專利名稱：治療皰疹病毒的藥物組合物及其生產(chǎn)方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種治療皰疹病毒的藥物組合物，特別是添加有中藥的治療皰疹病毒的藥物組合物及其生產(chǎn)方法。
背景技術(shù)：
皰疹病毒(Herpes-virus)是在動物和人類中發(fā)現(xiàn)的一群中等大小、結(jié)構(gòu)相似、有包膜的雙股DNA病毒?，F(xiàn)已發(fā)現(xiàn)100種以上。其中，單純皰疹病毒(Herpes Simples Viruses，HSV)和水痘-帶狀皰疹病毒(Varicella-zoster virus，VZV)是常見的傳染性病原體。HSV感染與先天畸形、流產(chǎn)、宮頸癌、腦炎、新生兒疾病、性病等10多種疾病有關(guān)。VZV感染可引起帶狀皰疹。
已知的單純皰疹病毒(Herpes Simples Viruses，HSV)和水痘-帶狀皰疹病毒(Varicella-zoster virus，VZV)與艾滋病(HIV)有關(guān)聯(lián)，據(jù)有關(guān)文獻(xiàn)介紹，艾滋病HIV(+)攜帶者中往往常常受到皰疹病毒感染及致病，在艾滋病的治療中了解到，HIV(+)攜帶者中皰疹病毒感染及致病有兩個特點(diǎn)一是感染發(fā)病率高，二是臨床癥狀嚴(yán)重，病程長，反復(fù)發(fā)作，預(yù)后不良。
Stavrianeas等報道了1988年至1996年希臘Andreas Sygros醫(yī)院HIV(+)攜帶者中皰疹病毒感染致病情況。690名HIV(+)攜帶者中359人患有皰疹病毒感染性疾病，發(fā)病率高達(dá)52.03％。其中101人為HSV感染，110人為VSV感染，97人為EBV感染，51人為CMV感染。HSV主要感染生殖器和肛周(77/101)，占HSV感染者76.2％。其中18名HSV感染者表現(xiàn)為感染部位經(jīng)久不愈的潰瘍。VZV感染導(dǎo)致的帶狀皰疹中4例表現(xiàn)為肥厚型損害，7例出血壞死性損害，11例反復(fù)發(fā)作達(dá)31次，6例皮損為多皮區(qū)。CMV感染與CD4+T淋巴細(xì)胞水平低下有關(guān)，所有CMV感染者GD4+T淋巴細(xì)胞＜100個/ul。而在97名EBV感染者中，96人表現(xiàn)為口腔毛狀白斑(Oral hairy lenukoplakia，OHL)，1人表現(xiàn)為Burkitt淋巴瘤[3]。
許多艾滋病患者都合并有HSV廣泛皮膚或粘膜感染。這類HSV感染不僅難于診斷，并且可能與艾滋了病率和死亡率有關(guān)。Garcia-Plata等報道了1名44歲HIV(+)血漿特異性HSV-2抗體陽性率占35.7％，而在HIV(+)樣本中則占82.7％，顯示HIV與HSV-2具有顯著相關(guān)性。因此他提出控制HSV-2感染可能是減少HIV在人群中傳播的好方法[5]。Mwansasu檢測了坦桑尼亞70名生殖器潰瘍患者潰湯組織HSV-1，HSV-2和HIV感染情況。結(jié)果在64％的病例中檢測到HSV-2 DNA，但未檢測到HSV-1DNA的存在。HSV-2和HIV抗體的陽性率分別占到79.7％和42％，也提示HSV-2和HIV之間相關(guān)。
VZV感染在正常人群中多表現(xiàn)為帶狀皰疹，而VZV感染導(dǎo)致脈絡(luò)膜和視網(wǎng)膜炎者一般僅見于艾滋病，急進(jìn)性外周視網(wǎng)膜壞死(Progressive outerretinal necerosis，PORN)綜合征是其中一種類型。PORN病情進(jìn)展迅速，數(shù)日至數(shù)周就完全失明，且無有效治療方法。
EBV感染所致B細(xì)胞淋巴樣增生(B-cell lymphoid proliferarions)發(fā)生于原發(fā)或者獲得性免疫功能障礙后。在HIV感染者中，EBV相關(guān)B細(xì)胞淋巴瘤(B-ecll lymphoma)多發(fā)生于嚴(yán)重免疫抑制的病人。HIV(+)攜帶者患Burkiff淋巴瘤(Burkitt lymphoma)的病例中有30F％～70％與EBV相關(guān)，提示EBV在艾滋病人患淋巴瘤過程中有起重要作用。
HHV-6于1986年首次從淋巴細(xì)胞增生性疾病(lymphoproliferativediseasea)患者和血液淋巴細(xì)胞中分離得到。人類HHV-6初次感染多發(fā)生在兒童時期，然后潛伏于淋巴組織中。一般認(rèn)為在機(jī)體免疫低下時再次激活，臨床表現(xiàn)為發(fā)熱、肝炎、腦炎和間質(zhì)性肺炎。Ranger-Rogez等對1085名，包括艾滋病患者、HIV(+)無癥狀者和HIV(-)者，檢測HHV-6抗體，結(jié)果顯示HHV-6抗體陽性率與HIV(+)和HIV感染疾病階段無關(guān)。
1990年一種新的人類皰疹病毒，HHV-7，從健康成年人CD4-T淋巴細(xì)胞中分離得到。與HHV-6類似，人類HHV-7初次感染多發(fā)身生在兒童時期，然后潛伏于淋巴組織中。Kempf等研究結(jié)果表明。HIV感染導(dǎo)致機(jī)體免疫抑制是HHV-7活化的原因。
HHV-8是新發(fā)現(xiàn)的一種皰疹病毒，被認(rèn)為是Kaposi’s肉瘤(Kaposi’s sarcoma，KS)的病因，因此又名Kaposi’s肉瘤相關(guān)皰疹病毒(Kaposi’s sarcoma-associatedherpesvirus，KSHV)。HHV-8不像其它皰疹病毒那樣在健康人中普遍存在，HIV-1(+)攜帶者中HHV-8感染率為20％～50％，高于健康人群[12]。艾滋病患者外周血中測出HHV-8或血清中測出HHV-8IgG抗體，提示KS的發(fā)生。HHV-8還與艾滋病患者體腔B細(xì)胞淋巴瘤的發(fā)生有關(guān)。
總之，人類感染皰疹病毒非常普遍，但多為隱性感染或原發(fā)感染癥狀較輕。原發(fā)感染后，皰疹病毒潛狀在相應(yīng)的組織細(xì)胞內(nèi)，當(dāng)機(jī)體遭受某些刺激，特別是機(jī)體細(xì)胞免疫功能受損時潛伏病毒活化導(dǎo)致疾病。HIV特異性攻擊CD4+T淋巴細(xì)胞，機(jī)體細(xì)胞免疫功能嚴(yán)重受損，使?jié)摲陌捳畈《净罨鸺膊』蛘弑銠C(jī)體易于感染皰疹病毒，并且可導(dǎo)致嚴(yán)重皰疹病毒感染性疾病。Bagdades等人發(fā)現(xiàn)HIV(+)攜帶者中HSV感染導(dǎo)致的潰瘍與CD4+T淋巴細(xì)胞低水平緊密相關(guān)，提示出HIV(+)攜帶者HSV感染與細(xì)胞免疫水平的聯(lián)系。
多項(xiàng)臨床和實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，HHV-6也是HIV感染后病程發(fā)展的一個促進(jìn)因子。不同于HIV感染的其它輔助因子(如HSV、CMV和ESV等)，HHV-6可攻擊CD4+T淋巴細(xì)胞，并通過多種機(jī)制影響HIV感染發(fā)病，其可能機(jī)制有1.HHV-6直接感染或干擾機(jī)體數(shù)種免疫細(xì)胞，包括CD4+T淋巴細(xì)胞、自然殺傷細(xì)胞(naturekiller cell，NK cell)、部分B淋巴細(xì)胞和單核巨噬細(xì)胞，減弱機(jī)體免疫系統(tǒng)抗病毒功能。
2.HHV-6和HIV能在CD4+T淋巴細(xì)胞共同復(fù)制，HHV-6可反式激活HIV的長末端重復(fù)序列(long terminal repeat，LTR)增強(qiáng)HIV表達(dá)，加速宿主細(xì)胞死亡。
3.HHV-6能上調(diào)CD4分子在CD4+細(xì)胞的表達(dá)，還能誘導(dǎo)CD4mRNA和蛋白在CD4-細(xì)胞的表達(dá)，包括NK細(xì)胞、成熟CD4-CD8+T淋巴細(xì)胞和CD4-δY淋巴細(xì)胞。因此，HHV-6可以增寬HIV易感細(xì)胞范圍，加強(qiáng)HIV在體內(nèi)的播散。
4.HHV-6還能刺激某些炎性細(xì)胞因子的表達(dá)，如干擾素a(interterona，IFNa)、腫瘤壞死因子a(rumor necrosis factora，TNFa)、白細(xì)胞介素1β(inrerleukin 1β，IL1β)等。這些炎性因子在體外能影響HIV的表達(dá)，并且可能是艾滋病及其相關(guān)疾病發(fā)病機(jī)制之一。
綜上所述，HIV感染導(dǎo)致機(jī)體免疫功能低下是皰疹病毒感染、復(fù)發(fā)的主要原因，而皰疹病毒(除HHV-7)又作為輔助因子增加HIV傳播的可能性，促進(jìn)艾滋病發(fā)病，加速病程并影響預(yù)后。因此必須重視艾滋病患者合并皰疹病毒感染的防治。
目前對艾滋病合并皰疹病毒感染的防治主要使用的抗病毒藥物，包括(一)核苷類藥物一代為阿昔洛韋(Acyclovir，ACV治療HSV和VZV感染)；(二代為更昔洛韋(Ganciclovir，治療CMV感染)、伐昔洛韋(Valaciclovir)；三代為泛昔洛韋(Famciclovir，治療VZV感染)；(二)非核苷類藥物膦甲酸鈉(foscarnet sodium)、素立夫定(Sorivudine，治療HSV感染)；(三)生物抗病毒藥物干擾素(Interferon)。
但上述有的藥物最近已出現(xiàn)耐藥性，且有的毒副作用較大，價格昂貴。因此，醫(yī)學(xué)科學(xué)家們還在不斷尋找開發(fā)新的安全、有效的抗病毒藥。
根據(jù)文獻(xiàn)介紹，許多中草藥或中藥制劑例如甘草甜素、天花粉蛋白、黃芩、桑白皮、大蒜、蘑菇、番木瓜、人參、苦瓜、雙黃連、紫花地丁、柴胡、丹參、夏枯草、白花蛇舌草、黃連、金銀花、紫草、穿心蓮、白頭翁、防風(fēng)、靈芝。黃芪、板藍(lán)根、桑寄生、淫羊藿、苦參、小柴胡湯、六君子湯、赤芍制劑、歸脾湯、補(bǔ)中益氣湯等，在調(diào)節(jié)機(jī)體免疫功能和抗病毒、預(yù)防和治療艾滋病方面有較大潛力，能增強(qiáng)淋巴細(xì)胞活力，改善AIDS癥狀、延長生存期及降低攜帶考的發(fā)病率有著重要作用。
但如何從治療皰疹病出發(fā)，通過抑制皰疹病毒感染、復(fù)發(fā)，提高機(jī)體免疫功能，達(dá)到具有抗HSV-1，CMV和HIV的作用目的，仍然是病毒醫(yī)學(xué)家的研究課題。
技術(shù)內(nèi)容本發(fā)明人在長期的科學(xué)研究中，通過對一些中草藥的藥理、藥效學(xué)進(jìn)行了比較，并篩選了一些天然抗病毒藥物，發(fā)現(xiàn)貫葉連翹為主并加入一些氨基酸組合后的藥物具有抗HSV-1，CMV和HIV的作用。
本發(fā)明的技術(shù)方案如下治療皰疹病毒的藥物組合物包括貫葉連翹和賴氨酸鹽酸鹽，其成分和重量百分含量為貫葉連翹提取物 50-80％賴氨酸鹽酸鹽 20-50％以上所述的貫葉連翹提取物含金絲桃素2-5％，其提取方法可以采用50℃左右的熱水浸泡2h后，加入0.5％NaOH，用75％甲醇在0.05Mpa下78℃提取3-5次，每次1.5h，溶媒量為5倍，在80℃條件下濃縮干燥；也可以采用80％乙醇為溶劑，撮出貫葉連翹中的蒽衍生物，再用吸附樹脂，結(jié)合硅膠層析法把金絲桃素分離出來，得到含量為4.26％的金絲桃素產(chǎn)品；有的文獻(xiàn)介紹用95％乙醇作為溶劑來提取金絲桃甙，濃縮時加入少量(NH4)2SO4，在真空度為34～8kPa的條件下濃縮，采用噴霧干燥的方法得到，也可以用文獻(xiàn)介紹的其它方法提取得到。
以上所述的賴氨酸鹽酸鹽含量為95％以上。
所述的藥物組合物做成的制劑包括片劑、膠囊劑、丸劑、顆粒劑、合劑、糖漿劑。
本發(fā)明的藥物組合物的生產(chǎn)方法如下1、片劑的生產(chǎn)方法將貫葉連翹提取物、賴氨酸鹽酸鹽，與賦形劑制成顆粒干燥，加入崩解劑、潤滑劑，壓片，或直接包裝，或包糖衣，或包薄膜衣即得到產(chǎn)品。
以上片劑所述的賦形劑為淀粉及其衍生物、糊精、磷酸氫鈣等；所述的崩解劑為羧甲基纖維素鈉、羥丙基纖維素等；所述的潤滑劑為硬脂酸鎂等；所述的包糖衣材料為蔗糖、滑石粉、明膠、色素、川蠟等；所述的薄膜包衣材料為胃溶型水、醇包衣材料等。其中賦形劑、崩解劑、潤滑劑、包衣材料用量的重量含量分別為5～75％、0.5～20％、0.5～2.0％、2～45％。
2、膠囊劑的生產(chǎn)方法將貫葉連翹提取物、賴氨酸鹽酸鹽加入賦形劑，和崩解劑并使之干燥，然后裝入膠囊中，得到產(chǎn)品。
以上制備膠囊所述的賦形劑為淀粉及其衍生物、磷酸氫鈣、硬脂酸鎂、微分硅膠等。重量20～80％。
3、丸劑的生產(chǎn)方法將貫葉連翹提取物、賴氨酸鹽酸鹽加入賦形劑，制丸。①制成濃縮丸；②加入賦形劑重量10～100％、蜜糖，制成水蜜丸、大蜜丸、濃縮丸。
4、顆粒劑的生產(chǎn)方法在上述生產(chǎn)得到的濃縮液中加入賦形劑，并制成顆粒，使之干燥，得到產(chǎn)品。
加入賦形劑的成分和含量蔗糖50～95％、乳糖50～90％、糊精50～70％。
5、合劑的生產(chǎn)方法將貫葉連翹提取物、賴氨酸鹽酸鹽與矯味劑、防腐劑溶液混合均勻，即得到產(chǎn)品。
加入的矯味劑及其含量蔗糖(或蜜糖)10～60％、防腐劑山梨酸鉀0.1～1％、尼泊金乙酯0.1～0.3％。
6、糖漿劑的生產(chǎn)方法將貫葉連翹提取物、賴氨酸鹽酸鹽與蔗糖、防腐劑溶液混合均勻，即得到產(chǎn)品。
加入的蔗糖量為60～70％、防腐劑山梨酸鉀0.1～1％、尼泊金乙酯0.1～0.3％。
本發(fā)明藥物組合物的抗炎作用機(jī)理以及其的突出實(shí)質(zhì)性特點(diǎn)和顯著的進(jìn)步為貫葉連翹為藤黃科金絲桃屬(Hyprzeum L)植物貫葉連翹(Hypericum perforatumLinn，EHPL)的全草，它主要被用于抗抑郁、收斂止血、治吐血、外傷出血、腫毒及止痛等癥。近年來國外的研究發(fā)現(xiàn)，提取物中金絲桃素是貫葉連翹中的主要有效成分，可以治療甲型肝炎、乙型肝炎、風(fēng)濕骨痛等。有的文獻(xiàn)介紹，金絲桃素還是一種有前途的內(nèi)源性光敏劑，可應(yīng)用于腫瘤的光化學(xué)診斷與治療，具有顯著的抗DNA、RNA病毒的作用。Meruelo D等研究表明貫葉連翹中所含的金絲桃素和偽金絲桃素在體內(nèi)和體外均具有抗逆轉(zhuǎn)錄病毒(如HIV)作用。實(shí)驗(yàn)證明金絲桃素在體外還對HSV-1、HSV-1、副流感病毒、牛痘病毒、皰疹口炎病毒有抑制作用。
賴氨酸鹽酸鹽為L-賴氨酸，別名L-己氨酸、L-松氨酸、L-2，6-二氨基己酸的鹽酸鹽，外觀為白色或近白色、可自由流動的結(jié)晶性粉末，無肉眼可見雜質(zhì)，賴氨酸鹽酸鹽通常較穩(wěn)定，高溫下易結(jié)塊，相對濕度60％以下穩(wěn)定，60％以上則生成二水合物，堿性條件及直接在還原糖存在下加熱則分解，易溶于水，水溶液呈中性至微酸性，與磷酸、鹽酸、氫氧化鈉、離子交換樹脂等一起加熱，能起到外消旋作用。
本發(fā)明人還經(jīng)過檢索，了解貫葉連翹國內(nèi)外的研究和治療疾病的進(jìn)展情況，并檢索到有關(guān)貫葉連翹的公開文獻(xiàn)有以下一些1、“國產(chǎn)貫葉連翹化學(xué)成分的研究”，殷志琦葉文才，(中國藥科大學(xué))《中國藥科大學(xué)學(xué)報》。2002，33(4)文摘對我國貴州產(chǎn)貫葉連翹的化學(xué)成分進(jìn)行了較系統(tǒng)的化學(xué)研究。利用各種色譜技術(shù)進(jìn)行分離純化，經(jīng)理化常數(shù)和波譜分析等進(jìn)行結(jié)構(gòu)鑒定。分離得到8個化合物槲皮素(quercetin，I)，皮苷(quercitrin，II)，山萘酚(kaempferol，III)，1，7-二羥基山酮(1，7-dihydroxyxanthone，IV)，kielcorin(5-hydroxymethyl-6-guaiacyl-2，33’，2’，4’-methoxy-xanthone-1，4-dioxane，V)，大黃素(emodin，VI)，2，5-二甲基-7-羥基色原酮(2，5-dimethyl-7-hydroxychromone，VII)，香草酸(vanillic acid，VII)。結(jié)論化合物IV，VII和VIII為首次從貫葉連翹中分離得到。2、“貫葉連翹提取物抗抑郁作用研究”作者，徐靜、蔡爽等(沈陽藥科大學(xué)、中國醫(yī)科大學(xué)附屬第一臨床醫(yī)院)，《中藥藥理與臨床》。2002，18(5)，文摘目的研究貫葉連翹提取物對小鼠的抑郁作用。方法選取了強(qiáng)迫小鼠游泳實(shí)驗(yàn)，小鼠尾懸吊應(yīng)激實(shí)驗(yàn)，拮抗利血平所致的抑制癥狀等實(shí)驗(yàn)指標(biāo)。結(jié)果貫葉連翹提取物150mg/kg，300mg/kg顯著縮短迫游泳小鼠及尾懸吊小鼠的不動時間；顯著拮抗利血平所致的體溫下降作用和小鼠眼瞼下垂作用。結(jié)論貫葉連翹提取物具有一定的抗抑郁作用。3、“貫葉連翹中的新抗真菌黃酮苷”，作者，盧艷花張臻等(南京師范大學(xué)、南京大學(xué))《植物學(xué)報》。2002，44(6)。文摘從貫葉連翹(Hypericum perforatum L.)地上部分的80％乙醇提取物中分離得到1個新的黃酮苷和6個已知黃酮類化合物。采用紅外光譜，紫外光譜，質(zhì)譜和核磁共振光譜等波譜技術(shù)測得新黃酮苷的結(jié)構(gòu)為6″-O-乙酰基槲皮素-3-O-β-D-阿洛糖苷(1，6″-O-acetyl quercetin3-O-β-D-alloside)，6個已知化合物分別被鑒定為槲皮苷(quercitrin)，金絲桃苷(hyperoside)，扁蓄苷(avicularin)，蘆丁(rutin)，槲皮素(quercetin)和山萘酚(kaemfero10。體外抗真菌活性實(shí)驗(yàn)表明，新黃酮苷(1)，槲皮苷和槲皮素對植物病原菌Helminthosporium sativum Pamel King et Bakke具有一定的抑制作用，三者的最小抑制濃度(MIC)分別為25，50和50μg/mL。另外，1和槲皮苷對禾赤色鐮孢霉(Fusarium graminearum Schw.)的生長也有抑制作用(MIC值均為100μg/mL)。4、“貫葉連翹活性成分研究新進(jìn)展”，李宏、姜懷春等(武漢大學(xué)、重慶商學(xué)院)《中草藥》。2001，32(7)。文摘介紹了貫葉連翹的活性成分，抗抑郁、抗腫瘤、抗病毒等藥理作用和副作用的研究新進(jìn)展。5、“貫葉連翹的研究進(jìn)展與可持續(xù)發(fā)展對策”，李會寧 王存蓮(漢中師范學(xué)院)《漢中師范學(xué)院學(xué)報自科版》。2000，18(1)文摘貫葉連翹除作為傳統(tǒng)的中藥材入藥外，它的活性成分在治療抑郁癥，肝炎和艾滋病以及抗癌等方面具有重要的利用前景而被廣泛關(guān)注。本文綜述了貫葉連翹的生藥顯微鑒定特征，有效成分的研究，藥理和臨床試驗(yàn)等方面的研究進(jìn)展。同時探討了可持續(xù)發(fā)展的對策。6、“貫葉連翹的生藥學(xué)研究”，雷國蓮 王繼濤(陜西中醫(yī)學(xué)院)《陜西中醫(yī)學(xué)院學(xué)報》。1999，22(6)。文摘為尋找和研究新而有效，無毒，安全可靠，非麻醉性的特殊性鎮(zhèn)痛藥，作者對秦嶺地區(qū)資料十分豐富，且富含金絲桃甙的植物貫葉連翹首次作了為系統(tǒng)的生藥學(xué)研究，為該藥的開發(fā)與利用提供可靠的鑒定和研究資料。7、“金絲桃素的研究進(jìn)展”，梁巧麗高宏成(北京大學(xué))，《中草藥》。1999，30(9)。文摘綜述金絲桃素在抗抑郁，抗病毒，對癌癥的光化學(xué)治療，免疫等方面的最新研究成果，為開發(fā)新藥提供參考。
賴氨酸及其衍生物單獨(dú)治療疾病在中國科技期刊和在中國專利中有以下一些公開的文獻(xiàn)題名賴氨酸茶堿治療支氣管哮喘及喘息性支氣管炎的臨床觀察刊名臨床內(nèi)科雜志。1995，12(4)文摘作者采用雙盲法對照研究口服賴氨酸茶堿和氨茶堿治療支氣管哮喘及喘息性支氣管炎的療效及副作用，結(jié)果表明賴氨酸茶堿平喘、止咳及改善小氣道痙攣?zhàn)饔门c氨茶堿相似，且副作用比氨茶減小，是一種較好的支氣管擴(kuò)張藥；題名芐達(dá)賴氨酸滴眼液對實(shí)驗(yàn)性白內(nèi)障的治療作用觀察刊名眼科新進(jìn)展。1997，17(3)；題名L-賴氨酸對大鼠腦損傷的作用刊名青島大學(xué)醫(yī)學(xué)院學(xué)報。2001，37(4)。文摘目的研究L-賴氨酸對大鼠閉合性腦損傷的作用。方法采用落體法致大鼠閉合性腦損傷，傷后立刻一次性腹腔注射L-賴氨酸，觀察L-賴氨酸對腦損傷大鼠腦水腫、病死率的影響；采用光鏡下特定區(qū)域壞死神經(jīng)元計數(shù)方法，觀察L-賴氨酸對皮質(zhì)及海馬CA-1神經(jīng)元損害的作用。結(jié)果L-賴氨酸組(621.5mg/kg及310.8mg/kg)與對照組(NS組)比較，能顯著減少相關(guān)腦區(qū)變性、壞死神經(jīng)元的數(shù)量(H＝10.35，13.84，t＝2.16～9.25，P＜0.05，0.01)，顯著減輕腦水腫(F＝3.52，q＝4.04～11.37，P＜0.01)，同時621.5mg/kg L-賴氨酸能顯著降低腦損傷后大鼠的病死率(P＝0.009)。結(jié)論L-賴氨酸對腦損傷有一定的保護(hù)作用。4、中國專利<申請?zhí)?amp;gt;01111316<公告號>1365665<發(fā)明名稱>用于與細(xì)胞外基質(zhì)退化相關(guān)疾病的含有抗壞血酸鹽和賴氨酸的藥物組合物<文摘>公開了一種預(yù)防和治療與細(xì)胞外基質(zhì)降解有關(guān)的疾病或病態(tài)如包括但不限于退化性疾病，特別是動脈粥樣硬化、癌癥、感染或其他炎性疾病的組合物，包含賴氨酸、脯氨酸、抗壞血酸鹽及其衍生物和合成的類似物和維生素、前維生素和微量元素。5、中國專利<申請?zhí)?amp;gt;96116212<發(fā)明名稱>一種治療腦血管病的藥物<文摘>本發(fā)明公開了一種抗腦血管病新藥——蘇腦片，主要由丹皮酚、川芎嗪、賴氨酸、珍珠粉、維生素E等組成，它能改善腦梗塞后腦血流量，治療各種原因引起的缺血性腦血管病以及顱腦外傷后出現(xiàn)的意識障礙等各種綜合癥。6、中國專利<申請?zhí)?amp;gt;95109783<授權(quán)公告日>2000年05月03日<發(fā)明名稱>一種治療顱腦外傷及其綜合癥的藥物組合物，本發(fā)明是一種治療顱腦外傷及其綜合癥的藥物組合物，其主要成分是鹽酸賴氨酸、維生素B6、維生素B 1和葡萄糖酸鈣。6、中國專利<申請?zhí)?amp;gt;93103380<發(fā)明名稱>L-賴氨酸鹽酸在制備止血藥物中的應(yīng)用<文摘>本發(fā)明公開了一種止血新藥(健身素顆粒劑)，這種止血新藥 的主要成分是L-賴氨酸鹽，用這種止血藥物能治療人體某些器官出血，如子宮異常出血、手術(shù)后異常出血，咯血，尿血等，從而開拓了L-賴氨酸的新用途。7、中國專利<申請?zhí)?amp;gt;93102915<發(fā)明名稱>L-賴氨酸鹽酸鹽用于制備治療顱腦外傷藥物的應(yīng)用<文摘>本發(fā)明提供了L-賴氨酸及其鹽類的新用途，即用L-賴氨酸治療顱腦損傷的藥物，它對治療顱腦受機(jī)械性損傷、腦血管病、大腦發(fā)育不全、更年期綜合癥的有效率達(dá)到90％以上，進(jìn)一步拓寬了L-賴氨酸的新用途。
其中中國專利<申請?zhí)?amp;gt;95109783、93103380、93102915是本發(fā)明人(原單位廣西南寧邕江制藥廠)的發(fā)明創(chuàng)造。
從上述文獻(xiàn)了解到，貫葉連翹在治療某些疾病方面得到了證明，尤其是抗抑郁作用的研究較多，但未公開其使用方法、也未見有貫葉連翹提取物與其它藥物配成組合物的公開文獻(xiàn)報道；賴氨酸在治療顱腦損傷、治療人體某些器官出血、改善腦梗塞后腦血流量等方面也有了較多研究，并已經(jīng)形成藥物產(chǎn)品在市場上銷售，但也未發(fā)現(xiàn)賴氨酸在治療皰疹方面的藥用報道，也未見將貫葉連翹和賴氨酸組合成藥物的公開文獻(xiàn)報道。
本發(fā)明人在對貫葉連翹和賴氨酸組合成藥物進(jìn)行研究的過程中對其藥理學(xué)、藥效學(xué)和臨床試驗(yàn)，發(fā)現(xiàn)該藥物組合物對二甲苯所致小鼠耳腫脹、棉球腋下埋藏誘發(fā)肉芽組織增生均有不同程度的抑制作用，但對急性炎癥有非常顯著性意義，抑菌作用試驗(yàn)結(jié)果提示該藥對一些病菌如金黃色葡萄球菌有抑制作用；對急性炎癥、慢性增生性炎癥作用呈正相關(guān)。認(rèn)為的作用機(jī)理可能與其抗炎、抑菌、抗菌作用及抗感染作用有關(guān)。
本發(fā)明的突出的實(shí)質(zhì)性特點(diǎn)和顯著的進(jìn)步為1、安全性從公開文獻(xiàn)中我們已經(jīng)了解到，貫葉連翹提取物的毒理工作已在小鼠，大鼠和犬等動物身上進(jìn)行了長達(dá)26星期的試驗(yàn)。最大試驗(yàn)劑量為5000mg/kg，最初不耐受劑量為每日900mg/kg。LD50大于最大劑量。所有試驗(yàn)?zāi)╋@示有基因毒和誘變作用。在13個男性正常人每日服用900，1800和3600mg貫葉連翅提取物試驗(yàn)中，每日900mg是大多數(shù)臨床試驗(yàn)采用的安全有效劑量。在我們進(jìn)行的臨床試驗(yàn)中，也證明了人服用貫葉連翹提取物的安全性。
2、鎮(zhèn)痛和消炎作用的有效性本發(fā)明的貫葉連翹提取物與賴氨酸鹽酸鹽組合后有明顯治療皰疹作用，而單獨(dú)使用貫葉連翹提取物或單獨(dú)使用賴氨酸鹽酸鹽達(dá)不到復(fù)合后的效果。
3、對人體的其它輔助治療效果貫葉連翹提取物與賴氨酸鹽酸鹽復(fù)配后，顯示出該藥物組合物不僅具有治療皰疹病作用，抑制皰疹病毒感染、復(fù)發(fā)，提高機(jī)體免疫功能，達(dá)到具有抗HSV-1，CMV和HIV的作用，而且還有抗抑郁、抗腫瘤的效果，還可以補(bǔ)充人體所缺乏的部分維生素。
具體實(shí)施例方式
實(shí)施例1取貫葉連翹提取物500g，賴氨酸鹽酸鹽500g(其中貫葉連翹提取物中金絲桃素含量2-5％，賴氨酸鹽酸鹽含量為95％以上)，與5～75％淀粉或者淀粉衍生物、糊精、磷酸氫鈣混合，制成顆粒，干燥，加入0.5～20％羧甲基纖維素鈉、羥丙基纖維素、潤滑劑0.5～2.0％硬脂酸鎂，壓片，或直接包裝，或包糖衣，或包薄膜衣即得到產(chǎn)品。
實(shí)施例2取貫葉連翹提取物750g，賴氨酸鹽酸鹽250g，與5～75％淀粉或者淀粉衍生物、糊精、磷酸氫鈣混合，制成顆粒，干燥，加入0.5～20％羧甲基纖維素鈉、羥丙基纖維素、潤滑劑0.5～2.0％硬脂酸鎂，壓片，或直接包裝，或包糖衣，或包薄膜衣即得到產(chǎn)品。
實(shí)施例3取貫葉連翹提取物800g，賴氨酸鹽酸鹽200g，與5～75％淀粉或者淀粉衍生物、糊精、磷酸氫鈣制成顆粒，干燥，加入助流劑微分硅膠，裝膠囊，即得到產(chǎn)品。
實(shí)施例4取貫葉連翹提取物500g，賴氨酸鹽酸鹽250g，與5～75％淀粉或者淀粉衍生物、糊精、磷酸氫鈣制成顆粒，干燥，加入助流劑微分硅膠，裝膠囊，即得到產(chǎn)品。
實(shí)施例5取貫葉連翹提取物700g，賴氨酸鹽酸鹽300g，與賦形劑蔗糖100g、乳糖100g、糊精300g制成濃縮丸、水蜜丸、大蜜丸、即得到產(chǎn)品。
實(shí)施例6取貫葉連翹提取物650g，賴氨酸鹽酸鹽350g，30g，與賦形劑蔗糖200g、乳糖100g、糊精200g制成濃縮丸、水蜜丸、大蜜丸、即得到產(chǎn)品。
實(shí)施例7取貫葉連翹提取物800g，賴氨酸鹽酸鹽350g，加入蔗糖500g、糊精500g，制成顆粒，干燥，得到產(chǎn)品。
實(shí)施例8取貫葉連翹提取物750g，賴氨酸鹽酸鹽250g，與蔗糖10～55％、防腐劑山梨酸鉀0.1～1％、尼泊金乙酯0.1～0.3％混合，制成合劑。
實(shí)施例9取貫葉連翹提取物650g，賴氨酸鹽酸鹽630g，與蔗糖量為60～70％、防腐劑山梨酸鉀0.1～1％、尼泊金乙酯0.1～0.3％合并，制成糖漿劑。
本發(fā)明有關(guān)臨床試驗(yàn)、藥理、藥效學(xué)情況一、貫葉連翹提取物和鹽酸賴氨酸體外抗皰疹病毒實(shí)驗(yàn)研究試驗(yàn)單位，北京大學(xué)醫(yī)學(xué)部神經(jīng)病理研究室試驗(yàn)時間2002年9月-2003年1月摘要目的評價貫葉連翹提取物、鹽酸賴氨酸單獨(dú)及聯(lián)合使用的細(xì)胞毒性和抗皰疹病毒活性。方法采用細(xì)胞病變效應(yīng)法(CPE)，測定貫葉連翹提取物、鹽酸賴氨酸單獨(dú)及聯(lián)合使用對Vero細(xì)胞和2BS細(xì)胞的細(xì)胞毒性，以及對單純皰疹病毒I型(HSV-1)和水痘-帶狀皰疹病毒(VZV)的抗病毒活性。結(jié)果鹽酸賴氨酸、貫葉連翹提取物單獨(dú)或聯(lián)合使用在體外對HSV-1和VZV表現(xiàn)不同程度的抗病毒活性，最小有效濃度(MIC)、半數(shù)有效濃度(IC50)范圍分別為9.7μg/mL～39.0μg/mL，6.8μg/mL～27.5μg/mL，與陽性對照藥利巴韋林MIC、IC50相近。結(jié)論貫葉連翹提取物、鹽酸賴氨酸單獨(dú)或聯(lián)合使用在體外具有抗HSV-1和VZV作用。
關(guān)鍵詞貫葉連翹提取物；鹽酸賴氨酸；單純皰疹病毒；水痘-帶狀皰疹病毒；細(xì)胞病變效應(yīng)。
皰疹病毒(Herpes-virus)是在動物和人類中發(fā)現(xiàn)的一群中等大小、結(jié)構(gòu)相似、有包膜的雙股DNA病毒?，F(xiàn)已發(fā)現(xiàn)100種以上。其中，單純皰疹病毒(Herpes Simples Viruses，HSV)和水痘-帶狀皰疹病毒(Varicella-zoster virus，VZV)是常見的傳染性病原體。HSV感染與先天畸形、流產(chǎn)、宮頸癌、腦炎、新生兒疾病、性病等10多種疾病有關(guān)。VZV感染可此起帶狀皰疹。由于經(jīng)典抗病毒藥無環(huán)鳥苷(acyclovir，ACV)已出現(xiàn)耐藥性，且毒副作用較大，價格昂貴。尋找開發(fā)新的安全、有效的抗病毒藥成為熱點(diǎn)。
貫葉連翹(Hypericum perforatum L)又名圣約翰草(St.John’s wort)，系藤黃科金絲桃屬植物，全草入藥，能清心明目，調(diào)經(jīng)活血、止血生肌、解毒消炎，在我國秦巴地區(qū)廣泛分布[2]。貫葉連翹還具有抗病毒、鎮(zhèn)痛、抗炎、抗菌等多種藥理作用，且安全性高。
賴氨酸是人體必需的8種氨基酸之一。文獻(xiàn)報道，皰疹病毒感染患者口服賴氨酸(1000mg/d～3000mg/d)能防止皰疹復(fù)發(fā)或減少復(fù)發(fā)頻率、緩解癥狀、縮短病程。Ehal M等注意到大部分具有抗皰疹病毒作用的肽類都富含賴氨酸。
對于賴氨酸能夠抗HSV公認(rèn)的理由是，病毒的復(fù)制必須有足夠精氨酸，賴氨酸干擾精氨酸利用，從而抑制單純皰疹及帶狀皰疹的復(fù)發(fā)，即使發(fā)作癥狀也較輕，病程較短?，F(xiàn)臨床主要用于帶狀皰疹和感冒瘡的治療，推薦劑量為一日三次，每次1000mg。
盡管臨床報告不少，但至今缺乏貫葉連翹提取物和賴氨酸抗皰疹病毒作用的實(shí)驗(yàn)依據(jù)。本次實(shí)驗(yàn)的目的是通過評價貫葉連翹提取物、鹽酸賴氨酸單獨(dú)及聯(lián)合使用的細(xì)胞毒性和抗皰疹病毒活性，為其臨床單獨(dú)或聯(lián)合使用提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)，為開發(fā)治療病毒感染藥物提供實(shí)驗(yàn)基礎(chǔ)。1.1材料1.1.1藥品與儀器鹽酸賴氨酸(廣西南寧邕江藥業(yè)有限公司生產(chǎn)，批號010605)，貫葉連翹提取物(廣西南寧邕江藥業(yè)有限公司提供，生產(chǎn)批號1605795，金絲桃素含量3‰，棕色瓶避光保存)，利巴韋林注射液(0.1g/mL，蘇州第六制藥廠生產(chǎn)，批號00023)，二甲基亞砜(dimethylsulfoxide，DMSO，Sigma公司生產(chǎn))。96孔微量細(xì)胞培養(yǎng)板，CO2培養(yǎng)箱，超凈工作臺，倒置顯微鏡。1.1.2實(shí)驗(yàn)分組實(shí)驗(yàn)分為(1)鹽酸賴氨酸組、(2)貫葉連翹提取物組、(3)貫葉連翹提取物+鹽酸賴氨酸重量比1∶1組、(4)貫葉連翹提取物+鹽酸賴氨酸重量比1∶2組、(5)貫葉連翹提取物+鹽酸賴氨酸重量比2∶1組。將各組藥物溶于Eagle’s細(xì)胞培養(yǎng)維持液(含10％DMSO)，配制成5mg/mL濃度，離心取上清，無菌室濾膜過濾滅菌。(6)陽性對照組利巴韋林組(不含DMSO的Eagle’s細(xì)胞培養(yǎng)維持液稀釋至5mg/mL濃度)、(7)空白對照組Eagle’s細(xì)胞培養(yǎng)維持液(含10％DMSO)。1.1.3病毒株單純皰疹病毒I型(HSV-1)批號2002320，水痘-帶狀皰疹病毒(VZV)批號2002216，由中國預(yù)防醫(yī)學(xué)科學(xué)院病毒學(xué)研究所提供。1.1.4細(xì)胞株非洲綠猴腎細(xì)胞(Green monkey kidney cells，Vero cell)，人胚肺二倍體細(xì)胞(2BS cell)10-13代細(xì)胞，由中國預(yù)防醫(yī)學(xué)科學(xué)院病毒學(xué)研究所提供。1.1.5Eagle’s細(xì)胞培養(yǎng)維持液等試驗(yàn)材料，由中國預(yù)防醫(yī)學(xué)科學(xué)院病毒學(xué)研究提提供。1.2方法1.2.1藥物對Vero細(xì)胞和2BS細(xì)胞的毒性測定采用細(xì)胞病變效應(yīng)法(cytopathic effect，CPE)，Vero細(xì)胞和2BS細(xì)胞以4×105/mL接種96孔培養(yǎng)板，37℃、5％CO2培養(yǎng)24h，分別加入驗(yàn)證藥物和陽性對照藥物5000μg/mL～39μg/mL，空白對照(含10％DMSO)1∶10～1∶160(相當(dāng)于DMSO濃度1.0％～0.063％)，每濃度接種4孔，每孔100μL。同時設(shè)正常細(xì)胞對照。置37℃，5％CO2培養(yǎng)5～7d。每24h在倒置顯微鏡下觀察細(xì)胞形態(tài)變化，記錄細(xì)胞形態(tài)變化以25％以下變化為+，26％～50％變化為++，51％～75％為+++，76％～100％變化為++++。用Reed-Muench法，計算藥物半數(shù)中毒濃度(TD50)和最大無毒濃度(TD0)。1.2.2在Vero細(xì)胞培養(yǎng)內(nèi)對HSV-1病毒毒力的測定采用病毒CPE法，Vero細(xì)胞以4×105/mL接種96孔培養(yǎng)板，37℃、50％CO2培養(yǎng)24h，加入原始濃度的HSV-1，1∶10～1∶106，10倍稀釋6個濃度，每濃度4孔，每孔100μL。設(shè)正常細(xì)胞對照。37℃、50％CO2培養(yǎng)5～7d。觀察細(xì)胞形態(tài)，用Reed-Muench法，計算HSV-1半數(shù)感染濃度(TCID50)。1.2.3在2BS細(xì)胞培養(yǎng)內(nèi)對VZV病毒毒力的測定采用病毒CPE法，2BS細(xì)胞以4×105/mL接種96孔培養(yǎng)板，37℃、50％CO2培養(yǎng)24h，加入原始濃度的VZV，1∶10～1∶80，2倍稀釋4個濃度，每濃度4孔，每孔100μL。設(shè)正常細(xì)胞對照。37℃、50％CO2培養(yǎng)5～7d。觀察細(xì)胞形態(tài)，用Reed-Muench法，計算病毒半數(shù)感染濃度(TDID50)。1.2.4藥物在Vero細(xì)胞培養(yǎng)內(nèi)對HSV-1的抑制試驗(yàn)采用病毒CPE法，Vero細(xì)胞以4×105/mL接種96孔培養(yǎng)板，37℃、50％CO2培養(yǎng)24h，加入HSV-1的100TCID50的病毒液，每孔100μL，37℃、50％CO2培養(yǎng)1h使其吸附，然后棄掉病毒液。分別加入驗(yàn)證藥物，藥物選用對細(xì)胞的最大無毒濃度(TD0)，各給藥組625μg/mL～4.88μg/mL，空白對照組(含10％DMSO)1∶40～1∶5120(相當(dāng)于DMSO濃度0.25％～0.002％)，2倍稀釋8個濃度，每濃度4孔，每孔100μL。利巴韋林注射液為935μg/mL～7.3μg/mL，2倍稀釋8個濃度，每濃度4孔，每孔100μL。同時設(shè)病毒對照和正常細(xì)胞對照，37℃、50％CO2培養(yǎng)5～7d，每24h倒置顯微鏡下觀察病毒CPE，至病毒對照細(xì)胞變出現(xiàn)“+++～++++”時結(jié)束試驗(yàn)。同樣試驗(yàn)重復(fù)三次求平均值，利用均值計算藥物半數(shù)有效濃度(IC50)、最小有效濃度(MIC)及治療指數(shù)(TI)。1.2.5藥物在2BS細(xì)胞培養(yǎng)內(nèi)對VZV的抑制試驗(yàn)采用病毒CPE法，2BS細(xì)胞以4×105/mL接種96孔培養(yǎng)板，37℃、50％CO2培養(yǎng)24h，加入VZV的100TCID50的病毒液，每孔100μL，37℃、50％CO2吸附1h，棄掉病毒液。其余實(shí)驗(yàn)步驟同1.2.4所述，求出藥物半數(shù)有效濃度(IC50)、最小有效濃度(MIC)及治療指數(shù)(TI)。2結(jié)果2.1藥物對細(xì)胞的毒性作用正常Vero細(xì)胞和2BS細(xì)胞能耐受的藥物濃度如表-1所示。TD50代表藥物半數(shù)中毒濃度，TD0代表藥物最大無毒濃度。由于貫葉連翹提取物不溶于水，各組藥物均用含10％DMSO的Eagle’s細(xì)胞培養(yǎng)維持液(即空白對照)配制。DMSO具有一定細(xì)胞毒性，因此空白對照組稀釋至1∶40(含0.25％DMSO)才對正常Vero細(xì)胞和2BS細(xì)胞無毒性作用。與空白對照相比，各試驗(yàn)組藥物在稀釋至1∶8(含1.25％DMSO)～1∶32(含0.31％DMSO)范圍時達(dá)到TD0，所含DMSO濃度高于對細(xì)胞無毒濃度0.25％，說明藥物組的有毒性作用有可能部分或全部來自于溶劑DMSO，其實(shí)際TD50、TD0應(yīng)大于所測得值。而陽性對照利巴韋林需用不含DMSO的Eagle’s細(xì)胞培養(yǎng)維持液稀釋，所以測得毒性為藥物真實(shí)濃度。2.2在Vero和2BS細(xì)胞培養(yǎng)內(nèi)對HSV-1和VZV病毒毒力測定結(jié)果(TCID50)觀察CPE，計算HSV-1的半數(shù)感染量(TCID50)為1∶106，VZV的半數(shù)感染量(TCID50)1∶28。即接種每孔0.1mL滴度為1∶106的HSV-1可使50％Vero細(xì)胞發(fā)生明顯病變，接種每孔0.1mL滴度為1∶28的VZV可使50％2BS細(xì)胞發(fā)生明顯病變。2.3藥物的譏病毒作用2.3.1藥物在Vero細(xì)胞培養(yǎng)內(nèi)對HSV-1病毒的抑制試驗(yàn)結(jié)果結(jié)果如表2所示，當(dāng)HSV-1病毒以100TCID50濃度感染正常Vero細(xì)胞后，各組試驗(yàn)藥物均顯示有不同程度抗病毒作用。最小有效濃度(MIC)范圍從9.7μg/ml～19.5μg/ml不等，半數(shù)有效濃度(IC50)范圍從6.8μg/ml～27.5μg/ml不等。2.3.2藥物在2BS細(xì)胞培養(yǎng)內(nèi)對VZV病毒的抑制作用結(jié)果如表2所示，當(dāng)VZV病毒以100TCID50濃度感染正常細(xì)胞后，各組試驗(yàn)藥物均顯示有不同程度抗病毒作用，最小有效濃度(MIC)范圍從9.7μg/ml～39.0μg/ml不等，半數(shù)有效濃度(IC50)范圍從6.8μg/ml～19.0μg/ml不等。3討論近年來HSV感染發(fā)病率急劇增高，人群中有60％～90％HSV攜帶者，嚴(yán)重威脅人類健康[8]。帶狀皰疹是VZV引起的疼痛性疾病，其最常見和最令人因擾的并發(fā)癥是皰疹后遺神經(jīng)痛(postherpetic neuralgia PHN)，尤其是老年患者多見，常持續(xù)數(shù)月或數(shù)年，表現(xiàn)為持續(xù)和/或間歇性自發(fā)刺激誘發(fā)痛，例如痛覺過敏，異常性疼痛。疼痛的后果包括疲勞、睡眠障食欲減退、抑郁、回避社交、影響日常生活降低生活質(zhì)量[9]。
盡管核苷類似物如疊氮胞苷(zidovudine，AZT)、dideoxyinosine(ddI)、dideoxycytidine(ddC)、ACV作為抗病毒藥已廣泛應(yīng)用于臨床，但嚴(yán)重的副作用[10]和病毒抗藥株[1]的出現(xiàn)使研制新的低毒、高效抗病毒藥物刻不容緩。天然藥物來源廣泛，不良反應(yīng)較少，其抗病毒作用日益受到重視。
貫葉連翹提取物(標(biāo)準(zhǔn)為含3‰金絲桃素)已作為抗郁藥廣泛使用，臨床患者對其有良好的耐受性。用藥后，其副作用的發(fā)生率與安慰劑相似。在美國甚至作為食品補(bǔ)充劑使用。貫葉連翹提取物藥理作用廣泛，具有鎮(zhèn)痛、抗炎、抗菌、抗腫瘤等多項(xiàng)藥理作用。Meruelo D等研究表明貫葉連翹中所含的金絲桃素和偽金絲桃素在體內(nèi)和體外均具有抗逆轉(zhuǎn)錄病毒(如人免疫缺陷病毒HIV)作用[12]。實(shí)驗(yàn)證明金絲桃素在體外還對HSV-1、HSV-2、副流感病毒、牛痘病毒、皰疹口炎病毒有抑制作用[13]。
賴氨酸是一種生理性物質(zhì)，安全性高，作為食品添加劑使用。臨床上已有一些用賴氨酸治療皰疹病毒感染的報道，用量高達(dá)每天3000mg。
為了研究貫葉連翹提取物和賴氨酸這兩種安全、低毒藥物在體外抗皰疹病毒作用，本實(shí)驗(yàn)以HSV-1攻擊Vero和VZV攻擊2BS細(xì)胞為模型，通過CPE法研究鹽酸賴氨酸、貫葉連翹提取物單獨(dú)使用，及鹽酸賴氨酸與貫葉連翹提取物以重量比1∶1、1∶2、2∶1聯(lián)合使用時細(xì)胞毒性和體外抗HSV-1、VZV作用。從總體來看，最小有效濃度(MIC)、半數(shù)有效濃度(IC50)范圍分別為9.7μg/ml～39.0μg/ml，6.8μg/ml～27.5μg/ml，與陽性對照藥利巴韋林MIC、IC50相近。
實(shí)驗(yàn)中所測得的鹽酸賴氨酸、貫葉連翹提取物單獨(dú)使用，及鹽酸賴氨酸與貫葉連翹提取物以重量比1∶1、1∶2、2∶1聯(lián)合使用時細(xì)胞毒性高于利巴韋林?？赡苁且?yàn)轵?yàn)證藥物用含10％DMSO的培養(yǎng)液配置，而利巴韋林需用不含DMSO的培養(yǎng)液配置。空白對照組的測定結(jié)果表明，當(dāng)DMSO濃度高于0.25％時對正常Vero細(xì)胞和2BS細(xì)胞有毒性作用。所以驗(yàn)證藥物與利巴韋林對細(xì)胞的毒性差異有可能部分或全部來自于溶劑DMSO的作用，而藥物實(shí)際的安全性應(yīng)較實(shí)驗(yàn)所示高。
綜上所述，貫葉連翹提取物、鹽酸賴氨酸單獨(dú)或聯(lián)合使用在體外具有抗皰疹病毒活性，貫葉連翹提取物、賴氨酸聯(lián)合應(yīng)用也為研究治療病毒感染性疾病(如皰疹后遺神經(jīng)痛PHN)提供了新的思路，有待進(jìn)一步深入研究。
二、藥理研究北京大學(xué)醫(yī)學(xué)部藥理學(xué)系和神經(jīng)病理研究室于2002年9月-2003年1月還對本發(fā)明的藥物組合物進(jìn)行了藥理研究，藥理研究共做了以下幾個項(xiàng)目
1、貫葉連翹提取物、鹽酸賴氨酸組合物使用對小鼠神經(jīng)行為的影響，種屬為ICR，雌雄各半，共60只，觀察灌胃給藥是否對小鼠中樞神經(jīng)系統(tǒng)有抑制作用，實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明高劑量(2000mg/kg)和中劑量(1000mg/kg)對小鼠一般神經(jīng)精神行為無影響。
2、貫葉連翹提取物、鹽酸賴氨酸組合物使用對小鼠自主活動的影響，種屬為ICR，雌雄各半，共60只，觀察灌胃給藥是否對小鼠中樞神經(jīng)系統(tǒng)有抑制作用，實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明高劑量(2000mg/kg)和中劑量(1000mg/kg)對小鼠有明顯鎮(zhèn)靜作用。
3、貫葉連翹提取物、鹽酸賴氨酸組合物使用對小鼠腸蠕動的影響，種屬為ICR，雌雄各半，共60只，用CMC比較，觀察灌胃給藥是否對小鼠腸道功能有影響，實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明高劑量(2000mg/kg)和中劑量(1000mg/kg)對小鼠胃腸沒有明顯影響。
4、貫葉連翹提取物、鹽酸賴氨酸組合物對大鼠LD50，種屬為SD大鼠，雌雄各半，共50只，分成3組，對照組用0.25％的CMC，觀察灌胃給藥后的死亡率，實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明最大劑量(14000mg/kg)雌性組死亡90％，雄性20％，和中劑量(7072mg/kg)死亡率為0。
5、貫葉連翹提取物、鹽酸賴氨酸組合物使用對小鼠抗電驚厥的影響，種屬為ICR，雌雄各半，共60只，用CMC比較，用110V交流電3秒致電驚厥，觀察灌胃給藥是否對小鼠抗最大電驚厥有無明顯影響，實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明高劑量(2000mg/kg)和中劑量(1000mg/kg)對小鼠抗最大電驚厥無。
6、貫葉連翹提取物、鹽酸賴氨酸組合物使用對家貓心率和心電圖的影響，種屬為家貓，雌雄不拘，共34只，對照組用0.25％的CMC，觀察灌胃給藥對家貓心率和心電圖的變化，實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明高劑量(600mg/kg)和中劑量(300mg/kg)對家貓心率和心電圖沒有明顯變化。
7、貫葉連翹提取物、鹽酸賴氨酸組合物使用對家貓呼吸的影響，種屬為家貓，雌雄不拘，共34只，對照組用0.25％的CMC，觀察灌胃給藥對家貓呼吸頻率和呼吸幅度的變化，實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明高劑量(600mg/kg)和中劑量(300mg/kg)對家貓心率和心電圖沒有明顯變化。
8、貫葉連翹提取物、鹽酸賴氨酸組合物使用對家貓血壓的影響，種屬為家貓，雌雄不拘，共34只，對照組用0.25％的CMC，觀察灌胃給藥對家貓呼吸頻率和呼吸幅度的變化，實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，觀察240分鐘，高劑量(600mg/kg)和中劑量(300mg/kg)對家貓血壓沒有明顯變化。
權(quán)利要求
1.一種具有治療皰疹病毒的藥物組合物，其特征在于它包括貫葉連翹提取物和賴氨酸鹽酸鹽，其成分和重量含量如下貫葉連翹提取物 50-80％賴氨酸鹽酸鹽20-50％
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的治療皰疹病毒的藥物組合物，其特征在于貫葉連翹提取物的金絲桃含量為2-5％；賴氨酸鹽酸鹽含量為95％以上。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的藥物組合物，其特征在于所述的藥物組合物可以做成片劑、膠囊劑、丸劑、顆粒劑、合劑、糖漿劑。
4.一種具有治療皰疹病毒的藥物組合物的生產(chǎn)方法，其特征在于該藥物組合物做成片劑的生產(chǎn)方法是將貫葉連翹提取物、賴氨酸鹽酸鹽，與賦形劑制成顆粒干燥，加入崩解劑、潤滑劑，壓片，或直接包裝，或包糖衣，或包薄膜衣即得到產(chǎn)品；所述的賦形劑為淀粉及其衍生物、糊精、磷酸氫鈣等；所述的崩解劑為羧甲基纖維素鈉、羥丙基纖維素等；所述的潤滑劑為硬脂酸鎂等；所述的包糖衣材料為蔗糖、滑石粉、明膠、色素、川蠟等；所述的薄膜包衣材料為胃溶型水、醇包衣材料等。其中賦形劑、崩解劑、潤滑劑、包衣材料用量的重量含量分別為5～75％、0.5～20％、0.5～2.0％、2～45％。
5.一種具有治療皰疹病毒的藥物組合物的生產(chǎn)方法，其特征在于該藥物組合物做成膠囊劑的生產(chǎn)方法是將貫葉連翹提取物、賴氨酸鹽酸鹽加入賦形劑，和崩解劑并使之干燥，然后裝入膠囊中，得到產(chǎn)品；所述的制備膠囊所述的賦形劑為淀粉及其衍生物、磷酸氫鈣、硬脂酸鎂、微分硅膠等。重量20～80％。
6.一種具有治療皰疹病毒的藥物組合物的生產(chǎn)方法，其特征在于該藥物組合物做成丸劑的生產(chǎn)方法將貫葉連翹提取物、賴氨酸鹽酸鹽加入賦形劑，制丸。①制成濃縮丸；②加入賦形劑重量10～100％、蜜糖，制成水蜜丸、大蜜丸、濃縮丸。
7.一種具有治療皰疹病毒的藥物組合物的生產(chǎn)方法，其特征在于該藥物組合物做成顆粒劑的生產(chǎn)方法在上述生產(chǎn)得到的濃縮液中加入賦形劑，并制成顆粒，使之干燥，得到產(chǎn)品；所述的顆粒劑的賦形劑的成分和含量蔗糖50～95％、乳糖50～90％、糊精50～70％。
8.一種具有治療皰疹病毒的藥物組合物的生產(chǎn)方法，其特征在于該藥物組合物做成合劑的生產(chǎn)方法將貫葉連翹提取物、賴氨酸鹽酸鹽與矯味劑、防腐劑溶液混合均勻，即得到產(chǎn)品；所述的合劑的矯味劑及其含量蔗糖(或蜜糖)10～60％、防腐劑山梨酸鉀0.1～1％、尼泊金乙酯0.1～0.3％。
9.一種具有治療皰疹病毒的藥物組合物的生產(chǎn)方法，其特征在于該藥物組合物做成糖漿劑的生產(chǎn)方法將貫葉連翹提取物、賴氨酸鹽酸鹽與蔗糖、防腐劑溶液混合均勻，即得到產(chǎn)品。所述的蔗糖加入量為60～70％、防腐劑山梨酸鉀0.1～1％、尼泊金乙酯0.1～0.3％。
全文摘要
本發(fā)明涉及一種具有治療治療皰疹病毒的藥物組合物及其生產(chǎn)方法，該藥物組合物包括50－80％的貫葉連翹提取物和20－50％和賴氨酸鹽酸鹽，它能抑制皰疹病毒感染、復(fù)發(fā)，提高機(jī)體免疫功能，達(dá)到具有抗HSV－1，CMV和HIV的作用目的，無明顯副作用，是一種治療皰疹病毒感染的理想藥物。
文檔編號A61K31/7048GK1452981SQ0312800
公開日2003年11月5日 申請日期2003年5月17日 優(yōu)先權(quán)日2003年5月17日
發(fā)明者庫寶善, 羅潤昌, 麻叔林, 湯萍英, 孫宜 申請人:廣西化工生物技術(shù)研究所