專利名稱：：一種酸解蜂膠黃酮苷的方法
技術(shù)領(lǐng)域：
：本發(fā)明屬蜂膠加工技術(shù)，涉及一種酸解蜂膠黃酮苷的方法。
背景技術(shù)：
：蜂膠(propolis)是蜜蜂從植物幼芽、樹皮與樹干裂縫上采集樹脂，并混入其上顎腺分泌物和蜂蠟加工而成的具有芳香氣味的膠狀固體物。蜂膠在古代阿拉伯醫(yī)書《醫(yī)典》上被稱為"黑蠟"，也是最早收載于《神農(nóng)本草經(jīng)》中露蜂房的主要成分之一。蜂膠具有預(yù)防創(chuàng)傷感染、調(diào)節(jié)免疫、抗腫瘤、降血壓、降血脂、降血糖以及抗病原微生物等多種生物學(xué)作用。蜂膠的化學(xué)成分復(fù)雜，含有黃酮類化合物、酸、醇、酚、醛、酯、醚類以及烯、萜、甾類化合物和多種氨基酸、脂肪酸、酶類、維生素和多種微量元素。在這些化學(xué)成分中，由于黃酮類化合物含量高，生物學(xué)活性強，因此有關(guān)蜂膠中黃酮類化合物提取和功效的研究成為熱點。黃酮類化合物是一類在自然界廣泛分布的多酚類抗氧化劑。大量研究表明，黃酮類化合物具有清除自由基、抗氧化、抗突變、抗腫瘤、抗菌、抗病毒和調(diào)節(jié)免疫等功能，其中最重要的是它的抗氧化活性。黃酮類化合物在自然界中多數(shù)以黃酮苷的形式存在，只有極少量的以游離黃酮苷元的形式存在。雖然天然存在的游離黃酮苷元含量極少，但其表現(xiàn)出來的活性要比結(jié)合型的糖苷高很多。黃酮苷元可以直接被吸收進入動物血液，大部分糖苷型的黃酮化合物在人體內(nèi)不能通過小腸壁進入到血液中，而是被腸腔內(nèi)微生物通過雜環(huán)裂解方式降解和代謝，其中僅有小部分黃酮在結(jié)腸內(nèi)益生菌(乳酸菌和雙歧桿菌)分泌的水解酶的作用下，產(chǎn)生苷元再重新吸收進入血液。因此，黃酮苷在動物體內(nèi)的生物利用率遠遠低于苷元型黃酮。研究表明，黃酮苷元清除人體氧自由基的生物活性明顯優(yōu)于黃酮糖苷，黃酮苷元的效價是黃酮糖苷效價的7倍。蜂膠中已經(jīng)分離鑒定出的黃酮類化合物有70多種，其中主要的有黃酮類、黃酮醇類、雙氫黃酮和黃烷醇類。研究發(fā)現(xiàn)，將蜂膠經(jīng)過硅膠吸附分離后得到四個組分，組分IV中的總黃酮含量相對髙于組分I、II、III,其主要成分就是黃酮苷類物質(zhì)，因此黃酮苷在蜂膠中的含量是比較高的。
發(fā)明內(nèi)容本發(fā)明的目的是提供一種酸解蜂膠黃酮苷的方法，采用鹽酸對蜂膠黃酮苷進行恒溫酸解，本發(fā)明的方法通過以下步驟實現(xiàn)-稱取蜂膠乙醇提取物，放入具塞三角燒瓶中，按固液比m固V液(mg:mL)=4:11:4加入水解液(lmol/L6mol/L鹽酸與乙醇配成體積分?jǐn)?shù)為70%的溶液)，放入58'C98'C的水浴鍋中水解0.5小時4小時，將酸解產(chǎn)物旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)濃縮得浸膏，冷凍干燥，得蜂膠黃酮苷酸解產(chǎn)物。所獲酸解產(chǎn)物經(jīng)高效液相色譜測定其黃酮類物質(zhì)含量，結(jié)果顯示黃酮苷類物質(zhì)含量下降，而黃酮苷元類物質(zhì)含量明顯提高。高效液相色譜測定精確稱取30mgl,l-二苯基-2-苦肼(DPPH)，用無水乙醇溶解并定容到250mL,配成DPPH溶液。取2mL0.08mg/mL的蜂膠酶解產(chǎn)物，加入2mLDPPH乙醇溶液，混勻，于517nm處測定lmin、6min、llmin、16min、21min、26min、31min、36min、41min時的吸光度。結(jié)果表明獲取的酸解產(chǎn)物具有良好的清除DPPH自由基的能力，顯著優(yōu)于原料蜂膠。本發(fā)明是對蜂膠產(chǎn)品的深度開發(fā)利用，通過酸解，蜂膠黃酮苷類物質(zhì)水解為黃酮苷元，與原料相比，產(chǎn)物的抗氧化性能增強。有利于提高蜂產(chǎn)品的附加值，開拓其應(yīng)用范圍。制得的蜂膠酶解產(chǎn)物比原料蜂膠抗氧化性能顯著提高，可更好地應(yīng)用于醫(yī)藥、食品和化妝品等領(lǐng)域。圖1是蜂膠中5種黃酮類物質(zhì)酸解前后含量圖。圖2是蜂膠黃酮酸解產(chǎn)物清除DPPH自由基能力圖。圖3是蜂膠黃酮酸解產(chǎn)物抗油脂氧化作用。圖4是蜂膠中5種黃酮類物質(zhì)酸解前后含量圖。圖5是蜂膠黃酮酸解產(chǎn)物清除DPPH自由基能力。圖6是蜂膠黃酮酸解產(chǎn)物抗油脂氧化作用。圖7是蜂膠中5種黃酮類物質(zhì)酸解前后含量圖。圖8是蜂膠黃酮酸解產(chǎn)物清除DPPH自由基能力。圖9是蜂膠黃酮酸解產(chǎn)物抗油脂氧化作用。具體實施例方式本發(fā)明結(jié)合附圖和具體實施例作進一步的說明。實施例1稱取蜂膠提取物，按固液比m固V液(mg:mL)-l:2加入水解液(6mol/L鹽酸與乙醇配成體積分?jǐn)?shù)為70%的溶液)，98n水解0.5小時。高效液相色譜測定蘆丁、楊梅酮、槲皮素、山奈酚、異鼠李素含量，該酸解條件下所得產(chǎn)物蜂膠中的黃酮苷類物質(zhì)蘆丁由酸解前的836.92mg/100g降低到酸解后的159.83mg/100g，水解率達80.9%，苷元類物質(zhì)槲皮素、山奈酚和異鼠李素的含量均有所增加，分別提高了49.6%、149.1°/。和396.0%(參見表l，圖l)。表l蜂膠中5種黃酮類物質(zhì)酸解前后含量(mg/100g)<table>tableseeoriginaldocumentpage5</column></row><table>蜂膠酸解產(chǎn)物清除DPPH自由基的能力高于同濃度的對照蜂膠，41min時酸解蜂膠對DPPH的抑制率達到91.5n/c)，與蜂膠本身相比提高了26.6%(參見表2，圖2)。表2蜂膠黃酮酸解產(chǎn)物清除DPPH自由基能力<table>tableseeoriginaldocumentpage5</column></row><table>準(zhǔn)確稱取60.0g新鮮豬油，在其中添加0.02%的蜂膠，置于55士2"C的恒溫箱中，定期取樣，測定其1天、3天、5天、7天、9天、11天、13天、15天時的過氧化值(POV)。按GB/T5009.37-1996的規(guī)定，豬油POV^).20。/。時為超標(biāo)。蜂膠酸解產(chǎn)物第15天時的POV是0.289。/。，而對照組蜂膠的POV是0.590Q/。，此時空白樣品已達0.886%(參見表3，圖3)。結(jié)果表明酸解產(chǎn)物具有較好的抗豬油氧化性能，顯著優(yōu)于原料蜂膠。表3豬油過氧化值(％)<table>tableseeoriginaldocumentpage5</column></row><table>空白0.0370.0690.1130.1770.2260.3080.5570.886對照蜂膠0.0360.0650.0840.0850.1190.1820.3290.5卯酸解蜂膠0.0330.0420.0460.0520細0.0950.1540.289實施例2稱取一定量的蜂膠提取物，按固液比m固V液(mg:mL)=2:l加入一定體積的水解液(4mol/L鹽酸與乙醇配成體積分?jǐn)?shù)為70%的溶液)，58。C水解4.0小時。高效液相色譜測定蘆丁、楊梅酮、槲皮素、山奈酚、異鼠李素含量，該酸解條件下所得產(chǎn)物蜂膠中的黃酮苷類物質(zhì)盧丁由酸解前的836.92mg/100g降低到酸解后的342.12mg/100g,水解率達59.1%，苷元類物質(zhì)槲皮素、山奈酚和異鼠李素的含量均有所增加，分別提高了36.6%、104%和314.6%(參見表4，圖4)。表4蜂膠中5種黃酮類物質(zhì)酸解前后含量(mg/100g)黃酮種類酸解前含量酸解后含量蘆丁836.92342.12楊梅酮507.15127.86槲皮素304.99416.66山奈酚196.54400.97異鼠李素318.241319.40蜂膠酸解產(chǎn)物清除DPPH自由基的能力高于同濃度的對照蜂膠，41min時酸解蜂膠對DPPH的抑制率達到71.1。/。，與蜂膠本身相比提高了6.2%(參見表5，圖5)。表5蜂膠黃酮酸解產(chǎn)物清除DPPH自由基能力時間/min1611162126313641對照蜂膠/%43.851.354.657.259.161.062.463.764.9酸解蜂膠/%50.858.862.564.866.568.069.170.271.1蜂膠酸解產(chǎn)物第15天時的POV是0.422n/。，對照組蜂膠的POV是0.590e/0，此時空白樣品已達0.886%(參見表6，圖6)。表6豬油過氧化值(％)<table>tableseeoriginaldocumentpage7</column></row><table>實施例3稱取一定量的蜂膠提取物，按固液比m固V液(mg:mL)=4:l加入一定體積的水解液(2mol/L鹽酸與乙醇配成體積分?jǐn)?shù)為70%的溶液)，78。C水解1小時。高效液相色譜測定蘆丁、楊梅酮、槲皮素、山奈酚、異鼠李素含量，該酸解條件下所得產(chǎn)物蜂膠中的黃酮苷類物質(zhì)蘆丁由酸解前的836.92mg/100g降低到酸解后的678.98mg/100g，水解率達18.9%，苷元類物質(zhì)槲皮素、山奈酚和異鼠李素的含量均有所增加，分別提高了19.8%、42.9%和104.9%(參見表7，圖7)。表7蜂膠中5種黃酮類物質(zhì)酸解前后含量(mg/100g)<table>tableseeoriginaldocumentpage7</column></row><table>蜂膠酸解產(chǎn)物清除DPPH自由基的能力高于同濃度的對照蜂膠，41min時酸解蜂膠對DPPH的抑制率為68.6。/。，與蜂膠本身相比提高了3.7%(參見表8，圖8)。表8蜂膠黃酮酸解產(chǎn)物清除DPPH自由基能力<table>tableseeoriginaldocumentpage7</column></row><table>蜂膠酸解產(chǎn)物第15天時的POV是0.538e/。，對照組蜂膠的POV是0.590e/0，此時空白樣品己達0.886%(參見表9，圖9)。表9豬油過氧化值(％)<table>tableseeoriginaldocumentpage8</column></row><table>權(quán)利要求1.一種酸解蜂膠黃酮苷的方法，其特征是通過以下步驟實現(xiàn)稱取蜂膠乙醇提取物，放入具塞三角燒瓶中，按固液比m固∶V液(mg∶mL)＝4∶1～1∶4加入由鹽酸與乙醇配成的水解液，放入58℃～98℃的水浴鍋中水解0.5～4小時，將酸解產(chǎn)物旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)濃縮得浸膏，冷凍干燥，得蜂膠黃酮苷酸解產(chǎn)物。2.根據(jù)權(quán)利要求l所述的一種酸解蜂膠黃酮苷的方法，其特征是水解液是lmol/L6mol/L鹽酸與乙醇配成體積分?jǐn)?shù)為70%的溶液。全文摘要本發(fā)明提供一種酸解蜂膠黃酮苷的方法，采用鹽酸對蜂膠黃酮苷進行恒溫酸解，通過酸解，蜂膠黃酮苷類物質(zhì)水解為黃酮苷元，與原料相比，產(chǎn)物的抗氧化性能增強。本發(fā)明是對蜂膠產(chǎn)品的深度開發(fā)利用，有利于提高蜂產(chǎn)品的附加值，開拓其應(yīng)用范圍。制得的蜂膠酶解產(chǎn)物比原料蜂膠抗氧化性能顯著提高，可更好地應(yīng)用于醫(yī)藥、食品和化妝品等領(lǐng)域。文檔編號C09K15/06GK101307083SQ20081006305公開日2008年11月19日申請日期2008年7月8日優(yōu)先權(quán)日2008年7月8日發(fā)明者劉亞男,李英華,胡福良申請人:浙江大學(xué)