專利名稱：：中和堿性飲料工業(yè)廢水的生物技術(shù)方法中和堿性飲料工業(yè)廢水的生物技術(shù)方法發(fā)明領(lǐng)域本發(fā)明涉及細菌分離株-微小桿菌(Sa'gMo6acten'wm(MTCC5183)，其保藏在布達佩斯條約認可的國際保藏機構(gòu)IMTECH,39A區(qū)，昌迪加爾，印度。更具體地，本發(fā)明涉及制備用于中和來自飲料業(yè)的高堿性廢水的細菌分離株-微小桿菌的方法，該菌株保藏在布達佩斯條約認可的國際保藏機構(gòu)IMTECH,39A區(qū)，昌迪加爾，印度。背景和現(xiàn)有技術(shù)嚴(yán)格的法律和權(quán)威機構(gòu)頻繁的檢查反映了目前社會對環(huán)境的關(guān)注。因此，例如，目前，當(dāng)排除到接收水道或污水系統(tǒng)中時，最低限度僅允許工業(yè)如飲料工業(yè)廢水的pH偏離中性點。取決于應(yīng)用，可獲得各種化學(xué)品來中和高堿性的飲料工業(yè)廢水。在多數(shù)情形中，使用硫酸(H2S04)。終端使用者必須考慮使用的濃度，必須仔細分析涉及的所有化學(xué)反應(yīng)，必須閱讀制造商的警示和說明，并且必須考慮關(guān)于危險液體的公共安全措施。處理廢水的方法包括用化學(xué)品處理，所述化學(xué)品可以是酸性或堿性，加入廢水中時能夠形成酸或堿。取決于應(yīng)用，可獲得各種化學(xué)品用于工業(yè)中和，不論是中和酸性溶液或堿性溶液。用于酸性或堿性中和的最常使用的中和化學(xué)品是98%硫酸和50%氫氧化鈉。在很多情形中，它們是非常好的選擇，然而，在選擇化學(xué)品時需要進行許多考慮，并且它們可能并非常常是最佳選擇。選擇用于中和酸或堿的化學(xué)品常常與設(shè)計中和體系一樣重要。下面列出了一些選擇化學(xué)品考慮的重點-健康和安全性。-成本和便利性。-中和化學(xué)品的物理性能。-存儲環(huán)境?；瘜W(xué)品選擇標(biāo)準(zhǔn)的一個說明如下健康和安全性混合化學(xué)品可導(dǎo)致極度的危險或有害反應(yīng)。例如，向具有氰化物的溶液中添加任何的酸導(dǎo)致釋放致死的HCN氣體。成本和便利性大多數(shù)酸和堿在多數(shù)應(yīng)用中發(fā)揮作用。例如，硫酸(H2S04)是低成本的，并且比硝酸更有效。在評估成本時濃度也是一個重要的考慮因素。例如，可以接近0%-98%的濃度范圍來購買硫酸。濃度越高，通?；ㄙM越小。物理性能必須仔細考慮所選擇試劑的物理性能。例如，50%氫氧化鈉(NaOH)在低于60°F的溫度下開始結(jié)冰。將濃度降低至25%完全消除了這一顧慮。例如，鹽酸(HCl)嚴(yán)重除氣(outgasses)。該氣體非常具有腐蝕性，并且侵蝕所有金屬物品。因此，如果使用HC1，必須是適當(dāng)通風(fēng)，或在氣體可容易消散的室外使用。存儲環(huán)境關(guān)注存儲問題如罐的類型和可利用的次級污染，操作者對處理危險化學(xué)品的熟練度，再填滿存儲容器或從大容積罐中轉(zhuǎn)移程序的危險性。最常使用的中和化學(xué)品如下-酸硫酸，鹽酸，硝酸，磷酸和在水中形成碳酸的二氧化碳。-堿氫氧化鈉(苛性鈉)，氫氧化鈣，碳酸鈣(石灰或石灰石)和氫氧化銨。用酸中和世界上最廣泛使用和生產(chǎn)的化學(xué)品是硫酸。可獲得的濃度范圍是0%-98%，在所有普遍用于中和反應(yīng)的酸中，其是最經(jīng)濟的。它比使用HC1或HN03更容易和安全，并且除磷酸以外，它比其它酸更有效。硫酸的典型使用濃度范圍是25%-96%。然而，通常推薦使用30%-50%濃度的硫酸。鹽酸(HC1)，也已知為muriaticacid，是在工業(yè)上第二個最常使用的酸(硫酸是第二個最常使用的酸)。它非常有效，相對廉價。在最大可獲得濃度37%時，HC1的有效性約是硫酸的1/3，因此使得它使用起來相對更昂貴。取決于溫度和攪拌，10。/。濃度以上的HC1變?yōu)槁然瘹湔魵?，其與空氣中存在的水蒸汽結(jié)合。由此形成的氣體具有高度的腐蝕性，并且侵蝕所有的金屬物品，包括建筑物結(jié)構(gòu)，噴頭，銅線，不銹鋼等。因此，必須是適當(dāng)通風(fēng)，或在氣體可容易消散的室外使用。硝酸(HN03)，盡管是在很多工業(yè)中廣泛使用的化學(xué)品，它仍然不如鹽酸或硫酸普及，原因在于它使用起來比兩者更昂貴。硝酸與空氣中存在的水蒸汽結(jié)合變?yōu)橛泻怏w。該氣體是高度腐蝕性的，并侵蝕所有金屬物品，包括建筑物結(jié)構(gòu)，噴頭，銅線，不銹鋼等。因此，必須是適當(dāng)通風(fēng)，或在氣體可容易消散的室外使用。磷酸(H3P04),非常廣泛用于農(nóng)業(yè)肥料和洗滌產(chǎn)品的生產(chǎn)，它是相對廉價的酸。然而，它仍然不能與硫酸和鹽酸充分競爭，原因在于它是弱酸，并且在正常濃度時在水中不能完全解離。這賦于它在使用時比硫酸或鹽酸更安全，并且它較少變體氣體。它傾向于緩沖中和反應(yīng)，這使得它用于較慢的容易控制的反應(yīng)。由于它的成本(與硫酸相比較)和可用性，磷酸不常用于中和體系中。二氧化碳(C02)是在地球大氣中發(fā)現(xiàn)的第三個最濃的氣體，C02本身不是酸。當(dāng)溶解于水中時，它形成碳酸(H2C03);就是這種碳酸在溶液中產(chǎn)生堿的中和。C02最吸引人的特征是它不將水的pH降低在7.0以下(對于所有的實際應(yīng)用而言)。另外，C02不具有腐蝕性；然而，由于它比空氣更重，因此，一種危險是引起窒息。由于必須將二氧化碳溶解在溶液中使用，因此難于使用該氣體，并且它的應(yīng)用受到限制。這需要使用碳酸化器，或一些方法，以將該氣體溶解在溶液中。還發(fā)生顯著的出氣，這不成問題，除非方法還需要固體沉淀。在灌注水泥的操作中，產(chǎn)生大量的堿性廢水。對于這類應(yīng)用而言是極好的選擇，原因在于位點是臨時的，氣體是無危險的，假設(shè)考慮保留和混和，可以平行(in-line)使用，并且該氣體是自身緩沖的，因此不考慮劑量，它將不會將pH降低到低于7.5-7.0。嗜堿菌(alkaliphiles)取決于生長條件，特別是營養(yǎng)，金屬離子和溫度，對于生長而言，幾種微生物顯示出多于一種適宜pH。術(shù)語"嗜堿菌"用于表示在pH超過9的條件下最適生長或生長良好的微生物。第一篇涉及嗜堿性微生物的堿性酶的報道公開于1971年。在過去的二十年中，我們的研究已經(jīng)集中在嗜堿性微生物的酶學(xué)，生理學(xué)，生態(tài)學(xué)，分類學(xué)，分子生物學(xué)和遺傳學(xué)。這些微生物的工業(yè)應(yīng)用也已經(jīng)被廣泛研究，一些酶如堿性蛋白酶，堿性淀粉酶和堿性纖維素酶己經(jīng)用于工業(yè)規(guī)模(Horikoshi.K.(1971)Productionofalkalineenzymesbyakalophilicmicroorganisms.Part1.Alkalineproteaseproducedby/f蘑No，221.Agric.Biol.Chem.36,.1407-1414.，Horikoshi,K.andAkiba,T.(1982)AlkalophilicMicroorganisms:ANewMicrobialWorld.Springer-Verlag,Heidelberg,Tokyo.)。隨后，很多微生物學(xué)家在各種領(lǐng)域發(fā)表了許多關(guān)于嗜堿性微生物的文章。在pH10-13的堿性環(huán)境中，嗜堿菌的細胞表面可以維持細胞內(nèi)的pH處于中性。在1995年，通過利用嗜堿性桿菌C-125突變體開發(fā)了新的宿主載體系統(tǒng)，該突變體對堿性敏感，并且已經(jīng)研究了負責(zé)嗜堿性(alkaliphily)的基因(Horikoshi,K.(1991)MicroorganismsinAlkalineEnvironments,Kodansha-VCH,Tokyo,Weinheim,NewYork,Cambridge,Basel"Kudo，T"Hino，M.,Kitada，M.andHorikoshi,K.(1990)DNAsequencesrequiredforthealkalophilyof,薪sp.strainC-125arelocatedclosetogetheronitschromosomalDNA.J.Bacteriol.172,7282-7283,)。盡管已經(jīng)將嗜堿菌用于許多工業(yè)應(yīng)用，但沒有關(guān)于利用它們來中和飲料工業(yè)廢水的研究報道。一些關(guān)于在存在糖的條件下通過細菌的混和物來進行生物中和的工作已經(jīng)考慮尋求專利的保護，并公開在美國專利申請?zhí)?9/160422中，題目是"MicrobialCompositionandaProcessUsefUlfortheNeutralizationofAlkalineWaste-Water"。發(fā)明目的本發(fā)明的主要目的是提供細菌分離株-微小桿菌(MTCC5183)，其保藏在布達佩斯條約認可的國際保藏機構(gòu)IMTECH,39A區(qū)，昌迪加爾，印度。本發(fā)明的另一個目的是提供制備細菌分離株-微小桿菌(MTCC5183)的方法，該菌株保藏在布達佩斯條約認可的國際保藏機構(gòu)IMTECH,39A區(qū)，昌迪加爾，印度。本發(fā)明的另一個目的是分離細菌-微小桿菌(MTCC5183)，其保藏在布達佩斯條約認可的國際保藏機構(gòu)IMTECH,39A區(qū)，昌迪加爾，印度，用于中和飲料工業(yè)的高堿性廢水。發(fā)明概述本發(fā)明提供來自飲料工業(yè)廢水的細菌分離株-微小桿菌(MTCC5183)，其保藏在國際保藏機構(gòu)IMTECH,39A區(qū)，昌迪加爾，印度。該細菌菌株能夠在兩個小時內(nèi)將廢水的pH從12.00降低到7.00單位。與通過化學(xué)手段進行的常規(guī)中和的方法相比，通過這種生物技術(shù)方法中和堿性飲料工業(yè)廢水是高度有效和經(jīng)濟的。因此，本發(fā)明提供細菌分離株-微小桿菌(MTCC5183)，其保藏在布達佩斯條約認可的國際保藏機構(gòu)IMTECH,39A區(qū)，昌迪加爾，印度。在本發(fā)明的一個實施方案中，該細菌分離株pH范圍10-12.00的培養(yǎng)基中生長。在本發(fā)明的另一個實施方案中，該細菌分離株能夠在1-1.5小時內(nèi)將飲料工業(yè)廢水12.0-11.5的高pH降低到中性pH(7.5-7.00)。在本發(fā)明的另一個實施方案中，該細菌分離株以1:5-1:10的比率用于將飲料工業(yè)廢水的高pH(12.0-11.5)中和到中性pH(7.5-7.00)。在本發(fā)明的另一個實施方案中，該細菌分離株獲自位于印度Gaziabad的地方飲料工業(yè)流出物處理工廠的活性淤泥。在本發(fā)明的另一個實施方案中，該細菌分離株是革蘭氏陽性的，非能動的，棒狀和氧化酶陰性的。在本發(fā)明的另一個實施方案中，該細菌分離株可水解淀粉。在本發(fā)明的另一個實施方案中，該細菌分離株從甘油，纖維二糖，D-甘露糖，甘露醇，甲基a-D-葡糖苷，苦杏苷和熊果苷中產(chǎn)生酸。本發(fā)明還提供了制備用于中和飲料工業(yè)堿性廢水的保藏在布達佩斯條約認可的國際保藏機構(gòu)IMTECH,39A區(qū)，昌迪加爾，印度的微小桿菌(MTCC5183)細菌分離株的方法，所述廢水的pH在12.00-11.5范圍內(nèi)，該方法包括以下步驟a)通過提供在堿性桿菌培養(yǎng)基中的淤泥提取物富集被細菌污染的活性淤泥；b)培養(yǎng)細菌；c)在達到需要的生長后，通過離心獲自步驟(b)的培養(yǎng)物來分離細菌，以獲得細菌細胞的沉淀；d)將獲自步驟(c)的沉淀溶解在磷酸鹽緩沖液中；e)通過加入從步驟(d)中獲得的細菌沉淀來中和pH在12.00-11.5范圍內(nèi)的飲料工業(yè)的堿性廢水。在本發(fā)明的一個實施方案中，被污染的活性淤泥獲自位于印度昌迪加爾飲料工業(yè)的流出物處理工廠的管道。在本發(fā)明的另一個實施方案中，以1:5-1:10活性淤泥培養(yǎng)基的比率，在33-35"C和100—120rpm下，富集淤泥40—48小時。在本發(fā)明的另一個實施方案中，在堿性桿菌培養(yǎng)基中，在11.00-12.00pH和37-34。C下，培養(yǎng)細菌。在本發(fā)明的另一個實施方案中，在達到通過光密度在1.5-2.0范圍內(nèi)而證實的生長后，通過離心在步驟(b)中獲得的培養(yǎng)物來分離細菌在本發(fā)明的另一個實施方案中，通過取5-7g在高壓滅菌瓶中的新鮮活性淤泥進行淤泥的富集，所述滅菌瓶中含有100-110mi淤泥提取物，50)LilCandidB(抗真菌)和堿性桿菌培養(yǎng)基。在本發(fā)明的另一個實施方案中，通過在約4000rpm下離心滅菌的淤泥混和物約20分鐘來制備淤泥提取物。在本發(fā)明的另一個實施方案中，通過以1:5-1:10的比率將活性淤泥溶解在蒸餾水中，并在約15psi下高壓滅菌約1小時來制備滅菌的淤泥混和物。在本發(fā)明的另一個實施方案中，堿性桿菌培養(yǎng)基包含約1.0:0.5:1.0虹.1.0重量/體積比的蛋白胨，酵母提取物，葡萄糖，K2HP04和Na2C03。在本發(fā)明的另一個實施方案中，所述淤泥提取物和所述堿性桿菌培養(yǎng)基的比率是1:5-1:10。在本發(fā)明的另一個實施方案中，在培養(yǎng)基、溫度，pH和碳源的確定的條件下培養(yǎng)所述分離的細菌分離株。在本發(fā)明的另一個實施方案中，確定所有細菌分離株在短時間降低飲料廢水pH的中和能力。在本發(fā)明的另一個實施方案中，通過pH計監(jiān)測pH的降低。在本發(fā)明的另一個實施方案中，選擇能夠在約1小時的短時間內(nèi)降低堿性飲料廢水pH的細菌。在本發(fā)明的另一個實施方案中，在通過使用堿性桿菌培養(yǎng)基，接著在32-37°C/80-120rpm下溫育8小時的確定的條件下培養(yǎng)所選擇的細菌，用于中和堿性飲料工業(yè)廢水，。在本發(fā)明的另一個實施方案中，在達到通過光密度在2-2.5范圍內(nèi)所證實的大量培養(yǎng)(heavyculture)后，離心生長培養(yǎng)物。在本發(fā)明的另一個實施方案中，將細菌沉淀溶解在磷酸鹽緩沖液中。在本發(fā)明的另一個實施方案中，通過向廢水中加入細菌沉淀以在1-1.5小時中觀察并通過pH計確定將pH從12.0-11.5降低到7.5-7.0來進行高堿性飲料工業(yè)廢水的中和。在本發(fā)明的另一個實施方案中，將細菌微小桿菌用作全細胞(wholecell)。發(fā)明詳述本發(fā)明提供了細菌分離株-微小桿菌(MTCC5183)，其保藏在布達佩斯條約認可的國際保藏機構(gòu)IMTECH,39A區(qū)，昌迪加爾，印度。該細菌分離株-微小桿菌.(MTCC5183)能夠中和飲料工業(yè)的高堿性廢水，所述微小桿菌保藏在國際保藏機構(gòu)IMTECH,39A區(qū)，昌迪加爾，印度。該細菌分離株能夠在pH為10-12.00的培養(yǎng)基中生長，還能夠在1-1.5小時非常短的時間內(nèi)將飲料工業(yè)廢水的高pH12.0-11.5降低到中性pH(7.5-7.00)。以1:5-1:10的比率，將該細菌沉淀用于將飲料工業(yè)廢水的高pH(12.0-11.5)中和至pH(7.5-7.00)。該細菌分離株分離自位于印度昌迪加爾的地方飲料工業(yè)的流出物處理工廠的活性淤泥。觀察到該分離株是革蘭氏陽性的，非能動的，棒形和氧化酶陰性的，水解淀粉，從甘油，纖維二糖，D-甘露糖，甘露醇，甲基ot-D-葡糖苷，苦杏苷和熊果苷中產(chǎn)生酸。制備細菌微小桿菌(MTCC5183)分離株的方法包括以下步驟a)通過提供在堿性桿菌培養(yǎng)基中的淤泥提取物，100-120rpm和33-35。C下，40-48小時，比率為1:5-1:10，富集被細菌污染的活性淤泥；b)通過使用所述堿性桿菌培養(yǎng)基，在pH11.00-12.00和37-34i:下培養(yǎng)細菌；c)在達到大量生長(O.D.1.5-2.0)后，通過離心獲自步驟(b)的培養(yǎng)物來分離細菌，以獲得細菌細胞的沉淀；d)將獲自步驟(C)的沉淀溶解在磷酸鹽緩沖液中；e)通過向廢水中加入從步驟(d)中獲得的細菌沉淀來中和飲料工業(yè)的堿性廢水(pH12.00-11.5)。通過取5-7g高壓滅菌瓶中的新鮮活性淤泥進行來自所述位置的淤泥的富集，所述滅菌瓶中含有100-110mi淤泥提取物，50jilCandidB(抗真菌)和堿性桿菌培養(yǎng)基。通過在約4000rpm下離心滅菌的淤泥混和物約20分鐘來制備淤泥提取物。通過以1:5-1:10的比率將活性淤泥溶解在蒸餾水中，并在約15psi下高壓滅菌約1小時來制備滅菌的淤泥混和物。堿性桿菌培養(yǎng)基包含約1.0:0.5:1.0:0.1:1.0重量/體積比的蛋白胨，酵母提取物，葡萄糖，K2HP04和Na2C03。將淤泥提取物和堿性桿菌培養(yǎng)基的混和物用于捕獲所述位置的最大限度的細菌菌群。所述淤泥提取物和所述堿性桿菌培養(yǎng)基的比率是1:5-1:10。在確定的條件下如培養(yǎng)基，溫度，pH，碳源等來培養(yǎng)分離的細菌分離株。對于所有的細菌分離株(總共兩株)，檢查它們在短時間內(nèi)降低飲料廢水pH的中和能力。通過pH計監(jiān)測pH的降低。選擇能夠在約1小時的短時間內(nèi)降低堿性飲料廢水pH的細菌。在利用堿性桿菌培養(yǎng)基，接著在32-37°C/80-120rpm下溫育8小時的確定的條件下培養(yǎng)選擇的細菌，用于中和堿性飲料工業(yè)廢水。在達到通過光密度在2-2.5范圍后離心生長培養(yǎng)物，然后溶解在磷酸鹽緩沖液中。通過向廢水中加入細菌沉淀來進行高堿性飲料工業(yè)廢水的中和，如通過pH計所檢測，在1.5-1小時中觀察到將pH從12.0-11.5降低到7.5-7.0將細菌微小桿菌用作全細胞。將本發(fā)明關(guān)注的細菌菌株保藏在布達佩斯條約認可的國際保藏機構(gòu)IMTECH,39A區(qū)，昌迪加爾，印度。S.No.培養(yǎng)物MTCCIDNo.1微小桿菌.(DSMID03-501)MTCC5183上述細菌菌株顯示在確定的條件下，在1小時的短時間內(nèi)能夠中和高堿性飲料工業(yè)廢水的顯著能力。本發(fā)明的細菌菌株分離自地方飲料工業(yè)ETP的6個月之久的活性淤泥。為了分離潛在的細菌分離株，將來自所述位置的10g活性淤泥加入到500ml高壓滅菌瓶中，所述滅菌瓶含有100ml活性淤泥提取物，100ml堿性桿菌培養(yǎng)基和50^tlCandidB(抗真菌)。堿性桿菌培養(yǎng)基含有l(wèi)gm蛋白胨，0.5gm酵母提取物，lg葡萄糖，0.1gK2HP04和lgNa2C03。將蛋白胨和酵母提取物在15psi下高壓滅菌，而將葡萄糖，K2HP04andNa2C03在10psi下高壓滅菌。在不同的psi高壓滅菌不同的成分后，將所有的成分無菌混合在一起。將富集的瓶放置在35'C，100rpm下48小時。為了制備活性淤泥提取物，取lkg活性淤泥，并在5(TC干燥2小時。將400g干燥的活性淤泥溶解在960ml—次蒸餾的水中，并在15lbs下高壓滅菌1小時。高壓滅菌后，將樣品在5000rpm下離心10分鐘。收集上清液(提取物)，并存儲在無菌瓶中，用于制備富集瓶和進一步使用。將富集的活性淤泥樣品系列稀釋在0.85%鹽水中。將100pl來自每個個體稀釋物樣品平鋪到瓊脂培養(yǎng)板上，該培養(yǎng)板含有活性淤泥提取物和50%ABM。AMB含有蛋白胨，酵母提取物,葡萄糖，K2HP04,Na2C03和2°/。瓊脂。將蛋白胨和酵母提取物在15psi下滅菌，將葡萄糖，K2HP04和Na2C03在10psi下滅菌。將不同的成分在不同psi下滅菌后，將所有的成分無菌混合在一起。將如此獲得的平板倒置在35士2'C下溫育24—96小時。在克隆形態(tài)學(xué)和顏色的基礎(chǔ)上，選擇總共2株細菌分離株，以檢測它們中和堿性廢水的能力。挑取單個分離的克隆，并在新鮮的平板上劃線，所述平板含有相同的培養(yǎng)基。重復(fù)上述步驟，直至獲得純凈的克隆。為了檢查兩株分離細菌的中和能力，在500ml玻璃瓶的兩個位置取200ml高pH(12.00)的飲料工業(yè)廢水，獨自加入每種細菌生長物。用pH計監(jiān)測pH的降低。兩株細菌中，發(fā)現(xiàn)僅1株分離株能夠在高pH(12.00)下生長，并且在2小時的短時間內(nèi)降低廢水的pH。將該細菌鑒定為微小桿菌(DSMID03-501)，其主要特征如下該細菌-微小桿菌MTCC5183(DSMID03-501)在性質(zhì)上是兼性需氧的，革蘭氏陽性，非能動的，是氧化酶陰性，在35。C下顯示最佳生長，還能夠在pH12.0-11.5的高pH環(huán)境下生長，能夠水解淀粉以及從甘油，纖維二糖，D-甘露糖，甘露醇，甲基a-D-葡糖苷，苦杏苷和熊果苷中產(chǎn)生酸。在中和實驗中，從地方飲料工業(yè)取飲料工業(yè)廢水。將如上述所篩選的該細菌-微小桿菌.(MTCC5183)接種在200mlABM中。將培養(yǎng)物在35°C振蕩條件下(100-120rpm)下溫育8小時。觀察到大量細菌生長(O.D.-2)后，在7,000rpm和4'C下離心培養(yǎng)物。將培養(yǎng)物沉淀溶解在20ml磷酸鹽緩沖液(0.05M,pH6.8)中。將該沉淀加入到含有200ml飲料工業(yè)廢水(pH-12.00)的瓶中。將該瓶放置在振蕩條件下(100-120rpm)。僅在2小時后觀察到pH的降低。該細菌-微小桿菌MTCC5183(DSMID03-501)能夠在1.5-1小時的短時間內(nèi)將pH從12.0-11.5降低到pH7.7-7。通過pH計監(jiān)測pH值。本發(fā)明還提供制備用于中和堿性廢水的細菌生長物的方法a)利用活性淤泥提取物和AMB富集所述位置的活性淤泥，以分離具有中和能力的細菌；b)利用活性淤泥提取物和堿性桿菌培養(yǎng)基(IOOml含有1gm蛋白胨，0.5gm酵母提取物，lg葡萄糖，O.lgK2HP04andlgNa2C03)的混和物從所述位置捕獲需要的潛在細菌；c)在確定的條件如培養(yǎng)基，溫度，pH，碳源等下培養(yǎng)分離自具體位置的所述細菌；d)通過將分離的細菌分離株接種在堿性飲料工業(yè)廢水中來檢查它們的中和能力；e)通過pH計監(jiān)測pH的降低；f)選擇能夠在短時間內(nèi)中和堿性廢水的細菌分離株；g)在確定的條件下培養(yǎng)所選擇的細菌，用于中和堿性飲料工業(yè)廢水。將ABM用于生長培養(yǎng)物。在35tV120rpm下溫育培養(yǎng)瓶8小時以獲得大量生長；h)在達到大量生長0.D.(2.00)后離心得到的培養(yǎng)物；i)收集細菌沉淀，并溶解在磷酸亞緩沖液(0.05M,pH6.8)中；j)通過將細菌沉淀加入到200ml廢水中來中和高堿性廢水。如通過pH計檢查所見，在1小時內(nèi)觀察到pH從12.0-11.5降低到7.5-7.00。下述實施例是為了舉例說明的目的，因此不應(yīng)被解釋為限制本發(fā)明的范圍。實施例1在開發(fā)嗜堿性細菌的努力中，進行戰(zhàn)略性分離以從特定的位置捕獲潛在的細菌群。細菌分離自來自地方飲料工業(yè)ETP的六個月之久的活性淤泥。為了分離潛在的細菌分離株，將5g來自所述位置的活性淤泥加入到500ml高壓滅菌瓶中，該滅菌瓶包含100ml活性淤泥提取物，100ml堿性桿菌培養(yǎng)基和5014CandidB(抗真菌)。堿性桿菌培養(yǎng)基包含1gm蛋白胨，0.5gm酵母提取物，lg葡萄糖，0.1gK2HPOjnIgNa2C03。將蛋白胨和酵母提取物在15psi下高壓滅菌，將葡萄糖,K2HP04和Na2C03在10psi下高壓滅菌。在不同psi下高壓滅菌不同成分后，將所有的成分無菌混合在一起。將富集瓶放置在35'C，120rpm96小時。為了制備活性淤泥提取物,取1Kg活性淤泥，并在5(TC下干燥2小時。將400g干燥的活性淤泥溶解在960ml—次蒸餾的水中，并在151bs下高壓滅菌l小時。高壓滅菌后，將樣品在5000rpm下離心10分鐘。收集上清液(提取物)，并儲存在無菌瓶中，用于制備富集瓶和進一步應(yīng)用。將富集的活性淤泥樣品系列稀釋在0.85%鹽水中。將100pl來自每個個體稀釋物樣品平鋪到瓊脂培養(yǎng)板上，該培養(yǎng)板含有活性淤泥提取物和50MABM。AMB含有蛋白胨，酵母提取物，葡萄糖，K2HP04,Na2C03和2%瓊脂。將蛋白胨和酵母提取物在15psi下滅菌，將葡萄糖,K2HP04和Na2C03在10psi下滅菌。將不同的成分在不同psi下滅菌后，將所有的成分無菌混合在一起。將如此獲得的平板在35士2'C下倒置溫育24—96小時。在克隆形態(tài)學(xué)和顏色的基礎(chǔ)上，選擇總共2株細菌分離株，以檢測它們中和堿性廢水的能力。挑取單個分離的克隆，并在新鮮的平板上劃線，所述平板含有相同的培養(yǎng)基。重復(fù)上述步驟，直至獲得純凈的克隆。實施例2為了開發(fā)中和堿性飲料工業(yè)廢水的潛在細菌，從已長時間通過飲料工業(yè)廢水的管道中分離總共兩株細菌。選擇這些細菌分離株，以檢查它們中和堿性廢水的能力。挑取單個分離的克隆并在新鮮的平板上劃線，所述平板含有相同的培養(yǎng)基。重復(fù)上述步驟直至獲得純凈的克隆。為了檢查兩株分離細菌的中和能力，在500ml玻璃瓶的兩個位置取200ml高pH(12.00)的飲料工業(yè)廢水，獨自加入每種細菌生長物。用pH計監(jiān)測PH的降低(表1)。兩株細菌中，發(fā)現(xiàn)僅l株分離株能夠在高pH(12.00)下生長，并且在2小時的短時間內(nèi)降低廢水的pH。將該細菌鑒定為微小桿菌(DSMID03-501)，其主要特征如下微小桿菌(DSMID03-501)在性質(zhì)上是兼性需氧的，革蘭氏陽性，非能動的，是氧化酶陰性，在35。C下顯示最佳生長，還能夠在高pH環(huán)境(pH12.00)的下生長，能夠水解淀粉以及從甘油，纖維二糖，D-甘露糖，甘露醇，甲基a-D-葡糖苷，苦杏苷和熊果苷中產(chǎn)生酸。實施例3為了開發(fā)中和堿性飲料工業(yè)廢水的潛在細菌，從飲料工業(yè)ETP的活性淤泥中分離總共兩株細菌。選擇這些細菌分離株以檢査它們中和堿性廢水的能力。挑取單個分離的克隆，并在新鮮的平板上劃線，所述平板含有相同的培養(yǎng)基。重復(fù)上述步驟直至獲得純凈的克隆。為了檢查兩株分離的細菌的中和能力，在500ml玻璃瓶的兩個位置取200ml高pH(12.00)的飲料工業(yè)廢水，獨自加入每種細菌生長物。用pH計監(jiān)測pH的降低(表l)。表l:通過分離的嗜堿性細菌引起的堿性廢水的pH降低<table>tableseeoriginaldocumentpage16</column></row><table>實施例4為了觀察所篩選細菌-微小桿菌在合適培養(yǎng)基上的生長，將來自微小桿菌瓊脂平板的兩個接種環(huán)在NB(營養(yǎng)肉湯)培養(yǎng)基和ABM的平板上劃線。堿性桿菌培養(yǎng)基包含1gm蛋白胨，0.5gm酵母提取物，lg葡萄糖，O.lgK2HP04和lgNa2C03。將蛋白胨和酵母提取物在15psi下高壓滅菌，將葡萄糖，K2HP04和Na2C03在10psi下高壓滅菌。在不同psi下高壓滅菌不同成分后，將所有成分在無菌下混合在一起。將如此獲得的平板在35士2"C下倒置溫育24—96小時。含有2%瓊脂的NB培養(yǎng)基具有的最初pH約為7，ABM培養(yǎng)基的最初pH為10.5。為了增加培養(yǎng)基的pH，使用Tris-HCL和Na2C03-NaHC03緩沖液。表2:微小桿菌在NB和ABM培養(yǎng)基上的生長<table>tableseeoriginaldocumentpage17</column></row><table>十非常差生長十+較差生長；+++良好生長；++++非常良好地生長。觀察到高pH的ABM培養(yǎng)基是生長微小桿菌的合適培養(yǎng)基。實施例5堿性飲料廢水被凍干的微小桿菌粉末中和。將40ml培養(yǎng)物(aD尸2.00)的細菌沉淀凍干，并添加到500ml含有200ml堿性飲料廢水的燒瓶中。將接種的燒瓶在35'C保持1小時。在l小時內(nèi)觀察到pH的降低(表3)。表3:通過微小桿菌的凍干細菌粉末引起的堿性廢水pH降低<table>tableseeoriginaldocumentpage17</column></row><table>益處1.利用微小桿菌中和堿性飲料廢水是經(jīng)濟和有效的方法。在常規(guī)的酸-中和方法中，利用酸的特性(tone)來進行中和，而在所開發(fā)的生物方法中，極大地降低了成分。2.通過生物手段中和堿性飲料廢水是相當(dāng)安全的方法，原因在于由于強酸對工人的健康以及工業(yè)方法有危險作用，導(dǎo)致利用大量的酸中和廢水對于工業(yè)而言是不安全的。除此之外，利用大量的酸還增加了排出到主要河流中的工業(yè)廢水的體積。權(quán)利要求1.一種細菌分離株微小桿菌CfidgMokifc&n'ww(MTCC5183)，其保藏在布達佩斯條約認可的國際保藏機構(gòu)IMTECH，39A區(qū)，昌迪加爾，印度。2.權(quán)利要求1的分離株，其中所述分離株能夠在pH為10-12.00的培養(yǎng)基上生長。3.權(quán)利要求1的分離株，其中所述細菌分離株能夠在1-1.5小時的時間內(nèi)將飲料工業(yè)廢水12.0-11.5的高pH降低到中性pH(7.5-7.00)。4.權(quán)利要求1的分離株，其中所述細菌分離株以1:5-1:10的比率用于將飲料工業(yè)廢水的高pH(12.0-11.5)中和至中性pH(7.5-7.00)。5.權(quán)利要求1的分離株，其中所述細菌分離株獲自位于印度昌迪加爾飲料工業(yè)的流出物處理工廠的活性淤泥。6.權(quán)利要求1的分離株，其中所述細菌分離株是革蘭氏陽性的，非能動的，棒形和氧化酶陰性的，可以水解淀粉，和從甘油，纖維二糖，D-甘露糖，甘露醇，甲基(x-D-葡糖苷，苦杏苷和熊果苷中產(chǎn)生酸。7.—種制備細菌分離株微小桿菌(MTCC5183)的方法，所述微小桿菌用中和pH在12.00-11.5范圍的飲料工業(yè)的堿性廢水，其保藏在布達佩斯條約認可的國際保藏機構(gòu)IMTECH，39A區(qū)，昌迪加爾，印度，所述方法包括以下步驟a)通過提供在堿性桿菌培養(yǎng)基中的淤泥提取物，富集被細菌污染的活性淤泥；b)培養(yǎng)細菌；C)在達到所需生長后，通過離心獲自步驟(b)的培養(yǎng)物來分離細菌，以獲得細菌細胞的沉淀；d)將獲自步驟(C)的沉淀溶解在磷酸鹽緩沖液中；e)通過加入從步驟(d)中獲得的細菌沉淀來中和pH在12.00-11.5范圍內(nèi)的飲料工業(yè)堿性廢水。8.權(quán)利要求7的方法，其中所述被污染的活性淤泥獲自位于印度昌迪加爾的飲料工業(yè)流出物處理工廠的管道。9.權(quán)利要求7的方法，其中以1:5-1:10的活性淤泥培養(yǎng)基的比率在100-120rpm，33-35。C下進行40-48小時的淤泥富集。10.權(quán)利要求7的方法，其中在堿性桿菌培養(yǎng)基中，pH為11.00-12.00和37-34"C下進行細菌的培養(yǎng)。11.權(quán)利要求7的方法，其中在達到通過光密度為1.5-2.0所證實的生長后，通過離心獲自步驟(b)的培養(yǎng)物來分離細菌。12.權(quán)利要求7的方法，其中通過取5-7g高壓滅菌瓶中的新鮮活性淤泥進行淤泥的富集，所述高壓滅菌瓶中含有100-110ml的淤泥提取物，50WCandidB抗真菌和堿性桿菌培養(yǎng)基。13.權(quán)利要求7的方法，其中通過在約4000rpm下離心無菌的淤泥混和物約20分鐘來制備淤泥提取物。14.權(quán)利要求7的方法，其中通過將活性淤泥以1:5-1:10的比率溶解在蒸餾水中，并在約15psi下高壓滅菌約1小時來制備滅菌的淤泥提取物。15.權(quán)利要求7的方法，其中堿性桿菌培養(yǎng)基包含比率約為1.0:0.5:1.0:0.1:1.0重量/體積的蛋白胨，酵母提取物，葡萄糖，K2HP04和Na2C03。16.權(quán)利要求7的方法，其中淤泥提取物和堿性桿菌培養(yǎng)基的比率是1:5-1:10。17.權(quán)利要求7的方法，其中在培養(yǎng)基、溫度、pH和碳源的確定條件下培養(yǎng)所述分離的細菌分離株。18.權(quán)利要求7的方法，其中在使用堿性桿菌培養(yǎng)基，接著在32-37"C/80-120rpm下溫育8小時的確定的條件下培養(yǎng)所述細菌，用于中和堿性飲料工業(yè)廢水。19.權(quán)利要求7的方法，其中在達到通過光密度為2-2.5而證實的大量生長后離心生長的培養(yǎng)物。20.權(quán)利要求7的方法，其中將細菌沉淀溶解在磷酸鹽緩沖液中。21.權(quán)利要求7的方法，其中將細菌微小桿菌用作全細胞。全文摘要本發(fā)明提供了一種通過在印度分離的細菌菌株微小桿菌來中和飲料工業(yè)廢水的方法，該菌株能夠在1-1.5小時內(nèi)將廢水的pH從12.00降低到7.00單位。文檔編號C02F103/32GK101124171SQ200480044738公開日2008年2月13日申請日期2004年12月28日優(yōu)先權(quán)日2004年12月28日發(fā)明者麗塔·庫馬爾,阿尼爾·庫馬爾申請人:科學(xué)與工業(yè)研究委員會