一種快速分離牙髓干細胞的試劑盒的制作方法
【專利摘要】本實用新型公開了一種快速分離牙髓干細胞的試劑盒，試劑盒包括四方體盒體和位于盒體前側(cè)的向一側(cè)開門的盒蓋，盒體內(nèi)側(cè)帶有3層沖著盒蓋的抽屜；第一層抽屜中放置有一次性無菌剪刀1把、一次性無菌250mL塑料杯4只、一次性無菌塑料平皿1只、一次性無菌100um細胞濾網(wǎng)1個、一次性無菌塑料鑷子2把，第二層抽屜中放置有兩個250mL用于裝洗滌液的試劑瓶，第三層抽屜中放置有一個30mL用于裝消化酶的試劑瓶和一個250mL用于裝原代細胞培養(yǎng)基的試劑瓶。本實用新型采用立式的抽屜結(jié)構(gòu)，便于安放于操作柜上，并且可以根據(jù)工作環(huán)境，羅列擺放，解決和操作空間，各個空間分隔清楚，減少交叉感染，徹底解決使用者洗刷器械后的內(nèi)毒素殘留問題，并且預防標本污染。
【專利說明】
一種快速分離牙髓干細胞的試劑盒
技術(shù)領(lǐng)域
[0001]本實用新型涉及分離干細胞的試劑盒，尤其是一種快速分離牙髓干細胞的試劑合
ΙΤΓΤ.0
【背景技術(shù)】
[0002]間充質(zhì)干細胞(mesenchymal stem cells，MSC)在人胎兒和生后多種組織中廣泛存在，包括骨膜、脂肪、羊水、真皮、牙、骨骼肌、胎肺、胎肝、臍血和臍帶等。國際及國內(nèi)的多項研究發(fā)現(xiàn)，牙髓組織MSC細胞含量豐富，具有多向分化潛能、自我更新能力和免疫調(diào)節(jié)能力，脫落的乳牙以及因某些問題拔掉的成人第三磨牙是組織廢棄物，來源廣泛，便于取材，對供者無不利影響，無道德倫理問題的限制，無畸胎瘤風險，不發(fā)生免疫排斥反應(yīng)。
[0003]傳統(tǒng)的牙髓干細胞分離方法雖然比較成熟，但是分離過程所用試劑需要前期配制和準備工作而且過程比較繁瑣，分離耗時較長且原代生長緩慢，標本易污染。
[0004]目前已有的試劑盒只是提供試劑，而不提供所需要的無菌器械，使用者還需要對多種器械進行洗刷和滅菌，以達到無菌無熱原的要求，耗時費力且器械容易殘留內(nèi)毒素。
【實用新型內(nèi)容】
[0005]本實用新型所要解決的技術(shù)問題是，提供了一種大大縮短分離前期試劑配制和準備工作所耗時間的快速分離牙髓干細胞的試劑盒。
[0006]為了解決上述技術(shù)問題，本實用新型采用的技術(shù)方案是:一種快速分離牙髓干細胞的試劑盒，試劑盒包括四方體盒體和位于盒體前側(cè)的向一側(cè)開門的盒蓋，盒體內(nèi)側(cè)帶有3層沖著盒蓋的抽屜；第一層抽屜中放置有一次性無菌剪刀I把、一次性無菌250mL塑料杯4只、一次性無菌塑料平皿I只、一次性無菌10um細胞濾網(wǎng)I個、一次性無菌塑料鑷子2把，第二層抽屜中放置有兩個250mL用于裝洗滌液的試劑瓶，第三層抽屜中放置有一個30mL用于裝消化酶的試劑瓶和一個250mL用于裝原代細胞培養(yǎng)基的試劑瓶。
[0007]所述第一層抽屜分為器械放置區(qū)和耗材放置區(qū)，器械放置區(qū)放有一次性無菌剪刀I把、一次性無菌塑料鑷子2把;耗材放置區(qū)中放有一次性無菌塑料杯4只、一次性無菌塑料平皿I只、一次性無菌10um細胞濾網(wǎng)I個。
[0008]所述第二層抽屜分為兩個獨立的第一洗滌液放置區(qū)和第二洗滌液放置區(qū)，兩個250mL用于裝洗滌液的瓶子分別放在第一洗滌液放置區(qū)和第二洗滌液放置區(qū)中。
[0009]所述第三層抽屜分為兩個獨立的消化酶放置區(qū)和培養(yǎng)基放置區(qū)，一個30mL用于裝消化酶的試劑瓶和一個250mL用于裝原代細胞培養(yǎng)基的試劑瓶分別放在消化酶放置區(qū)和培養(yǎng)基放置區(qū)中。
[0010]本實用新型的有益效果是:采用立式的抽屜結(jié)構(gòu)，便于安放于操作柜上，并且可以根據(jù)工作環(huán)境，羅列擺放，解決和操作空間，各個空間分隔清楚，減少交叉感染，而且徹底解決使用者洗刷器械后的內(nèi)毒素殘留問題，提供洗滌液、消化酶和培養(yǎng)基，提高臍帶分離速度，并且大大縮短分離前期試劑配制和準備工作所耗時間，并且預防標本污染。
【附圖說明】
[0011 ]圖1是本實用新型快速分離牙髓干細胞的試劑盒的整體結(jié)構(gòu)示意圖。
[0012]圖2是本實用新型快速分離牙髓干細胞的試劑盒的第一層結(jié)構(gòu)示意圖。
[0013]圖3是本實用新型快速分離牙髓干細胞的試劑盒的第二層結(jié)構(gòu)示意圖。
[0014]圖4是本實用新型快速分離牙髓干細胞的試劑盒的第三層結(jié)構(gòu)示意圖。
【具體實施方式】
[0015]下面結(jié)合附圖和【具體實施方式】對本實用新型作進一步詳細說明:
[0016]如圖1-4所示，本實用新型的快速分離牙髓干細胞的試劑盒，試劑盒包括四方體盒體4和位于盒體4前側(cè)的向一側(cè)開門的盒蓋5，盒體4內(nèi)側(cè)帶有3層沖著盒蓋的抽屜;第一層抽屜I中放置有一次性無菌剪刀I把、一次性無菌250mL塑料杯4只、一次性無菌塑料平皿I只、一次性無菌10um細胞濾網(wǎng)I個、一次性無菌塑料鑷子2把，第二層抽屜2中放置有兩個250mL用于裝洗滌液的試劑瓶，第三層抽屜3中放置有一個30mL用于裝消化酶的試劑瓶和一個250mL用于裝原代細胞培養(yǎng)基的試劑瓶。
[0017]所述第一層抽屜I分為器械放置區(qū)IA和耗材放置區(qū)IB，器械放置區(qū)IA放有一次性無菌剪刀I把、一次性無菌塑料鑷子2把;耗材放置區(qū)IB中放有一次性無菌塑料杯4只、一次性無菌塑料平皿I只、一次性無菌10um細胞濾網(wǎng)I個。
[0018]所述第二層抽屜2分為兩個獨立的第一洗滌液放置區(qū)2A和第二洗滌液放置區(qū)2B，兩個250mL用于裝洗滌液的瓶子分別放在第一洗滌液放置區(qū)2A和第二洗滌液放置區(qū)2B中。
[0019]所述第三層抽屜3分為兩個獨立的消化酶放置區(qū)3A和培養(yǎng)基放置區(qū)3B，一個30mL用于裝消化酶的試劑瓶和一個250mL用于裝原代細胞培養(yǎng)基的試劑瓶分別放在消化酶放置區(qū)3A和培養(yǎng)基放置區(qū)3B中。
[0020]具體地說，所述第二層抽屜中設(shè)有250mL洗滌液2瓶，為含有200U/mL青霉素、200U/HiL鏈霉素的PBS溶液。所述30mL消化酶I瓶，為質(zhì)量/體積百分比濃度為0.2%的IV型膠原酶和0.4%的分解酶溶液。所述25011^原代細胞培養(yǎng)基1瓶，為含有801^/11^ EGF、120ng/mL、10%胎牛血清的頂EM溶液。
[0021 ]上述快速分離牙髓干細胞的試劑盒使用方法如下:
[0022]步驟一:分別打開第一層抽屜器械耗材放置區(qū)域中的3個250ml—次性無菌塑料杯。
[0023]步驟二:打開第二層抽屜洗滌液放置區(qū)的洗滌液I瓶，分別加入至三個一次性塑料杯中，大約每個80mL。
[0024]步驟三:打開第一層抽屜器械耗材放置區(qū)中的一次性無菌鑷子，將牙齒放入步驟二中的裝有洗滌液的I個塑料杯中洗滌。
[0025]步驟四:用一次性無菌鑷子將牙齒放入第2個塑料杯中繼續(xù)清洗，在第3個塑料杯中重復洗滌。
[0026]步驟五:將第一層抽屜器械耗材放置區(qū)中的一次性無菌平皿取出，用一次性無菌鑷子將牙齒放入一次性無菌平皿中心，使用無菌牙鉆機鉆開牙齒，取出牙髓。
[0027]步驟六:將第一層抽屜器械耗材放置區(qū)中的一次性無菌剪刀取出，用一次性無菌剪刀將牙髓剪碎。
[0028]步驟七:將第三層抽屜消化酶放置區(qū)的消化酶取出，將取出的牙髓組織放入50mL離心杯中，按照每克牙髓組織ImL消化酶的比例，加入消化酶后，放入搖床中37°C，140r/min消化60min。
[0029]步驟八:取出第一層抽屜器械耗材放置區(qū)的一次性細胞篩網(wǎng)，再將洗滌液放置區(qū)的第二瓶洗滌液取出，消化后，向離心管中加入40mL洗滌液洗滌后經(jīng)過一次性細胞篩網(wǎng)過濾，將固體過濾后，將細胞懸液1000r/min，5min離心，重復離心操作一次。
[0030]步驟九:將第三層抽屜培養(yǎng)基放置區(qū)的培養(yǎng)基取出，加入離心后的沉淀物中，充分混勻后加入培養(yǎng)瓶中。待24小時后換液。
[0031]綜上所述，本實用新型的內(nèi)容并不局限在上述的實施例中，相同領(lǐng)域內(nèi)的有識之士可以在本實用新型的技術(shù)指導思想之內(nèi)可以輕易提出其他的實施例，但這種實施例都包括在本實用新型的范圍之內(nèi)。
【主權(quán)項】
1.一種快速分離牙髓干細胞的試劑盒，其特征在于，試劑盒包括四方體盒體(4)和位于盒體(4)前側(cè)的向一側(cè)開門的盒蓋(5)，盒體(4)內(nèi)側(cè)帶有3層沖著盒蓋的抽屜;第一層抽屜(I)中放置有一次性無菌剪刀I把、一次性無菌250mL塑料杯4只、一次性無菌塑料平皿I只、一次性無菌10um細胞濾網(wǎng)I個、一次性無菌塑料鑷子2把，第二層抽屜(2)中放置有兩個250mL用于裝洗滌液的試劑瓶，第三層抽屜(3)中放置有一個30mL用于裝消化酶的試劑瓶和一個250mL用于裝原代細胞培養(yǎng)基的試劑瓶。2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的快速分離牙髓干細胞的試劑盒，其特征在于，所述第一層抽屜(1)分為器械放置區(qū)(IA)和耗材放置區(qū)(IB)，器械放置區(qū)(IA)放有一次性無菌剪刀I把、一次性無菌塑料鑷子2把;耗材放置區(qū)(IB)中放有一次性無菌塑料杯4只、一次性無菌塑料平皿I只、一次性無菌10um細胞濾網(wǎng)I個。3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的快速分離牙髓干細胞的試劑盒，其特征在于，所述第二層抽屜(2)分為兩個獨立的第一洗滌液放置區(qū)(2A)和第二洗滌液放置區(qū)(2B)，兩個250mL用于裝洗滌液的瓶子分別放在第一洗滌液放置區(qū)(2A)和第二洗滌液放置區(qū)(2B)中。4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的快速分離牙髓干細胞的試劑盒，其特征在于，所述第三層抽屜(3)分為兩個獨立的消化酶放置區(qū)(3A)和培養(yǎng)基放置區(qū)(3B)，一個30mL用于裝消化酶的試劑瓶和一個250mL用于裝原代細胞培養(yǎng)基的試劑瓶分別放在消化酶放置區(qū)(3A)和培養(yǎng)基放置區(qū)(3B)中。
【文檔編號】C12N5/0775GK205635588SQ201620452914
【公開日】2016年10月12日
【申請日】2016年5月18日
【發(fā)明人】張冰晶, 魯振宇, 韓洪起, 秦臻, 劉俊江, 徐悅, 黃文敬
【申請人】天津普瑞賽爾生物科技有限公司