專利名稱：：含疏水蛋白的鉆井液的制作方法含疏水蛋白的鉆井液描述本發(fā)明涉及含疏7K蛋白或其衍生物之一的鉆井液，并涉及疏水蛋白用作鉆井液的助劑的用途。通常，鉆井液的任務(wù)是簡化開發(fā)新沉積物(例如礦物油或天然氣)過程中經(jīng)常艮難的鉆摞:操作。目的是支持鉆探操作和輸送此過程中產(chǎn)生的巖石碎片。鉆頭和鉆桿需要潤滑和冷卻。此外，需要補(bǔ)償沉積物的流體靜壓力，這是經(jīng)常使用高比重鉆井液的原因。井壁也應(yīng)當(dāng)有襯。商業(yè)4吏用的鉆井液的重要特性包括適當(dāng)?shù)恼扯群土黧w性質(zhì)、密度、熱穩(wěn)定性、乳化和分散能力、pH控制、尤其是高度的環(huán)境相容性。既然對(duì)新原材料的搜尋在世界的許多地方仍在繼續(xù)，并且也需要在閉塞的地點(diǎn)(例如遠(yuǎn)離海岸或在熱帶叢林中)經(jīng)常進(jìn)行深層鉆探，那么就存在新鉆探助劑，尤其是滿足高水平技術(shù)需求并可廉價(jià)生產(chǎn)和現(xiàn)場使用的鉆井液助劑的需要。此外，鉆井液也應(yīng)該是保藏穩(wěn)定的并且經(jīng)長時(shí)間可使用的。在釋》文到環(huán)境的事件中鉆井液不導(dǎo)致動(dòng)物和植物世界的持續(xù)破壞也是尤其重要的。疏水蛋白是100-150個(gè)M酸的小蛋白質(zhì)，其可從絲狀真菌產(chǎn)生，如從裂褶菌(^/'^/;/^//|/附o附柳Mwe)產(chǎn)生。它們通常每個(gè)分子具有8個(gè)半胱氨酸單位。疏水蛋白對(duì)界面具有顯著的親和力并因此適于包被表面，例如通過形成雙親性膜改變界面的性質(zhì)。例如，可通過疏7JC蛋白的方法包被塑料特氟隆以獲得兩親表面。疏水蛋白可從天然來源分離。此外，也已知疏7K蛋白及其衍生物的合成生產(chǎn)方法。例如，德國專利申請(qǐng)DE102005007480.4公開了疏水蛋白及其衍生物的生產(chǎn)方法。現(xiàn)有技術(shù)已經(jīng)提出疏水蛋白在各種應(yīng)用中的用途。例如，EP-A05016962描述了蛋白質(zhì)促進(jìn)例如油/水或燃料/水混合物分相的用途。本領(lǐng)域技術(shù)人員已知個(gè)別雙親性分子取決于使用濃度和周圍介質(zhì)可對(duì)相界面具有穩(wěn)定或去穩(wěn)定作用。WO96/41882提出了疏水蛋白用作乳化劑、增稠劑、表面活性劑的用途，用于疏7JC表面親水化、提高親7jC基質(zhì)的抗水性、產(chǎn)生水包油或油包水的乳濁液的用途。還提出了藥學(xué)應(yīng)用(如生產(chǎn)軟膏或乳劑)和美容應(yīng)用(如護(hù)膚或生產(chǎn)洗發(fā)香波或洗發(fā)劑)。WO96/41882還描述了例如用于藥學(xué)應(yīng)用的含疏水蛋白的組合物。EP-A1252516公開了在30-80°C的溫度用含疏7JC蛋白溶液包被窗戶、隱形鏡片、生物傳感器、醫(yī)療儀器、進(jìn)行檢測或用于存儲(chǔ)的管道、船舶外殼、固體顆?；蚩蛙嚨能噧r(jià)和地盤。WO03/53383描述了疏水蛋白在美容應(yīng)用中用于處理角蛋白材料的用途。WO03/10331公開了疏水蛋白具有表面活性性質(zhì)。例如，公開了疏水蛋白包被的傳感器，例如非共價(jià)結(jié)合另外的物質(zhì)(例如電活性物質(zhì)、抗體或酶)的檢測電極。WO2004/000880提出了用疏水蛋白或疏水蛋白樣物質(zhì)包,iL4面。同樣/>開了水包油或油包水乳濁液也可通過加入疏水蛋白穩(wěn)定。涉及疏K蛋白樣蛋白質(zhì)的WO01/74864也描述了它們可用于穩(wěn)定^液和乳濁液。蛋白質(zhì)用于分相的用途也基本已知。例如，GB195,876描述了用膠體破壞油包水乳濁液的方法。以舉例方式提到的膠體為蛋白質(zhì)，如明膠、酪蛋白、清蛋白，或者為多糖，如阿拉伯膠或黃蓍樹膠。JP-A11-169177公開了具有脂酶活性的蛋白質(zhì)用于破壞乳濁液的用途。WO01/60916公開了至少一種水溶性蛋白質(zhì)、至少一種水溶性多糖和至少一種水溶性高聚物(例如聚環(huán)氧乙烷)的無表面活性劑的混合物的多種用途，也包括原油破乳化的用途。然而，所引用的文獻(xiàn)中都沒有>5^開疏水蛋白用作鉆井液中的助劑的用途。本發(fā)明提供了疏水蛋白用作鉆井液的助劑的用途，所用的疏水蛋白特別地用作鉆井液中的乳化劑。所用的疏水蛋白優(yōu)選地為融合疏水蛋白，尤其為選自之后提到的yaad國Xa-dewA-his(SEQIDNO:20)、yaad國Xa國rodA曙his(SEQIDNO:22)或yaad-Xa-basfl-his(SEQIDNO:24)的融合疏水蛋白，其中yaad也可為具有20-293個(gè)氨基酸的截短融合配偶體yaad，。鉆井液通常由一種或更多種液體和懸浮或溶解的固體組成，所述的液體例如水、原油和有機(jī)添加劑或溶劑。水成鉆井液、基于油的鉆井液和合成鉆井液的差別取決于主要液體成分的類型。在發(fā)明的鉆井液中，優(yōu)選使用基于油的鉆井液(例如柴油、礦物油)。同樣，優(yōu)選使用基于全部組成的0.1-10000ppm、優(yōu)選地1-1000ppm、尤其是1-600卯m量的疏水蛋白(也可以同時(shí)使用多種疏水蛋白)。優(yōu)勢(shì)之一是所用的疏水蛋白的量顯著低于常規(guī)乳化劑情況中所用的量，后者使用以重量計(jì)為2-10%的量。鉆井液優(yōu)選地為基于油的鉆井液，其包含以重量計(jì)為40-95%、優(yōu)選地以重量計(jì)為70-95%的至少一種油成分、以重量計(jì)為2-80%、優(yōu)選地以重量計(jì)為2-30%的水，以及才艮據(jù)需要的另外的成分。另外的有用成分包括例如下列物質(zhì)a)鹽(例如堿金屬和堿土金屬氯化物、堿金屬和堿土金屬溴化物、堿金屬和堿土金屬碳酸鹽；這些鹽也經(jīng)常起到控制pH值的作用)，b)補(bǔ)償液體損失的添加劑(例如膨潤土、淀粉、纖維素或其衍生物)，c)著濕劑C使上述添加劑(例如膨潤土)可油濕潤)，d)流動(dòng)改進(jìn)劑(降低流阻，例如丙烯酸類樹脂、聚硅氧烷、聚氨基曱e)增加鉆井液比重的添加劑(例如重晶石、赤鐵礦、磁鐵礦、鈥鐵礦、菱鐵礦、白云石、方解石、氯化鈉)，f)乳化劑(例如脂肪酸鹽、聚酰胺)，g)其它添加劑，例如M劑、流體損失添加劑、聚合物或共聚物、胺(例如聚丙烯酰胺)，h)增粘添加劑(例如膨潤土、石絨)。在本發(fā)明優(yōu)選的實(shí)施方案中，使用至少一種促進(jìn)乳濁液形成的另外的化合物和疏水蛋白。本發(fā)明也涉及鉆井的方法，尤其涉及開發(fā)地下沉積物、尤其是開發(fā)油和氣的方法，其中使用包含至少一種疏水蛋白或其衍生物的鉆井液。優(yōu)選^f吏用上述融合疏水蛋白。在鉆探過程中，通常使用基于油的鉆井液，其包含以重量計(jì)為40-95%的至少一種油成分(例如生物柴油)、以重量計(jì)為2-60%的水(例如淡水或海水)以及根據(jù)需要的另外的成分。本發(fā)明還提供了鉆井液本身，其包含至少一種疏水蛋白。在特別的實(shí)施方案中，鉆井液包含以重量計(jì)為70-95%的至少一種油成分(例如生物柴油)、以重量計(jì)為2-30%的水，以及根據(jù)需要以重量計(jì)最多為13%的另外的成分(例如膨潤土和/或氯化釣)。本發(fā)明也涉及生產(chǎn)鉆井液的方法，其中疏水蛋白成分和鉆井液的其余成分完全混合。這可在工業(yè)生產(chǎn)地點(diǎn)或其它地點(diǎn)完成，例如在鉆井平臺(tái)完成。使用蛋白質(zhì)(如疏水蛋白)作為鉆探助劑具有這樣的優(yōu)勢(shì)，它們是天然存在的或天然類似的物質(zhì)，其是可生物降解的從而不引起對(duì)環(huán)境的持續(xù)破壞。在例如鉆探油沉積物的許多大M^應(yīng)用中，關(guān)鍵因素是所用助劑的非常長時(shí)間的持續(xù)可用性。本發(fā)明的目的是提供使用特定蛋白質(zhì)進(jìn)行地球鉆探的改進(jìn)的方法。在本發(fā)明中，疏7K蛋白也理解為是指其衍生物或經(jīng)修飾的疏水蛋白。經(jīng)修飾的或矛;t生的疏水蛋白可例如為疏水蛋白融合蛋白或與疏水蛋白的序列具有至少60%同一性，例如至少70%同一性、尤其至少80%同一性、更優(yōu)選地至少90%同一性、甚至優(yōu)選地至少95%同一性的蛋白質(zhì)和滿足疏水蛋白生物學(xué)特性達(dá)50%的程度，例如達(dá)60%的程度、特別是達(dá)70%的程度、更優(yōu)選地達(dá)80%的程度的蛋白質(zhì)，特別是通過用這些蛋白質(zhì)包被改變表面性質(zhì)以使用蛋白質(zhì)包被玻璃表面之前或之后的水滴接觸角增加至少20°、優(yōu)選地至少25。、尤其是至少30。的性質(zhì)。已經(jīng)驚奇地發(fā)現(xiàn)疏水蛋白或其衍生物在尋找和開發(fā)沉積物中提高鉆探性能。這也是基于防止鉆井液和所輸送物質(zhì)的快速分相的事實(shí)。在本文中，甚至小量的疏水蛋白都相當(dāng)有效。對(duì)定義疏水蛋白來說關(guān)鍵的是疏水蛋白的結(jié)構(gòu)特異性而非序列特異性。天然疏水蛋白的M酸序列非常多樣，但是它們都具有8個(gè)保守半胱氨酸殘基的高度特征性模式。這些殘基形成四個(gè)分子內(nèi)二硫鍵。N端和C端可在相對(duì)大的范圍內(nèi)變化。在此可以通過本領(lǐng)域技術(shù)人員已知的分子生物學(xué)技術(shù)向融合配偶體添加一個(gè)長10-500個(gè)氨基酸的蛋白質(zhì)。此外，疏水蛋白及其衍生物在本發(fā)明中理解為是指具有相似結(jié)構(gòu)并且功能相當(dāng)?shù)牡鞍踪|(zhì)。在本發(fā)明中，術(shù)語"疏水蛋白"在此后應(yīng)理解為是指通用結(jié)構(gòu)式(I)的多肽Xn-C^-Xi.50畫C2-Xo畫5-C3畫Xi.ioo-C4-Xi一iO(rC5-Xi畫50-C6畫Xo-5畫C7-Xi.50一C8-Xm(1)其中X可為20個(gè)天然存在氨基酸(Phe、Leu、Ser、Tyr、Cys、Trp、Pro、His、Gln、Arg、Ile、Met、Thr、Asn、Lys、Val、Ala、Asp、Glu、Gly)中的任何一個(gè)。在式中，X在每一種情況中可相同或不同。X旁邊的每一個(gè)指數(shù)為氨基酸的量，c為半胱氨酸、丙氨酸、絲氨酸、甘氨酸、甲硫氨酸或蘇氨酸，其中至少四個(gè)命名為C的殘基為半胱氨酸，指數(shù)n和m為0-500間，優(yōu)選地15-300間的互相獨(dú)立的自然數(shù)。式(I)多肽的特征也在于，室溫包,皮玻璃表面之后與未包4皮玻璃表面上相同大小水滴的接觸角的每一種情況相比，它們引起水滴的接觸角增加至少20°，優(yōu)選地至少25。并且更優(yōu)選地至少30°。命名為d到C8的M酸優(yōu)選地為半胱氨酸；然而，它們也可以由其它具有相似空間填充的^J^酸替代，優(yōu)選地由丙氨酸、絲氨酸、蘇氨酸、甲石充氨酸或甘氨酸替代。然而，位點(diǎn)d到(:8的至少4個(gè)、優(yōu)選地至少5個(gè)、更優(yōu)選地至少6個(gè)和尤其是至少7個(gè)應(yīng)該由半胱氨酸組成。在發(fā)明的蛋白質(zhì)中，半胱氨酸可以還原形式存在或與另一個(gè)氨基酸形成二石克鍵。尤其優(yōu)選的是分子內(nèi)形成C-C鍵，特別是至少一個(gè)分子內(nèi)二硫鍵、優(yōu)選地至少2個(gè)、更優(yōu)選地至少3個(gè)和最優(yōu)選地至少4個(gè)分子內(nèi)二硫鍵。在上述半胱氨酸交換為具有相似空間填充的氨基酸的情況中，此類C位點(diǎn)有利地成對(duì)交換，其可與另一個(gè)氨基酸形成分子內(nèi)二石克鍵。如果半胱氨酸、絲氨酸、丙氨酸、甘氨酸、甲硫氨酸或蘇氨酸也用在命名為X的位置，通式中各個(gè)C位置的編號(hào)可相應(yīng)地改變。優(yōu)選使用通式(II)的疏水蛋白開展本發(fā)明Xn-C、X3-25-C2-Xo陽2-C3-X5-50-C4-X2隱35-C5隱X2-l5國C6-Xo-2-C7誦X3-35-C8-Xm(II)其中X、C以及X和C旁的每一個(gè)指數(shù)如上所定義，指數(shù)n和m每一個(gè)為0-300的數(shù)字，蛋白質(zhì)還具有上述接觸角變化的特點(diǎn)，此外，至少6個(gè)命名為C的殘基為半胱氨酸。更優(yōu)選地，所有C殘基為半胱氨酸。尤其優(yōu)選使用通式(III)的疏水蛋白Xn-C^國X5-9-C2-C3-Xii-39-C4-X2-23-C5畫X5-9國C6-C7畫X6-l8國C8畫Xm(III)其中X、C以及X旁的每一個(gè)指數(shù)為如上所定義，指數(shù)n和m每一個(gè)為0-200的數(shù)字，蛋白質(zhì)還具有上述接觸角變化的特點(diǎn)，命名為C的殘基中至少6個(gè)為半胱氨酸。更優(yōu)選地，所有的C殘基為半胱氨酸。Xn和Xm殘基可為天然地也與疏水蛋白連接的肽序列。然而，一個(gè)或兩個(gè)殘基也可為天然不與疏水蛋白連接的肽序列。這也理解為是指疏水蛋白中天然存在的肽序列中的Xn和/或Xm殘基由疏水蛋白中天然不存在的肽序列延長。如果Xn和/或Xm為天然不與疏水蛋白連接的肽序列，此類序列通常長度為至少20個(gè)、優(yōu)選地至少35個(gè)、更優(yōu)選地至少50個(gè)并且最優(yōu)選地100個(gè)氨基酸。天然不與疏7jC蛋白連接的此殘基在此后也稱為融合配偶體。這意在表達(dá)可由至少一個(gè)疏水蛋白部分和天然不以這種方式一起出現(xiàn)的融合配偶體部分組成。融合配偶體部分可選自多種蛋白質(zhì)。許多融合配偶體也可以與一個(gè)疏水蛋白部分連接，例如在疏水蛋白部分的氨基端(Xn)和g端(XnO上連接。然而，也可以例如兩個(gè)融合配偶體連接到本發(fā)明蛋白質(zhì)的一個(gè)位置(Xn或xm)。尤其適合的融合配偶體為微生物中天然存在的蛋白質(zhì)，特別是大腸桿菌(E.coli)或枯草芽胞桿菌(Bacillussubtilis)中存在的蛋白質(zhì)。此類融合配偶體的實(shí)例為序列yaad(SEQIDNO:15和16)、yaae(SEQIDNO:17和18)和石克氧還蛋白。同樣非常適合的是這些序列的片段或衍生物，其只包含一些所述序列，例如所述序列的70-99%、優(yōu)選地5-50%、更優(yōu)選地10-40%、或者與所述序列相比改變了單個(gè)M酸或核苷酸，其中每一個(gè)百分氣基于氨基酸的量。在其它優(yōu)選的實(shí)施方案中，融合疏水蛋白以及作為Xn或Xm基團(tuán)的融合配偶體也具有所謂的親和結(jié)構(gòu)域(親和標(biāo)簽/親和尾部)。這以理論上已知錨定基團(tuán)。此類親和結(jié)構(gòu)域的實(shí)例包括(His)k、(Arg)k、(Asp)k、(Phe)k或(Cys)k基團(tuán)，其中k通常為l-10的自然數(shù)。其可優(yōu)選地為(His)k基團(tuán)，其中k為4-6。根據(jù)本發(fā)明作為疏水蛋白或其f汴生物4吏用的蛋白質(zhì)也可在其多肽序列中得到小務(wù)飾，例如通it^t基化、乙?；揎椈蛘吡硗馔ㄟ^化學(xué)交聯(lián)修飾，例如用戊二搭^f務(wù)飾。根據(jù)本發(fā)明使用的疏水蛋白或其衍生物的一個(gè)特性是當(dāng)表面用蛋白質(zhì)包被時(shí)表面性質(zhì)的改變?？蓪?shí)驗(yàn)測定表面性質(zhì)的變化，例如通過測量用蛋白質(zhì)包凈皮表面之前和之后的水滴接觸角并確定兩個(gè)測量的差異。接觸角測量的操作為本領(lǐng)域技術(shù)人員在理論上已知的。測量是基于室溫、5w水滴和用玻璃板作為基質(zhì)。實(shí),分給出了精確的實(shí)lNHf，例如測量接觸角的適當(dāng)方法。在其中所述M下，與每一種情況未包被玻璃至少20°、優(yōu)選地至少25°、更優(yōu)選地至少30。的特性。開展本發(fā)明尤其優(yōu)選的疏水蛋白為dewA、rodA、hypA、hypB、sc3、basfl、basf2型的疏水蛋白，其結(jié)構(gòu)特征見下文序列表。它們也可僅為部分或其衍生物。具有相同或不同結(jié)構(gòu)的多個(gè)疏水蛋白部分(優(yōu)選2個(gè)或3個(gè))酸序列，尤其是才艮據(jù)SEQIDNO:19、21、23的序列的融合蛋白yaad-Xa國dewA畫his(SEQIDNO:20)、yaad-Xa-rodA國his(SEQIDNO:22)或yaad-Xa-basfl-his(SEQIDNO:24)。通過交換、插入或刪除所有^J^酸中的至少10個(gè)、優(yōu)選地至少5個(gè)氨基酸、更優(yōu)選地5%的#^酸從SEQIDNO.20、22或24所示的多肽序列加工產(chǎn)生的蛋白質(zhì)和仍具有起始蛋白質(zhì)的生物學(xué)特性達(dá)至少50%的程度的蛋白質(zhì)也是尤其優(yōu)選的實(shí)施方案。蛋白質(zhì)的生物學(xué)特性在本文理解為是指已經(jīng)描述的接觸角改變至少20。。尤其適于幵展本發(fā)明的衍生物為通過截短yaad融合配偶體而衍生自yaad國Xa-dewA畫his(SEQIDNO:20)、yaad曙Xa畫rodA畫his(SEQIDNO:22)或yaad-Xa-basfl-his(SEQIDNO:24)的殘基?？捎欣厥褂媒囟痰膟aad殘基替代具有294個(gè)氨基酸的完整yaad融合配偶體(SEQIDNO:16)。但是截短的殘基應(yīng)包含至少20個(gè)、更優(yōu)選地至少35個(gè)氨基酸。例如，可使用20-293個(gè)、優(yōu)選地25-250個(gè)、更優(yōu)選地35-150個(gè)和例如35-100個(gè)^J^酸的截短基團(tuán)。疏水蛋白和融合配偶體間的切割位點(diǎn)可用于以非衍生的形式釋放純的疏7JC蛋白(例如通過甲硫氨酸處的BrCN切割、因子Xa切割、腸激酶切割、凝血酶切割、TEV切割等等)。也可以產(chǎn)生依次為一個(gè)融合配偶體例如yaad或yaae、甚至不同序列的多種疏水蛋白例如DewA-RodA或Sc3-DewA、Sc3-RodA的融合蛋白。同樣可以4吏用疏7]C蛋白片段(例如N端或C端截短物)或具有70%同源性的突變蛋白。根據(jù)特定用途(即待分離的液相)選擇每一種情況的最佳構(gòu)建體。肽合成方法制備，例如通過Merrifield固相合成制備?？赏ㄟ^適當(dāng)方法從天然來源分離天然存在的疏水蛋白。以舉例方式引用W6sten等人，Eur.JCellBio.63，122-129(1994)或WO96/41882。融合蛋白可優(yōu)選地通過基因工程方法制備，其中一個(gè)核i^f列，特別式組合，即所需蛋白質(zhì)在宿主生物中作為組合核^列的基因表達(dá)的結(jié)果而產(chǎn)生的方式。此制備方法例如在DE102005007480.4中乂^開。用于所述制備方法的適當(dāng)宿主生物(生產(chǎn)生物)可為原核生物(包括古生菌)或真核生物，尤其是細(xì)菌(包括嗜鹽菌和methanococcia)、真菌、昆蟲細(xì)胞、植物細(xì)胞和哺乳動(dòng)物細(xì)胞，其中更優(yōu)選地是大腸桿菌、枯草芽胞桿菌、巨大芽孢桿菌(Bacillusmegaterium)、米曲霉(Aspergillusoryzae)、鉤巢曲霉(Aspergillusnidulans)、黑曲霉(Aspergillusniger)、巴斯德畢赤酵母(Pichiapastoris)、假單胞菌某種(Pseudomonasspec.)、乳桿菌、多形漢遜酵母(Hansenulapolymorpha)、里氏木霉(Trichodermareesei)、SF9(或相關(guān)細(xì)胞)。本發(fā)明也基于使用表達(dá)構(gòu)建體，其包含在調(diào)節(jié)核酸序列的遺傳控制下編碼根據(jù)本發(fā)明使用的多肽的核酸序列，并且也基于包含這些表達(dá)構(gòu)建體的至少一個(gè)的栽體。所用的構(gòu)建體優(yōu)選地包含在每一種情況中與編碼序列有效連接的特定編碼序列的5，上游、啟動(dòng)子和3，下游、終止子序列以及才艮據(jù)需要的其它常用調(diào)節(jié)元件。在本發(fā)明中，"有效連接"理解為是指啟動(dòng)子、編碼序列、終止子以及根據(jù)需要的其它調(diào)節(jié)元件依次排列以使每一個(gè)調(diào)節(jié)元件可在表達(dá)編碼序列過程中按所預(yù)期實(shí)現(xiàn)其功能。可有效連接序列的實(shí)例為引導(dǎo)肽，以及增強(qiáng)子和多聚腺苷酸化信號(hào)等更多的調(diào)節(jié)元件包括選擇標(biāo)記、擴(kuò)增信號(hào)、復(fù)制起點(diǎn)等等。適當(dāng)?shù)恼{(diào)節(jié)序歹'j在眾'jj口Goeddel，GeneExpressionTechnology:MethodsinEnzymology185，AcademicPress，SanDiego,CA(1990)中描述。除了這些調(diào)節(jié)序列之外，真正結(jié)構(gòu)基因的上游還可存在這些序列的天優(yōu)選的核酸構(gòu)建體也有利地包含與啟動(dòng)子功能性連接的一個(gè)或更多個(gè)所謂的"增強(qiáng)子"序列，其能增強(qiáng)核酸序列的表達(dá)。在DNA序列的3，端也可以插入額外有利的序列，如另外的調(diào)節(jié)元件或終止子。核酸序列可以一個(gè)或更多個(gè)拷貝存在于構(gòu)建體中。更多的標(biāo)記，如抗生素抗性或補(bǔ)充輔源營養(yǎng)的基因也可以存在于構(gòu)建體中并且才艮據(jù)需要的用于選擇構(gòu)建體。啟動(dòng)子中存在用于制備的有利調(diào)節(jié)序列，如cos、tac、trp、tet、trp-tet、Ipp、lac、Ipp-lac、laclq國T7、T5、T3、gal、trc、ara、rhaP(rhaPBAD)SP6、lambda-PR或imlambda-P啟動(dòng)子，其有利地用于革蘭氏陰性細(xì)菌。其它有利調(diào)節(jié)序列例如存在于革蘭氏陽性啟動(dòng)子amy和SP02中，存在于酵母和真菌啟動(dòng)子ADC1、MFalpha、AC、P-60、CYC1、GAPDH、TEF、rp28、ADH中。也可以用合成啟動(dòng)子進(jìn)行調(diào)節(jié)。為在宿主生物中表達(dá)，核酸構(gòu)建體有利地插入載體，例如能在宿主中最優(yōu)表達(dá)基因的質(zhì)?；蚴删w。除了質(zhì)粒和噬菌體以外，載體理解為是指本領(lǐng)域技術(shù)人員已知的所有其它載體，例如病毒(如SV40、CMV、桿狀病毒和腺病毒)、轉(zhuǎn)座子、IS元件、噬菌粒、粘粒和線性或環(huán)狀DNA，并且也包括農(nóng)桿菌系統(tǒng)。這些栽體可在宿主中自主復(fù)制或在染色體上復(fù)制。適當(dāng)?shù)馁|(zhì)粒為例如大腸桿菌中的pLG338、pACYC184、pBR322、pUC18、pUC19、pKC30、pRep4、pHSl、pKK223-3、pDHE19.2、pHS2、pPLc236、pMBL24、pLG200、pUR290、pIN-III"3陽Bl、tgtll或pBdCI，鏈霉菌屬的plJ101、pIJ364、plJ702或plJ361,芽孢桿菌屬的pUB110、pC194或pBD214，棒桿菌屬的pSA77或pAJ667，真菌的pALSl、plL2或pBB116，酵母的2alpha、pAG國l、YEp6、YEpl3或pEMBLYe23或者植物的pLGV23、pGHlac+、pBIN19、pAK2004或pDH51。所述質(zhì)粒構(gòu)成了可以選擇質(zhì)粒的一小部分。本領(lǐng)域4支術(shù)人員已知其它質(zhì)粒并可例如從CloningVectors(PouwelsP.H.等人編輯，Elsevier,Amsterdam-NewYork-Oxford,1985，ISBN0444卯4018)中選擇。表達(dá)所提供的其它基因的核酸構(gòu)建體還有利地包含增強(qiáng)表達(dá)的3，和/或5，端調(diào)節(jié)序列，其取決于所選宿主生物和基因而選擇用于最佳表達(dá)。這些調(diào)節(jié)序列意在能控制基因表達(dá)和蛋白質(zhì)表達(dá)。取決于宿主生物這可以指例如基因僅在誘導(dǎo)后表達(dá)或過量表達(dá)，或者其立即表達(dá)和/或過量表達(dá)。調(diào)節(jié)序列或因子可優(yōu)選地發(fā)揮積極作用并從而增強(qiáng)引入基因的基因表達(dá)。因此，可通過〗吏用強(qiáng)轉(zhuǎn)錄信號(hào)(如啟動(dòng)子和/或增強(qiáng)子)在轉(zhuǎn)錄水平實(shí)現(xiàn)調(diào)節(jié)元件的擴(kuò)增。此外，也可以通過例如提高mRNA的穩(wěn)定性增強(qiáng)轉(zhuǎn)錄。在載體的其它實(shí)施方案中，包含核酸構(gòu)建體或核酸的載體也可以線性DNA的形式有利地引入微生物中并通過異源或同源重組整合到宿主生物的基因組中。此線性DNA可由線性化載體(如質(zhì)粒)組成或僅由核酸構(gòu)建體或核酸組成。有利地根據(jù)生物中所用的特定"密碼子選擇，，改變核酸序列以在生物中最佳表達(dá)異源基因。"密碼子選擇"可根據(jù)該生物其它已知基因的計(jì)算機(jī)評(píng)價(jià)容易地確定。通過融合適當(dāng)?shù)膯?dòng)子與適當(dāng)?shù)木幋a核苷酸序列和終止子信號(hào)或多聚腺苷酸化信號(hào)制備表達(dá)盒。為此，使用常用重組和克隆技術(shù)，例如如T.Maniatis，E.F.Fritsch和J.Sambrook,MolecularCloning:ALaboratoryManual,ColdSpringHarborLaboratory,ColdSpringHarbor,NY(1989);T.J.Silhavy，M.L.Berman和L.W.Enquist,ExperimentswithGeneFusions,ColdSpringHarborLaboratory,ColdSpringHarbor,NY(1984);Ausubel，F(xiàn).M.等人，CurrentProtocolsinMolecularBiology,GreenePublishingAssoc.andWileyInterscience(1987)中所述。為在適當(dāng)宿主生物中表達(dá)，重組核酸構(gòu)建體或基因構(gòu)建體有利地插入到能在宿主中最佳表達(dá)基因的宿主特異性載體中。載體為本領(lǐng)域技術(shù)人員所熟知并可例如從"CloningVectors"(PouwelsP.H.等人編輯，Elsevier,Amsterdam-NewYork-Oxford,1985)中選擇。借助于載體，可以制備例如用至少一個(gè)載體轉(zhuǎn)化的重組;微生物，并可用于生產(chǎn)根據(jù)本發(fā)明使用的疏水蛋白或其衍生物。上述重組構(gòu)建體有利地引入到適當(dāng)宿主系統(tǒng)中并表達(dá)。優(yōu)選使用本領(lǐng)域技術(shù)人員熟悉的克隆和轉(zhuǎn)染方法(例如共沉淀、原生質(zhì)體融合、電穿孔、逆轉(zhuǎn)錄病毒轉(zhuǎn)染等等)實(shí)現(xiàn)所述核酸在特定表達(dá)系統(tǒng)中的表達(dá)。適當(dāng)?shù)南到y(tǒng)在例如CurrentProtocolsinMolecularBiology,F.Ausubel等人編輯,WileyInterscience,NewYork1997或Sambrook等人，MolecularCloning:ALaboratoryManual,第二版，ColdSpringHarborLaboratory,ColdSpringHarborLaboratoryPress,ColdSpringHarbor,NY，1989中描述。也可以制備同源重組微生物。為此，制備包含至少一部分所用基因或編碼序列的載體，其中根據(jù)需要引入至少一個(gè)M酸缺失、添加或取代以改變，例如功能性破壞序列("敲除"序列)。引入的序列例如也可為相關(guān)孩吏生物的同系物或者衍生自哺乳動(dòng)物、酵母或昆蟲來源。用于同源重組的載體可備選地如下構(gòu)建，以使同源重組情況中的內(nèi)源基因以另一種方式突變或改變但仍編碼功能蛋白(例如可改變上游調(diào)節(jié)區(qū)域以改變內(nèi)源蛋白質(zhì)的表達(dá))。根據(jù)本發(fā)明使用的基因的改變部分在同源重組載體中。適當(dāng)?shù)耐粗亟M載體的構(gòu)建例如在Thomas,K.R.和Capecchi，M.R.(1987)Cell51:503中描述。在理論上，原核和真核生物都可用作此類核酸或此類核酸構(gòu)建體的重組體宿主生物。宿主生物有利地為微生物，如細(xì)菌、真菌或酵母。有利地使用革蘭氏陽性或革蘭氏陰性細(xì)菌，優(yōu)選地使用腸桿菌科、假單胞菌科、根瘤菌科、鏈霉菌科或諾卡氏菌科的細(xì)菌，更優(yōu)選地使用埃希氏菌屬(Escherichia)、假單胞菌屬(Pseudomonas)、鏈霉菌屬(Streptomyces)、諾卡菌屬(Nocardia)、伯克霍爾德氏菌屬(Burkholderia)、沙門菌屬(Salmonella)、農(nóng)桿菌屬(Agrobacterium)或紅球菌屬(Rhodococcus)的細(xì)菌。取決于宿主生物，用于上述融合蛋白制備方法的生物可以本領(lǐng)域技術(shù)人員已知的方式生長或培養(yǎng)。微生物通常在包含碳源(通常為糖的形式)、氮源(通常為有機(jī)氮源，如酵母提取物的形式)或鹽(如硫酸銨)、痕量元素(如鐵、錳和鎂鹽)并且根據(jù)需要還包含維生素的液體培養(yǎng)基中于0-100。C、優(yōu)選地10-60。C在氧噴霧條件下生長。營養(yǎng)液的pH值可保持在固定值，即在生長過程中調(diào)節(jié)或不調(diào)節(jié)。生長可分批發(fā)酵、半分批發(fā)酵或連續(xù)進(jìn)行?？稍诎l(fā)酵起始引入營養(yǎng)成分或者半連續(xù)或連續(xù)地補(bǔ)充。可通過實(shí)施例中所述的方法從生物中分離酶或酶用于作為粗提取物反應(yīng)。根據(jù)本發(fā)明使用的疏7K蛋白或其功能性、生物學(xué)活性的片段可通過重組制備的方法制備，其中培養(yǎng)產(chǎn)生多肽的微生物，根據(jù)需要誘導(dǎo)蛋白質(zhì)的表達(dá)并從培養(yǎng)物中分離它們。如果需要蛋白質(zhì)可在工業(yè)M^莫上以這種方式產(chǎn)生。可通過已知方法培養(yǎng)和發(fā)酵重組微生物。細(xì)菌可在例如TB或LB培養(yǎng)基中，溫度20-40°C和pH值6-9的條件下增殖。適當(dāng)?shù)呐囵B(yǎng)條件例如在T.Maniatis,E.F.Fritsch和J.Sambrook，MolecularCloning:ALaboratoryManual，ColdSpringHarborLaboratory，ColdSpringHarbor,NY(1989)中具體描述。如果蛋白質(zhì)不分泌到培養(yǎng)基中，那么然后可將細(xì)胞破壞并通過已知的蛋白質(zhì)分離方法從裂解物中獲得產(chǎn)物。根據(jù)需要，細(xì)胞可通過高頻超聲、高壓(例如在弗氏壓碎器中)、滲透裂解、去垢劑的作用、分解酶或有機(jī)溶劑、勻漿或所列多種方法的組合破壞。蛋白質(zhì)可通過已知的層析方法純化，如分子篩層析(凝膠過濾)，如Q瓊脂糖層析、離子交換層析和疏水層析純化，并且也可用其它常用方法如超濾、結(jié)晶、鹽析、透析和非變性凝膠電泳純化。適當(dāng)?shù)姆椒ɡ缭贑ooper,F.G.，BiochemischeArbeitsmethoden[BiochemicalTechniques]，VerlagWalterdeGruyter，Berlin,NewYork或Scopes,R.，ProteinPurification,SpringerVerlag，NewYork,Heidelberg,Berlin中描述。尤其有利的是，可通過提供其可結(jié)合的固體支持物(特別是適當(dāng)聚合物)上相應(yīng)互補(bǔ)基團(tuán)的特定錨定基團(tuán)簡化融合疏水蛋白的分離和純化。此類固體支持物可例如用于填充層析柱，并且以這種方式分離效率通?？娠@著增加。此類分離方法也稱為親和層析。為摻入錨定基團(tuán)可以在蛋白質(zhì)制備過程中使用通過特定核苷^列延長cDNA并從而編碼改變的蛋白質(zhì)或融合蛋白的載體系統(tǒng)或寡核苷酸。為了更容易純化，修飾的蛋白質(zhì)包含作為錨發(fā)揮功能的所謂標(biāo)簽，例如也稱為六個(gè)組氨酸錨的修飾。用組氨酸錨修飾的融合疏水蛋白可通過層析純化，例如用鎳-Sepharose作為柱填料。隨后融合疏水蛋白可通過適當(dāng)?shù)南疵撛噭?例如咪唑溶液)從柱上再次洗脫。在簡化的純化方法中，也可以不用層析純化。為此，首先通過適當(dāng)方法(例如微量過濾或離心)將細(xì)胞從發(fā)酵培養(yǎng)液中取出。隨后可通過適當(dāng)方法(例如上文提到的方法)破壞細(xì)胞，然后可從包涵體中分離細(xì)胞殘?jiān)?。后者可有利地通過離心實(shí)現(xiàn)。最后，包涵體可以理論已知的方式石皮壞以釋放融合疏水蛋白。這可通過例如酸、堿和/或去垢劑的方法完成。根據(jù)本發(fā)明使用的含融合疏水蛋白的包涵體可通常甚至用0.1MNaOH在大約1h內(nèi)完全溶解。通過此簡化方法獲得的融合疏7JC蛋白的純度基于全部蛋白質(zhì)的量以重量計(jì)通常為60-80%。通過所述簡化方法獲得的溶液可不經(jīng)進(jìn)一步純化而用于開展本發(fā)明。如所述制備的疏7jc蛋白可作為融合蛋白直接使用或在脫離或去掉融合配偶體之后作為"純"疏7jc蛋白使用。當(dāng)想要去掉融合配偶體時(shí)，建議在融合蛋白的疏7K蛋白部分和融合配偶體部分間滲入潛在的切割位點(diǎn)(蛋白酶的特異識(shí)別位點(diǎn))。適當(dāng)?shù)那懈钗稽c(diǎn)特別是疏水蛋白部分和融合配偶體部分中都不存在的那些肽序列，其可用生物信息學(xué)工具容易地確定。尤其適當(dāng)?shù)睦覣BrCN在曱硫氨酸處的切割、用Xa因子切割的蛋白酶介導(dǎo)性切割、腸激酶切割、凝血酶切割、TEV(煙草蝕刻病毒蛋白酶)切割。根據(jù)本發(fā)明，疏水蛋白或其衍生物可用于包含至少一種液相的鉆井液。鉆井液可為任何組合物，條件是它們具有至少一種液相，特別是基于油的液相。在本發(fā)明中組合物也具有另外的相。根據(jù)本發(fā)明，基于油的鉆井液中的油優(yōu)選地為生物柴油、內(nèi)烯烴、《烯烴、植物酯、鏈烷烴或其混合物。適當(dāng)?shù)钠渌軇槔缬袡C(jī)溶劑，如醚、芳香化合物，如甲苯、醇、烷、烯、環(huán)烷、環(huán)烯、酯、酮、萘或卣代烴。可根據(jù)要進(jìn)行的鉆探的類型和根據(jù)需要根據(jù)土壤中存在的任何物質(zhì)(礦石、鹽、礦物來源)調(diào)整鉆井液以獲得最佳作用。也可通過提高溫度額外地改進(jìn)〗吏用鉆井液的鉆探，例如0-400。C的溫度，例如30-200°C的溫度，特別是40-150。C的溫度。所用的疏水蛋白或其衍生物的量可在大范圍內(nèi)變化，并且有利地根據(jù)組合物本身和組合物中存在的任何另外的成分調(diào)整數(shù)量。需要根據(jù)特定條件調(diào)整鉆井液(特別是其密度)，例如待鉆探通過的地巖層的特性、鉆探深度、壓力和溫度。已經(jīng)驚奇地發(fā)現(xiàn)即使少量的疏7JC蛋白或其衍生物都會(huì)提高鉆井液穩(wěn)定性并從而也提高鉆探操作的穩(wěn)定性。根據(jù)本發(fā)明可以任何適當(dāng)?shù)牧渴褂弥辽僖环N疏水蛋白或其衍生物。通常，可以基于全部成分的0.1-10000ppm的量、優(yōu)選地以1-1000ppm的量、更優(yōu)選地以1-600ppm的量和最優(yōu)選地以4-500ppm的量4吏用至少一種疏水蛋白或其衍生物。在本應(yīng)用中，單位卯m指毫克/千克。本發(fā)明的鉆井液可與其它常用成分和添加劑組合。在此應(yīng)提到的有例如不具有或具有突出去垢劑作用的載體油。適當(dāng)?shù)牡V物栽體油為礦物油加工過程中獲得的級(jí)分，如具有例如SN500-2000級(jí)別粘度的光亮油或基礎(chǔ)油；還有芳香烴、鏈烷烴和烷氧基鏈烷醇。根據(jù)本發(fā)明同樣適用的是礦物油提煉過程中獲得的級(jí)分并且也稱為"加氫裂化油"(具有360-500。C沸點(diǎn)的真空餾分，可從催化加氫、在高壓條件下異構(gòu)化并且還去鏈烷烴的天然礦物油中獲得)。同樣適用的是上述礦物載體油的'混合物?？上郶據(jù)本發(fā)明使用的合成載體油的實(shí)例選自聚烯烴(聚of烯烴或聚內(nèi)烯烴)、(聚)酯、(聚)烷氧化物、聚醚、脂肪族聚醚酰胺、烷基酚起始的聚醚、烷基*始的聚醚酰胺和長鏈烷醇的羧酸酯。適當(dāng)聚烯烴的實(shí)例為尤其基于聚丁烯或聚異丁烯(氫化或未氫化的)的烯烴聚合物，其中Mn=400-1800。其它適當(dāng)栽體油系統(tǒng)例如在DE-A3826608、DE-A4142241、DE畫A4309074、EP-A0452328和EP-A0548617中描述，其在此明確引用作為參考。所述載體油以本領(lǐng)域技術(shù)人員認(rèn)為對(duì)于特定應(yīng)用而言合適的量使用。其它常用添加劑為腐蝕抑制劑，例如基于有機(jī)羧酸的銨鹽的腐蝕抑制劑，所述的鹽傾向于形成薄膜，或者在非鐵金屬防腐的情況中基于雜環(huán)芳族化合物的腐蝕抑制劑；抗氧化劑或穩(wěn)定劑，例如基于胺、其它常規(guī)乳化劑的抗氧化劑或穩(wěn)定劑；抗靜電劑；金屬茂，如二茂鐵；潤滑性改進(jìn)劑，如特定的脂肪酸、烯基琥珀酸酯、二(羥基烷基)脂肪族胺、羥基乙酰胺或蓖麻油；染料(標(biāo)記物)、失水劑(例如聚合物)、調(diào)節(jié)密度的物質(zhì)、流變改性劑，還有構(gòu)建濾餅的物質(zhì)(例如膨潤土或粘土)、石灰或其它乳化劑。根據(jù)需要也加入胺以降低pH值。本發(fā)明在此后通過實(shí)施例詳細(xì)描述。實(shí)施例實(shí)施例l:克隆yaad-His6/yaaE-His6使用寡核苷酸Hal570和Hal571(Hal572/Hal573)進(jìn)行聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)。所用的模板DNA為細(xì)菌枯草芽胞桿菌的基因組DNA。得到的PCR片段包含枯草芽胞桿菌yaaD/yaaE基因編碼序列并在每一個(gè)末端分別包含Ncol與BglII限制性酶切位點(diǎn)。純化PCR片段并用限制性內(nèi)切酶Ncol和Bg瓜切割。此DNA片段用作插入片段并克隆到已預(yù)先用限制性內(nèi)切酶Ncol和BglII線性化的來自Qiagen的pQE60載體中。如此形成的載體pQE60YAAD弁2/pQE60YaaE弁5可用于表達(dá)由YAAD::HIS6或YAAE::HIS6組成的蛋白質(zhì)。Hal570:gcgcgcccatggctcaaacaggtactgaHal571:gcagatctccagccgcgttcttgcatacHal572:ggccatgggattaacaataggtgtactaggHal573:gcagatcttacaagtgccttttgcttatattcc實(shí)施例2:克隆yaad疏水蛋白DewA-His6使用寡核苷酸KaM416和KaM417進(jìn)行聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)。所用的模板DNA為霉菌鉤巢曲霉的基因組DNA。得到的PCR片段包含疏水蛋白基因dewA的編碼序列和N端因子Xa蛋白酶切割位點(diǎn)。純化PCR片段并用限制性內(nèi)切酶BamHI切割。此DNA片段用作插入片段并克隆到已預(yù)先用限制性內(nèi)切酶BglII線性化的載體pQE60YAAD弁2中。如此形成的載體#508可用于表達(dá)由YAAD::Xa::dewA::HIS6組成的融合蛋白。KaM416:GCAGCCCATCAGGGATCCCTCAGCCTTGGTACCAGCGCKaM417:CCCGTAGCTAGTGGATCCATTGAAGGCCGCATGAAGTTCTCCGTCTCCGC實(shí)施例3:克隆yaad疏水蛋白R(shí)odA-His6與質(zhì)粒弁508類似地，使用寡核苷酸KaM434和KaM435克隆質(zhì)粒#513。KaM434:GCTAAGCGGATCCATTGAAGGCCGCATGAAGTTCTCCATTGCTGCKaM435:CCAATGGGGATCCGAGGATGGAGCCAAGGG實(shí)施例4:克隆yaad疏水蛋白BASF1-His6與質(zhì)粒#508類似地，使用寡核苷酸KaM417和KaM418克隆質(zhì)粒#507。所用的模板DNA為合成的DNA序列(疏水蛋白BASF1)(見后附的SEQIDNO.ll和12)。KaM417:CCCGTAGCTAGTGGATCCATTGAAGGCCGCATGAAGTTCTCCGTCTCCGCKaM418:CTGCCATTCAGGGGATCCCATATGGAGGAGGGAGACAG實(shí)施例5:克隆yaad疏水蛋白BASF2-His6與質(zhì)粒#508類似地，使用寡核普酸KaM417和KaM418克隆質(zhì)粒#506。所用的模板DNA為合成的DNA序列(疏水蛋白BASF2)(見后附分SEQIDNO.13和14)。KaM417:CCCGTAGCTAGTGGATCCATTGAAGGCCGCATGAAGTTCTCCGTCTCCGCKaM418:CTGCCATTCAGGGGATCCCATATGGAGGAGGGAGACAG實(shí)施例6:克隆yaad疏水蛋白SC3-His6與質(zhì)粒#508類似地，使用寡核苷酸KaM464和KaM465克隆質(zhì)粒#526。所用的模板DNA為裂褶菌(Schyzophyllumcommune)的cDNA(見后附的SEQIDNO.9和10)。KaM464:CGTTAAGGATCCGAGGATGTTGATGGGGGTGCKaM465:GCTAACAGATCTATGTTCGCCCGTCTCCCCGTCGT實(shí)施例7:重組大腸桿菌菌林yaad疏水蛋白DewA-His6的發(fā)酵在15mlGreiner管中接種3ml含表達(dá)yaad疏水蛋白DewA-His6的大腸桿菌菌林的LB液體培養(yǎng)基。在搖床中以200轉(zhuǎn)/分于37。C接種8h。每一種情況中，兩個(gè)帶擋板的ll錐形瓶和250mlLB培養(yǎng)基(十100照/ml的氨節(jié)青霉素)用每一種情況lml預(yù)培養(yǎng)物接種并在搖床中以180轉(zhuǎn)/分于37。C孵育9h。在201發(fā)酵罐中用0.51預(yù)培養(yǎng)物(OD鋼鵬l:lO，對(duì)水測量)接種于13.51LB培養(yǎng)基(+100照/ml氨節(jié)青霉素)中。在OD60nm為~3.5時(shí)加入140ml100mMIPTG。3h后將發(fā)酵罐冷卻到10。C并離心去掉培養(yǎng)液。用細(xì)胞沉淀進(jìn)行進(jìn)一步純化。實(shí)施例8:重組疏水蛋白融合蛋白的純化用50mMpH7.5的磷酸鈉緩沖液使100g細(xì)胞沉淀(100-500mg的疏水蛋白)的總體積達(dá)200ml并重懸。懸液用UltraturraxT25型(JankeandKunkel;IKA-Labortechnik)處理10分鐘，隨后用500單位Benzonase(Merck,Darmstadt;貨號(hào)1.01697.0001)在室溫賻育1小時(shí)降解核酸。破壞細(xì)胞前用玻璃管(P1)進(jìn)行過濾。為破壞細(xì)胞和分離殘佘基因組DNA，以1500巴進(jìn)4亍兩個(gè)勻漿循環(huán)(MicrofluidizerM-110EH;MicrofluidicsCorp.)。離心勻漿物(SorvallRC畫5B，GSA轉(zhuǎn)子，250ml離心杯，60分鐘，4°C,12000轉(zhuǎn)/分，23000g)，將上清液i丈于水上并將沉淀重懸于100mlpH7.5的磷酸鈉緩沖液中。重復(fù)離心和重懸三次，在第三次重復(fù)中加入含1%SDS的磷酸鈉緩沖液。重懸后，將混合物攪拌1小時(shí)并進(jìn)行最后的離心(SorvallRC-5B，GSA轉(zhuǎn)子，250ml離心杯，60分鐘，4。C，12000轉(zhuǎn)/分，23000g)。根據(jù)SDS畫PAGE分析，疏7jC蛋白在最后離心之后存在于上清液中(圖1)。實(shí)驗(yàn)表明疏水蛋白在相應(yīng)的大腸桿菌細(xì)胞中可能以包涵體形式存在。將50ml含疏水蛋白的上清液應(yīng)用于50ml用50mMTris隱ClpH8.0緩沖液平衡的鎳SepharoseHighPerformance17-5268-02柱(Amersham)。用50mMTris畫ClpH8.0緩沖液洗柱子，隨后用含200mM咪唑的50mMpH8.0的Tris-Cl緩沖液洗脫疏水蛋白。在50mMpH8.0的Tris-Cl緩沖液中透析溶液以去除咪唑。圖l顯示了所制備的疏水蛋白的純化泳道A:用于鎳-S印harose柱樣品(l:10稀釋)泳道B:流過液=洗滌步驟洗脫物泳道C-E:OD280最高的洗脫級(jí)分(WP1、WP2、WP3)泳道F顯示了所用的分子量標(biāo)準(zhǔn)。圖1的疏7jc蛋白具有大約53kD的分子量。一些較小的帶代表了疏水蛋白的降解產(chǎn)物。實(shí)施例9:性能檢測通過在玻璃上水滴接觸角的改變表征疏水蛋白基質(zhì)玻璃(窗玻璃，Stiddeutscheglass,Mannheim):使用根據(jù)實(shí)施例8純化的疏水蛋白。-溶液中疏7jc蛋白濃度100ng/ml，溶液還包含50mM醋酸鈉緩沖液和0.1%聚氧乙烯(20)-失水山梨醇單月桂酸酯(Tweer^20)，溶液的pH值4畫將玻璃板浸沒在此溶液中過夜(溫度80。C)-然后從溶液中取出疏水蛋白包被的玻璃板并在蒸餾水中洗滌，-然后在蒸餾水中孵育10min/80°C/l%SDS,-再次在蒸餾水中洗滌在空氣中干燥樣品并在室溫測定包被玻璃表面5|Lll水滴的接觸角(以度為單位)。在DataphysicsOCA15+接觸角系統(tǒng)，軟件(2002年11月)上測量接觸角。根據(jù)制造商的說明進(jìn)行測量。未處理玻璃給出30±5。的接觸角。用才艮據(jù)實(shí)施例8的疏水蛋白(yaad-dewA-his6)包被的玻璃板給出75±5。的接觸角。接觸角增加45°。實(shí)施例10:產(chǎn)生含疏水蛋白濃縮物0w^-A「fl-rfew^-歷S6)的基于油的鉆井液以下列量向含222ml生物柴油和61ml氯化鈣溶液(25%)的制劑中加入疏水蛋白濃縮物a)Oppmb)10ppmc)100ppmd)10000ppm用乳化裝置(UltraTurraxT50)以2000、6000和10000轉(zhuǎn)/分的速度與5分鐘和10分鐘的攪拌時(shí)間產(chǎn)生各種試驗(yàn)中的各種乳濁液。用每一種鉆井液樣品開展乳化試驗(yàn)(與DIN51415類似)。在這些試驗(yàn)中，化合物在所述條件下(攪拌時(shí)間和旋轉(zhuǎn)速度)互相混合。之后，觀察到分層是時(shí)間的函數(shù)。參考標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行評(píng)價(jià)，其中1代表乳濁液完全開裂，2代表釋放水的部分開裂，3代表檢測不到開裂。所述疏水蛋白濃度的試驗(yàn)結(jié)果匯總于表1中。對(duì)于每一種情況列出了1分鐘/、24小時(shí)和48小時(shí)(每一種情況下在室溫，23。C)后分相層的評(píng)價(jià)。此外，也在80。C的均一溫度下試驗(yàn)。表1<table>tableseeoriginaldocumentpage25</column></row><table>評(píng)價(jià)不加入疏水蛋白A時(shí)觀察到鉆探混合物的快速分離。評(píng)價(jià)1是實(shí)踐中的油鉆探不可接受的。甚至很少量的疏水蛋白都具有良好的乳化作用。甚至10ppm的疏水蛋白(低于1mg)會(huì)帶來可接受的結(jié)果。在以更高量使用疏水蛋白的情況中，甚至可以獲得更好的結(jié)果，特別是熱穩(wěn)定性更好。對(duì)序列表中的DNA和多肽序列指定的序列名稱dewADNA和多肽序列SEQIDNO:1dewA多肽序列SEQIDNO:2rodADNA和多肽序列SEQIDNO:3rodA多肽序列SEQIDNO:4hypADNA和多肽序列SEQIDNO:5hypA多肽序列SEQIDNO:6hypBDNA和多肽序列SEQIDNO:7hypB多肽序列SE()IDNO:8sc3DNA和多肽序列SEQID脆9sc3多肽序列SEQIDNO:10basflDNA和多肽序列SEQIDNO:11basfl多肽序列SEQIDNO:12basf2DNA和多肽序列SEQIDNO:13basO多肽序列SEQIDNO:14yaadDNA和多肽序列SEQIDNO:15yaad多肽序列SEQIDNO:16yaaeDNA和多肽序列SEQIDNO:17yaae多肽序列SEQIDNO:18yaad-Xa-dewA畫hisDNA和多肽序列SEQIDNO:19yaad-Xa-dewA-his多肽序列SEQIDNO:20yaad-Xa-rodA-hisDNA和多肽序列SEQIDNO:21yaad-Xa-rodA國his多肽序列SEQIDNO:22yaad-Xa-basfl-hisDNA和多肽序列SEQIDNO:23yaad-Xa-bas打-his多肽序列SEQIDNO:2權(quán)利要求1.疏水蛋白用作鉆井液助劑的用途。2.根據(jù)權(quán)利要求l的用途，其中疏水蛋白用作鉆井液中的乳化劑。3.根據(jù)權(quán)利要求1和2的用途，其中所用的疏水蛋白為融合疏7jc蛋白。4.根據(jù)權(quán)利要求l-3中任一項(xiàng)所述的用途，其中所用的疏水蛋白為選自yaad國Xa國dewA-his(SEQIDNO:20)、yaad畫Xa-rodA-his(SEQIDNO:22)或yaad-Xa-basfl-his(SEQIDNO:24)的融合疏水蛋白，其中yaad也可為具有20-293個(gè)氨基酸的截短的融合配偶體yaad，。5.根據(jù)權(quán)利要求l-4中任一項(xiàng)所述的用途，其中疏水蛋白用作基于油的鉆井液的助劑。6.根據(jù)權(quán)利要求l-5中任一項(xiàng)所述的用途，其中疏水蛋白以基于全部成分的0.1-10000ppm的量使用。7.根據(jù)權(quán)利要求l-6中任一項(xiàng)所述的用途，其中疏水蛋白以基于全部成分的1-1000ppm的量使用。8.根據(jù)權(quán)利要求l-7中任一項(xiàng)所述的用途，其中鉆井液為基于油的鉆井液，其包含以重量計(jì)為40-95%的至少一種油成分、以重量計(jì)為2-60%的水以及根據(jù)需要的另外的成分。9.根據(jù)權(quán)利要求l-8中任一項(xiàng)所述的用途，其中使用疏水蛋白和促進(jìn)乳濁液形成的至少一種另外的化合物。10.鉆井開發(fā)地下沉積物的方法，其中使用包含至少一種疏水蛋白的鉆井液。11.根據(jù)權(quán)利要求10的方法，其中鉆井液中所用的疏7jC蛋白為融合疏水蛋白或其衍生物。12.根據(jù)權(quán)利要求10和11任一項(xiàng)所述的的方法，其中鉆井液中所用的疏水蛋白為選自yaad-Xa謹(jǐn)dewA-his(SEQIDNO:20)、yaad國Xa腳rodA國his(SEQIDNO:22)或yaad-Xa-basfl-his(SEQIDNO:24)的融合疏7]C蛋白，其中yaad也可為具有20-293個(gè)氨基酸的截短的融合配偶體yaad，。13.根據(jù)權(quán)利要求10-12中任一項(xiàng)所述的方法，其中疏水蛋白用作基于油的鉆井液的助劑。14.才艮據(jù)權(quán)利要求10-13中任一項(xiàng)所述的方法，其中疏7K蛋白以基于全部成分的0.1-10000ppm的量使用。15.根據(jù)權(quán)利要求10-14中任一項(xiàng)所述的方法，其中疏水蛋白以基于全部成分的1-1000卯m的量使用。16.根據(jù)權(quán)利要求10-15中任一項(xiàng)所述的方法，其中鉆井液為基于油的鉆井液，其包含以重量計(jì)為40-95%的至少一種油成分、以重量計(jì)為2-60%的水以及才艮據(jù)需要的另外的成分。17.根據(jù)權(quán)利要求10-16中任一項(xiàng)所述的方法，其中鉆井液為基于油的鉆井液，其包含以重量計(jì)為70-95%的至少一種油成分、以重量計(jì)為2-30%的水以及才艮據(jù)需要的另外的成分。18.根據(jù)權(quán)利要求10-17中任一項(xiàng)所述的方法，其中鉆井液為基于油的鉆井液，其包含以重量計(jì)為70-95%的至少一種油成分、以重量計(jì)為2-30%的水以及才艮據(jù)需要以重量計(jì)最多13%的另外的成分。19.根據(jù)權(quán)利要求10-18中任一項(xiàng)所述的方法，其中使用疏7JC蛋白和促進(jìn)乳濁液形成的至少一種另外的化合物。20.包含至少一種疏水蛋白的鉆井液。21.根據(jù)權(quán)利要求20的鉆井液，其中疏水蛋白為融合疏水蛋白或其衍生物。22.根據(jù)權(quán)利要求20和21的鉆井液，其中鉆井液中所用的疏水蛋白為選自yaad-Xa-dewA-his(SEQIDNO:20)、yaad-Xa畫rodA-his(SEQIDNO:22)或yaad-Xa畫basfl誦his(SEQIDNO:24)的融合疏7JC蛋白，其中yaad也可為具有20-293個(gè)氨基酸的截短的融合配偶體yaad，。23.根據(jù)權(quán)利要求20-22中任一項(xiàng)所述的鉆井液，其為基于油的鉆井液。24.根據(jù)權(quán)利要求20-23中任一項(xiàng)所述的鉆井液，其包含基于全部成分的0.1-10000ppm的疏水蛋白。25.根據(jù)權(quán)利要求20-24中任一項(xiàng)所述的鉆井液，其包含基于全部成分的1-1000卯m的疏水蛋白。26.根據(jù)權(quán)利要求20-25中任一項(xiàng)所述的鉆井液，其為基于油的鉆井液，其包含以重量計(jì)為40-95%的至少一種油成分、以重量計(jì)為2-60%的水以及根據(jù)需要的另外的成分。27.根據(jù)權(quán)利要求20-26中任一項(xiàng)所述的鉆井液，其為基于油的鉆井液，其包含以重量計(jì)為70-95%的至少一種油成分、以重量計(jì)為2-30%的水以及根據(jù)需要的另外的成分。28.根據(jù)權(quán)利要求20-27中任一項(xiàng)所述的鉆井液，其為基于油的鉆井液，其包含以重量計(jì)為70-95%的至少一種油成分、以重量計(jì)為2-30%的水以及+艮據(jù)需要的以重量計(jì)最多13%的另外的成分。29.才艮據(jù)權(quán)利要求20-28中任一項(xiàng)所述的鉆井液，其包含至少一種疏水蛋白和促進(jìn)乳濁液形成的至少一種另外的成分。30.產(chǎn)生根據(jù);f又利要求20-29的鉆井液的方法，其中疏水蛋白成分與鉆井液的其余成分充分混合。全文摘要本發(fā)明涉及至少一種疏水蛋白或至少一種其衍生物用作鉆井液助劑的用途。文檔編號(hào)C09K8/32GK101228249SQ200680019188公開日2008年7月23日申請(qǐng)日期2006年3月29日優(yōu)先權(quán)日2005年4月1日發(fā)明者M(jìn)·古茨曼,U·鮑斯,Y·劉申請(qǐng)人:巴斯福股份公司