高色調(diào)紅曲紅色素的制備方法
【專(zhuān)利摘要】本發(fā)明提供了一種高色調(diào)紅曲紅色素的制備方法，步驟為：1，紅曲霉菌在種子培養(yǎng)基中進(jìn)行培養(yǎng)，得種子液；2，將所述種子液接種到發(fā)酵培養(yǎng)液中，進(jìn)行發(fā)酵培養(yǎng)，調(diào)節(jié)發(fā)酵培養(yǎng)液的pH值，離心，得紅曲霉菌濕細(xì)胞，提取胞內(nèi)紅曲色素；3，將提取的胞內(nèi)紅曲色素在表面活性劑膠束溶液中加入谷氨酸鈉后實(shí)現(xiàn)紅曲橙色素轉(zhuǎn)化為紅曲紅色素的膠束催化?；蛘邔⒉襟E1所述種子液接種到含非離子表面活性劑的發(fā)酵培養(yǎng)基中，加入谷氨酸鈉并調(diào)節(jié)發(fā)酵培養(yǎng)基的pH值后進(jìn)行培養(yǎng)，得到紅曲紅色素。本發(fā)明采用在發(fā)酵培養(yǎng)基中加入表面活性劑和谷氨酸鈉的方法，制備了紅曲橙色素含量低的高色調(diào)、高色價(jià)的紅曲紅色素。
【專(zhuān)利說(shuō)明】高色調(diào)紅曲紅色素的制備方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明涉及一種生物工程【技術(shù)領(lǐng)域】的發(fā)酵方法，具體地，涉及一種應(yīng)用表面活性 劑分泌胞內(nèi)產(chǎn)物并進(jìn)一步在胞外實(shí)現(xiàn)膠束催化制備高色調(diào)（組分相對(duì)單一）的紅曲色素的 方法。
【背景技術(shù)】
[0002] 紅曲霉菌（Monascus sp)固態(tài)發(fā)酵生產(chǎn)的紅曲米是我國(guó)傳統(tǒng)的食品色素添加劑， 也是一種中藥，在我國(guó)已經(jīng)有一千多年的使用歷史。當(dāng)今采用現(xiàn)代微生物液態(tài)深層發(fā)酵技 術(shù)生產(chǎn)紅曲紅色素，該色素作為食品色素添加劑在東亞國(guó)家廣泛使用，如中國(guó)、日本、韓國(guó)、 臺(tái)灣、泰國(guó)、越南等。一般地，紅曲霉菌發(fā)酵所產(chǎn)生的紅曲色素包括兩種紅曲黃色素組分、兩 種紅曲橙色素組分、兩種紅曲紅色素組分以及紅曲紅色素的氨基酸衍生物。商品紅曲色素 一般是上述各種色素組分的混合物，色價(jià)和色調(diào)兩個(gè)參數(shù)常用來(lái)表征紅曲色素中各組分的 濃度和相對(duì)含量。其中色價(jià)表示紅曲色素的色素濃度，如在510nm處的吸光度表示紅曲紅 色素的色價(jià)。色調(diào)表示紅曲色素中各組分的相對(duì)含量，如紅曲紅色素相對(duì)于紅曲橙色素的 色調(diào)可以用紅曲紅色素與紅曲橙色素的色價(jià)比表示，這表證了紅曲紅色素與紅曲橙色素的 相對(duì)含量。
[0003] 雞胚實(shí)驗(yàn)表明紅曲橙色素具有一定的致畸作用[Martinkova L,Patakova-Juzlova P,Kren V,Kucerova Z，Havlicek V，Olsovsky P, Hovorka 0,Rihova B,Vesely D,Vesela D,Ulrichova J,Prikrylova V.Biological activities of oligoketide pigments of Monascus purpureus. Food Add Contamin. 1999, 16(1):15-24. 紅曲霉菌聚酮色素的生物活性?！妒称诽砑觿┪廴尽?，1999, 16(1) :15-24]。因此，提高紅曲色 素的色調(diào)不但是紅曲色素作為色素添加劑的重要技術(shù)指標(biāo)，同時(shí)也是提高紅曲色素食品添 加劑安全性的重要質(zhì)量指標(biāo)。在發(fā)酵過(guò)程中，利用現(xiàn)代生物技術(shù)手段改造微生物菌株以控 制紅曲橙色素的分率從理論上具有可行性，但是基因工程改造微生物所獲得的發(fā)酵產(chǎn)品屬 于基因工程食品。由于食品安全的特殊性，基因工程食品在很多國(guó)家獲得生產(chǎn)、銷(xiāo)售的許 可權(quán)是非常繁瑣和困難的。采用發(fā)酵工程技術(shù)調(diào)控紅曲霉菌的次級(jí)代謝成為重要的手段。
[0004] 為了滿足市場(chǎng)對(duì)天然紅曲紅色素的需求，同時(shí)保障食品安全，迫切需要開(kāi)發(fā)高色 調(diào)、紅曲色素中色素組分相對(duì)單一的紅曲紅色素發(fā)酵技術(shù)。經(jīng)對(duì)現(xiàn)有技術(shù)文獻(xiàn)的檢索發(fā) 現(xiàn)，Zhiqiang Hu,Xuehong Zhang, Zhenqiang Wu, Hanshi Qi, Zhilong Wang. Export of intracellular Monascus pigments by two-stage microbial fermentation in nonionic surfactant micelle aqueous solution. Journal of biotechnology，2012, 162:202-209. (胡志強(qiáng)，張雪洪，吳振強(qiáng)，齊翰實(shí)，王志龍."在非離子表面活性劑膠束溶液中應(yīng)用兩段發(fā)酵 技術(shù)釋放胞內(nèi)紅曲色素《生物技術(shù)學(xué)報(bào)》，2012,162:202-209)中介紹，紅曲霉菌在非離 子表面活性劑膠束溶液中發(fā)酵能將胞內(nèi)紅曲色素分泌到細(xì)胞外環(huán)境。但是，不同的發(fā)酵條 件和方式對(duì)紅曲色素組成分率的影響，尤其是對(duì)消除紅曲橙色素的作用，還沒(méi)有研究報(bào)道。 在進(jìn)一步的檢索中，更沒(méi)有關(guān)于在表面活性劑膠束溶液中應(yīng)用膠束催化紅曲橙色素轉(zhuǎn)化為 紅曲紅色素的相關(guān)報(bào)道。
[0005] 申請(qǐng)人:之前申請(qǐng)的發(fā)明專(zhuān)利：201310123517. 5,名稱(chēng)為萃取發(fā)酵和調(diào)控pH制備紅 曲色素的方法，該專(zhuān)利技術(shù)通過(guò)萃取發(fā)酵技術(shù)與調(diào)控pH技術(shù)相結(jié)合，制備桔霉素含量低且 紅曲色素組分相對(duì)單一的紅曲色素。
[0006] 現(xiàn)有發(fā)酵技術(shù)，不論是固體發(fā)酵還是液態(tài)發(fā)酵，所得紅曲色素基本上都是紅曲紅 色素、紅曲橙色素、紅曲黃色素的混合物，由于紅曲橙色素潛在的安全隱患。本發(fā)明將紅曲 橙色素化學(xué)轉(zhuǎn)化為紅曲紅色素，從而消除紅曲橙色素的安全隱患，制備高色調(diào)的紅曲紅色 素產(chǎn)品。
【發(fā)明內(nèi)容】
[0007] 針對(duì)現(xiàn)有技術(shù)中的缺陷，本發(fā)明的目的是提供一種分泌胞內(nèi)產(chǎn)物與胞外膠束催化 化學(xué)反應(yīng)相結(jié)合制備高色調(diào)的紅曲紅色素的方法，該方法應(yīng)用表面活性劑膠束溶液在發(fā)酵 過(guò)程中將胞內(nèi)色素分泌到胞外并進(jìn)一步在胞外實(shí)現(xiàn)紅曲橙色素轉(zhuǎn)化為紅曲紅色素的膠束 催化，制備了紅曲橙色素含量低的高色調(diào)、高色價(jià)的紅曲紅色素產(chǎn)品。
[0008] 為實(shí)現(xiàn)上述目的，本發(fā)明可以采用以下兩種技術(shù)方案中任意一種：
[0009] -種高色調(diào)紅曲紅色素的制備方法，所述方法包括如下步驟：
[0010] 步驟11，紅曲霉菌在種子培養(yǎng)基中進(jìn)行培養(yǎng)，得種子液；所述的紅曲霉菌為中國(guó) 工業(yè)微生物菌株保藏中心提供（Monascus anka，CICC 5013);
[0011] 步驟12,為了保護(hù)胞內(nèi)產(chǎn)物分泌與胞外膠束催化制備高色調(diào)的紅曲紅色素，將所 述種子液接種到含碳源的發(fā)酵培養(yǎng)液中，進(jìn)行發(fā)酵培養(yǎng)，調(diào)節(jié)發(fā)酵培養(yǎng)液的pH值，離心，得 紅曲霉菌濕細(xì)胞，提取紅曲霉菌濕細(xì)胞得到以紅曲橙色素為主要組分的紅曲色素；所得到 紅曲色素為紅曲橙色素含量高的胞內(nèi)產(chǎn)物。
[0012] 步驟13,為了保護(hù)膠束催化可以進(jìn)一步控制紅曲橙色素轉(zhuǎn)化為紅曲紅色素，將所 述提取的紅曲色素添加到含非離子表面活性劑和谷氨酸鈉的溶液中進(jìn)行紅曲橙色素轉(zhuǎn)化 為紅曲紅色素的膠束催化反應(yīng)。
[0013] 優(yōu)選地，步驟13中，谷氨酸鈉濃度的范圍在5-30g/L。非離子表面活性劑的濃度小 于或等于l〇〇g/L。
[0014] 本發(fā)明上述方法，通過(guò)添加過(guò)量的谷氨酸鈉，在表面活性劑膠束溶液中，紅曲橙色 素與谷氨酸鈉在表面活性劑膠束溶液中反應(yīng)，實(shí)現(xiàn)紅曲橙色素轉(zhuǎn)化為紅曲紅色素。
[0015] 一種高色調(diào)紅曲紅色素的制備方法，所述方法包括如下步驟：
[0016] 步驟21，紅曲霉菌在種子培養(yǎng)基中進(jìn)行培養(yǎng)，得種子液；所述的紅曲霉菌為中國(guó) 工業(yè)微生物菌株保藏中心提供（Monascus anka，CICC 5013);
[0017] 步驟22,為了保護(hù)胞內(nèi)產(chǎn)物分泌可以進(jìn)一步控制高色調(diào)紅曲紅色素的形成，同時(shí) 控制紅曲橙色素的含量，將步驟21中所得到的種子液接種到含表面活性劑和谷氨酸鈉的 培養(yǎng)基中發(fā)酵培養(yǎng)，離心得到胞外紅曲色素。本步驟實(shí)現(xiàn)了高色價(jià)的組分相對(duì)單一的高色 調(diào)紅曲紅色素的發(fā)酵，所得紅曲色素中紅曲橙色素的分率低、組分相對(duì)單一的高色調(diào)的紅 曲紅色素。
[0018] 優(yōu)選地，步驟22中，表面活性劑濃度保持在50-100g/l的范圍。谷氨酸鈉的濃度 保持在5-30g/l的范圍。
[0019] 優(yōu)選地，步驟22中，所述發(fā)酵培養(yǎng)基由如下含量的各組分組成：水100ml，葡萄糖 5g，ΚΗ 2Ρ04 0· 4g，MgS04 0· lg，CaCl2 0· 005g，非離子表面活性劑 1 ?10g/100ml，谷氨酸濃 度為 5g/100 ?30g/1000ml。
[0020] 本發(fā)明上述方法，通過(guò)添加過(guò)量的谷氨酸鈉，在表面活性劑溶液中的發(fā)酵可以將 胞內(nèi)紅曲色素分泌到細(xì)胞外，且在膠束催化作用下，紅曲橙色素在胞外表面活性劑膠束溶 液與谷氨酸鈉反應(yīng)實(shí)現(xiàn)了紅曲橙色素轉(zhuǎn)化為紅曲紅色素。
[0021] 現(xiàn)有技術(shù)中一般是在有機(jī)溶劑中實(shí)現(xiàn)紅曲橙色素與谷氨酸鈉反應(yīng)，不能在發(fā)酵過(guò) 程中實(shí)現(xiàn)，否則，微生物很難存活。本發(fā)明上述第一種方法在表面活性劑膠束溶液中胞外膠 束催化紅曲橙色素轉(zhuǎn)化為紅曲紅色素，第二種方法在萃取發(fā)酵和膠束催化下一步實(shí)現(xiàn)紅曲 橙色素與谷氨酸鈉反應(yīng)，因此，排除了紅曲橙色素在發(fā)酵過(guò)程中的降解，提高了產(chǎn)物濃度。 不同于之前專(zhuān)利申請(qǐng)201310123517. 5的是：201310123517. 5只是萃取發(fā)酵，沒(méi)有添加高濃 度的谷氨酸鈉，因此得到的是胞外混合色素。本發(fā)明添加谷氨酸鈉后橙色素去除了，且控制 較高pH抑制了紅曲黃色素的形成，因此得到的主要是紅曲紅色素。
[0022] 本發(fā)明谷氨酸鈉是紅曲橙色素轉(zhuǎn)化為紅曲紅色素的反應(yīng)試劑，而非離子表面活性 劑在本反應(yīng)中是反應(yīng)介質(zhì)，具有膠束催化作用，否則在水溶液反應(yīng)速率很慢。同時(shí)非離子表 面活性劑溶液可以在步驟22中實(shí)現(xiàn)萃取發(fā)酵，將胞內(nèi)紅曲橙色素轉(zhuǎn)移到細(xì)胞外。
[0023] 本發(fā)明使用了非離子表面活性劑（如Triton X-114, Tween 80, Triton X-100)的 膠束溶液實(shí)現(xiàn)胞內(nèi)紅曲色素的分泌和胞外紅曲橙色素轉(zhuǎn)化為紅曲紅色素的膠束催化?？梢?獲得紅曲橙色素含量低的高色調(diào)的紅曲紅色素產(chǎn)品。
[0024] 本發(fā)明采用胞內(nèi)產(chǎn)物分泌和膠束催化膠束的目的在于在發(fā)酵過(guò)程中實(shí)現(xiàn)胞內(nèi)紅 曲色素的釋放與胞外膠束催化紅曲橙色素化學(xué)轉(zhuǎn)化為紅曲紅色素的過(guò)程集成，獲得組分相 對(duì)單一、紅曲橙色素含量低的高色調(diào)紅曲紅色素產(chǎn)品。
[0025] 本發(fā)明采用表面活性劑的目的在于將胞內(nèi)色素分泌到細(xì)胞外。
[0026] 本發(fā)明采用膠束催化技術(shù)的目的在于將分泌到胞外紅曲橙色素進(jìn)一步在胞外膠 束溶液中實(shí)現(xiàn)紅曲橙色素轉(zhuǎn)化為紅曲紅色素的膠束催化。
[0027] 與現(xiàn)有技術(shù)相比，本發(fā)明具有如下的有益效果：本發(fā)明采用采用胞內(nèi)產(chǎn)物分泌和 膠束催化集成控制了紅曲色素中紅曲橙色素的分率。紅曲色素中組分相對(duì)單一的紅曲紅色 素一方面滿足了食品色素添加劑的市場(chǎng)對(duì)產(chǎn)品針對(duì)性和感官的要求，另一方面消除了紅曲 橙色素組分，提高了食品添加劑的安全性。同時(shí)提高了發(fā)酵過(guò)程中紅曲紅色素的色價(jià)。本 發(fā)明方法簡(jiǎn)單，容易實(shí)現(xiàn)，產(chǎn)率高，成本低，重復(fù)性強(qiáng)，環(huán)保，有較好的應(yīng)用前景。
【具體實(shí)施方式】
[0028] 下面結(jié)合具體實(shí)施例對(duì)本發(fā)明進(jìn)行詳細(xì)說(shuō)明。以下實(shí)施例將有助于本領(lǐng)域的技術(shù) 人員進(jìn)一步理解本發(fā)明，但不以任何形式限制本發(fā)明。應(yīng)當(dāng)指出的是，對(duì)本領(lǐng)域的普通技術(shù) 人員來(lái)說(shuō)，在不脫離本發(fā)明構(gòu)思的前提下，還可以做出若干變形和改進(jìn)。這些都屬于本發(fā)明 的保護(hù)范圍。基于
【發(fā)明內(nèi)容】
中所述的方法，以下實(shí)施例中涉及的一些細(xì)節(jié)如下：
[0029] 色價(jià)檢測(cè)方法具體為：將胞外發(fā)酵液或胞內(nèi)產(chǎn)物釋放液用70% (V/V)的乙醇（pH =2)溶液適當(dāng)稀釋?zhuān)捎梅止夤舛扔?jì)分布測(cè)定410、470、510nm處的吸光值。上述吸光值乘 上稀釋倍數(shù)得到的吸光度單位分別表示黃色素、橙色素和紅色素的色價(jià)。對(duì)應(yīng)地，紅曲紅色 素的色調(diào)表示為紅曲黃色素與紅曲橙色素的色價(jià)的比例。
[0030] 確定紅曲色素的基本組分的檢測(cè)方法具體為：將胞外發(fā)酵液或胞內(nèi)產(chǎn)物釋放液用 70% (V/V)的乙醇（pH = 2)溶液適當(dāng)吸收，采用薄層層析（默克公司硅膠F254板），溶劑 系統(tǒng)為醋酸：甲醇、氯仿=9:21:285,在自然光下，在Rf分別為0. 8、0. 68和0處可以檢測(cè) 到紅曲橙色素，紅曲黃色素和紅曲紅色素。
[0031] 步驟11和步驟21中，所述種子培養(yǎng)基由如下含量的各組分組成：水100ml，蛋白 胨2g，酵母粉2g，葡萄糖2g。
[0032] 步驟11和步驟21中，所述培養(yǎng)在溫度為30°C，200rpm的搖床中進(jìn)行，培養(yǎng)時(shí)間為 32小時(shí)。
[0033] 步驟12中，所述發(fā)酵培養(yǎng)在溫度為30°C，200rpm的搖床中進(jìn)行，培養(yǎng)時(shí)間為6-8 天。所述發(fā)酵培養(yǎng)液的初始pH值為4. 5。所述發(fā)酵培養(yǎng)基中的碳源可以用大米粉、玉米粉、 黃豆粉等天然農(nóng)產(chǎn)品替代。碳源是微生物代謝生長(zhǎng)所必須的物質(zhì)和能量來(lái)源，可以使葡萄 糖。但工業(yè)上常采用價(jià)格低廉的農(nóng)產(chǎn)品，甚至是農(nóng)業(yè)殘留物，本發(fā)明考慮到食品安全，采用 質(zhì)量較好的天然農(nóng)產(chǎn)品。
[0034] 步驟13中，所述反應(yīng)是指在溫度為30°C，200rpm的搖床中進(jìn)行，反應(yīng)時(shí)間為6? 12小時(shí)；反應(yīng)pH為2-7。
[0035] 步驟22中，所述培養(yǎng)是指在溫度為30°C，200rpm的搖床中進(jìn)行，培養(yǎng)時(shí)間為6?8 天；所述分離是指在70°C的水浴中靜置2小時(shí)。所述發(fā)酵培養(yǎng)基的初始pH值為4?6. 5。
[0036] 實(shí)施例1
[0037] 本實(shí)施例涉及一種將紅曲橙色素轉(zhuǎn)化為紅曲紅色素的膠束催化方法，所述方法包 括如下步驟：
[0038] 步驟1，紅曲霉菌在種子培養(yǎng)基水（100ml，蛋白胨2g，酵母粉2g，葡萄糖2g) 中進(jìn)行培養(yǎng)32小時(shí)，得種子液，所述的紅曲霉菌為中國(guó)工業(yè)微生物菌株保藏中心提供 (Monascus anka, CICC 5013)；
[0039] 步驟2,將所述種子液接種到初始pH值為4. 5,以玉米粉為氮源的發(fā)酵培養(yǎng)液中， 在溫度為30°C，200rpm的搖床中進(jìn)行7天的發(fā)酵培養(yǎng)，離心，得紅曲霉菌濕細(xì)胞；取紅曲霉 菌濕細(xì)胞預(yù)處理，釋放胞內(nèi)產(chǎn)物，檢測(cè)發(fā)酵液pH、細(xì)胞內(nèi)外的紅曲色素的色價(jià)；其中，所述 預(yù)處理具體為：取0. 5g濕細(xì)胞在等體積的發(fā)酵液70% (V/V)的乙醇（pH = 2)溶液中浸泡 1小時(shí)；
[0040] 分析胞外發(fā)酵液410、470和510nm處紅曲色素的吸光度分別為2、1和1. 8吸光度 單位；發(fā)酵液最終pH為6. 8。胞內(nèi)色素經(jīng)乙醇溶液提取，薄層層析表明紅曲色素主要成分 是紅曲橙色素；在410、470和510nm處的吸光度分別為25、38和20吸光度單位。紅曲紅色 素的色調(diào)為20/38。
[0041] 步驟3，將上述胞內(nèi)紅曲色素的提取物經(jīng)濃縮后，取少量濃縮的色素添加到的表面 活性劑Triton-100水溶液中，調(diào)節(jié)pH = 2 ;表面活性劑濃度為5%，谷氨酸鈉濃度為30g/L， 控制紅曲橙色素的色價(jià)為0. 8 ;在溫度為30°C,200rpm的搖床中進(jìn)行，反應(yīng)時(shí)間為8小時(shí)；
[0042] 分析反應(yīng)液的吸收光譜，在410、470和510nm處的吸光度分別為0. 3、0. 7和0. 4 吸光度單位。紅曲紅色素的色調(diào)為〇. 4/0. 7 ;采用薄層層析分析表明紅曲色素各組分的分 率沒(méi)有明顯變化。
[0043] 實(shí)施例2
[0044] 本實(shí)施例涉及一種將紅曲橙色素轉(zhuǎn)化為紅曲紅色素的膠束催化的方法，所述方法 包括如下步驟：
[0045] 步驟1，紅曲霉菌在種子培養(yǎng)基水（100ml，蛋白胨2g，酵母粉2g，葡萄糖2g) 中進(jìn)行培養(yǎng)32小時(shí)，得種子液，所述的紅曲霉菌為中國(guó)工業(yè)微生物菌株保藏中心提供 (Monascus anka, CICC 5013)；
[0046] 步驟2,將所述種子液接種到初始pH值為4. 5,以玉米粉為氮源的發(fā)酵培養(yǎng)液中， 在溫度為30°C，200rpm的搖床中進(jìn)行7天的發(fā)酵培養(yǎng)，離心，得紅曲霉菌濕細(xì)胞；取紅曲霉 菌濕細(xì)胞預(yù)處理，釋放胞內(nèi)產(chǎn)物，檢測(cè)發(fā)酵液pH、細(xì)胞內(nèi)外的紅曲色素的色價(jià)；其中，所述 預(yù)處理具體為：取0. 5g濕細(xì)胞在等體積的發(fā)酵液70% (V/V)的乙醇（pH = 2)溶液中浸泡 1小時(shí)；
[0047] 分析胞外發(fā)酵液410、470和510nm處紅曲色素的吸光度分別為2、1和1. 8吸光度 單位；發(fā)酵液最終pH為6. 8。胞內(nèi)色素經(jīng)乙醇溶液提取，薄層層析表明紅曲色素主要成分 是紅曲橙色素；在410、470和510nm處的吸光度分別為25、38和20吸光度單位。紅曲紅色 素的色調(diào)為20/38。
[0048] 步驟3，將上述胞內(nèi)紅曲色素的提取物經(jīng)濃縮后，取少量濃縮的色素添加到的表面 活性劑Trition-100水溶液中，調(diào)節(jié)pH = 7 ;表面活性劑濃度為5%，谷氨酸鈉濃度為30g/ L,控制紅曲橙色素的色價(jià)為0. 8 ;在溫度為30°C,200rpm的搖床中進(jìn)行，反應(yīng)時(shí)間為8小 時(shí)；
[0049] 分析反應(yīng)液的吸收光譜，在410、470和510nm處的吸光度分別為0. 6、0. 4和0. 5 吸光度單位。紅曲紅色素的色調(diào)為〇. 5/0. 4 ;采用薄層層析分析表明紅曲色素紅曲橙色素 分率明顯減少而紅曲紅色素分率明顯增加。
[0050] 實(shí)施例3
[0051] 本實(shí)施例涉及一種將紅曲橙色素轉(zhuǎn)化為紅曲紅色素的膠束催化的方法，所述方法 包括如下步驟：
[0052] 步驟1，紅曲霉菌在種子培養(yǎng)基水（100ml，蛋白胨2g，酵母粉2g，葡萄糖2g) 中進(jìn)行培養(yǎng)32小時(shí)，得種子液，所述的紅曲霉菌為中國(guó)工業(yè)微生物菌株保藏中心提供 (Monascus anka, CICC 5013)；
[0053] 步驟2,將所述種子液接種到初始pH值為4. 5,以玉米粉為氮源的發(fā)酵培養(yǎng)液中， 在溫度為30°C，200rpm的搖床中進(jìn)行7天的發(fā)酵培養(yǎng)，離心，得紅曲霉菌濕細(xì)胞；取紅曲霉 菌濕細(xì)胞預(yù)處理，釋放胞內(nèi)產(chǎn)物，檢測(cè)發(fā)酵液pH、細(xì)胞內(nèi)外的紅曲色素的色價(jià)；其中，所述 預(yù)處理具體為：取0. 5g濕細(xì)胞在等體積的發(fā)酵液70% (V/V)的乙醇（pH = 2)溶液中浸泡 1小時(shí)；
[0054] 分析胞外發(fā)酵液410、470和510nm處紅曲色素的吸光度分別為2、1和1. 8吸光度 單位；發(fā)酵液最終pH為6. 8。胞內(nèi)色素經(jīng)乙醇溶液提取，薄層層析表明紅曲色素主要成分 是紅曲橙色素；在410、470和510nm處的吸光度分別為25、38和20吸光度單位。紅曲紅色 素的色調(diào)為20/38。
[0055] 步驟3,將上述胞內(nèi)紅曲色素的提取物經(jīng)濃縮后，取少量濃縮的色素添加到的表 面活性劑Trition-100水溶液中，調(diào)節(jié)pH = 4 ;表面活性劑濃度為5%，谷氨酸鈉濃度為 30g/L，控制紅曲橙色素的色價(jià)為0. 8 ;在溫度為30°C，200rpm的搖床中進(jìn)行，反應(yīng)時(shí)間為8 小時(shí)；
[0056] 分析反應(yīng)液的吸收光譜，在410、470和510nm處的吸光度分別為0. 3、0. 5和0. 4 吸光度單位。紅曲紅色素的色調(diào)為〇. 4/0. 5 ;采用薄層層析分析表明紅曲色素紅曲橙色素 分率減少而紅曲紅色素分率增加。
[0057] 實(shí)施例4
[0058] 本實(shí)施例涉及一種將紅曲橙色素轉(zhuǎn)化為紅曲紅色素的膠束催化的方法，所述方法 包括如下步驟：
[0059] 步驟1，紅曲霉菌在種子培養(yǎng)基水（100ml，蛋白胨2g，酵母粉2g，葡萄糖2g) 中進(jìn)行培養(yǎng)32小時(shí)，得種子液，所述的紅曲霉菌為中國(guó)工業(yè)微生物菌株保藏中心提供 (Monascus anka, CICC 5013)；
[0060] 步驟2,將所述種子液接種到初始pH值為4. 5,以玉米粉為氮源的發(fā)酵培養(yǎng)液中， 在溫度為30°C，200rpm的搖床中進(jìn)行7天的發(fā)酵培養(yǎng)，離心，得紅曲霉菌濕細(xì)胞；取紅曲霉 菌濕細(xì)胞預(yù)處理，釋放胞內(nèi)產(chǎn)物，檢測(cè)發(fā)酵液pH、細(xì)胞內(nèi)外的紅曲色素的色價(jià)；其中，所述 預(yù)處理具體為：取0. 5g濕細(xì)胞在等體積的發(fā)酵液70% (V/V)的乙醇（pH = 2)溶液中浸泡 1小時(shí)；
[0061] 分析胞外發(fā)酵液410、470和510nm處紅曲色素的吸光度分別為2、1和1. 8吸光度 單位；發(fā)酵液最終pH為6. 8。胞內(nèi)色素經(jīng)乙醇溶液提取，薄層層析表明紅曲色素主要成分 是紅曲橙色素；在410、470和510nm處的吸光度分別為25、38和20吸光度單位。紅曲紅色 素的色調(diào)為20/38。
[0062] 步驟3，將上述胞內(nèi)紅曲色素的提取物經(jīng)濃縮后，取少量濃縮的色素添加到的表面 活性劑Trition-100水溶液中，調(diào)節(jié)pH = 7 ;表面活性劑濃度為10%，谷氨酸鈉濃度為30g/ L,控制紅曲橙色素的色價(jià)為0. 8 ;在溫度為30°C,200rpm的搖床中進(jìn)行，反應(yīng)時(shí)間為8小 時(shí)；
[0063] 分析反應(yīng)液的吸收光譜，在410、470和510nm處的吸光度分別為0. 65、0. 4和0. 55 吸光度單位。紅曲紅色素的色調(diào)為〇. 55/0. 4 ;采用薄層層析分析表明紅曲色素紅曲橙色素 斑點(diǎn)幾乎消失而紅曲紅色素分率明顯增加。
[0064] 實(shí)施例5
[0065] 本實(shí)施例涉及一種將紅曲橙色素轉(zhuǎn)化為紅曲紅色素的膠束催化的方法，所述方 法包括如下步驟：
[0066] 步驟1，紅曲霉菌在種子培養(yǎng)基水（100ml，蛋白胨2g，酵母粉2g，葡萄糖2g) 中進(jìn)行培養(yǎng)32小時(shí)，得種子液，所述的紅曲霉菌為中國(guó)工業(yè)微生物菌株保藏中心提供 (Monascus anka, CICC 5013)；
[0067] 步驟2,將所述種子液接種到初始pH值為4. 5,以玉米粉為氮源的發(fā)酵培養(yǎng)液中， 在溫度為30°C，200rpm的搖床中進(jìn)行7天的發(fā)酵培養(yǎng)，離心，得紅曲霉菌濕細(xì)胞；取紅曲霉 菌濕細(xì)胞預(yù)處理，釋放胞內(nèi)產(chǎn)物，檢測(cè)發(fā)酵液pH、細(xì)胞內(nèi)外的紅曲色素的色價(jià)；其中，所述 預(yù)處理具體為：取0. 5g濕細(xì)胞在等體積的發(fā)酵液70% (V/V)的乙醇（pH = 2)溶液中浸泡 1小時(shí)；
[0068] 分析胞外發(fā)酵液410、470和510nm處紅曲色素的吸光度分別為2、1和1. 8吸光度 單位；發(fā)酵液最終pH為6. 8。胞內(nèi)色素經(jīng)乙醇溶液提取，薄層層析表明紅曲色素主要成分 是紅曲橙色素；在410、470和510nm處的吸光度分別為25、38和20吸光度單位。紅曲紅色 素的色調(diào)為20/38。
[0069] 步驟3,將上述胞內(nèi)紅曲色素的提取物經(jīng)濃縮后，取少量濃縮的色素添加到的表 面活性劑Trition-100水溶液中，調(diào)節(jié)pH = 7 ;表面活性劑濃度為0. 5%，谷氨酸鈉濃度為 30g/L，控制紅曲橙色素的色價(jià)為0. 8 ;在溫度為30°C，200rpm的搖床中進(jìn)行，反應(yīng)時(shí)間為8 小時(shí)；
[0070] 分析反應(yīng)液的吸收光譜，在410、470和510nm處的吸光度分別為0. 5、0. 5和0. 4 吸光度單位。紅曲紅色素的色調(diào)為〇. 4/0. 5 ;采用薄層層析分析表明紅曲色素紅曲橙色素 斑點(diǎn)存在而紅曲紅色素分率明顯增加。
[0071] 實(shí)施例6
[0072] 本實(shí)施例涉及一種將紅曲橙色素轉(zhuǎn)化為紅曲紅色素的膠束催化的方法，所述方法 包括如下步驟：
[0073] 步驟1，紅曲霉菌在種子培養(yǎng)基水（100ml，蛋白胨2g，酵母粉2g，葡萄糖2g) 中進(jìn)行培養(yǎng)32小時(shí)，得種子液，所述的紅曲霉菌為中國(guó)工業(yè)微生物菌株保藏中心提供 (Monascus anka, CICC 5013)；
[0074] 步驟2,將所述種子液接種到初始pH值為4. 5,以玉米粉為氮源的發(fā)酵培養(yǎng)液中， 在溫度為30°C，200rpm的搖床中進(jìn)行7天的發(fā)酵培養(yǎng)，離心，得紅曲霉菌濕細(xì)胞；取紅曲霉 菌濕細(xì)胞預(yù)處理，釋放胞內(nèi)產(chǎn)物，檢測(cè)發(fā)酵液pH、細(xì)胞內(nèi)外的紅曲色素的色價(jià)；其中，所述 預(yù)處理具體為：取0. 5g濕細(xì)胞在等體積的發(fā)酵液70% (V/V)的乙醇（pH = 2)溶液中浸泡 1小時(shí)；
[0075] 分析胞外發(fā)酵液410、470和510nm處紅曲色素的吸光度分別為2、1和1. 8吸光度 單位；發(fā)酵液最終pH為6. 8。胞內(nèi)色素經(jīng)乙醇溶液提取，薄層層析表明紅曲色素主要成分 是紅曲橙色素；在410、470和510nm處的吸光度分別為25、38和20吸光度單位。紅曲紅色 素的色調(diào)為20/38。
[0076] 步驟3，將上述胞內(nèi)紅曲色素的提取物經(jīng)濃縮后，取少量濃縮的色素添加到的表面 活性劑Trition-100水溶液中，調(diào)節(jié)pH = 7 ;表面活性劑濃度為10%，谷氨酸鈉濃度為30g/ L,控制紅曲橙色素的色價(jià)為0. 8 ;在溫度為30°C,200rpm的搖床中進(jìn)行，反應(yīng)時(shí)間為8小 時(shí)；
[0077] 分析反應(yīng)液的吸收光譜，在410、470和510nm處的吸光度分別為0. 7、0. 4和0. 6 吸光度單位。紅曲紅色素的色調(diào)為〇. 6/0. 5 ;采用薄層層析分析表明紅曲色素紅曲橙色素 斑點(diǎn)消失而紅曲紅色素分率明顯增加。
[0078] 實(shí)施例7
[0079] 本實(shí)施例涉及一種將紅曲橙色素轉(zhuǎn)化為紅曲紅色素的膠束催化的方法，所述方法 包括如下步驟：
[0080] 步驟1，紅曲霉菌在種子培養(yǎng)基水（100ml，蛋白胨2g，酵母粉2g，葡萄糖2g) 中進(jìn)行培養(yǎng)32小時(shí)，得種子液，所述的紅曲霉菌為中國(guó)工業(yè)微生物菌株保藏中心提供 (Monascus anka, CICC 5013)；
[0081] 步驟2,將所述種子液接種到初始pH值為4. 5,以玉米粉為氮源的發(fā)酵培養(yǎng)液中， 在溫度為30°C，200rpm的搖床中進(jìn)行7天的發(fā)酵培養(yǎng)，離心，得紅曲霉菌濕細(xì)胞；取紅曲霉 菌濕細(xì)胞預(yù)處理，釋放胞內(nèi)產(chǎn)物，檢測(cè)發(fā)酵液pH、細(xì)胞內(nèi)外的紅曲色素的色價(jià)；其中，所述 預(yù)處理具體為：取0. 5g濕細(xì)胞在等體積的發(fā)酵液70% (V/V)的乙醇（pH = 2)溶液中浸泡 1小時(shí)；
[0082] 分析胞外發(fā)酵液410、470和510nm處紅曲色素的吸光度分別為2、1和1. 8吸光度 單位；發(fā)酵液最終pH為6. 8。胞內(nèi)色素經(jīng)乙醇溶液提取，薄層層析表明紅曲色素主要成分 是紅曲橙色素；在410、470和510nm處的吸光度分別為25、38和20吸光度單位。紅曲紅色 素的色調(diào)為20/38。
[0083] 步驟3，將上述胞內(nèi)紅曲色素的提取物經(jīng)濃縮后，取少量濃縮的色素添加到的表面 活性劑Trition-100水溶液中，調(diào)節(jié)pH = 7 ;表面活性劑濃度為10%，谷氨酸鈉濃度為5g/ L,控制紅曲橙色素的色價(jià)為0. 8 ;在溫度為30°C,200rpm的搖床中進(jìn)行，反應(yīng)時(shí)間為8小 時(shí)；
[0084] 分析反應(yīng)液的吸收光譜，在410、470和510nm處的吸光度分別為0. 4、0. 6和0. 3 吸光度單位。紅曲紅色素的色調(diào)為〇. 3/0. 6 ;采用薄層層析分析顯示了紅曲色素各組分。
[0085] 實(shí)施例8
[0086] 本實(shí)施例涉及一種在發(fā)酵過(guò)程將胞內(nèi)色素分泌到胞外并進(jìn)一步在胞外將紅曲橙 色素轉(zhuǎn)化為紅曲紅色素的膠束催化的方法，所述方法包括如下步驟：
[0087] 步驟1，紅曲霉菌在種子培養(yǎng)基水（100ml，蛋白胨2g，酵母粉2g，葡萄糖2g) 中進(jìn)行培養(yǎng)32小時(shí)，得種子液，所述的紅曲霉菌為中國(guó)工業(yè)微生物菌株保藏中心提供 (Monascus anka, CICC 5013)；
[0088] 步驟2,將所述種子液接種到初始pH值為4,以玉米粉為氮源的發(fā)酵培養(yǎng)液，在培 養(yǎng)基中加入表面活性劑濃度為5g/L、谷氨酸鈉濃度為30g/L。在溫度為30°C，200rpm的搖 床中進(jìn)行7天的發(fā)酵培養(yǎng)，離心，得紅曲霉菌濕細(xì)胞；取紅曲霉菌濕細(xì)胞預(yù)處理，釋放胞內(nèi) 產(chǎn)物，檢測(cè)發(fā)酵液pH、細(xì)胞內(nèi)外的紅曲色素的色價(jià)；其中，所述預(yù)處理具體為：取0.5g濕細(xì) 胞在等體積的發(fā)酵液70% (V/V)的乙醇（pH = 2)溶液中浸泡1小時(shí)；
[0089] 分析發(fā)酵液最終pH為6. 5 ;胞外發(fā)酵液410、470和510nm處紅曲色素的吸光度分 別為25、15和28吸光度單位；紅曲紅色素的色調(diào)為28/15 ;薄層層析表明紅曲色素主要成 分是紅曲紅色素。胞內(nèi)色素經(jīng)乙醇溶液提取，薄層層析表明紅曲色素主要成分也是紅曲紅 色素；在410、470和510nm處的吸光度分別為7、3和4吸光度單位；紅曲紅色素的色調(diào)為 4/3。
[0090] 實(shí)施例9
[0091] 本實(shí)施例涉及一種在發(fā)酵過(guò)程將胞內(nèi)色素分泌到胞外并進(jìn)一步在胞外將紅曲橙 色素轉(zhuǎn)化為紅曲紅色素的膠束催化的方法，所述方法包括如下步驟：
[0092] 步驟1，紅曲霉菌在種子培養(yǎng)基水（100ml，蛋白胨2g，酵母粉2g，葡萄糖2g) 中進(jìn)行培養(yǎng)32小時(shí)，得種子液，所述的紅曲霉菌為中國(guó)工業(yè)微生物菌株保藏中心提供 (Monascus anka, CICC 5013)；
[0093] 步驟2,將所述種子液接種到初始pH值為4,以混合玉米粉與黃豆粉（1:1)為氮源 的發(fā)酵培養(yǎng)液，在培養(yǎng)基中加入表面活性劑濃度為5g/L、谷氨酸鈉濃度為20g/L。在溫度 為30°C，200rpm的搖床中進(jìn)行6天的發(fā)酵培養(yǎng)，離心，得紅曲霉菌濕細(xì)胞；取紅曲霉菌濕細(xì) 胞預(yù)處理，釋放胞內(nèi)產(chǎn)物，檢測(cè)發(fā)酵液pH、細(xì)胞內(nèi)外的紅曲色素的色價(jià)；其中，所述預(yù)處理 具體為：取〇. 5g濕細(xì)胞在等體積的發(fā)酵液70% (V/V)的乙醇（pH = 2)溶液中浸泡1小時(shí)；
[0094] 分析發(fā)酵液最終pH為6. 8 ;胞外發(fā)酵液410、470和510nm處紅曲色素的吸光度分 別為23、12和25吸光度單位；紅曲紅色素的色調(diào)為25/12 ;薄層層析表明紅曲色素主要成 分是紅曲紅色素。胞內(nèi)色素經(jīng)乙醇溶液提取，薄層層析表明紅曲色素主要成分也是紅曲紅 色素；在410、470和510nm處的吸光度分別為6、3和5吸光度單位，紅曲紅色素的色調(diào)為 5/3。
[0095] 實(shí)施例10
[0096] 本實(shí)施例涉及一種在發(fā)酵過(guò)程將胞內(nèi)色素分泌到胞外并進(jìn)一步在胞外將紅曲橙 色素轉(zhuǎn)化為紅曲紅色素的膠束催化的方法，所述方法包括如下步驟：
[0097] 步驟1，紅曲霉菌在種子培養(yǎng)基水（100ml，蛋白胨2g，酵母粉2g，葡萄糖2g) 中進(jìn)行培養(yǎng)32小時(shí)，得種子液，所述的紅曲霉菌為中國(guó)工業(yè)微生物菌株保藏中心提供 (Monascus anka, CICC 5013)；
[0098] 步驟2,將所述種子液接種到初始pH值為4,以混合大米粉與黃豆粉（1:1)為氮源 的發(fā)酵培養(yǎng)液，在培養(yǎng)基中加入表面活性劑濃度為5g/L、谷氨酸鈉濃度為20g/L。在溫度為 30°C，200rpm的搖床中進(jìn)行7天的發(fā)酵培養(yǎng)，離心，得紅曲霉菌濕細(xì)胞；取紅曲霉菌濕細(xì)胞 預(yù)處理，釋放胞內(nèi)產(chǎn)物，檢測(cè)發(fā)酵液pH、細(xì)胞內(nèi)外的紅曲色素的色價(jià)；其中，所述預(yù)處理具 體為：取〇. 5g濕細(xì)胞在等體積的發(fā)酵液70% (V/V)的乙醇（pH = 2)溶液中浸泡1小時(shí)；
[0099] 分析發(fā)酵液最終pH為6. 7 ;胞外發(fā)酵液410、470和510nm處紅曲色素的吸光度分 別為22、11和24吸光度單位；紅曲紅色素的色調(diào)為24/11 ;薄層層析表明紅曲色素主要成 分是紅曲紅色素。胞內(nèi)色素經(jīng)乙醇溶液提取，薄層層析表明紅曲色素主要成分也是紅曲紅 色素；在410、470和510nm處的吸光度分別為7、2和3吸光度單位，紅曲紅色素的色調(diào)為 3/2。
[0100] 實(shí)施例11
[0101] 本實(shí)施例涉及一種在發(fā)酵過(guò)程將胞內(nèi)色素分泌到胞外并進(jìn)一步在胞外將紅曲橙 色素轉(zhuǎn)化為紅曲紅色素的膠束催化的方法，所述方法包括如下步驟：
[0102] 步驟1，紅曲霉菌在種子培養(yǎng)基水（100ml，蛋白胨2g，酵母粉2g，葡萄糖2g) 中進(jìn)行培養(yǎng)32小時(shí)，得種子液，所述的紅曲霉菌為中國(guó)工業(yè)微生物菌株保藏中心提供 (Monascus anka, CICC 5013)；
[0103] 步驟2,將所述種子液接種到初始pH值為4,以葡萄糖為碳源、谷氨酸為氮源的發(fā) 酵培養(yǎng)液，在培養(yǎng)基中加入表面活性劑濃度為5g/L、谷氨酸鈉濃度為5g/L。在溫度為30°C， 200rpm的搖床中進(jìn)行8天的發(fā)酵培養(yǎng)，離心，得紅曲霉菌濕細(xì)胞；取紅曲霉菌濕細(xì)胞預(yù)處 理，釋放胞內(nèi)產(chǎn)物，檢測(cè)發(fā)酵液pH、細(xì)胞內(nèi)外的紅曲色素的色價(jià)；其中，所述預(yù)處理具體為： 取0. 5g濕細(xì)胞在等體積的發(fā)酵液70% (V/V)的乙醇（pH = 2)溶液中浸泡1小時(shí)；
[0104] 分析發(fā)酵液最終pH為6. 2 ;胞外發(fā)酵液410、470和510nm處紅曲色素的吸光度分 別為15、30和17吸光度單位；紅曲紅色素的色調(diào)為17/30 ;薄層層析表明紅曲色素主要成 分是紅曲橙色素。胞內(nèi)色素經(jīng)乙醇溶液提取，薄層層析表明紅曲色素主要成分也是紅曲橙 色素；在410、470和510nm處的吸光度分別為7、3和2吸光度單位，紅曲紅色素的色調(diào)為 2/3。
[0105] 實(shí)施例12
[0106] 本實(shí)施例涉及一種在發(fā)酵過(guò)程將胞內(nèi)色素分泌到胞外并進(jìn)一步在胞外將紅曲橙 色素轉(zhuǎn)化為紅曲紅色素的膠束催化的方法，所述方法包括如下步驟：
[0107] 步驟1，紅曲霉菌在種子培養(yǎng)基水（100ml，蛋白胨2g，酵母粉2g，葡萄糖2g) 中進(jìn)行培養(yǎng)32小時(shí)，得種子液，所述的紅曲霉菌為中國(guó)工業(yè)微生物菌株保藏中心提供 (Monascus anka, CICC 5013)；
[0108] 步驟2,將所述種子液接種到初始pH值為4,以葡萄糖為碳源、谷氨酸為氮源的 發(fā)酵培養(yǎng)液，在培養(yǎng)基中加入表面活性劑濃度為5g/L、谷氨酸鈉濃度為20g/L。在溫度為 30°C，200rpm的搖床中進(jìn)行7天的發(fā)酵培養(yǎng)，離心，得紅曲霉菌濕細(xì)胞；取紅曲霉菌濕細(xì)胞 預(yù)處理，釋放胞內(nèi)產(chǎn)物，檢測(cè)發(fā)酵液pH、細(xì)胞內(nèi)外的紅曲色素的色價(jià)；其中，所述預(yù)處理具 體為：取〇. 5g濕細(xì)胞在等體積的發(fā)酵液70% (V/V)的乙醇（pH = 2)溶液中浸泡1小時(shí)；
[0109] 分析發(fā)酵液最終pH為6. 5 ;胞外發(fā)酵液410、470和510nm處紅曲色素的吸光度分 別為23、13和21吸光度單位；紅曲紅色素的色調(diào)為21/13 ;薄層層析表明紅曲色素主要成 分是紅曲橙色素。胞內(nèi)色素經(jīng)乙醇溶液提取，薄層層析表明紅曲色素主要成分也是紅曲紅 色素；在410、470和510nm處的吸光度分別為5、3和4吸光度單位，紅曲紅色素的色調(diào)為 4/3。
[0110] 實(shí)施例13
[0111] 本實(shí)施例涉及一種在發(fā)酵過(guò)程將胞內(nèi)色素分泌到胞外并進(jìn)一步在胞外將紅曲橙 色素轉(zhuǎn)化為紅曲紅色素的膠束催化的方法，所述方法包括如下步驟：
[0112] 步驟1，紅曲霉菌在種子培養(yǎng)基水（100ml，蛋白胨2g，酵母粉2g，葡萄糖2g) 中進(jìn)行培養(yǎng)32小時(shí)，得種子液，所述的紅曲霉菌為中國(guó)工業(yè)微生物菌株保藏中心提供 (Monascus anka, CICC 5013)；
[0113] 步驟2,將所述種子液接種到初始pH值為4. 5,以葡萄糖為碳源、谷氨酸為氮源的 發(fā)酵培養(yǎng)液，在培養(yǎng)基中加入表面活性劑濃度為5g/L、谷氨酸鈉濃度為35g/L。在溫度為 30°C，200rpm的搖床中進(jìn)行8天的發(fā)酵培養(yǎng)，離心，得紅曲霉菌濕細(xì)胞；取紅曲霉菌濕細(xì)胞 預(yù)處理，釋放胞內(nèi)產(chǎn)物，檢測(cè)發(fā)酵液pH、細(xì)胞內(nèi)外的紅曲色素的色價(jià)；其中，所述預(yù)處理具 體為：取〇. 5g濕細(xì)胞在等體積的發(fā)酵液70% (V/V)的乙醇（pH = 2)溶液中浸泡1小時(shí)；
[0114] 分析發(fā)酵液最終pH為6. 8 ;胞外發(fā)酵液410、470和510nm處紅曲色素的吸光度分 別為31、17和33吸光度單位；紅曲紅色素的色調(diào)為33/17 ;薄層層析表明紅曲色素主要成 分是紅曲橙色素。胞內(nèi)色素經(jīng)乙醇溶液提取，薄層層析表明紅曲色素主要成分也是紅曲紅 色素；在410、470和510nm處的吸光度分別為7、3和5吸光度單位，紅曲紅色素的色調(diào)為 5/3。
[0115] 實(shí)施例14
[0116] 本實(shí)施例涉及一種在發(fā)酵過(guò)程將胞內(nèi)色素分泌到胞外并進(jìn)一步在胞外將紅曲橙 色素轉(zhuǎn)化為紅曲紅色素的膠束催化的方法，所述方法包括如下步驟：
[0117] 步驟1，紅曲霉菌在種子培養(yǎng)基水（100ml，蛋白胨2g，酵母粉2g，葡萄糖2g) 中進(jìn)行培養(yǎng)32小時(shí)，得種子液，所述的紅曲霉菌為中國(guó)工業(yè)微生物菌株保藏中心提供 (Monascus anka, CICC 5013)；
[0118] 步驟2,將所述種子液接種到初始pH值為6. 5,以葡萄糖為碳源、谷氨酸為氮源的 發(fā)酵培養(yǎng)液，在培養(yǎng)基中加入表面活性劑濃度為5g/L、谷氨酸鈉濃度為35g/L。在溫度為 30°C，200rpm的搖床中進(jìn)行7天的發(fā)酵培養(yǎng)，離心，得紅曲霉菌濕細(xì)胞；取紅曲霉菌濕細(xì)胞 預(yù)處理，釋放胞內(nèi)產(chǎn)物，檢測(cè)發(fā)酵液pH、細(xì)胞內(nèi)外的紅曲色素的色價(jià)；其中，所述預(yù)處理具 體為：取〇. 5g濕細(xì)胞在等體積的發(fā)酵液70% (V/V)的乙醇（pH = 2)溶液中浸泡1小時(shí)；
[0119] 分析發(fā)酵液最終pH為6. 8 ;胞外發(fā)酵液410、470和510nm處紅曲色素的吸光度分 別為33、17和35吸光度單位；紅曲紅色素的色調(diào)為35/17 ;薄層層析表明紅曲色素主要成 分是紅曲橙色素。胞內(nèi)色素經(jīng)乙醇溶液提取，薄層層析表明紅曲色素主要成分也是紅曲紅 色素；在410、470和510nm處的吸光度分別為7、3和5吸光度單位，紅曲紅色素的色調(diào)為 5/3。
[0120] 實(shí)施例15
[0121] 本實(shí)施例涉及一種在發(fā)酵過(guò)程將胞內(nèi)色素分泌到胞外并進(jìn)一步在胞外將紅曲橙 色素轉(zhuǎn)化為紅曲紅色素的膠束催化的方法，所述方法包括如下步驟：
[0122] 步驟1，紅曲霉菌在種子培養(yǎng)基水（100ml，蛋白胨2g，酵母粉2g，葡萄糖2g) 中進(jìn)行培養(yǎng)32小時(shí)，得種子液，所述的紅曲霉菌為中國(guó)工業(yè)微生物菌株保藏中心提供 (Monascus anka, CICC 5013)；
[0123] 步驟2,將所述種子液接種到初始pH值為4. 5,以葡萄糖為碳源、硝酸鈉為氮源的 發(fā)酵培養(yǎng)液，在培養(yǎng)基中加入表面活性劑濃度為5g/L、谷氨酸鈉濃度為25g/L。在溫度為 30°C，200rpm的搖床中進(jìn)行7天的發(fā)酵培養(yǎng)，離心，得紅曲霉菌濕細(xì)胞；取紅曲霉菌濕細(xì)胞 預(yù)處理，釋放胞內(nèi)產(chǎn)物，檢測(cè)發(fā)酵液pH、細(xì)胞內(nèi)外的紅曲色素的色價(jià)；其中，所述預(yù)處理具 體為：取〇. 5g濕細(xì)胞在等體積的發(fā)酵液70% (V/V)的乙醇（pH = 2)溶液中浸泡1小時(shí)；
[0124] 分析發(fā)酵液最終pH為6. 9 ;胞外發(fā)酵液410、470和510nm處紅曲色素的吸光度分 別為23、11和21吸光度單位；紅曲紅色素的色調(diào)為21/11 ;薄層層析表明紅曲色素主要成 分是紅曲橙色素。胞內(nèi)色素經(jīng)乙醇溶液提取，薄層層析表明紅曲色素主要成分也是紅曲紅 色素；在410、470和510nm處的吸光度分別為7、4和5吸光度單位，紅曲紅色素的色調(diào)為 5/4。
[0125] 以上對(duì)本發(fā)明的具體實(shí)施例進(jìn)行了描述。需要理解的是，本發(fā)明并不局限于上述 特定實(shí)施方式，本領(lǐng)域技術(shù)人員可以在權(quán)利要求的范圍內(nèi)做出各種變形或修改，這并不影 響本發(fā)明的實(shí)質(zhì)內(nèi)容。
【權(quán)利要求】
1. 一種高色調(diào)紅曲紅色素的制備方法，其特征在于，所述方法包括如下步驟： 步驟11，紅曲霉菌在種子培養(yǎng)基中進(jìn)行培養(yǎng)，得種子液； 步驟12,將所述種子液接種到含碳源的發(fā)酵培養(yǎng)液中，進(jìn)行發(fā)酵培養(yǎng)，調(diào)節(jié)發(fā)酵培養(yǎng)液 的pH值，離心，得紅曲霉菌濕細(xì)胞，提取紅曲霉菌濕細(xì)胞得到以紅曲橙色素為主要組分的 紅曲色素； 步驟13,將所述提取的紅曲色素添加到含非離子表面活性劑和谷氨酸鈉的溶液中進(jìn)行 紅曲橙色素轉(zhuǎn)化為紅曲紅色素的膠束催化反應(yīng)。
2. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的高色調(diào)紅曲紅色素的制備方法，其特征在于，步驟13中，谷氨 酸鈉濃度的范圍在5-30g/L。
3. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的高色調(diào)紅曲紅色素的制備方法，其特征在于，步驟13中，非離 子表面活性劑的濃度小于或等于l〇〇g/L。
4. 根據(jù)權(quán)利要求1-3任一項(xiàng)所述的高色調(diào)紅曲紅色素的制備方法，其特征在于，步驟 13中，所述反應(yīng)是指在溫度為30°C，200rpm的搖床中進(jìn)行，反應(yīng)時(shí)間為6?12小時(shí)；反應(yīng) pH 為 2-7。
5. 根據(jù)權(quán)利要求1-3任一項(xiàng)所述的高色調(diào)紅曲紅色素的制備方法，其特征在于，步驟 12中，所述發(fā)酵培養(yǎng)在溫度為30°C，200rpm的搖床中進(jìn)行，培養(yǎng)時(shí)間為6-8天；所述發(fā)酵培 養(yǎng)液的初始pH值為4. 5。
6. -種高色調(diào)紅曲紅色素的制備方法，其特征在于，所述方法包括如下步驟： 步驟21，紅曲霉菌在種子培養(yǎng)基中進(jìn)行培養(yǎng)，得種子液； 步驟22,將步驟1中所得到的種子液接種到含非離子表面活性劑和谷氨酸鈉的培養(yǎng)基 中發(fā)酵培養(yǎng)，離心得到高色價(jià)、高色調(diào)的胞外紅曲色素。
7. 根據(jù)權(quán)利要求6所述的高色調(diào)紅曲紅色素的制備方法，其特征在于，步驟22中，非離 子表面活性劑濃度保持在50-100g/l的范圍。
8. 根據(jù)權(quán)利要求6所述的高色調(diào)紅曲紅色素的制備方法，其特征在于，步驟22中，谷氨 酸鈉的濃度保持在5-30g/l的范圍。
9. 根據(jù)權(quán)利要求6-8任一項(xiàng)所述的高色調(diào)紅曲紅色素的制備方法，其特征在于，步驟 22中，所述培養(yǎng)基的初始pH值為4?6. 5。
10. 根據(jù)權(quán)利要求6-8任一項(xiàng)所述的高色調(diào)紅曲紅色素的制備方法，其特征在于，步驟 22中，所述培養(yǎng)基由如下含量的各組分組成：水100ml，葡萄糖5g，KH 2P040 . 4g，MgS040. lg， CaCl20. 005g，非離子表面活性劑1?10g/100ml，谷氨酸濃度為5g/100?30g/1000ml。
【文檔編號(hào)】C09B61/00GK104195178SQ201410323842
【公開(kāi)日】2014年12月10日 申請(qǐng)日期:2014年7月8日 優(yōu)先權(quán)日:2014年7月8日
【發(fā)明者】王志龍, 熊旭 申請(qǐng)人:上海交通大學(xué)