專利名稱：一種氨基酸-熒光團(tuán)類化合物及其應(yīng)用的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及氨基酸-linker-熒光團(tuán)類化合物及其作為氨肽酶N的小分子熒光探針和篩選氨肽酶N抑制劑中的應(yīng)用，屬于藥物技術(shù)領(lǐng)域。
背景技術(shù)：
氨肽酶N(A PN，⑶13)廣泛表達(dá)于腎臟和腸刷狀緣細(xì)胞、骨髓始祖細(xì)胞膜、單核細(xì)胞膜、中樞神經(jīng)系統(tǒng)突觸細(xì)胞膜、成纖維細(xì)胞、內(nèi)皮細(xì)胞膜、胎盤細(xì)胞膜表面，能夠從蛋白質(zhì)的N末端降解釋放氨基酸。與正常細(xì)胞活動(dòng)相比，該酶在腫瘤細(xì)胞表面過度表達(dá)， 對(duì)腫瘤的侵襲、血管生成具有重要作用。另外，該蛋白酶作為許多病毒(如引起新生豬急性胃腸炎的播散性胃腸炎病毒以及引起人上呼吸道感染冠狀病毒HCV 229E)的受體參與相應(yīng)的生理反應(yīng)。它還能夠表達(dá)于抗原遞呈細(xì)胞表面，降解多種免疫活性物質(zhì)，使機(jī)體免疫力下降，削弱巨噬細(xì)胞和N K細(xì)胞對(duì)腫瘤細(xì)胞的識(shí)別和殺傷能力[Zhang，X. P. ；Xu, ff. F. Aminopeptidase N(APN/CD13)as a target for anti-cancer agent design. Curr Med Chem 2008，15,2850-2865]。雖然人類對(duì)APN的功能已經(jīng)有了很多了解，但是對(duì)于APN活性和組織分布的檢測(cè)方法并沒有太多的研究?，F(xiàn)有的方法包括免疫標(biāo)記法、同位素標(biāo)記法和熒光法。免疫標(biāo)記法不能實(shí)現(xiàn)活體內(nèi)的檢測(cè)，同位素標(biāo)記法雖然能夠?qū)崿F(xiàn)活體內(nèi)檢測(cè)，但是具有放射毒性。相比較而言熒光法具有靈敏度、毒性小、能夠?qū)崿F(xiàn)活體內(nèi)檢測(cè)的優(yōu)點(diǎn)。將熒光團(tuán)與APN靶向性配體NGR連接，利用NGR的靶向性測(cè)定活體內(nèi)APN的組織分布情況是最近幾年的研究方法 [(a)vonffallbrunn, A. ；ffaldeck, J. ；Holtke, C. ；Zuehlsdorf, M. ；Mesters, R. ；Heindel, ff. ；Schafers, M. ；Bremer, C. In vivo optical imaging of CD 13/APN-expression in tumor xenografts. J Biomed opt2008,13,011007-1—011007-9. (b)Smith, R. A.； Giorgio, T. D. Quantitative measurement ofmultifunctional quantum dot binding to cellular targets using flow cytometry. Cytometry Part A2009,75A, 465-474].然而， 這些分子探針的使用由于較強(qiáng)的背景信號(hào)而受到限制。因此，設(shè)計(jì)合成選擇性好、靈敏度高、信噪比大、毒性小的APN熒光探針具有重要的意義。研究表明，基于酶活性的可激活探針自身沒有熒光，當(dāng)其與酶作用后釋放出熒光團(tuán)而產(chǎn)生突光[Chen, X. Q. ；Sun, M. ；Ma, Η. M. Progress in spectroscopic probes with cleavable activebonds. Curr org chem 2006,10,477-489]。因?yàn)?APN 能夠從妝鏈的氛基端逐步降解肽鏈，如果將APN特異性氨基酸殘基與熒光團(tuán)通過肽鍵連接合成具有APN選擇性的可激活小分子熒光探針，進(jìn)而測(cè)定各種APN高表達(dá)動(dòng)物模型體內(nèi)的APN活性和組織分布，研究其與腫瘤、血管生成和免疫系統(tǒng)的關(guān)系，勢(shì)必能為腫瘤和免疫系統(tǒng)疾病的早起診斷和預(yù)防提供依據(jù)。另外，對(duì)氨肽酶N抑制劑的篩選還是以紫外吸收法為主，該方法具有靈敏度低、成本高、測(cè)試時(shí)間長(zhǎng)等缺點(diǎn)。如果我們能夠找到一理想的熒光探針進(jìn)行氨肽酶N的酶活實(shí)驗(yàn)，也可為氨肽酶N抑制劑的篩選提供一個(gè)平臺(tái)。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明針對(duì)現(xiàn)有技術(shù)的不足，提供一種氨基酸-熒光素類化合物及其制備方法和在制藥領(lǐng)域的應(yīng)用。為實(shí)現(xiàn)上述目的，本發(fā)明采用下述技術(shù)方案—種氨基酸-熒光團(tuán)類化合物及其應(yīng)用。其結(jié)構(gòu)通式為(I)、(II)、(III)或(IV)， 或它們的游離形式，
權(quán)利要求
1. 一種氨基酸-熒光團(tuán)類化合物，其結(jié)構(gòu)通式為(I)、(II)、(III)或(IV)，或它們的游離形式，
2.根據(jù)權(quán)利要求I所述的化合物，其特征在于，所述Rl為甲基、丙基、2-甲硫基乙基、 苯甲基、苯乙基、2-環(huán)己基乙基、4-異丙基苯基或4- 二甲氨基苯基。
3.根據(jù)權(quán)利要求I所述的化合物，其特征在于，所述R2為7-羥基香豆素、萘二酰亞胺類熒光團(tuán)、尼羅紅系列或Cy系列熒光團(tuán)。
4.根據(jù)權(quán)利要求I所述的化合物，其特征在于，具有如下結(jié)構(gòu)之一
5.如權(quán)利要求1-4任一項(xiàng)所述的化合物作為氨肽酶N的小分子熒光探針的應(yīng)用。
6.如權(quán)利要求1-4任一項(xiàng)所述的化合物在篩選氨肽酶N抑制劑，檢測(cè)氨肽酶N的組織分布和腫瘤細(xì)胞及組織成像的應(yīng)用。
7.如權(quán)利要求1-4任一項(xiàng)所述的化合物作為參比熒光探針在篩選氨肽酶N抑制劑中的應(yīng)用。
8.如權(quán)利要求1-4任一項(xiàng)所述的化合物在各類氨肽酶N異常表達(dá)疾病診斷中的應(yīng)用。
全文摘要
本發(fā)明涉及一種氨基酸-熒光團(tuán)類化合物及其應(yīng)用。其結(jié)構(gòu)通式為(I)、(II)、(III)、(IV)或者它們的游離形式，式中R1為各種氨基酸側(cè)鏈，優(yōu)選甲基、丙基、2-甲硫基乙基、苯甲基、苯乙基、2-環(huán)己基乙基、4-異丙基苯基、4-二甲氨基苯基；R2為各種熒光團(tuán)，優(yōu)選7-羥基香豆素、萘二酰亞胺類熒光團(tuán)、尼羅紅系列和Cy系列熒光團(tuán)；X為C或者N。該類熒光探針分子可用來檢測(cè)氨肽酶N的活性(酶水平和細(xì)胞水平)，可作為探針工具來檢測(cè)氨肽酶N的組織分布和進(jìn)行腫瘤組織成像，可作為各類氨肽酶N異常表達(dá)疾病的診斷工具。此外，該類化合物制備方法反應(yīng)條件溫和，原料便宜易得，操作及后處理簡(jiǎn)單。
文檔編號(hào)C09K11/06GK102603695SQ20121003039
公開日2012年7月25日 申請(qǐng)日期2012年2月10日 優(yōu)先權(quán)日2012年2月10日
發(fā)明者李敏勇, 杜呂佩, 陳來中 申請(qǐng)人:山東大學(xué)