專利名稱：一種雙酶法提取紫甘薯花色苷的工藝的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種紫甘薯花色苷的提取方法，屬于天然食用色素的提取技術(shù)領(lǐng)域。 涉及以冷凍紫甘薯為原料，采用α-淀粉酶和果膠酶進(jìn)行雙酶法提取紫甘薯花色苷的工藝。
背景技術(shù)：
20世紀(jì)初，隨著毒理及生物學(xué)研究的不斷深入，發(fā)現(xiàn)合成食用色素中，多數(shù)種類對(duì)人體都會(huì)產(chǎn)生不同程度的傷害，甚至具有致癌、致畸變等毒性作用，其中以偶氮類的致癌作用最明顯。相較之下，天然食用色素不僅無毒副作用、色澤自然且兼具藥用功效，因此日益受到人們的推崇。天然食用色素種類繁多，其中備受人們關(guān)注，應(yīng)用廣泛的紅紫色系列主要包括辣椒紅素、紅曲紅素、焦糖色素以及花色素等?；ㄉ厥且活悘V泛存在于自然界植物中的水溶性色素，屬于類黃酮化合物。在自然狀態(tài)下，通常與糖通過糖苷鍵結(jié)合形成糖苷，稱為花色苷。因其安全、色澤鮮亮自然、無特殊氣味兼具抗氧化、保護(hù)肝臟等保健功效，受到廣泛關(guān)注，現(xiàn)已投入工業(yè)化生產(chǎn)。紫甘薯，花色苷含量高，易栽培，產(chǎn)量高，已成為獲取天然花色苷的理想作物。因此，紫甘薯中花色苷的開發(fā)和利用成為一大研究熱點(diǎn)。近年來，對(duì)紫甘薯花色苷提取方法的研究很多，包括溶劑提取法、發(fā)酵法、酶解法等。申請(qǐng)公布號(hào)CN 101735646 Α(申請(qǐng)?zhí)?0091(^63045. 7)的中國(guó)專利文獻(xiàn)公開了一種紫甘薯花色苷的分離提取方法將新鮮紫甘薯清洗后打漿破碎；然后放入酸性乙醇水溶液中，采用超聲波輔助浸提；浸提液經(jīng)過濾、減壓濃縮后，采用非極性大孔吸附樹脂NKA吸附，用水洗雜，用酸性乙醇水溶液洗脫；洗脫液濃縮干燥得紫甘薯花色苷產(chǎn)品。申請(qǐng)公布號(hào) CN 101735644 A (申請(qǐng)?zhí)?00910234497. 2)的中國(guó)專利文獻(xiàn)公開了一種紫甘薯花色苷的提取方法。將紫甘薯進(jìn)行微波烘烤置熟后，然置于酸性電解水中反復(fù)勻漿萃取，再經(jīng)過濾、 分離和干燥處理，制成花色苷粉末。公開號(hào)CN 10i;343298A (申請(qǐng)?zhí)?00810054180. 6)的中國(guó)專利文獻(xiàn)涉及一種陽離子交換樹脂二次純化紫甘薯花色苷的制各方法，主要技術(shù)特點(diǎn)是以紫甘薯花色苷的一次精制產(chǎn)品作為原料，一次精制產(chǎn)品用陽離子交換樹脂吸附、除雜、洗脫，冷凍干燥的方法獲得二次精制紫甘薯花色苷產(chǎn)品。但包括上述專利文獻(xiàn)在內(nèi)的現(xiàn)有的提取方法都存在各自的缺點(diǎn)，例如，酸化水溶液提取法會(huì)造成大量的廢酸液排放，污染環(huán)境；發(fā)酵法工藝復(fù)雜，生產(chǎn)成本高，不利于大規(guī)模工業(yè)生產(chǎn)；單一酶提取法，提取效率低，產(chǎn)品色價(jià)很難提高，其提取率和產(chǎn)品色價(jià)都相對(duì)較低。本專利方法是對(duì)現(xiàn)有的提取方法研究比較后，得到的色素含量和色價(jià)都較高的提取方法。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的在于避免上述提取方法中的不足之處，采用經(jīng)濟(jì)、安全、高效、無污染的提取方法從紫甘薯中提取花色苷，充分利用紫甘薯資源，為食用色素行業(yè)提供一種新型的提取工藝。本發(fā)明的目的可以通過以下措施來達(dá)到
一種雙酶法提取紫甘薯花色苷的工藝，是以冷凍紫甘薯為原料，經(jīng)雙酶法制得紫甘薯酶解液，之后用大孔樹脂純化，得到高純度的紫甘薯花色苷濃縮液。前面所述的工藝，優(yōu)選的方案在于所述的雙酶法為依次使用α -淀粉酶和果膠酶進(jìn)行酶解。前面所述的工藝，優(yōu)選的方案在于所述的雙酶法具體步驟如下
(1)冷凍紫甘薯去皮破碎，與水混合得混合液，加入異Vc鈉、檸檬酸，護(hù)色4(T60min；
(2)經(jīng)糊化、打漿，調(diào)節(jié)pH至4.5^5. 5，加入α -淀粉酶酶解后，再加入果膠酶繼續(xù)酶解 2 2. 5h ；
(3)離心(優(yōu)選的離心轉(zhuǎn)速為4000r/min)2(T30min，90 95°C條件下滅酶l(T20min ；
(4)冷卻后將pH調(diào)至2 3，制得紫甘薯酶解液。前面所述的工藝，優(yōu)選的方案在于所述的步驟(1)按料水比1:14 16 (優(yōu)選 1:14. 5-15. 5)的比例將冷凍紫甘薯與水混合，得混合液。前面所述的工藝，優(yōu)選的方案在于所用異Vc鈉的用量為混合液質(zhì)量的0. Γ0. 2% (優(yōu)選0. 12 0. 16%)，所用檸檬酸的用量為混合液質(zhì)量的0. 4 0. 5% (優(yōu)選0. 42、. 46%)。前面所述的工藝，優(yōu)選的方案在于步驟(2)中所述的糊化條件為于7(T76°C (優(yōu)選 72-750C )下糊化 5 IOmin (優(yōu)選 6-8min)0前面所述的工藝，優(yōu)選的方案在于步驟(2)中所述的α -淀粉酶的規(guī)格為4、/ g，在4(T55°C下酶解廣1. 5h后，再加入果膠酶繼續(xù)酶解，所用果膠酶的規(guī)格為5 15U/g。前面所述的工藝，優(yōu)選的方案在于所述大孔樹脂純化使用AB-8型大孔樹脂進(jìn)行純化。前面所述的工藝，優(yōu)選的方案在于所述大孔樹脂純化具體步驟是將紫甘薯酶解液濃縮，采用AB-8型大孔樹脂上樣，用乙醇解析，解析液經(jīng)濃縮后得到高純度的紫甘薯花色苷濃縮液。前面所述的工藝，優(yōu)選的方案在于所述大孔樹脂純化具體步驟是將紫甘薯酶解液濃縮至花色苷濃度為0. 2 0. :3mg/mL，采用AB-8型大孔樹脂，以廣2 mL/min的流速上樣，用乙醇(優(yōu)選使用PH為3、質(zhì)量濃度為6(Γ70%的乙醇)以纊3 mL/min流速進(jìn)行解析， 解析液經(jīng)濃縮后得到高純度的紫甘薯花色苷濃縮液。本發(fā)明涉及一種天然紫甘薯花色苷的酶法提取工藝，其特征是以冷凍紫甘薯為原料，經(jīng)去皮破碎、護(hù)色糊化、打漿后、調(diào)至適宜PH及溫度，依次加入α -淀粉酶，果膠酶進(jìn)行酶解，酶解液經(jīng)離心、滅酶、純化、濃縮等工藝，得到高純度的紫甘薯花色苷濃縮液。本發(fā)明工藝流程簡(jiǎn)單，成本低，最終產(chǎn)品澄清透明，無薯味，純度高，易于保存，色價(jià)可達(dá)50。是一種良好的天然食用色素產(chǎn)品。本發(fā)明與現(xiàn)有的紫甘薯花色苷提取工藝相比有如下優(yōu)點(diǎn)
1.工藝簡(jiǎn)便采用α-淀粉酶和果膠酶進(jìn)行雙酶法提取工藝，雖然兩種酶各自最適的酶解條件不同，但經(jīng)研究得到了雙酶法酶解的適中條件，使工藝大大簡(jiǎn)化，便于工業(yè)化生產(chǎn)。2.安全無污染采用水作為提取溶劑，避免了有機(jī)溶劑對(duì)花色苷結(jié)構(gòu)的破壞，而且減少了廢液排放帶來的環(huán)境污染。3.產(chǎn)品色價(jià)高本發(fā)明創(chuàng)新的采用了雙酶法提取紫甘薯中的花色苷，解決了單一酶法提取率和產(chǎn)品色價(jià)都相對(duì)較低的問題。


圖1為實(shí)施例1所得紫甘薯花色苷的紫外光譜圖。
具體實(shí)施例方式下面結(jié)合實(shí)施例和附圖詳細(xì)說明本發(fā)明的技術(shù)方案，但保護(hù)范圍不被此限制。實(shí)施例中所用設(shè)備或原料皆可從市場(chǎng)獲得，比如所用α-淀粉酶購(gòu)自北京奧博星生物技術(shù)有限責(zé)任公司，果膠酶購(gòu)自帝斯曼食品有限公司。所用異Vc鈉購(gòu)自江西省德興市百勤異Vc 鈉有限公司、檸檬酸自天津博迪化工股份有限公司，所用ΑΒ-8型大孔樹脂為上海藍(lán)季科技發(fā)展有限公司提供。參照王智勇(《紫甘薯色素提取純化工藝及性質(zhì)研究》西南大學(xué)碩士學(xué)位論文 2008)的方法，對(duì)各實(shí)施例所得產(chǎn)品的花色苷含量和得率進(jìn)行測(cè)定，得到的計(jì)算公式如下， 花色苷含量C=26. 201Α+0. 0301，R2=O. 9985 ；花色苷得率:W (mg/g)=CX VX 1(Γ3/Μ，式中 C為花色苷含量，μ g/mL ；V為樣液總體積，mL ；M為紫甘薯取樣量，g。參照楊朝霞(《紫甘薯花色苷提取純化工藝研究及組分分析》青島大學(xué)碩士學(xué)位論文2004)的方法，對(duì)產(chǎn)品色價(jià)進(jìn)行測(cè)定，公式如下色價(jià)=(Α/Μ) XK，式中A為吸光度值； M為樣品質(zhì)量，g;K為稀釋倍數(shù)。實(shí)施例1 一種雙酶法提取紫甘薯花色苷的工藝，是以冷凍紫甘薯為原料，經(jīng)雙酶法制得紫甘薯酶解液，之后用大孔樹脂純化，得到高純度的紫甘薯花色苷濃縮液。所述的雙酶法為依次使用α-淀粉酶和果膠酶進(jìn)行酶解。所述大孔樹脂純化使用ΑΒ-8型大孔樹脂進(jìn)行純化。具體步驟是
雙酶法提取工藝為選用凍藏的無病蟲害及腐爛的紫甘薯，洗凈后解凍，去皮破碎后， 按料水比為1:14混合得到混合液，向混合溶液中加入占總重0. 1%的異Vc鈉、0. 4%的檸檬酸，護(hù)色40min ；將原料置于70°C條件下糊化5min ；打漿后，將料液調(diào)至酶解所需pH4. 5，加入4 6U/g的α -淀粉酶，在40°C條件下，酶解lh，再加入5 15U/g的果膠酶繼續(xù)酶解2h。 酶解后在4000r/min轉(zhuǎn)速下，離心20min后，在90°C條件下，滅酶IOmin。冷卻后，將酶解液 pH調(diào)至2。大孔樹脂純化工藝為
酶解液經(jīng)減壓蒸餾，濃縮至花色苷濃度0. 2mg/mL,采用AB-8型大孔樹脂進(jìn)行純化，以 1 mL/min流速上樣，吸附飽和后，用檸檬酸-檸檬酸鈉緩沖溶液(pH=3)洗去極性較大的雜質(zhì)后，用PH 3、質(zhì)量濃度為60%的乙醇，以2 mL/min流速進(jìn)行解析。解析液經(jīng)濃縮后得到高純度、高色價(jià)的紫甘薯花色苷濃縮液。最終產(chǎn)品色價(jià)為51. 23，花色苷濃度為14. 92mg/ml，得率為2. 08mg/g。圖1為所得紫甘薯花色苷的紫外光譜圖，采用TU-1900雙光束紫外可見分光光度計(jì)(北京普析通用儀器有限責(zé)任公司)，由此可見，紫甘薯花色苷在^7nml98nm (苯甲酰基組成的交叉共軛體系)和326rniT334nm (桂皮?；M成的交叉共軛體系)處分別有一個(gè)吸收
5峰，證明花色苷的?；Y(jié)構(gòu)未被破壞。實(shí)施例2 —種雙酶法提取紫甘薯花色苷的工藝，基本步驟可參照實(shí)施例1，但與之不同的是
雙酶法提取工藝為選用凍藏的無病蟲害及腐爛的紫甘薯，洗凈后解凍，去皮破碎后，按料水比為1 16混合，向溶液中加入占溶液總重0. 2%的異Vc鈉、0. 5%的檸檬酸，護(hù)色60min;將原料置于76°C條件下糊化IOmin ；打漿后，將料液調(diào)至酶解所需pH5. 5，加入 4 6U/g的α -淀粉酶，在條件下，酶解1. 5h，再加入5 15U/g的果膠酶繼續(xù)酶解2. 5h。 酶解后在4000r/min轉(zhuǎn)速下，離心30min后，在95°C條件下，滅酶20min。冷卻后，將酶解液 pH調(diào)至3。大孔樹脂純化工藝為
酶解液經(jīng)減壓蒸餾，濃縮至花色苷濃度0. 3mg/mL,采用AB-8型大孔樹脂進(jìn)行純化，以 2 mL/min流速上樣，吸附飽和后，用檸檬酸-檸檬酸鈉緩沖溶液(pH=3)洗去極性較大的雜質(zhì)后，用PH 3、質(zhì)量濃度為70%乙醇，以3 mL/min流速進(jìn)行解析。解析液經(jīng)濃縮后得到高純度、高色價(jià)的紫甘薯花色苷濃縮液。最終產(chǎn)品色價(jià)為51. 32，花色苷濃度為15. 01mg/ml，得率為2. 22mg/g。實(shí)施例3 —種雙酶法提取紫甘薯花色苷的工藝，基本步驟可參照實(shí)施例1，但與之不同的是
雙酶法提取工藝為選用凍藏的無病蟲害及腐爛的紫甘薯，洗凈后解凍，去皮破碎后， 按料水比為1:14. 5混合，向溶液中加入占溶液總重0. 1 的異Vc鈉、0.似％的檸檬酸，護(hù)色 50min ；將原料置于72°C條件下糊化6min ；打漿后，將料液調(diào)至酶解所需pH5. 0，加入4 6U/ g的α -淀粉酶，在45°C條件下，酶解1. 2h，再加入5 15U/g的果膠酶繼續(xù)酶解2. 2h。酶解后在4000r/min轉(zhuǎn)速下，離心25min后，在92°C條件下，滅酶15min。冷卻后，將酶解液pH 調(diào)至2. 5。大孔樹脂純化工藝為
酶解液經(jīng)減壓蒸餾，濃縮至花色苷濃度0. 25mg/mL，采用AB-8型大孔樹脂進(jìn)行純化， 以1.5 mL/min流速上樣，吸附飽和后，用檸檬酸-檸檬酸鈉緩沖溶液(pH=3)洗去極性較大的雜質(zhì)后，用PH 3、65%乙醇，以2. 5 mL/min流速進(jìn)行解析。解析液經(jīng)濃縮后得到高純度、 高色價(jià)的紫甘薯花色苷濃縮液。最終產(chǎn)品色價(jià)為51. 31，花色苷濃度為14. 98mg/ml，得率為2. 33mg/go實(shí)施例4 一種雙酶法提取紫甘薯花色苷的工藝，基本步驟可參照實(shí)施例1，但與之不同的是
雙酶法提取工藝為選用凍藏的無病蟲害及腐爛的紫甘薯，洗凈后解凍，去皮破碎后， 按料水比為1:15. 5混合，向溶液中加入占溶液總重0. 16%的異VdLO. 46%的檸檬酸，護(hù)色 45min ；將原料置于75°C條件下糊化Smin ；打漿后，將料液調(diào)至酶解所需pH5. 5，加入4 6U/ g的α -淀粉酶，在50°C條件下，酶解1. 5h，再加入5 15U/g的果膠酶繼續(xù)酶解2.證。酶解后在4000r/min轉(zhuǎn)速下，離心30min后，在92°C條件下，滅酶15min。冷卻后，將酶解液pH 調(diào)至3。大孔樹脂純化工藝為
酶解液經(jīng)減壓蒸餾，濃縮至花色苷濃度0. ^mg/mL，采用AB-8型大孔樹脂進(jìn)行純化，以1.8 mL/min流速上樣，吸附飽和后，用檸檬酸-檸檬酸鈉緩沖溶液(pH=3)洗去極性較大的雜質(zhì)后，用PH 3、68%乙醇，以2. 8 mL/min流速進(jìn)行解析。解析液經(jīng)濃縮后得到高純度、 高色價(jià)的紫甘薯花色苷濃縮液。 最終產(chǎn)品色價(jià)為51. 52，花色苷濃度為15. (Mmg/ml，得率為2. ^mg/g。
權(quán)利要求
1.一種雙酶法提取紫甘薯花色苷的工藝，其特征在于以冷凍紫甘薯為原料，經(jīng)雙酶法制得紫甘薯酶解液，之后用大孔樹脂純化，得到高純度的紫甘薯花色苷濃縮液。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的工藝，其特征在于所述的雙酶法為依次使用α-淀粉酶和果膠酶進(jìn)行酶解。
3.根據(jù)權(quán)利要求2所述的工藝，其特征在于所述的雙酶法具體步驟如下(1)冷凍紫甘薯去皮破碎，與水混合得混合液，加入異Vc鈉、檸檬酸，護(hù)色4(T60min；(2)經(jīng)糊化、打漿，調(diào)節(jié)pH至4.5^5. 5，加入α -淀粉酶酶解后，再加入果膠酶繼續(xù)酶解 2 2. 5h ；(3)離心(優(yōu)選的，離心轉(zhuǎn)速為4000r/min)2(T30min，90 95°C條件下滅酶l(T20min ；(4)冷卻后將pH調(diào)至2 3，制得紫甘薯酶解液。
4.根據(jù)權(quán)利要求3所述的工藝，其特征在于所述的步驟(1)按料水比1:14 16(優(yōu)選 1:14. 5-15. 5)的比例將冷凍紫甘薯與水混合，得混合液。
5.根據(jù)權(quán)利要求3所述的工藝，其特征在于所用異Vc鈉的用量為混合液質(zhì)量的0. Γ0. 2% (優(yōu)選0.12、. 16%)，所用檸檬酸的用量為混合液質(zhì)量的0.4 0.5% (優(yōu)選 0. 42、. 46%) ο
6.根據(jù)權(quán)利要求3所述的工藝，其特征在于步驟(2)中所述的糊化條件為于7(T76°C (優(yōu)選72-75°C )下糊化5 IOmin (優(yōu)選6_&ι η)。
7.根據(jù)權(quán)利要求3所述的工藝，其特征在于步驟(2)中所述的α-淀粉酶的規(guī)格為4 6U/g，在4(T55°C下酶解廣1.證后，再加入果膠酶繼續(xù)酶解，所用果膠酶的規(guī)格為5 15U/ g°
8.根據(jù)權(quán)利要求1所述的工藝，其特征在于所述大孔樹脂純化使用AB-8型大孔樹脂進(jìn)行純化。
9.根據(jù)權(quán)利要求8所述的工藝，其特征在于所述大孔樹脂純化具體步驟是將紫甘薯酶解液濃縮，采用AB-8型大孔樹脂上樣，用乙醇解析，解析液經(jīng)濃縮后得到高純度的紫甘薯花色苷濃縮液。
10.根據(jù)權(quán)利要求9所述的工藝，其特征在于所述大孔樹脂純化具體步驟是將紫甘薯酶解液濃縮至花色苷濃度為0. 2 0. :3mg/mL，采用AB-8型大孔樹脂，以廣2 mL/min的流速上樣，用乙醇(優(yōu)選使用PH為3、質(zhì)量濃度為6(Γ70%的乙醇)以纊3 mL/min流速進(jìn)行解析，解析液經(jīng)濃縮后得到高純度的紫甘薯花色苷濃縮液。
全文摘要
本發(fā)明公開了一種雙酶法提取紫甘薯花色苷的工藝，是以冷凍紫甘薯為原料，經(jīng)雙酶法制得紫甘薯酶解液，之后用大孔樹脂純化，得到高純度的紫甘薯花色苷濃縮液。本發(fā)明工藝流程簡(jiǎn)單，成本低，最終產(chǎn)品澄清透明，無薯味，純度高，易于保存，色價(jià)相對(duì)較高。
文檔編號(hào)C09B61/00GK102337043SQ20111027783
公開日2012年2月1日 申請(qǐng)日期2011年9月19日 優(yōu)先權(quán)日2011年9月19日
發(fā)明者尹花仙, 湯海賓, 申京宇, 鮑誠(chéng) 申請(qǐng)人:煙臺(tái)大學(xué)