一種柿子果實(shí)色素的提取方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明涉及一種植物天然色素的提取方法，具體涉及一種柿子果實(shí)色素的提取方 法。
【背景技術(shù)】
[0002] 天然色素是由天然資源獲得的食用色素。主要從動物和植物組織及微生物（培 養(yǎng)）中提取的色素，其中植物性著色劑占多數(shù)。天然色素不僅具有給食品著色的作用，而 且，相當(dāng)部分天然色素具有生理活性。
[0003] 柿（Diospyros. kaki. L)，又名猴賽，朱果，柿樹為多年生落葉果樹。柿屬柿樹科 (Ebenaceae)柿屬（Diospyros. kaki. L)植物，本屬植物全世界約有500余種，大多數(shù)為熱帶 或亞熱帶植物，少數(shù)產(chǎn)于暖溫帶。柿子是柿樹科漿果類溫帶落葉果樹，原產(chǎn)我國，在我國已 有一千多年的種植歷史。我國是柿子的原產(chǎn)地，原產(chǎn)于我國的柿屬植物現(xiàn)有66種，多數(shù)分 布于海南島、廣東、廣西、福建、云南等?。ㄗ灾螀^(qū)）的熱帶和亞熱帶地區(qū)，長江以南的暖熱 帶也有少量分布。不僅分布廣，產(chǎn)量也高，2005年我國柿子產(chǎn)量為183. 7萬噸，占世界柿子 產(chǎn)量的71. 5%。目前我國種植面積最大，而且柿果產(chǎn)量最多。柿子是我國重要的水果，產(chǎn) 量較大，目前柿子主要作為鮮果食用或用于制造柿餅，在加工中有大量的殘次果或副產(chǎn)物， 這些殘次果或加工副產(chǎn)物大部分被作為廢料丟棄，這不僅造成了資源的極大浪費(fèi)，也給環(huán) 境造成負(fù)擔(dān)。柿子果實(shí)、果皮含有豐富的天然色素，有望獲得高提取率、高純度、高色價(jià)的產(chǎn) 品，以滿足國內(nèi)外市場對天然色素的需求。
[0004] 天然色素 （Natural Pigments)的開發(fā)與應(yīng)用己成為各行業(yè)科技工作者普遍關(guān)注 的課題。人們試圖從各種動植物資源中獲取天然色素，同時(shí)探索其生理活性，來緩解并解決 由合成色素所帶來的各種問題。如中國專利CN103013164A，公開了一種柿子皮提取天然色 素的方法，以生產(chǎn)柿餅時(shí)撥出的皮為原料，利用逆流提取結(jié)合大孔吸附樹脂分離提取分離 柿子皮色素，逆流提取運(yùn)用加熱的溶劑逆向?qū)κ磷悠ぴ线M(jìn)行提取，利用大孔吸附樹脂可 以選擇性吸附天然色素成分，但該方法得到的色素含量較低。對科技的研宄是無止境的，天 然色素的巨大市場前景推動著研宄的進(jìn)一步發(fā)展。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0005] 本發(fā)明提供了一種柿子果實(shí)色素的提取方法，可以得到含量95%以上的柿子果實(shí) 色素。
[0006] 本發(fā)明是通過如下技術(shù)方案實(shí)現(xiàn)的：
[0007] -種柿子果實(shí)色素的提取方法，包括下述步驟：
[0008] 1)原料處理：將柿子清洗、破碎；
[0009] 2)超高壓處理：破碎后的柿子中加入5-10倍重量份的純凈水，壓力350MPa，作用 溫度40-50°C，超高壓處理2-5min ;
[0010] 3)超聲波處理：將步驟2)得到溶液，超聲波處理5-10min，作用溫度40-50°C，功 率為300W ;
[0011] 4)萃?。簩⒉襟E3)得到溶液過濾，用與濾液等體積的乙酸乙酯進(jìn)行反復(fù)萃取，取 水層，真空濃縮除去乙酸乙酯，反復(fù)數(shù)次直至乙酸乙酯層無色；
[0012] 5)大孔樹脂吸附純化：選用HP-20大孔樹脂，經(jīng)預(yù)處理后濕法上柱，用稀鹽酸調(diào)色 素液pH至3. 5,用恒流泵控制色素液通過吸附柱，待流出液吸光值為上樣液吸光值的10% 后停止加入色素液，用純水分?jǐn)?shù)次清洗樹脂表面，以pH為3. 5的質(zhì)量分?jǐn)?shù)為90%的乙醇溶 液為洗脫劑洗脫色素液，得到的色素液真空濃縮除去乙醇，得到初步純化色素液；
[0013] 6)聚酰胺層析柱吸附純化：聚酰胺經(jīng)預(yù)處理后濕法裝柱，步驟5)得到的初步純化 色素液過聚酰胺層析柱，以質(zhì)量分?jǐn)?shù)為50%的甲醇和質(zhì)量分?jǐn)?shù)為0. 1%的甲酸混合溶液為 洗脫劑，收集有色部分，洗脫液真空濃縮；
[0014] 7)葡聚糖凝膠柱吸附純化：葡聚糖凝膠經(jīng)預(yù)處理后濕法裝柱，步驟6)得到的純化 樣品過葡聚糖凝膠柱，以質(zhì)量分?jǐn)?shù)為50%的甲醇和質(zhì)量分?jǐn)?shù)為0. 1%的甲酸混合溶液為洗 脫劑，收集有色部分，洗脫液真空濃縮；
[0015] 8)制備型液相色譜分離純化：采用制備型液相色譜對濃縮后的色素液分離純化， 得到柿子果實(shí)色素液；
[0016] 9)干燥：采用冷凍干燥，去除色素液的水分，得到柿子果實(shí)色素。
[0017] 所述制備型液相色譜分離純化，工作條件為：菲羅門LUNA-C18色譜柱， 4. 6mmX150mmX5 μ，進(jìn)樣量 10 μ L，流速 0. 4mL/min，掃描范圍：254nm_600nm，檢測波長 520nm，流動相 4. 5% 甲酸 A，甲醇 B，梯度洗脫條件：Omin，10%B ;20min，25%B ;33min，45% B ；40min, 90% B ；45min, 10% B〇
[0018] 與現(xiàn)有技術(shù)相比，本發(fā)明具有如下優(yōu)點(diǎn)：
[0019] 1、本發(fā)明采用超高壓處理柿子原料，在預(yù)定壓力保持一段時(shí)間，使原料細(xì)胞內(nèi)外 壓力達(dá)到平衡（有效成分達(dá)到溶解平衡）后迅速卸壓，使細(xì)胞內(nèi)外滲透壓力差突然增大， 細(xì)胞內(nèi)的有效成分穿過細(xì)胞膜（細(xì)胞膜的結(jié)構(gòu)在超高壓下發(fā)生變化），轉(zhuǎn)移到細(xì)胞外的提 取液中，達(dá)到提取目標(biāo)成分的目的。超高壓提取避免了因長時(shí)間高溫而引起的有效成分的 變化、損失以及生理活性的降低，同時(shí)因?yàn)槌邏菏窃诿荛]的環(huán)境下進(jìn)行的，沒有溶劑的揮 發(fā)，不會對環(huán)境造成污染。是一種安全有效的提取活性物質(zhì)的方法。
[0020] 2、本發(fā)明在采用超高壓處理原料后，接著再采用超聲波提取，超聲波提取利用的 是強(qiáng)烈的機(jī)械剪切作用，促進(jìn)柿子多酚的溶出，本發(fā)明通過采用兩種提取方式的結(jié)合，一方 面縮短了提取時(shí)間，另一方面提高了產(chǎn)品得率。
[0021] 3、本發(fā)明采用大孔樹脂柱層析，聚酰胺柱層析，葡聚糖凝膠柱層析對色素液進(jìn)行 吸附純化，能有效除去色素液中水溶性雜質(zhì)，實(shí)現(xiàn)色素單體的初步分離。
[0022] 4、采用制備型液相色譜進(jìn)行柿子果實(shí)色素的分離純化，能夠有效實(shí)現(xiàn)柿子果實(shí)色 素單體的分離，保證了產(chǎn)品的純度。
【具體實(shí)施方式】
[0023] 下面以實(shí)施例對本發(fā)明作進(jìn)一步說明，但本發(fā)明并不局限于這些實(shí)施例。
[0024] 實(shí)施例1 :
[0025] 一種柿子果實(shí)色素的提取方法，包括下述步驟：
[0026] 1)原料處理：將IOkg柿子清洗、破碎；
[0027] 2)超高壓處理：破碎后的柿子中加入50kg的純凈水，壓力350MPa，作用溫度 50°C，超高壓處理2min ;
[0028] 3)超聲波處理：將步驟2)得到溶液，超聲波處理8min，作用溫度40°C，功率為 300W ；
[0029] 4)萃?。簩⒉襟E3)得到溶液過濾，用與濾液等體積的乙酸乙酯進(jìn)行反復(fù)萃取，取 水層，真空濃縮除去乙酸乙酯，反復(fù)數(shù)次直至乙酸乙酯層無色；
[0030] 5)大孔樹脂吸附純化：選用HP-20大孔樹脂，經(jīng)預(yù)處理后濕法上柱，用稀鹽酸調(diào)色 素液pH至3. 5,用恒流泵控制色素液通過吸附柱，待流出液吸光值為上樣液吸光值的10% 后停止加入色素液，用純水分?jǐn)?shù)次清洗樹脂表面，以pH為3. 5的質(zhì)量分?jǐn)?shù)為90%的乙醇溶 液為洗脫劑洗脫色素液，得到的色素液真空濃縮除去乙醇，得到初步純化色素液；
[0031] 6)聚酰胺層析柱吸附純化：聚酰胺經(jīng)預(yù)處理后濕法裝柱，步驟5)得到的初步純化 色素液過聚酰胺層析柱，以質(zhì)量分?jǐn)?shù)為50%的甲醇和質(zhì)量分?jǐn)?shù)為0. 1%的甲酸混合溶液為 洗脫劑，收集有色部分，洗脫液真空濃縮；
[0032] 7)葡聚糖凝膠柱吸附純化：葡聚糖凝膠經(jīng)預(yù)處理后濕法裝柱，步驟6)得到的純化 樣品過葡聚糖凝膠柱，以質(zhì)量分?jǐn)?shù)為50%的甲醇和質(zhì)量分?jǐn)?shù)為0. 1%的甲酸混合溶液為洗 脫劑，收集有色部分，洗脫液真空濃縮；
[0033] 8)制備型液相色譜分離純化：采用制備型液相色譜對濃縮后的色素液分離純化， 得到柿子果實(shí)色素液；工作條件為：菲羅門LUNA-C18色譜柱，4. 6mmX150mmX5 μ，進(jìn)樣量 1(^1，流速0.4111171^11，掃描范圍：254腹-