一種用于組織塊消化法培養(yǎng)細(xì)胞的試劑盒的制作方法
【專利摘要】本實(shí)用新型提供一種用于組織塊消化法培養(yǎng)細(xì)胞的試劑盒，包括離心管和下端伸至離心管內(nèi)的消化管，消化管的底部為40?80目的平底篩網(wǎng)結(jié)構(gòu)或60?200目向下方凸起的篩網(wǎng)結(jié)構(gòu)。為了滿足工廠生產(chǎn)與實(shí)驗(yàn)室小劑量培養(yǎng)細(xì)胞的需求，用于各類不同細(xì)胞的初步提純與培養(yǎng)，以解決目前細(xì)胞培養(yǎng)時(shí)所使用的工具結(jié)構(gòu)過于簡(jiǎn)單，設(shè)計(jì)不合理，離心后得到的細(xì)胞較少等的問題。本實(shí)用新型屬于細(xì)胞培育領(lǐng)域。
【專利說明】
一種用于組織塊消化法培養(yǎng)細(xì)胞的試劑盒
技術(shù)領(lǐng)域
[0001] 本實(shí)用新型涉及一種細(xì)胞培養(yǎng)試劑盒，屬于細(xì)胞培育領(lǐng)域。
【背景技術(shù)】
[0002] 細(xì)胞培養(yǎng)是生物學(xué)研究的基礎(chǔ)工作，也是生物制藥業(yè)所必須的步驟之一。近年來， 上皮細(xì)胞以及其他功能細(xì)胞的培養(yǎng)技術(shù)逐漸成熟，效率不斷提升，但目前細(xì)胞培養(yǎng)時(shí)所使 用的工具結(jié)構(gòu)過于簡(jiǎn)單，設(shè)計(jì)不合理，離心后得到的細(xì)胞較少，不易滿足工廠生產(chǎn)與實(shí)驗(yàn)室 小劑量培養(yǎng)細(xì)胞的需求。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0003] 本實(shí)用新型的目的在于：為了滿足工廠生產(chǎn)與實(shí)驗(yàn)室小劑量培養(yǎng)細(xì)胞的需求，特 提供一種用于組織塊消化法培養(yǎng)細(xì)胞的試劑盒，用于各類不同細(xì)胞的初步提純與培養(yǎng)，以 解決目前細(xì)胞培養(yǎng)時(shí)所使用的工具結(jié)構(gòu)過于簡(jiǎn)單，設(shè)計(jì)不合理，離心后得到的細(xì)胞較少等 的問題。
[0004] 本實(shí)用新型的方案如下：一種用于組織塊消化法培養(yǎng)細(xì)胞的試劑盒，包括離心管 和下端伸至離心管內(nèi)的消化管，消化管的底部為40-80目的平底篩網(wǎng)結(jié)構(gòu)或60-200目向下 方凸起的篩網(wǎng)結(jié)構(gòu)。
[0005] 消化管的上端卡至離心管的上端開口處，且離心管的上端由消化管的上端封閉， 消化管的上端對(duì)應(yīng)設(shè)置有可拆卸式的頂蓋，頂蓋通過連接部與離心管的本體連接為一體， 離心管和消化管之間為可拆卸式結(jié)構(gòu)；
[0006] 優(yōu)選地，消化管的容積為0.5ml;
[0007] 優(yōu)選地，離心管的長(zhǎng)度至少是消化管長(zhǎng)度的1.3倍；
[0008] 優(yōu)選地，離心管的底部為錐形或類錐形結(jié)構(gòu)，便于細(xì)胞的收集；
[0009] 優(yōu)選地，離心管的內(nèi)徑與消化管下端的外徑相同，且消化管上端的內(nèi)徑與離心管 的內(nèi)徑相同；
[0010] 本實(shí)用新型與現(xiàn)有技術(shù)相比，主要優(yōu)點(diǎn)是將該試劑盒配合離心機(jī)使用，能夠?yàn)楦?類不同細(xì)胞進(jìn)行初步提純與培養(yǎng)，結(jié)構(gòu)簡(jiǎn)單，且設(shè)計(jì)更為合理，離心后提純得到的細(xì)胞較 多，且提純效果更好，足以滿足目前工廠生產(chǎn)與實(shí)驗(yàn)室小劑量培養(yǎng)細(xì)胞的需求。
【附圖說明】
[0011] 圖1是該試劑盒組合后的結(jié)構(gòu)示意圖；
[0012] 圖2是離心管的結(jié)構(gòu)示意圖；
[0013]圖3是消化管的結(jié)構(gòu)示意圖。
【具體實(shí)施方式】
[0014]為使本實(shí)用新型的目的、技術(shù)方案和優(yōu)點(diǎn)更加清楚，便于細(xì)胞培養(yǎng)的規(guī)范化操作， 下面將參照附圖對(duì)本實(shí)用新型作進(jìn)一步地詳細(xì)描述，
[0015] 實(shí)施例：
[0016] 參照?qǐng)D1至圖3,本實(shí)施例提供一種用于組織塊消化法培養(yǎng)細(xì)胞的試劑盒，包括離 心管1和下端伸至離心管1內(nèi)的消化管2，離心管1的底部為錐形結(jié)構(gòu)，消化管2的容積為 0.5ml，離心管1的長(zhǎng)度是消化管2長(zhǎng)度的1.5倍，離心管1和消化管2之間為可拆卸式結(jié)構(gòu)，消 化管2的上端卡至離心管1的上端開口處，且離心管1的上端由消化管2的上端封閉，消化管2 的上端對(duì)應(yīng)設(shè)置有可拆卸式的頂蓋3,頂蓋3通過連接部4與離心管1的本體連接為一體，離 心管1的內(nèi)徑與消化管2下端的外徑相同，且消化管2上端的內(nèi)徑與離心管1的內(nèi)徑相同，消 化管2的底部為40-80目的平底篩網(wǎng)結(jié)構(gòu)。
[0017] 1.細(xì)胞培養(yǎng)及提純方法：
[0018]按照lmL規(guī)格的離心管1的比例，使用原理是將一定量組織塊加入消化管2中，且同 時(shí)加入A1、P1各0.3mL，將消化管2與離心管1組合，使液體自然落入離心管1中（如果液體不 自然落下，可作用1分鐘左右后人工甩數(shù)下或離心將其離下），丟棄離心管1中液體(可保留 小部分），在離心管1底部加入〇.lmLF1做保護(hù)液；根據(jù)表3的參數(shù)與建議，隨后在消化管2 中加入消化液lmL，將其放入細(xì)胞培養(yǎng)箱消化(時(shí)間根據(jù)不同消化液與組織類型參考表4)， 待消化液掉入離心管1后，再加消化液至淹沒組織塊，放入培養(yǎng)箱消化(時(shí)間參考建議參數(shù)， 即表4)，3000轉(zhuǎn)/min離心3分鐘后，取出消化管2(可換一個(gè)干凈的離心管1繼續(xù)用于消化）， 將上清液去掉，加入O.lmL的基礎(chǔ)試劑F1，可再加入P1 0.3mL和A1O.lmL離心洗滌一次， 將所得細(xì)胞懸浮按照合適的配方培養(yǎng)液培養(yǎng)即可。
[0019] 2.基礎(chǔ)試劑成分與作用原理
[0020] 2.1試劑P1成分與作用原理
[0021] 磷酸鹽緩沖液。其主要成分為每100mL該溶液含有NaCl0.8g，KCl0.02g，NaHP04 0.142g，KH2P04 0.027g，高溫高壓滅菌，無菌條件下分裝，常溫?zé)o菌保存有效期 3個(gè)月，4°C保存有效期6個(gè)月；該溶液為生理等滲溶液，PH維持在7.5±0.4。
[0022]該溶液主要的作用是洗滌細(xì)胞與組織塊且不破壞細(xì)胞的功能與結(jié)構(gòu)，且能在較大 范圍內(nèi)緩沖維持體系內(nèi)的酸堿度，保護(hù)細(xì)胞免受酸堿環(huán)境影響。
[0023] 2.2試劑F1成分與作用原理
[0024]消化終止液。成為為含有20%胎牛血清的等滲溶液，主要成分是體積分?jǐn)?shù)20%胎牛 血清，79%P1成分，1%A1成分。無菌條件下配制，不得輻照、高溫、高壓等使得蛋白變性的操 作，否則失效。常溫保存有效期2個(gè)月，4°C保存最長(zhǎng)5個(gè)月，且不得反復(fù)凍融。
[0025]該成分的主要作用成分是血清，主要作用原理是競(jìng)爭(zhēng)性抑制，其中的蛋白有效成 分與胰酶競(jìng)爭(zhēng)性結(jié)合，使得胰酶終止消化組織與細(xì)胞。P1起著緩沖PH與保護(hù)細(xì)胞作用，A1能 在儲(chǔ)存過程中有效抑制細(xì)菌。
[0026] 2.3試劑A1成分與作用原理
[0027] 抗生素。主要成分是青霉素和鏈霉素，該成分100mL含有青霉素粉劑和鏈霉素粉劑 各1g。將其使用去離子水充分溶解后，使用0.22wii細(xì)菌濾器過濾分裝，常溫保存超過6個(gè) 月，凍存后可長(zhǎng)期保存，解凍后有效期不受影響，不得過量使用，否則影響細(xì)胞生長(zhǎng)。
[0028] 該成分的主要作用是抑制培養(yǎng)體系以及操作過程中帶來的細(xì)菌的污染，青霉素能 有效抑制體系中的格蘭仕陽性菌，而鏈霉素能有效抑制格蘭仕陰性菌。
[0029] 2.4消化液成分與作用原理
[0030]消化液T1成分與作用原理
[0031 ]胰酶消化液。該溶液主要成分是胰蛋白酶，每100mL成分含有胰酶0.25g，質(zhì)量體 積分?jǐn)?shù)為〇. 25%。將0.25g胰酶溶解在100mL無菌去離子水里，0.22mi除菌濾器過濾。凍存 條件下長(zhǎng)期保存，自然解凍后使用;常溫條件下有效期6個(gè)月，4°C有效期為一年。該溶液不 耐高溫，不能輻照及較為劇烈的環(huán)境，最適應(yīng)使用溫度為37°C。
[0032]該成分的主要作用原理為蛋白酶與細(xì)胞與組織塊中的蛋白質(zhì)結(jié)合，首先作用細(xì)胞 之間的連接，使得細(xì)胞內(nèi)部張力變化形成球形，更容易通過消化管2中的濾網(wǎng)；使用中應(yīng)重 點(diǎn)考慮其作用時(shí)間，否則會(huì)引起細(xì)胞的過度消化而喪失活力。
[0033] 3.試劑盒部分使用參數(shù)及條件
[0034]
[0035]
【主權(quán)項(xiàng)】
1. 一種用于組織塊消化法培養(yǎng)細(xì)胞的試劑盒，其特征在于:包括離心管（1)和下端伸至 離心管（1)內(nèi)的消化管(2)，消化管(2)的底部為40-80目的平底篩網(wǎng)結(jié)構(gòu)或60-200目向下方 凸起的篩網(wǎng)結(jié)構(gòu)。2. 根據(jù)權(quán)利要求1所述一種用于組織塊消化法培養(yǎng)細(xì)胞的試劑盒，其特征在于:消化管 (2)的上端卡至離心管（1)的上端開口處，且離心管（1)的上端由消化管（2)的上端封閉，消 化管(2)的上端對(duì)應(yīng)設(shè)置有可拆卸式的頂蓋(3)，頂蓋(3)通過連接部(4)與離心管（1)的本 體連接為一體。3. 根據(jù)權(quán)利要求1所述一種用于組織塊消化法培養(yǎng)細(xì)胞的試劑盒，其特征在于:離心管 (1) 和消化管(2)之間為可拆卸式結(jié)構(gòu)。4. 根據(jù)權(quán)利要求1所述一種用于組織塊消化法培養(yǎng)細(xì)胞的試劑盒，其特征在于:消化管 (2) 的容積為0.5ml。5. 根據(jù)權(quán)利要求1所述一種用于組織塊消化法培養(yǎng)細(xì)胞的試劑盒，其特征在于:離心管 (1)的長(zhǎng)度至少是消化管(2)長(zhǎng)度的1.3倍。6. 根據(jù)權(quán)利要求1所述一種用于組織塊消化法培養(yǎng)細(xì)胞的試劑盒，其特征在于:離心管 (1)的底部為錐形或類錐形結(jié)構(gòu)。7. 根據(jù)權(quán)利要求2所述一種用于組織塊消化法培養(yǎng)細(xì)胞的試劑盒，其特征在于:離心管 (1)的內(nèi)徑與消化管（2)下端的外徑相同，且消化管（2)上端的內(nèi)徑與離心管（1)的內(nèi)徑相 同。
【文檔編號(hào)】C12M3/08GK205687953SQ201620548884
【公開日】2016年11月16日
【申請(qǐng)日】2016年6月8日 公開號(hào)201620548884.9, CN 201620548884, CN 205687953 U, CN 205687953U, CN-U-205687953, CN201620548884, CN201620548884.9, CN205687953 U, CN205687953U
【發(fā)明人】陳偉明, 李鍵
【申請(qǐng)人】陳偉明