一種免疫磁珠分離抗酸桿菌檢測試劑盒的制作方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本實用新型涉及一種菌類檢測試劑盒，具體的說，涉及一種免疫磁珠分離抗酸桿菌檢測試劑盒。
【背景技術(shù)】
[0002]當(dāng)前我國在結(jié)核病控制方面首先面臨的問題是結(jié)核病的診斷。肺結(jié)核的實驗室診斷方法主要有細(xì)菌學(xué)檢查、免疫學(xué)檢查和分子生物學(xué)檢查。細(xì)菌學(xué)檢查是目前傳染性肺結(jié)核診斷的金標(biāo)準(zhǔn)，主要有痰涂片抗酸染色直接找結(jié)核分支桿菌和結(jié)核分支桿菌培養(yǎng)方法。傳統(tǒng)的涂片抗酸染色較為簡單、但痰涂片陽性率較低，鏡檢需要經(jīng)驗，難以區(qū)分環(huán)境分支桿菌造成的假陽性等不足。
[0003]目前開展的免疫學(xué)診斷方法，如T-SPOT，其原理為檢測結(jié)核桿菌特異性細(xì)胞免疫反應(yīng)功能，通過體外定量檢測全血細(xì)胞被結(jié)核分枝桿菌特異性抗原刺激后釋放的γ-干擾素，判斷其是否具有針對結(jié)核分枝桿菌特異性的細(xì)胞免疫反應(yīng)，可用于結(jié)核病的輔助診斷，但受機體免疫狀態(tài)，以及費用高等因素影響，不易在基層醫(yī)院開展。近幾年興起的分子生物學(xué)檢查方法，如PCR法、基因芯片等，基本實現(xiàn)了快速、靈敏、準(zhǔn)確地診斷結(jié)核的目的，但存在特異性差，易污染以及標(biāo)準(zhǔn)化等問題。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0004]針對上述現(xiàn)有技術(shù)的不足，本實用新型提供一種免疫磁珠分離抗酸桿菌檢測試劑盒，克服了難以區(qū)分分支桿菌造成的假陽性的不足，并且具有特異、靈敏、無污染的特點，無需昂貴的特殊設(shè)備，能夠在基層醫(yī)院推廣使用。
[0005]為了實現(xiàn)上述目的，本實用新型提供一種免疫磁珠分離抗酸桿菌檢測試劑盒，包括盒體和盒蓋，所述盒蓋連接在盒體上方，盒蓋與盒體蓋合處設(shè)有密封墊，密封墊可以采用海綿墊，所述盒體內(nèi)設(shè)有瓶托，所述瓶托設(shè)有凹槽，包括放置載玻片的凹槽、放置蓋玻片的凹槽、放置磁鐵的凹槽、放置玻璃管的凹槽以及放置試劑瓶的凹槽，并且每一個凹槽下面有一個對應(yīng)的標(biāo)明放置物名稱的標(biāo)簽。
[0006]所述放置試劑瓶的凹槽為6個，并且每一個試劑瓶中對應(yīng)盛放有PBS緩沖液、PE標(biāo)記抗抗酸桿菌抗體、抗IgG Dynabeads免疫磁珠、5 %石碳酸復(fù)紅溶液、3 %鹽酸酒精溶液、亞甲基藍(lán)溶液所述的試劑瓶中裝有PBS緩沖液、PE標(biāo)記抗抗酸桿菌抗體、抗IgG Dynabeads免疫磁珠、5 %石碳酸復(fù)紅溶液、3 %鹽酸酒精溶液、亞甲基藍(lán)溶液。
[0007]為了能夠順利的進(jìn)行試驗，并且考慮到試劑盒控制在較合適的大小方便使用，其中放置載玻片的凹槽、放置蓋玻片的凹槽、放置玻璃試管的凹槽容量均為50個，其中5%石碳酸復(fù)紅溶液、3 %鹽酸酒精溶液、亞甲基藍(lán)溶液各100ml，PBS緩沖液500ml，PE標(biāo)記抗抗酸桿菌抗體為50 μ 1，抗IgG Dynabeads免疫磁珠為250 μ I。
[0008]作為進(jìn)一步改進(jìn)，所述凹槽內(nèi)設(shè)置有緩沖裝置，使放置物能夠較好的固定在凹槽內(nèi)，在運輸過程中不易晃動，使試劑盒在移動過程中不會造成凹槽內(nèi)放置物易破損情況的發(fā)生，所述的緩沖裝置可以是海綿墊或者其他柔軟材料，并且還具有一定的保溫效果。
[0009]作為進(jìn)一步改進(jìn)，所述盒體內(nèi)還設(shè)有一個控溫裝置，能夠使試劑盒在運輸過程，或者取出試劑做實驗過程中保持試劑盒中的試劑基本維持在實驗所需要的溫度。
[0010]優(yōu)選的，瓶托上的槽數(shù)至少為10個。
[0011 ] 為了確保試劑盒中的試劑能夠較好的保存與使用，試劑盒保存溫度最好為4°C，保存時間不超過6個月。
[0012]有益效果:本實用新型的試劑盒為免疫磁珠分離抗酸桿菌提供所需的試劑以及實驗器材，能夠直接進(jìn)行實驗而不必再為準(zhǔn)備實驗條件耗時耗力，還能夠?qū)υ噭┖袃?nèi)物品在運輸過程中起到較好的保護(hù)作用以及對試劑提供一個實驗過程所需溫度條件。并且能夠準(zhǔn)確的檢測抗酸染色顯示陽性或者陰性，進(jìn)而能夠顯著提高痰菌陰性肺結(jié)核的診斷效率。本實用新型利用免疫反應(yīng)的高度特異性和磁性分離的快速、簡單等優(yōu)點，使得采用實用新型的試劑盒進(jìn)行分離抗酸桿菌具有簡單、快速、準(zhǔn)確、無污染的特點，無需昂貴的特殊設(shè)備，就能夠在基層醫(yī)院推廣使用。
【附圖說明】
[0013]圖1為本實用新型【具體實施方式】的結(jié)構(gòu)示意圖。
[0014]圖中I盒體，2盒蓋，3瓶托，4放置載玻片的凹槽，5放置蓋玻片的凹槽，6放置磁鐵的凹槽，7放置玻璃管的凹槽，8、9、10、11、12、13均為放置試劑瓶的凹槽，14控溫裝置。
【具體實施方式】
[0015]下面結(jié)合具體實施例來對本實用新型做進(jìn)一步說明。
[0016]實施例1
[0017]免疫磁珠分離抗酸桿菌檢測試劑盒，包括盒體I和盒蓋2，所述盒蓋2連接在盒體I上方，盒蓋2與盒體I蓋合處設(shè)有密封墊，密封墊可以采用海綿墊，所述盒體內(nèi)設(shè)有瓶托3，所述瓶托設(shè)有凹槽，包括放置載玻片的凹槽4、放置蓋玻片的凹槽5、放置磁鐵的凹槽6、放置玻璃管的凹槽7以及放置試劑瓶的凹槽8、9、10、11、12、13，并且每一個凹槽下面有一個對應(yīng)的標(biāo)明放置物名稱的標(biāo)簽。
[0018]其中凹槽8的試劑瓶中裝有PBS緩沖液500ml、凹槽9的試劑瓶中裝有PE標(biāo)記抗抗酸桿菌抗體50 μ 1、凹槽10的試劑瓶中裝有抗IgG Dynabeads免疫磁珠250 μ 1、凹槽11的試劑瓶中裝有5%石碳酸復(fù)紅溶液100ml、凹槽12的試劑瓶中裝有3%鹽酸酒精溶液100ml、凹槽13的試劑瓶中裝有亞甲基藍(lán)溶液100ml。
[0019]試劑盒的凹槽內(nèi)設(shè)置有海綿墊，使放置物能夠較好的固定在凹槽內(nèi)，在運輸過程中不易晃動，使試劑盒在移動過程中不會造成凹槽內(nèi)放置物易破損情況的發(fā)生，并且還具有一定的保溫效果。
[0020]此外，瓶托與盒蓋之間也可以加上一層海綿墊，也能夠?qū)ζ客兄蟹胖梦锲鸬骄彌_和保溫的效果。
[0021]盒體內(nèi)還設(shè)有一個控溫裝置14，能夠使試劑盒在運輸過程，或者取出試劑做實驗過程中保持試劑盒中的試劑基本維持在實驗所需要的溫度。
[0022]試劑盒保存溫度最好為4°C，保存時間不超過6個月。
[0023]當(dāng)然，此試劑盒中的槽數(shù)也可以多于10個，以備在實驗中可以放置實驗所需的試劑與器材。
[0024]下面用19名浸潤性肺結(jié)核患者作為志愿者，取他們的深咳痰作為標(biāo)本。以試劑盒中的試劑和器材，采用如下步驟來進(jìn)行分離抗酸桿菌:
[0025]步驟一:取深咳痰標(biāo)本，加入PE標(biāo)記抗抗酸桿菌抗體I μ 1，4°C孵育30分鐘，用PBS緩沖液洗孵育后的細(xì)胞一次后，加入50 μ I抗IgG Dynabeads免疫磁珠，混勻后置于4°C孵育20分鐘，然后置于分離柱中，并將分離柱安裝入磁場中2分鐘，取出后棄去上清液，用2ml PBS/1 X 17個Dynabeads洗4次，放入離心機中在轉(zhuǎn)速為3000轉(zhuǎn)/分下離心10分鐘；
[0026]步驟二:取離心沉淀物0.1ml，放入載玻片中央處，均勻涂抹成2cmX2.5cm的卵圓形痰膜，自然干燥，涂片火焰固定，平放染色架上，加5%石碳酸復(fù)紅蓋滿痰膜，微火加溫至染液呈現(xiàn)蒸汽，去火焰，染色7分鐘，水洗，加3%鹽酸酒精蓋滿痰膜，脫色3分鐘，至無紅色，水洗，加亞甲基藍(lán)蓋滿痰膜，直接涂片復(fù)染30秒，集菌涂片復(fù)染2分鐘，水洗，然后自然干燥；
[0027]步驟三:將步驟二中干燥后的涂片置于顯微鏡(目鏡10 X，油鏡100 X)下觀察，通過觀察涂片抗酸染色顯示陽性或陰性。
[0028]結(jié)果顯示，19例浸潤型肺結(jié)核患者中，7例痰涂片抗酸染色檢查陽性，免疫磁珠分選后抗酸染色仍陽性；在12例痰涂片陰性肺結(jié)核患者中，經(jīng)免疫磁珠分選后6例抗酸染色陽性，6例普通細(xì)菌性肺炎患者經(jīng)免疫磁珠分選后抗酸染色均為陰性。從結(jié)果可以看出，采用本實用新型的試劑盒能夠準(zhǔn)確的檢測出抗酸染色顯示陽性還是陰性，并且具有操作簡單、快速的特點，在基層醫(yī)院也可以使用。
[0029]本實用新型并不局限于上述實施例，在不脫離本實用新型精神及其實質(zhì)情況下，本領(lǐng)域的普通技術(shù)人員可根據(jù)本實用新型做出各種相應(yīng)改變和變形，這些相應(yīng)對本實用新型進(jìn)行的修改或者等同替換，其均應(yīng)涵蓋在本實用新型的權(quán)利要求保護(hù)的范圍當(dāng)中。
【主權(quán)項】
1.一種免疫磁珠分離抗酸桿菌檢測試劑盒，包括盒體和盒蓋，所述盒蓋連接在盒體上方，其特征在于:盒蓋與盒體蓋合處設(shè)有密封墊，所述盒體內(nèi)設(shè)有瓶托，所述瓶托設(shè)有凹槽，包括放置載玻片的凹槽、放置蓋玻片的凹槽、放置磁鐵的凹槽、放置玻璃管的凹槽以及放置試劑瓶的凹槽，并且每一個凹槽下面有一個對應(yīng)的標(biāo)明放置物名稱的標(biāo)簽。2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的免疫磁珠分離抗酸桿菌檢測試劑盒，其特征在于:所述放置試劑瓶的凹槽為6個，并且每一個試劑瓶中對應(yīng)盛放有PBS緩沖液、PE標(biāo)記抗抗酸桿菌抗體、抗IgG Dynabeads免疫磁珠、石碳酸復(fù)紅溶液、鹽酸酒精溶液、亞甲基藍(lán)溶液。3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的免疫磁珠分離抗酸桿菌檢測試劑盒，其特征在于:所述密封墊為海綿墊。4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的免疫磁珠分離抗酸桿菌檢測試劑盒，其特征在于:所述凹槽內(nèi)設(shè)有緩沖裝置。5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的免疫磁珠分離抗酸桿菌檢測試劑盒，其特征在于:所述放置載玻片的凹槽、放置蓋玻片的凹槽、放置玻璃試管的凹槽容量均為50個。6.根據(jù)權(quán)利要求1所述的免疫磁珠分離抗酸桿菌檢測試劑盒，其特征在于:所述盒體內(nèi)設(shè)有一個控溫裝置。7.根據(jù)權(quán)利要求1至6任一項所述的免疫磁珠分離抗酸桿菌檢測試劑盒，其特征在于:所述凹槽至少為10個。8.根據(jù)權(quán)利要求1至6任一項所述的免疫磁珠分離抗酸桿菌檢測試劑盒，其特征在于:所述的試劑盒保存溫度為4°C，保存時間不超過6個月。
【專利摘要】本實用新型涉及一種免疫磁珠分離抗酸桿菌檢測試劑盒，包括盒體和盒蓋，所述盒蓋連接在盒體上方，盒蓋與盒體蓋合處設(shè)有密封墊，所述盒體內(nèi)設(shè)有瓶托，所述瓶托設(shè)有凹槽，包括放置載玻片的凹槽、放置蓋玻片的凹槽、放置磁鐵的凹槽、放置玻璃管的凹槽以及放置試劑瓶的凹槽，并且每一個凹槽下面有一個對應(yīng)的標(biāo)明放置物名稱的標(biāo)簽。采用本實用新型的試劑盒進(jìn)行分離抗酸桿菌具有簡單、快速、準(zhǔn)確的特點，無需昂貴的特殊設(shè)備，就能夠在基層醫(yī)院推廣使用。
【IPC分類】C12R1/32, C12M1/34, C12Q1/04
【公開號】CN204625631
【申請?zhí)枴緾N201520050027
【發(fā)明人】楊江華
【申請人】皖南醫(yī)學(xué)院弋磯山醫(yī)院
【公開日】2015年9月9日
【申請日】2015年1月23日