血細(xì)胞化學(xué)染色檢測試劑盒的制作方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本實(shí)用新型涉及熒光測試物的使用，具體是一種血細(xì)胞化學(xué)染色檢測試劑盒。
【背景技術(shù)】
[0002]細(xì)胞化學(xué)染色是以細(xì)胞形態(tài)學(xué)為基礎(chǔ)，根據(jù)化學(xué)反應(yīng)原理，將骨髓涂片按一定程序染色，然后在顯微鏡下觀察細(xì)胞化學(xué)成分及其變化的一項(xiàng)檢查方法。有助于了解各種血細(xì)胞的化學(xué)組成及病理生理改變，可用作血細(xì)胞類型的鑒別，以及對某些血液病的診斷和鑒別診斷、療效觀察、發(fā)病機(jī)制等。細(xì)胞化學(xué)染色的方法較多，主要介紹常用過氧化物酶、堿性磷酸酶、酯酶、糖原、鐵染色等細(xì)胞化學(xué)染色。
[0003]1.過氧化物酶染色
[0004]血細(xì)胞中的過氧化物酶(Peroxidase，POX)能分解試劑中的底物H2O2，釋出新生態(tài)氧，使無色聯(lián)苯胺氧化為藍(lán)色聯(lián)苯胺，后者與亞硝基鐵氰化鈉結(jié)合形成藍(lán)黑色的顆粒，沉著于細(xì)胞質(zhì)中。
[0005]主要用于急性白血病類型的鑒別，急性粒細(xì)胞白血病時(shí)，白血病細(xì)胞多呈強(qiáng)陽性反應(yīng)；急性單核細(xì)胞白血病時(shí)呈弱陽性或陰性反應(yīng)；急性淋巴細(xì)胞白血病則呈陰性反應(yīng)，POX染色對急性粒細(xì)胞白血病與急性淋巴細(xì)胞白血病的鑒別最有價(jià)值。
[0006]2.中性粒細(xì)胞堿性磷酸酶染色
[0007]中性粒細(xì)胞堿性磷酸酶(neutrophilalkalineph phatase，NAP)的顯示方法有偶氮偶聯(lián)法和鈣-鈷法兩種，前者的染色原理是血細(xì)胞內(nèi)堿性磷酸酶在pH為9.4?9.6的條件下，將基質(zhì)液中的α-磷酸萘酚鈉水解，產(chǎn)生α-萘酚與重氮鹽偶聯(lián)形成灰黑色沉淀，定位于細(xì)胞質(zhì)內(nèi)酶活性所在之處，鈣-鈷法染色是堿性磷酸酶在堿性條件下將基質(zhì)液中的β -甘油磷酸鈉水解，產(chǎn)生磷酸鈉。磷酸鈉依次與硝酸鈣、硝酸鈷、硫化銨發(fā)生反應(yīng)，形成不溶性棕黑色的硫化鈷，定位于酶活性之處。
[0008]NAP活性可因年齡、性別、應(yīng)激狀態(tài)、月經(jīng)周期、妊娠及分娩等因素有一定的生理性變化。在病理情況下，NAP活性的變化常有助于某些疾病的診斷和鑒別診斷。
[0009]感染性疾病、急性化膿菌感染時(shí)NAP活性明顯增高，病毒性感染時(shí)其活性在正常范圍或略減低。
[0010]慢性粒細(xì)胞白血病的NAP活性明顯減低，積分值常為O。類白血病反應(yīng)的NAP活性極度增高，故可作為與慢性粒細(xì)胞自血病鑒別的一個(gè)重要指標(biāo)。
[0011]急性粒細(xì)胞白血病時(shí)NAP積分值減低；急性淋巴細(xì)胞白血病的NAP積分值多增高；急性單核細(xì)胞白血病時(shí)一般正常或減低。
[0012]再生障礙性貧血時(shí)NAP活性增高；陣發(fā)性睡眠性血紅蛋白尿時(shí)活性減低，因此也可作為兩者鑒別的參考。
[0013]3.酯酶染色
[0014]醋酶又稱非特異性醋酶(non-specific esterase，NSE)，能將基質(zhì)液中的α-醋酸萘酚水解，產(chǎn)生α -萘酚，再與重氮染料偶聯(lián)，形成不溶性的有色沉淀，定位于胞質(zhì)內(nèi)。
[0015]急性單核細(xì)胞白血病細(xì)胞呈強(qiáng)陽性反應(yīng)，但單核細(xì)胞中的酶活性可被氟化鈉(NaF)抑制，故在進(jìn)行染色時(shí)，常同時(shí)做氟化鈉抑制試驗(yàn)。急性粒細(xì)胞白血病時(shí)，呈陰性反應(yīng)或弱陽性反應(yīng)，但陽性反應(yīng)不被氟化鈉抑制。因此，本染色法主要用于急性單核細(xì)胞白血病與急性粒細(xì)胞白血病的鑒別。
[0016]4.糖原染色
[0017]糖原染色，又稱過碘酸-Schiff反應(yīng)(Per1dic acid-Schiff，S，react1n，PAS 反應(yīng))。過碘酸能將血細(xì)胞內(nèi)的糖原氧化，生成醛基。醛基與Schiff液中的無色品紅結(jié)合，形成紫紅色化合物，定位于胞質(zhì)內(nèi)。
[0018]臨床意乂
[0019]紅血病或紅白血病時(shí)幼紅細(xì)胞呈強(qiáng)陽性反應(yīng)，積分值明顯增高，有助于與其他紅細(xì)胞系統(tǒng)疾病的鑒別，嚴(yán)重缺鐵性貧血、重型海洋性貧血及巨幼細(xì)胞貧血，部分病例的個(gè)別幼紅細(xì)胞可呈陽性反應(yīng)。
[0020]急性粒細(xì)胞白血病，原粒細(xì)胞呈陰性反應(yīng)或弱陽性反應(yīng)，陽性反應(yīng)物質(zhì)呈細(xì)顆粒狀或均勻淡紅色；急性淋巴細(xì)胞白血病原淋和幼淋細(xì)胞常呈陽性反應(yīng)，陽性反應(yīng)物質(zhì)呈粗顆粒狀或塊狀；急性單核細(xì)胞白血病原單核細(xì)胞大多為陽性反應(yīng)，呈彌漫均勻紅色或細(xì)顆粒狀，有時(shí)在胞質(zhì)邊緣處顆粒較粗大。因此，PAS反應(yīng)對三種急性白血病類型的鑒別有一定參考價(jià)值。
[0021]5.鐵染色
[0022]人體內(nèi)的鐵有一定量以鐵蛋白和含鐵血黃素的形式貯存在骨髓中的單核-吞噬細(xì)胞胞質(zhì)內(nèi)，幼紅細(xì)胞的線粒體中也有含鐵血黃素。這些鐵在酸化的低鐵氰化鉀溶液中反應(yīng)，生成藍(lán)色的鐵氰化鐵沉淀(普魯士藍(lán))，定位于含鐵的部位。故此染色法又稱為普魯士藍(lán)反應(yīng)，觀察骨髓小粒中貯存在單核-吞噬細(xì)胞系統(tǒng)內(nèi)的鐵(在幼紅細(xì)胞之外的鐵)，陽性反應(yīng)為骨髓小粒上見到的呈淺藍(lán)綠色均勻的無形物質(zhì)，或呈藍(lán)色或深藍(lán)色的小珠狀、粗顆粒狀或藍(lán)黑色的小塊物質(zhì)，按陽性反應(yīng)的強(qiáng)度分為5級。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0023]本實(shí)用新型就是為了解決血細(xì)胞化學(xué)染色檢測的問題，而提供一種便于各類醫(yī)療機(jī)構(gòu)能夠普遍應(yīng)用的血細(xì)胞化學(xué)染色檢測法試劑盒。
[0024]本實(shí)用新型是按以下技術(shù)方案設(shè)計(jì)的:
[0025]本實(shí)用新型包括長方形盒體及與其一側(cè)邊彎折連體的盒蓋，而在盒體內(nèi)放置有試劑架，試劑架上有5個(gè)楔形插孔，形成有分別容納血細(xì)胞化學(xué)染色試劑瓶。本實(shí)用新型專利依據(jù)應(yīng)用終點(diǎn)法進(jìn)行血細(xì)胞化學(xué)染色檢測分析，適用于血液疾病的診斷，本實(shí)用新型依據(jù)應(yīng)用化學(xué)染色法進(jìn)行血細(xì)胞分析，具有靈敏度更高、成本低、準(zhǔn)確度高的優(yōu)點(diǎn)，而且，便于普及的優(yōu)點(diǎn)。
【附圖說明】
[0026]圖1是本實(shí)用新型立體結(jié)構(gòu)示意圖；
[0027]圖中:1.長方形盒體 2.盒蓋
[0028]3.試劑架4.插孔
[0029]5.過氧化物酶染色試劑瓶6.酯酶染色試劑瓶
[0030]7.糖原染色試劑瓶8.堿性磷酸酶染色試劑瓶
[0031]9.鐵染色試劑瓶
【具體實(shí)施方式】
[0032]一種血細(xì)胞化學(xué)染色檢測試劑盒，包括長方形盒體I及與其一側(cè)邊彎折連體的盒蓋2，盒體⑴內(nèi)放置有試劑架(3)，試劑架(3)上形成有4個(gè)圓形插孔(4)，插孔(4)上分別放有過氧化物酶染色試劑瓶(5)、酯酶染色試劑瓶￠)、糖原染色試劑瓶(7)、堿性磷酸酶染色試劑瓶(8)、鐵染色試劑瓶(9)。
[0033]所述血細(xì)胞化學(xué)染色檢測試劑盒，其內(nèi)部放置有5個(gè)楔形插孔的試劑架，插孔之間形成一定間隔。
[0034]所述的盒體I內(nèi)紙質(zhì)支架形成的試劑插孔，分別容納過氧化物酶染色、酯酶染色、糖原染色、堿性磷酸酶染色、鐵染色試劑瓶。過氧化物酶染色試劑瓶(5)每瓶裝有10ml過氧化物酶染色試劑、酯酶染色試劑瓶(6)每瓶裝有10ml酯酶染色試劑、糖原染色試劑瓶
(7)每瓶裝有10ml糖原染色試劑、堿性磷酸酶染色試劑瓶(8)每瓶裝有10ml堿性磷酸酶染色試劑、鐵染色試劑瓶(9)每瓶裝有10ml鐵染色染色試劑。
[0035]1.方法應(yīng)用本實(shí)用新型進(jìn)行血細(xì)胞化學(xué)染色法檢測。
[0036]2.儀器:日本0LYMPUSCX41顯微鏡。
[0037]3.實(shí)驗(yàn)結(jié)果判斷:
[0038]過氧化物酶染色:胞質(zhì)中無藍(lán)黑色顆粒者為陰性反應(yīng)，出現(xiàn)細(xì)小顆粒、分布稀疏者為弱陽性反應(yīng)，顆粒粗大而密集者為強(qiáng)陽性反應(yīng)。
[0039]粒細(xì)胞堿性磷酸酶染色:堿性磷酸醇主要存在于成熟階段的中性粒細(xì)胞(分葉核及桿狀核)，其他血細(xì)胞均呈陰性反應(yīng)。陽性反應(yīng)為胞質(zhì)中出現(xiàn)灰色到棕黑色顆粒，反應(yīng)強(qiáng)度分為5級，S卩“一”、“1+”、“2+”、“3+”、“4+”。反應(yīng)結(jié)果以陽性反應(yīng)細(xì)胞百分率和積分值來表示。血涂片染色后，在漫鏡下，觀察100個(gè)成熟中性粒細(xì)胞，陽性反應(yīng)細(xì)胞所占百分率即為陽性率；對所有陽性反應(yīng)細(xì)胞逐個(gè)按反應(yīng)強(qiáng)度分級，將各級所占的百分率乘以級數(shù)，然后相加，即為積分值。
[0040]糖原:胞質(zhì)中出現(xiàn)紅色者為陽性反應(yīng)，陽性反應(yīng)物可呈顆粒狀、小塊狀或彌漫均勻紅色，PAS反應(yīng)的陽性程度通常以強(qiáng)陽性、陽性、弱陽性和陰性來表示。也有用陽性百分率(觀察同一類型細(xì)胞的陽性細(xì)胞串)和積分值來表示。正常血細(xì)胞的PAS染色反應(yīng):粒系細(xì)胞中原粒細(xì)胞為陰性反應(yīng)，自早幼粒細(xì)胞至中性分葉核粒細(xì)胞均呈陽性反應(yīng)，并隨細(xì)胞的成熱，陽性反應(yīng)程度漸增強(qiáng)；單核細(xì)胞呈弱陽性反應(yīng)；淋巴細(xì)胞大多呈陰性反應(yīng)，少數(shù)可呈弱陽性反應(yīng)；幼紅細(xì)胞和紅細(xì)胞均呈陰性反應(yīng)；巨核細(xì)胞和血小板均呈陽性反應(yīng)，巨核細(xì)胞的陽性反應(yīng)程度隨細(xì)胞的發(fā)育成熟而增強(qiáng)，成熟巨核細(xì)胞多呈強(qiáng)陽性反應(yīng)。
[0041]酯酶染色:胞質(zhì)中出現(xiàn)有色沉淀者為陽性反應(yīng)。因所用的重氮鹽不同，陽性反應(yīng)的沉淀可分灰黑色或棕黑色，此酶主要存在于單核系細(xì)胞中，故有人稱之為單核細(xì)胞型酯酶，原單核細(xì)胞為陰性反應(yīng)或弱陽性反應(yīng)，幼單核細(xì)胞和單核細(xì)胞呈陽性反應(yīng)，粒系細(xì)胞一般為陰性或弱陽性反應(yīng)，淋巴細(xì)胞一般為陰性反應(yīng)。
[0042]鐵染色:“陰性”骨髓小粒無藍(lán)色顯現(xiàn)(提示骨髓貯存鐵缺乏)。
[0043]“ I+”有少量鐵顆粒，或偶見少量鐵小珠。
[0044]“2+”有較多的鐵顆粒和鐵小珠。
[0045]“3+”有很多鐵顆粒、小珠和少數(shù)藍(lán)黑色小塊。
[0046]“4+”有極多的鐵顆粒和小珠，并有很多密集成堆的小塊。
【主權(quán)項(xiàng)】
1.一種血細(xì)胞化學(xué)染色檢測試劑盒，包括長方形盒體(I)及與其一側(cè)邊彎折連體的盒蓋(2)，其特征在于:盒體(I)內(nèi)放置有長方體試劑架(3)，試劑架(3)上形成有5個(gè)楔形插孔(4)，插孔(4)上分別放有過氧化物酶染色試劑瓶(5)、酯酶染色試劑瓶￠)、糖原染色試劑瓶(7)、堿性磷酸酶染色試劑瓶(8)、鐵染色試劑瓶(9)。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述血細(xì)胞化學(xué)染色檢測試劑盒，其特征在于:試劑架(3)為長方體形，其上形成5個(gè)均等的楔形插孔的紙質(zhì)支架。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述血細(xì)胞化學(xué)染色檢測試劑盒，其特征在于:其內(nèi)置試劑架上分別插有過氧化物酶染色、酯酶染色、糖原染色、堿性磷酸酶染色試劑瓶、鐵染色試劑瓶。
【專利摘要】本實(shí)用新型涉及一種血細(xì)胞過氧化物酶染色、酯酶染色、糖原染色、堿性磷酸酶染色、鐵染色檢測試劑盒，屬于熒光測試物的使用。本實(shí)用新型包括長方形盒體及與其一側(cè)邊彎折連體的盒蓋，而在盒體內(nèi)放置有試劑架，試劑架上有5個(gè)楔形插孔，形成有分別容納過氧化物酶染色、酯酶染色、糖原染色、堿性磷酸酶染色、鐵染色試劑瓶。本實(shí)用新型專利依據(jù)應(yīng)用化學(xué)染色法進(jìn)行細(xì)胞過氧化物酶染色、酯酶染色、糖原染色、堿性磷酸酶染色、鐵染色檢測分析，適用于血液病患者的診斷，便于普及，適用于各級醫(yī)療和科研機(jī)構(gòu)使用。
【IPC分類】C12M1-34
【公開號】CN204550584
【申請?zhí)枴緾N201520201881
【發(fā)明人】閆瑞振, 李立和
【申請人】天津市寶坻區(qū)人民醫(yī)院
【公開日】2015年8月12日
【申請日】2015年4月6日