術(shù)領(lǐng)域
[0001] 本發(fā)明涉及分子生物學(xué)技術(shù)領(lǐng)域，尤其涉及一種評估兒童稟賦能力的基因檢測方 法，該方法用于評估兒童的稟賦能力。
【背景技術(shù)】
[0002] 英國學(xué)者通過遺傳研究得出，人的成功與基因有密切關(guān)系。例如澳大利亞體育研 究院調(diào)查737名運動員發(fā)現(xiàn)，參加奧運會并取得頂級運動成績的爆發(fā)力項目，如短跑、舉重 項目的運動員ACTN3R等位基因的攜帶比例高達(dá)95%，特別是爆發(fā)力項目的女運動員中，這 個基因攜帶的比例高達(dá)1 〇〇 %。研究證實，ACTN3的兩種等位基因 R、X分別對應(yīng)不同的運動能 力，R等位基因產(chǎn)生ACTN蛋白，產(chǎn)生爆發(fā)力和速度;X等位基因不產(chǎn)生ACTN，它決定的肌肉纖 維類型擁有更強的耐力，更適合于從事耐力型運動。
[0003] 美國學(xué)者心理醫(yī)生思啟蒙經(jīng)過研究分析，畫出了人類生理上的三條主要成長曲 線一一思啟蒙曲線，揭示了幼兒期潛能學(xué)習(xí)能力中腦開發(fā)的重要性。這里將曲線轉(zhuǎn)換成比 較明了的圖表，如表1所不：
[0004] 表 1
[0006] 英國劍橋大學(xué)羅伯特?普洛明教授通過大量單卵雙生子的遺傳基因研究得出，人 們的成功32-62%由基因決定。天賦基因檢測是以單堿基多態(tài)性為主要檢測靶標(biāo)，運用先進(jìn) 的基因芯片和測序等技術(shù)，通過對受檢者DNA樣本進(jìn)行科學(xué)嚴(yán)謹(jǐn)?shù)臋z測，檢測與天賦相關(guān)的 基因，科學(xué)評估孩子的天賦傾向，其準(zhǔn)確率可達(dá)到99.99%。
[0007] 隨著人類基因組計劃、國際千人基因組計劃的完成，測序技術(shù)的飛速發(fā)展，對于基 因功能的研究，以及對人群的遺傳學(xué)的研究產(chǎn)生了大量關(guān)于基因功能的文獻(xiàn)、大量遺傳學(xué) 文獻(xiàn)，這些技術(shù)進(jìn)展使得我們能夠在NCBI網(wǎng)站中檢索到大量的文獻(xiàn)，然后再對兒童稟賦相 關(guān)的基因及SNP位點做出篩選和評估，通過對這些基因位點的檢測科學(xué)地評估兒童的稟賦 差異，同時也能讓家長適時的去培養(yǎng)和引導(dǎo)孩子，以達(dá)到因材施教的目的。
[0008] 中國專利申請公開號CN102373266A，發(fā)明名稱一種兒童個性化教育基因檢測芯片 及其檢測方法中公開了一種使用基因雜交芯片的方法檢測基因位點，該方法適合于幾百到 幾萬個位點同時檢測，位點越多成本越低，如果只有幾十個位點檢測，并不適合用基因雜交 芯片的方法。
[0009] 目前傳統(tǒng)的基因分型方法有：1)RFLP-PCR，2)-代測序，3)基因芯片等。本發(fā)明采 用核酸質(zhì)譜基因分型法，與傳統(tǒng)的基因分型法比較有著眾多優(yōu)勢，如下= RFLP-PCR雖然成本 低，但受限于酶切位點的序列設(shè)計，經(jīng)常很難找到合適的酶切位點。而且不能實現(xiàn)高通量檢 測和高通量分析。一代測序法雖然準(zhǔn)確性最高，但成本相對較高。而且也不能實現(xiàn)高通量檢 測和高通量分析?；螂s交芯片法，取決于檢測位點數(shù)目，如果每張芯片檢測位點在10000 元以上，相對成本會低一些，然而僅檢測10幾個位點，其成本比一代測序成本還要高。而且 一張雜交芯片一般只能檢測一個樣本。也比較難實現(xiàn)高通量檢測。而核酸質(zhì)譜法，一張核酸 質(zhì)譜芯片可以進(jìn)行384個樣本的檢測，每個樣本可以實現(xiàn)最多36個基因位點的檢測，可以實 現(xiàn)高通量檢測和高通量分析。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0010] 本發(fā)明要解決的技術(shù)問題在于提供一種基于遺傳物質(zhì)的信息評估兒童稟賦能力 的基因檢測方法，采用基因測序的方法獲得遺傳物質(zhì)的信息，并根據(jù)大量問卷調(diào)查和科學(xué) 文獻(xiàn)數(shù)據(jù)，做出對兒童稟賦能力的評估。
[0011] 本發(fā)明解決其技術(shù)問題是采用以下技術(shù)方案來實現(xiàn)的。
[0012] 本發(fā)明公開一種評估兒童稟賦能力的基因檢測方法，其包括如下步驟：1)根據(jù)大 量文獻(xiàn)調(diào)研確定兒童稟賦能力與SNP位點的相關(guān)性;2)提取受檢者樣本DNA; 3)采用核酸質(zhì) 譜檢測法，通過對樣本稀釋劑編排、PCR反應(yīng)、SAP反應(yīng)、延伸反應(yīng)、調(diào)節(jié)、點樣至芯片將每個 樣本所需檢測的所有SNP位點放在同一個檢測孔內(nèi)；4)根據(jù)步驟3)得到的數(shù)據(jù)進(jìn)行基因分 型，并將基因型與相關(guān)SNP位點對應(yīng)；以及5)根據(jù)大量文獻(xiàn)調(diào)研及人群基因檢測和問卷調(diào)查 得出基因型兒童稟賦能力算法，采用5分制法對每一種基因型做出0-5的打分標(biāo)準(zhǔn)。
[0013] 本發(fā)明解決其技術(shù)問題還可采用以下技術(shù)措施進(jìn)一步實現(xiàn)。
[0014]上述的基因檢測方法，步驟1)中所述兒童稟賦能力為27種，其包括:認(rèn)知能力、情 景記憶、快速記憶、長程記憶、操作能力、精細(xì)操作、語言組織、外語學(xué)習(xí)、創(chuàng)造能力、社交能 力、樂觀情緒、堅韌忍耐、抑郁情緒、孤獨傾向、親社會行為、團隊協(xié)作、自主能力、爆發(fā)力、有 氧耐力、運動訓(xùn)練敏感性、樂器演奏、音樂領(lǐng)悟、舞蹈稟賦、繪畫攝影、寫作能力、口才表達(dá)、 博弈類游戲。
[0015] 上述的基因檢測方法，所述兒童稟賦能力對應(yīng)分布在12個基因內(nèi)的14個所述SNP 位點上。
[0016] 上述的基因檢測方法，認(rèn)知能力對應(yīng)SNP位點rs4680對應(yīng)基因 COMT，情景記憶對應(yīng) SNP位點rsl7070145對應(yīng)基因 KIBRA，快速記憶對應(yīng)SNP位點rs6314對應(yīng)基因5TH2AR，長程記 憶對應(yīng)SNP位點rs6265對應(yīng)基因 BDNF，操作能力對應(yīng)SNP位點rs363050對應(yīng)基因 FADS2,精細(xì) 操作對應(yīng)SNP位點rs324650對應(yīng)基因 CHRM2,語言組織對應(yīng)SNP位點rsl456031對應(yīng)基因 F0XP2,外語學(xué)習(xí)對應(yīng)SNP位點rs6314對應(yīng)基因5TH2AR，創(chuàng)造能力對應(yīng)SNP位點rs4680對應(yīng)基 因 COMT，社交能力對應(yīng)SNP位點rs6311對應(yīng)基因5TH2AR，樂觀情緒對應(yīng)SNP位點rs6311對應(yīng) 基因5TH2AR，堅韌忍耐對應(yīng)SNP位點rs4680對應(yīng)基因 C0MT，抑郁情緒對應(yīng)SNP位點rs4906902 對應(yīng)基因 GABRB3,孤獨傾向?qū)?yīng)SNP位點rs3770448對應(yīng)基因 SLC25A12,親社會行為對應(yīng)SNP 位點rs3770448對應(yīng)基因 SLC25A12,團隊協(xié)作對應(yīng)SNP位點rs3765166對應(yīng)基因 SLC25A12,自 主能力對應(yīng)SNP位點rs4680對應(yīng)基因 C0MT，爆發(fā)力對應(yīng)SNP位點rsl815739對應(yīng)基因 ACTN3， 有氧耐力對應(yīng)SNP位點rs4362對應(yīng)基因 ACE，運動訓(xùn)練敏感性對應(yīng)SNP位點rsl 133190對應(yīng)基 因 CKMM，樂器演奏對應(yīng)SNP位點rs324650對應(yīng)基因 CHRM2，音樂領(lǐng)悟?qū)?yīng)SNP位點rs6311對應(yīng) 基因5TH2AR，舞蹈稟賦對應(yīng)SNP位點rsl815739對應(yīng)基因 ACTN3,繪畫攝影對應(yīng)SNP位點 rsl7070145對應(yīng)基因 KIBRA，寫作能力對應(yīng)SNP位點rs6314對應(yīng)基因5TH2AR，口才表達(dá)對應(yīng) SNP位點rsl456031對應(yīng)基因 F0XP2,博弈類游戲?qū)?yīng)SNP位點rsl7070145對應(yīng)基因 KIBRA。
[0017] 上述的基因檢測方法，在步驟4)中根據(jù)Agena公司在線引物設(shè)計軟件設(shè)計核酸質(zhì) 譜檢測法基因分型引物如表2。
[0018] 表2
[0021] 其中I s t-PCRP和2nd-PCRP為PCR擴增引物，UEP_SEQ為單堿基延伸反應(yīng)引物。
[0022] 上述的基因檢測方法，步驟4)的基因型與兒童稟賦能力對應(yīng)關(guān)系及步驟5)中基因 型具體打分標(biāo)準(zhǔn)如表3:
[0023] 表 3
[0026] 其中，該打分表是根據(jù)3511例兒童的基因檢測結(jié)果和對應(yīng)的問卷調(diào)查表做出的統(tǒng) 計學(xué)評分。其中第3、5、7列為不同基因型，第4、6、8列為依次對應(yīng)的打分。滿分為5分制。
[0027] 本發(fā)明與現(xiàn)有技術(shù)相比具有明顯的優(yōu)點和有益效果。借由上述技術(shù)方案，本發(fā)明 一種評估兒童稟賦能力的基因檢測方法至少具有下列優(yōu)點及有益效果：
[0028] 1、本發(fā)明采用核酸質(zhì)譜檢測法相對靈活，可以將最多36重反應(yīng)放在一個檢測孔里 同時檢測，因此比較適合幾十到幾百個位點的檢測項目。本發(fā)明將14個SNP位點放在同一個 檢測孔里，一次實驗可以同時在一個反應(yīng)孔里得出14個SNP位點的全部檢測結(jié)果。如果用 384孔板進(jìn)行操作，一次實驗采用一張核酸質(zhì)譜芯片可以同時檢測384人，而一天可以檢測 多張核酸質(zhì)譜芯片，可以實現(xiàn)一天檢測一千人以上，因此，可以實現(xiàn)高通量檢測工作。
[0029] 2、本發(fā)明基于pubmed數(shù)據(jù)庫文獻(xiàn)檢索獲得了兒童稟賦相關(guān)基因位點候選庫，隨后 對3511例中國兒童的樣本進(jìn)行了檢測，同時開展了問卷調(diào)查和跟蹤隨訪。對這3511例兒童 的基因檢測結(jié)果和調(diào)查隨訪結(jié)果進(jìn)行了科學(xué)的生物信息學(xué)和統(tǒng)計學(xué)分析，通過優(yōu)化和調(diào) 整，建立了目前較為成熟的兒童稟賦基因檢測方案和評分標(biāo)準(zhǔn)。
[0030] 3、本發(fā)明檢測14個位點最適合用核酸質(zhì)譜法進(jìn)行檢測，不適合用雜交芯片法，用 核酸質(zhì)譜法不僅可以實現(xiàn)高通量檢測和高通量分析，而且單位成本低。核酸質(zhì)譜法相對準(zhǔn) 確，準(zhǔn)確性僅次于一代測序法。
【具體實施方式】
[0031] 為更進(jìn)一步闡述本發(fā)明為達(dá)成預(yù)定發(fā)明目的所采取的技術(shù)手段，以下結(jié)合較佳實 施例，對依據(jù)本發(fā)明提出的一種評估兒童稟賦能力的基因檢測方法的【具體實施方式】、步驟、 特征及通過其獲得的結(jié)果，詳細(xì)說明如后。
[0032] 本發(fā)明公開一種評估兒童稟賦能力的基因檢測方法，其包括如下步驟：
[0033]步驟一:根據(jù)大量文獻(xiàn)調(diào)研確定兒童稟賦能力與SNP位點的相關(guān)性。其中27種兒童 稟賦能力對應(yīng)分布在12個基因內(nèi)的14個SNP位點，如表4。
[0034]表 4
[0037]稟賦能力對應(yīng)基因的SNP位點的選擇并不局限于上表所述SNP位點，還包括其他能 夠確定稟賦能力對應(yīng)基因的SNP位點，在此不再贅述。
[0038]步驟二:提取受檢者樣本DNA。下面將詳細(xì)介紹提取過程。
[0039] 一、樣本采集
[0040] 采集的樣本信息如表5:
[0041] 表 5
[0043] 樣本采集方法采用口腔拭子采集口腔脫落細(xì)胞，具體方法如下：
[0044] 1、取樣前準(zhǔn)備
[0045] (1)取樣前30分鐘內(nèi)禁止進(jìn)食、吸煙和飲酒。
[0046] (2)取樣前5分鐘，準(zhǔn)備清水，一次飲入約30ml，充分洗漱口腔8-12秒，吐出。
[0047] (3)按照上步，再洗漱口腔2次。
[0048] (4)采集人員取樣前需洗凈雙手。
[0049] 2、取樣操作
[0050] (1)旋開口腔拭子柄部外蓋，從管中小心抽出口腔拭子，避免手觸及拭子頭部。
[0051 ] (2)用手按住左側(cè)臉頰，握住手柄，將拭子伸入口腔左側(cè)，用拭子頭部充分接觸左 側(cè)口腔內(nèi)壁粘膜，在左側(cè)上下牙床咬合部位用力上下擦拭，同時旋轉(zhuǎn)拭子，使拭子頭部均勻 接觸口腔粘膜，重復(fù)此動作1分鐘。擦拭力度等同刷牙力度。采樣后將拭子插回套管擰緊。
[0052] (3)用第二支口腔拭子按照上步相同方法采集右側(cè)口腔內(nèi)壁脫落細(xì)胞。
[0053] (4)用剩余兩支口腔拭子按（2)、（3)步驟再次分別采集左右兩側(cè)口腔內(nèi)壁脫落細(xì) 胞。
[0054] (5)取樣后將采集完畢的所有口腔拭子管放回樣本盒原處。
[0055] 二、DNA提取流程
[0056] (1)樣本(棉拭子）的預(yù)處理:雙手戴上手套，從冰箱取出樣本，檢查樣本是否合格 并核對編號，做好記錄。從樣本盒中取出樣本管依次置于試管架上，做好標(biāo)記，放于超凈臺 上。
[0057] (2)取一定數(shù)量的2ml離心管，對應(yīng)樣本依次編號后置于離心管架上，放入超凈臺 上備用。
[0058] (3)打開2ml離心管管蓋，用剪刀將棉簽部分從桿上剪下，加入400μ1的生理鹽水， 蓋上蓋子靜置5min〇
[0059] (4)打開蓋子，加入20μ1的蛋白酶K，再加入400μ1 buffer AL。
[0060] (5)將離心管蓋好，在渦旋振蕩器上適度振蕩，簡短離心去除管蓋上的液滴。
[0061] (6)將恒溫金屬浴設(shè)定在56°C，溫浴10分鐘，時間到后取出簡短離心去除管蓋上的 液滴。
[0062] (7)打開離心管的蓋子，加入400μ1無水乙醇，蓋上蓋子，在渦旋振蕩器上適度振 蕩，簡短尚心去除管蓋上的液滴。
[0063] (8)準(zhǔn)備一定數(shù)量的QIAamp離心柱（已套在2ml收集管內(nèi)），對應(yīng)樣本依次編號后置 于離心管架上，打開離心柱的蓋子，取上一步的樣品600μ1轉(zhuǎn)移到離心柱中，蓋好蓋子，置于 離心機中，配平后進(jìn)行離心，6000g離心lmin。
[0064] (9)離心完畢后，取出離心柱與收集管，將離心柱置于一個干凈的2ml收集管中，將 原來的收集管棄掉。
[0065] (10)將2ml離心管中剩余的樣品轉(zhuǎn)移到QIAamp離心柱中，重復(fù)前兩步操作。
[0066] (11)小心打開離心柱蓋，加入500μ1 buffer AWl到離心柱中，小心蓋上蓋子，置于 離心機中，配平后進(jìn)行離心，6000g離心lmin。
[0067] (12)離心完畢后，取出離心柱與收集管，棄掉收集管中的廢液。
[0068] (13)小心打開離心柱蓋，加入500μ1 buffer AW2到離心柱中，小心蓋上蓋子，置于 離心機中，配平后進(jìn)行離心，20000g離心3min。
[0069] (14)離心完畢后，取出離心柱與收集管，棄掉收集管中的廢液。
[0070] (15)重新放入離心機中進(jìn)行空甩，20000g離心lmin。
[0071] (16)準(zhǔn)備一定數(shù)量的1.5ml離心管，對應(yīng)樣本依次編號后置于離心管架上，放入超 凈臺上，將離心柱對應(yīng)編號依次置于1.5ml離心管中，棄掉裝有離心廢液的舊收集管。打開 離心柱的蓋子，于超凈臺上瞭干5min。
[0072] (17)加入70μ1 buffer AE，槍頭不要接觸濾膜且盡量使液體均勻鋪在濾膜上。蓋 上蓋子，室溫靜置5min。置于離心機中，配平后進(jìn)行離心，6000g離心lmin。
[0073] (18)離心完畢后，取出離心柱與收集管，右手使用移液器將1.5ml管中的液體吸出 再次垂直加入離心柱中進(jìn)行二次洗脫，蓋上蓋子，室溫靜置5min。置于離心機中，配平后進(jìn) 行離心，6000g離心Imin。
[0074] (19)離心完畢后，取出離心柱與收集管，棄掉離心柱，蓋上蓋子，進(jìn)行濃度測定。 [0075]根據(jù)上述步驟，測得的三個樣本的DNA濃度如表6:
[0076]表 6 luu/b」 WU)濃皮測疋元半，符桿??取八
冰相進(jìn)仃俅仔開進(jìn)仃八洋宜記。
[0079] 步驟三:采用核酸質(zhì)譜檢測法，通過對樣本稀釋劑編排、PCR反應(yīng)、SAP反應(yīng)、延伸反 應(yīng)、調(diào)節(jié)、點樣至芯片將每個樣本所需檢測的所有SNP位點放在同一個檢測孔內(nèi)，具體流程 如下。
[0080] 三、核酸質(zhì)譜兒童稟賦檢測實驗流程
[0081] 1、樣本稀釋及編排：
[0082] (1)將保存于-20°C冰箱的樣本出庫，并進(jìn)行出庫登記，編排樣本在96孔板上的位 置。
[0083] (2)在有裙邊96孔板中稀釋樣品至5ngAxL，并加入2yL稀釋好的樣品至無裙邊96孔 板中。
[0084] 2、PCR 反應(yīng)：
[0085] (1)配制ΙμΜ(每個引物）PCR引物混合物，里面包含多重反應(yīng)里每個SNP位點的 forward(正向）和reverse(反向）引物。
[0086] (2)在0 · 6mL離心管中配制PCR反應(yīng)混液。
[0087] (3)將配好的PCR混液用排槍取3yL加至無裙邊96孔板中。
[0088] (4)把板用膜封好，渦旋震蕩并離心。
[0089 ] (5)將96孔板放上PCR儀進(jìn)行PCR反應(yīng)熱循環(huán)，PCR完成后取出96孔板備用。
[0090] 3、SAP 反應(yīng)：
[0091] (1)在0 · 6mL離心管中配制SAP混液。
[0092] (2)將無裙邊96孔板的封板膜撕開，加2yL SAP混液到每一個孔里（加混液后總體 積：7yL)。
[0093] (3)把板用膜封好，渦旋震蕩并離心。
[0094] (4)將96孔板放上PCR儀進(jìn)行SAP反應(yīng)熱循環(huán)，PCR完成后取出96孔板備用。
[0095] 4、延伸反應(yīng)：
[0096] (1)配制iPLEX延伸引物混液。
[0097] 第一實施例，配置兩組iPLEX延伸引物混液。根據(jù)以下規(guī)則配制7/14μΜ iPLEX延伸 引物混液。
[0098] 1)將延伸引物分成2組:低分子量和高分子量。
[0099] 2)將低分子量組在iPLEX延伸引物混液的濃度定為7μΜ并計算所需體積。
[0100] 3)將高分子量組在iPLEX延伸引物混液的濃度定為14μΜ并計算所需體積。
[0101] 4)計算達(dá)到工作體積所需的水的體積。
[0102] 第二實施例，配置三組iPLEX延伸引物混液。根據(jù)以下規(guī)則配制8/10/15μΜ iPLEX 延伸引物混液。
[0103] 1)將延伸引物分成3組:低分子量、中分子量和高分子量。
[0104] 2)將低分子量組在iPLEX延伸引物混液的濃度定為8μΜ并計算所需體積。
[0105] 3)將中分子量組在iPLEX延伸引物混液的濃度定為ΙΟμΜ并計算所需體積。
[0106] 4)將高分子量組在iPLEX延伸引物混液的濃度定為15μΜ并計算所需體積。
[0107] 5)計算達(dá)到工作體積所需的水的體積。
[0108] 第三實施例，配置四組iPLEX延伸引物混液。根據(jù)以下規(guī)則配制7/9.3/11.6/ 14μΜ iPLEX延伸引物混液。
[0109] 1)按照分子量將延伸引物分成4組。
[0110] 2)將低分子量組在iPLEX延伸引物混液的濃度定為7μΜ并計算所需體積。
[0111] 3)將兩個中分子量組別的在iPLEX延伸引物混液的濃度分別定為9.3μΜ和11.6μΜ， 并計算所需體積。
[0112] 4)將高分子量組在iPLEX延伸引物混液的濃度定為14μΜ并計算所需體積。
[0113] 5)計算達(dá)到工作體積所需的水的體積。
[0114] 第四實施例，根據(jù)"線性調(diào)整方法（linear adjustment method)"配制延伸引物混 液。簡單來說，每個延伸引物的庫存(500μΜ)有15μ1已預(yù)先放在孔Al到C12里，并成干粉狀。 加15uL PCR grade H2O到每個孔里并且混好。然后根據(jù)linear Primer Regression spreadsheet(線性引物回歸表)混合不同體積的延伸引物到新的管中，并加水至目標(biāo)體積。 制成品就是Extend primer working pool(延伸引物工作混合物）
[0115] (2)在0 · 6yL管中配制iPLEX延伸混液。
[0116] (3)將無裙邊96孔板的封板膜撕開，加2yL延伸混液到每一個孔里（加混液后總體 積：9yL)。
[0117] (4)把板用膜封好，渦旋震蕩和離心。
[0118] (5)將96孔板放上PCR儀進(jìn)行延伸反應(yīng)熱循環(huán)，PCR完成后取出96孔板備用。
[0119] 5、調(diào)節(jié)(樣本脫鹽）
[0120] (1)把潔凈樹脂(Resin)鋪平在96/15mg dimple plate上，風(fēng)干15分鐘。
[0121] (2)在樣本板的每一個有樣本的孔里加入42yL水然后離心。
[0?22 ] (3)加入15mg潔凈樹脂(Re s iη):輕輕將樣本板凌空反轉(zhuǎn)，放在已放樹脂的d imp I e plate上，然后將dimple plate連樣本板一起反轉(zhuǎn)(過程中兩塊板不可水平移動），讓樹脂掉 到孔里。
[0123] (4)用膜把板封好，放在旋轉(zhuǎn)器上顛倒搖勻15分鐘。
[0124] (5)3200g(標(biāo)準(zhǔn)板離心機的4000rpm)將板離心5分鐘。
[0125] 6、點樣至芯片
[0126] (1)點樣儀準(zhǔn)備工作:在實驗樣品在進(jìn)行脫鹽的過程中，對點樣儀進(jìn)行清洗:主面 板的TOOLS選項下，先選擇DRAIN，排空清洗池里的液體，然后選擇FILL，打開機蓋，將洗瓶里 加滿無水乙醇，將預(yù)置96孔板中加入NaOH，放置好后，蓋上機蓋，進(jìn)行清洗。
[0127] (2)開啟Typer軟件，使用Assay Editor導(dǎo)入assay信息，使用Plate Editor編板， 設(shè)置assay和樣本名稱。
[0128] (3)將無裙邊96孔板放在帶裙邊的轉(zhuǎn)換器上。點樣儀的設(shè)置已按此板調(diào)好。
[0129] (4)放入新的芯片，記錄ID號，開始進(jìn)行點樣。
[0130] 7、進(jìn)行質(zhì)譜實驗并獲得數(shù)據(jù)
[0131] (1)使用ChipLinker軟件連結(jié)編板信息與芯片號。
[0132] (2)開啟RT workstation軟件。
[0133] (3)將芯片放到MassARRAY Typer Workstation MA4或Compact里打質(zhì)譜，使用 MLDI-TOF(基質(zhì)輔助激光解吸電離-飛行時間）質(zhì)譜儀獲得數(shù)據(jù)。
[0134] 步驟四：根據(jù)步驟三得到的數(shù)據(jù)進(jìn)行基因分型，并將基因型與相關(guān)SNP位點對應(yīng)， 如表7。
[0135] 表7

[0137] 上述表7中ΝΕ0ΧΧ，僅代表SNP位點的編號無生物學(xué)意義，X代表數(shù)字。
[0138] 在步驟四中根據(jù)Agena公司在線引物設(shè)計軟件設(shè)計核酸質(zhì)譜檢測法基因分型引物 如表8。
[0139] 表8
[0142] 其中I s t-PCRP和2nd-PCRP為PCR擴增引物，UEP_SEQ為單堿基延伸反應(yīng)引物。
[0143] 步驟五:根據(jù)大量文獻(xiàn)調(diào)研及人群基因檢測和問卷調(diào)查得出基因型兒童稟賦能力 算法，采用5分制法對每一種基因型做出0-5的打分標(biāo)準(zhǔn)。
[0144] 例如:rs4680與認(rèn)知能力有關(guān)，AA是5分，GA是4分，GG是3分是按照根據(jù)現(xiàn)有文獻(xiàn)報 道：
[0145] [l]Harris SEl1Wright AF1Hayward C1Starr JM1Whalley LJ1Deary IJ.The functional COMT polymorphism,Val 158 Met, is associated with logical memory and the personality traitintellect/imagination in a cohort of healthy 79 year olds(79歲健康人的隊列研究表明COMT基因 Vall58Met多態(tài)性與邏輯記憶以及個人智力和 想象力特質(zhì)有關(guān)。）.Neurosci Lett.2〇〇5 S印 2;385(1):1_6·
[0146] [2]Modulating effect of COMT Val(158)Met polymorphism on interference resolution during a working memory task. (C0MT基因 Vall58Met多態(tài)性在工作記憶任 務(wù)中解決干擾調(diào)節(jié)作用的相關(guān)研究）Brain Cogn.2015 Apr;95:7_18.doi:10.1016/ j.bandc.2015.01.013.Epub 2015Feb 12.
[0147] [3]Chuan L,Gao J,Lei Y,ffang R,Lu L1Zhang X.
[0148] Vall58Met polymorphism of COMT gene and Parkinson's disease risk in Asians.(在亞洲人群中COMT基因 Vall58Met多態(tài)性在與帕金森病的發(fā)病風(fēng)險的相關(guān)研究） Neurol Sci.2015 Jan；36(l):109-15.doi:10.1007/s100 72-014-1896-0.Epub 2014 Jul 25.
[0149] 人群調(diào)查實驗如下：
[0150] 設(shè)計認(rèn)知能力測量表，共計20個題目，每個題目5分，滿分是100分，并按照下表進(jìn) 行5分制換算。如表9。
[0151] 表9
[0154] 我們根據(jù)上述認(rèn)知能力測量表對3511例兒童進(jìn)行了檢測，這3511例兒童的SNP基 因分型比率如表10。
[0155] 表1〇
L〇157」對不同基因型的年齡分布和性別分布進(jìn)行分析并無統(tǒng)計學(xué)差異。
[0158] 對不同基因型對認(rèn)知能力測量結(jié)果做出平均值如表11。
[0159] 表11
[0161] ~步驟四的基因型與兒童稟賦能力對應(yīng)關(guān)系及步驟五中基因型具體打分標(biāo)準(zhǔn)如表 12。
[0162] 表12
[0165] 其中，該打分表是根據(jù)3511例兒童的基因檢測結(jié)果和對應(yīng)的問卷調(diào)查表做出的統(tǒng) 計學(xué)評分。其中第3、5、7列為不同基因型，第4、6、8列為依次對應(yīng)的打分。滿分為5分制。
[0166] 受檢者各種稟賦能力對應(yīng)分?jǐn)?shù)如表13。
[0167] 表13
[0170]以上所述，僅是本發(fā)明的較佳實施例而已，并非對本發(fā)明作任何形式上的限制，雖 然本發(fā)明已以較佳實施例揭露如上，然而并非用以限定本發(fā)明，任何熟悉本專業(yè)的技術(shù)人 員，在不脫離本發(fā)明技術(shù)方案范圍內(nèi)，當(dāng)可利用上述揭示的技術(shù)內(nèi)容作出些許更動或修飾 為等同變化的等效實施例，但凡是未脫離本發(fā)明技術(shù)方案內(nèi)容，依據(jù)本發(fā)明的技術(shù)實質(zhì)對 以上實施例所作的任何簡單修改、等同變化與修飾，均仍屬于本發(fā)明技術(shù)方案的范圍內(nèi)。
【主權(quán)項】
1. 一種評估兒童稟賦能力的基因檢測方法，其特征在于，其包括如下步驟： 1) 根據(jù)大量文獻(xiàn)調(diào)研確定兒童稟賦能力與SNP位點的相關(guān)性； 2) 提取受檢者樣本DNA; 3) 采用核酸質(zhì)譜檢測法，通過對樣本稀釋劑編排、PCR反應(yīng)、SAP反應(yīng)、延伸反應(yīng)、調(diào)節(jié)、 點樣至忍片將每個樣本所需檢測的所有SNP位點放在同一個檢測孔內(nèi)； 4) 根據(jù)步驟3)得到的數(shù)據(jù)進(jìn)行基因分型，并將基因型與相關(guān)SNP位點對應(yīng)； W及5)根據(jù)大量文獻(xiàn)調(diào)研及人群基因檢測和問卷調(diào)查得出基因型兒童稟賦能力算法， 采用5分制法對每一種基因型做出0-5的打分標(biāo)準(zhǔn)。2. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的基因檢測方法，其特征在于，步驟1)中所述兒童稟賦能力為27 種，其包括:認(rèn)知能力、情景記憶、快速記憶、長程記憶、操作能力、精細(xì)操作、語言組織、外語 學(xué)習(xí)、創(chuàng)造能力、社交能力、樂觀情緒、堅初忍耐、抑郁情緒、孤獨傾向、親社會行為、團隊協(xié) 作、自主能力、爆發(fā)力、有氧耐力、運動訓(xùn)練敏感性、樂器演奏、音樂領(lǐng)悟、舞蹈稟賦、繪畫攝 影、寫作能力、口才表達(dá)、博弈類游戲。3. 根據(jù)權(quán)利要求2所述的基因檢測方法，其特征在于，所述兒童稟賦能力對應(yīng)分布在12 個基因內(nèi)的14個所述SNP位點上。4. 根據(jù)權(quán)利要求3所述的基因檢測方法，其特征在于，認(rèn)知能力對應(yīng)SNP位點rs4680對 應(yīng)基因 COMT，情景記憶對應(yīng)SNP位點rsl7070145對應(yīng)基因 KI BRA，快速記憶對應(yīng)SNP位點 rs6314對應(yīng)基因5TH2AR，長程記憶對應(yīng)SNP位點rs6265對應(yīng)基因抓NF，操作能力對應(yīng)SNP位 點rs363050對應(yīng)基因 FADS2,精細(xì)操作對應(yīng)SNP位點rs324650對應(yīng)基因 CHRM2,語言組織對應(yīng) SNP位點rsl456031對應(yīng)基因 FOXP2,外語學(xué)習(xí)對應(yīng)SNP位點rs6314對應(yīng)基因5TH2AR，創(chuàng)造能 力對應(yīng)SNP位點rs4680對應(yīng)基因 COMT，社交能力對應(yīng)SNP位點rs6311對應(yīng)基因5TH2AR，樂觀 情緒對應(yīng)SNP位點rs6311對應(yīng)基因5TH2AR，堅初忍耐對應(yīng)SNP位點rs4680對應(yīng)基因 COMT，抑 郁情緒對應(yīng)SNP位點rs4906902對應(yīng)基因 GABRB3,孤獨傾向?qū)?yīng)SNP位點rs3770448對應(yīng)基因 SLC25A12,親社會行為對應(yīng)SNP位點rs3770448對應(yīng)基因化C25A12,團隊協(xié)作對應(yīng)SNP位點 rs3765166對應(yīng)基因化C25A12,自主能力對應(yīng)SNP位點rs4680對應(yīng)基因 COMT，爆發(fā)力對應(yīng)SNP 位點rsl815739對應(yīng)基因 ACTN3,有氧耐力對應(yīng)SNP位點rs4362對應(yīng)基因 ACE，運動訓(xùn)練敏感 性對應(yīng)SNP位點rsll33190對應(yīng)基因 CKMM，樂器演奏對應(yīng)SNP位點rs324650對應(yīng)基因 CHRM2， 音樂領(lǐng)悟?qū)?yīng)SNP位點rs6311對應(yīng)基因5TH2AR，舞蹈稟賦對應(yīng)SNP位點rsl815739對應(yīng)基因 ACTN3,繪畫攝影對應(yīng)SNP位點rsl7070145對應(yīng)基因 KI BRA，寫作能力對應(yīng)SNP位點rs6314對 應(yīng)基因5TH2AR，口才表達(dá)對應(yīng)SNP位點rsl456031對應(yīng)基因 FOXP2,博弈類游戲?qū)?yīng)SNP位點 rsl7070145對應(yīng)基因 KI BRA。5. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的基因檢測方法，其特征在于，在步驟4)中根據(jù)Agena公司在線 引物設(shè)計軟件設(shè)計核酸質(zhì)譜檢測法基因分型引物如下：其中1 St-PCRP和化d-PCRP為PCR擴增引物，肥tSEQ為單堿基延伸反應(yīng)引物。6.根據(jù)權(quán)利要求1所述的基因檢測方法，其特征在于，步驟4)的基因型與兒童稟賦能力 對應(yīng)關(guān)系及步驟5)中基因型具體打分標(biāo)準(zhǔn)如下：其中，該打分表是根據(jù)3511例兒童的基因檢測結(jié)果和對應(yīng)的問卷調(diào)查表做出的統(tǒng)計學(xué) 評分。其中第3、5、7列為不同基因型，第4、6、8列為依次對應(yīng)的打分。滿分為5分制。
【文檔編號】C12Q1/68GK106086179SQ201610431040
【公開日】2016年11月9日
【申請日】2016年6月16日
【發(fā)明人】郭金海, 連樂建, 劉進(jìn)穩(wěn)
【申請人】北京東方亞美基因科技研究院有限公司