專(zhuān)利名稱(chēng)：蘇木素染色液以及含蘇木素染色液的巴氏染色試劑盒的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及體外診斷領(lǐng)域，特別涉及一種蘇木素染色液、含蘇木素染色液的巴氏染色試劑盒及其染色方法。
背景技術(shù)：
染色是利用染料在組織切片上給與顏色，使染料中的染色劑與組織或細(xì)胞內(nèi)的某種成分發(fā)生作用，經(jīng)過(guò)透明后通過(guò)光譜吸收和折射，使其各種微細(xì)結(jié)構(gòu)能顯現(xiàn)不同顏色，這樣在顯微鏡下就可顯示出組織或細(xì)胞結(jié)構(gòu)的技術(shù)。巴氏染色法是液基薄層細(xì)胞學(xué)制片中最好的最常用的染色方法。該染色法不但具有顯示細(xì)胞結(jié)構(gòu)清晰，分色明顯，透明度好，胞漿顏色鮮艷等特點(diǎn)，而且所染標(biāo)本不易脫色，可長(zhǎng)久保存。使用蘇木素染色液進(jìn)行核染色是巴氏染色法中比較關(guān)鍵的一步，在使用傳統(tǒng)蘇木 素染色液進(jìn)行核染色時(shí)，一般有兩種方法一是過(guò)染法，首先有意識(shí)地進(jìn)行深染，需要通過(guò)鹽酸分化過(guò)程使核染色趨于合適，染色過(guò)程復(fù)雜；二是淡染法，在核染色過(guò)程中，需要嚴(yán)格掌握染色時(shí)間，使核染色適宜而不用鹽酸分化。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明要解決的技術(shù)問(wèn)題為提供一種無(wú)需嚴(yán)格控制染色時(shí)間也不會(huì)過(guò)染的蘇木素染色液，含蘇木素染色液的巴氏染色試劑盒及其染色方法。具體地，本發(fā)明提供了一種蘇木素染色液，其組分及重量百分比為蘇木精O. 05%-1%醇10%_50%硫酸鋁O. 5%-5%氧化劑O. 01%-0· 1%弱酸0.5%-10%其余為水。上述蘇木素染色液中，所述醇為甲醇、乙醇、異丙醇或丙三醇中的任意一種或幾種。優(yōu)選地，所述醇至少包括丙三醇；丙三醇的加入有利于提高蘇木素染色液的穩(wěn)定性，保證染色效果。所述氧化劑為氧化汞或碘酸鈉。所述弱酸為乙酸、碳酸、檸檬酸或磷酸中的任意一種。上述蘇木素染色液中，硫酸鋁的加入加強(qiáng)了蘇木素染色液的著色能力，可縮短蘇木素染色液染細(xì)胞核的時(shí)間。本發(fā)明蘇木素染色液通過(guò)調(diào)整蘇木精、醇以及氧化劑的濃度，使得染色液中氧化后的蘇木精濃度接近著色后細(xì)胞內(nèi)的蘇木精濃度，從而使得細(xì)胞核不會(huì)發(fā)生過(guò)染。
本發(fā)明的另一個(gè)目的在于提供一種巴氏染色試劑盒，包括上述蘇木素染色液。優(yōu)選地，上述巴氏染色試劑盒還包括EA/0G染色液、返藍(lán)試劑和脫水劑。所述EA/0G染色液由以下重量百分比的成分組成伊紅Y O. 02%-2%亮綠0.01%-1%磷鎢酸O. 05%-5%醇10%_95%碳酸鋰0.01%-1%
其余為水。上述EA/0G染色液中，所述醇為甲醇、乙醇或異丙醇中的任意一種或幾種。上述EA/0G染色液中，磷鎢酸和碳酸鋰可組成緩沖對(duì)，一方面可中和分色及藍(lán)化時(shí)可能留下的酸或堿，保證染色達(dá)到理想效果；另一方面，對(duì)外來(lái)酸堿有一定的緩沖作用，防止外來(lái)酸堿對(duì)染色效果的影響，提高染色的穩(wěn)定性。上述巴氏染色試劑盒中，所述返藍(lán)試劑為磷酸-磷酸鹽緩沖液、Bis-Tris緩沖液或Tris-HCl緩沖液中的任意一種或幾種，所述緩沖液呈堿性，可以加快細(xì)胞核返藍(lán)速度，縮短細(xì)胞核返藍(lán)時(shí)間，并由于是緩沖液，而避免了傳統(tǒng)氨水作為返藍(lán)試劑時(shí)容易出現(xiàn)返藍(lán)過(guò)度的問(wèn)題。上述巴氏染色試劑盒中，所述脫水劑為甲醇、乙醇或異丙醇中的任意一種或幾種。本發(fā)明還提供了一種上述巴氏染色試劑盒的快速染色方法，在常溫下按以下步驟進(jìn)行操作(I)采用液基細(xì)胞自然沉降法制備細(xì)胞抹片，待細(xì)胞完全沉降后加脫水劑處理；( 2 )使用返藍(lán)試劑進(jìn)行水化；(3)使用蘇木素染色液進(jìn)行核染色，后用返藍(lán)試劑進(jìn)行返藍(lán)，并用脫水劑進(jìn)行脫水處理；(4 )使用EA/0G染色液進(jìn)行胞漿染色,使用脫水劑進(jìn)行清洗；(5) 二甲苯透明，封片。本發(fā)明蘇木素染色液具有以下優(yōu)點(diǎn)(I)無(wú)需嚴(yán)格控制時(shí)間也不會(huì)發(fā)生過(guò)染，與傳統(tǒng)的過(guò)染法相比，省了鹽酸分化除去核過(guò)染染料的步驟；(2)含硫酸鋁，加強(qiáng)了蘇木素染色液的著色能力； 含本發(fā)明蘇木素染色液的巴氏染色試劑盒除具有以上優(yōu)點(diǎn)外，還具有以下優(yōu)勢(shì)(I)采用堿性緩沖液作為返藍(lán)試劑，其返藍(lán)速度快，效果好；(2) EA/0G染色液中含有鱗鎢酸和碳酸鋰，對(duì)外來(lái)酸堿有一定的緩沖作用，防止外來(lái)酸堿對(duì)染色效果的影響，提高染色穩(wěn)定性；(3)采用本發(fā)明試劑盒染色的液基薄層細(xì)胞制片后，細(xì)胞核清晰，細(xì)胞漿鮮艷，有利于細(xì)胞學(xué)醫(yī)生的觀察；(4)有效期長(zhǎng)在常溫避光的條件下有效期長(zhǎng)達(dá)一年。


圖I為實(shí)施例4所述細(xì)胞核染色效果圖；圖2為實(shí)施例4所述細(xì)胞巴氏染色結(jié)果圖；圖3為實(shí)施例5所述細(xì)胞核染色效果圖；圖4為實(shí)施例5所述細(xì)胞巴氏染色結(jié)果圖；圖5為實(shí)施例6所述細(xì)胞核染色效果圖；圖6為實(shí)施例6所述細(xì)胞巴氏染色結(jié)果圖；圖7為本發(fā)明蘇木素染色液不同染色時(shí)間的核染色效果圖。
具體實(shí)施例方式為了使本領(lǐng)域的技術(shù)人員更好地理解本發(fā)明的技術(shù)方案，下面結(jié)合具體實(shí)施例對(duì)本發(fā)明作進(jìn)一步的詳細(xì)說(shuō)明。實(shí)施例I本發(fā)明巴氏染色試劑盒的組成及制備(I)本發(fā)明蘇木素染色液，其配方如下
權(quán)利要求
1.一種蘇木素染色液，其組分及重量百分比為 蘇木精O. 05%-1% 醇 10%-50% 硫酸鋁O. 5%-5% 氧化劑 O. 01%-0. 1% 弱酸 O. 5%-10% 其余為水。
2.如權(quán)利要求I所述的蘇木素染色液，其特征在于，所述醇為甲醇、乙醇、異丙醇或丙三醇中的任意一種或幾種。
3.如權(quán)利要求I所述的蘇木素染色液，其特征在于，所述醇至少包括丙三醇。
4.如權(quán)利要求I所述的蘇木素染色液，其特征在于，所述氧化劑為氧化汞或碘酸鈉。
5.如權(quán)利要求I所述的蘇木素染色液，其特征在于，所述弱酸為乙酸、碳酸、檸檬酸或磷酸中的任意一種。
6.一種巴氏染色試劑盒，包括權(quán)利要求I所述的蘇木素染色液。
7.如權(quán)利要求6所述的巴氏染色試劑盒，還包括EA/OG染色液、返藍(lán)試劑和脫水劑。
8.如權(quán)利要求7所述的巴氏染色試劑盒，其特征在于，所述EA/OG染色液由以下重量百分比的成分組成 伊紅 Y0. 02%-2% 亮綠 O. 01%-1% 磷鎢酸O. 05%-5% 醇 10%-95% 碳酸鋰O. 01%-1% 其余為水。
9.如權(quán)利要求7所述的巴氏染色試劑盒，其特征在于，所述返藍(lán)試劑為磷酸-磷酸鹽緩沖液、Bis-Tris緩沖液或Tris-HCl緩沖液中的任意一種或幾種，所述緩沖液呈堿性。
10.如權(quán)利要求7所述的巴氏染色試劑盒，其特征在于，所述脫水劑為甲醇、乙醇或異丙醇中的任意一種或幾種。
11.一種使用權(quán)利要求7-10任一項(xiàng)所述巴氏染色試劑盒的快速染色方法，其特征是在常溫下按以下步驟進(jìn)行操作 (1)采用液基細(xì)胞自然沉降法制備細(xì)胞抹片，待細(xì)胞完全沉降后加脫水劑處理； (2)使用返藍(lán)試劑進(jìn)行水化； (3)使用所述蘇木素染色液進(jìn)行核染色，后用返藍(lán)試劑進(jìn)行返藍(lán)，并用脫水劑進(jìn)行脫水處理； (4)使用EA/OG染色液進(jìn)行胞漿染色，使用脫水劑進(jìn)行清洗； (5)二甲苯透明，封片。
全文摘要
本發(fā)明公開(kāi)了一種蘇木素染色液，含蘇木素染色液的巴氏染色試劑盒及其染色方法。與傳統(tǒng)的蘇木素染色液相比，本發(fā)明蘇木素染色液無(wú)需嚴(yán)格控制染色時(shí)間也不會(huì)發(fā)生核過(guò)染，因此無(wú)需分化即可達(dá)到理想的染色效果。本發(fā)明蘇木素染色液還具有著色能力強(qiáng)，染色時(shí)間短，效果穩(wěn)定，操作簡(jiǎn)單，有效期長(zhǎng)等優(yōu)點(diǎn)。
文檔編號(hào)C09B67/10GK102876081SQ201210359280
公開(kāi)日2013年1月16日 申請(qǐng)日期2012年9月24日 優(yōu)先權(quán)日2012年9月24日
發(fā)明者周華深 申請(qǐng)人:廣州鴻琪光學(xué)儀器科技有限公司