專利名稱：脫除水體中亞硝酸態(tài)氮素污染的產(chǎn)堿桿菌mb-n6及用途的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明屬于微生物治理污染領(lǐng)域，具體涉及一種治理廢水或環(huán)境中有毒物質(zhì)的微 生物菌株以及它的用途。
背景技術(shù)：
水產(chǎn)養(yǎng)殖和環(huán)境保護(hù)中，氮素污染尤其是氨氮和亞硝酸鹽氮的污染對(duì)許多水產(chǎn)動(dòng) 物有一定的毒害作用。因養(yǎng)殖水體的環(huán)境承載能力有限，其自身氮素污染日趨嚴(yán)重，養(yǎng)殖水 域的環(huán)境質(zhì)量日益下降。水域環(huán)境污染不僅直接對(duì)養(yǎng)殖品種造成危害，而且可通過(guò)改變水 域的微生態(tài)，使得病原微生物滋生繁衍，導(dǎo)致養(yǎng)殖品種暴發(fā)病的發(fā)生。在養(yǎng)殖水域氮素污染 的控制上，以往一般采用單一的理化方法，雖然取得了一定的成效，但同時(shí)存有種種弊端， 如能源消耗過(guò)大，易產(chǎn)生二次污染等。因此生物控制技術(shù)便得到人們的重視。目前國(guó)內(nèi)外 一般采用單一或復(fù)合微生態(tài)菌種來(lái)控制氮素污染。二十世紀(jì)八十年代，我國(guó)的臺(tái)灣省和東 南亞等國(guó)率先應(yīng)用光合細(xì)菌來(lái)控制養(yǎng)殖水體的水質(zhì)，取得了一定的成果，并開(kāi)創(chuàng)了生物制 劑控制養(yǎng)殖水質(zhì)的先河。九十年代后國(guó)內(nèi)也采用光合細(xì)菌來(lái)凈化養(yǎng)殖水域環(huán)境，效果比較 明顯。九十年代中期開(kāi)始，國(guó)內(nèi)外又采用如玉壘菌、硝化細(xì)菌等生物制劑來(lái)凈化水質(zhì)，效果 也不錯(cuò)。這些生物處理的方法，由于具有投資少，成本低，應(yīng)用范圍廣等特點(diǎn)，已越來(lái)越受水 產(chǎn)工作者的重視和歡迎。因此研制高效與專一的復(fù)合微生態(tài)制劑調(diào)控養(yǎng)殖水體環(huán)境，促進(jìn) 水產(chǎn)養(yǎng)殖業(yè)的可持續(xù)發(fā)展，保證水產(chǎn)品質(zhì)量及降低成本具有非常重要的意義。目前普遍認(rèn) 為生物脫氮是從水體中去除氮素污染的經(jīng)濟(jì)有效的方法之一。在此基礎(chǔ)上，國(guó)內(nèi)外在90年代后期大量采用復(fù)合微生態(tài)制劑技術(shù)。復(fù)合微生態(tài) 制劑技術(shù)是脫除不同種屬微生物的不同性質(zhì)，通過(guò)微生物的互生和共生作用，最大限度地 去除水體中的各種有害成分。目前應(yīng)用較為成功的是EM菌。但這些產(chǎn)品均是從國(guó)外引進(jìn) 的，國(guó)外最初在研制這些產(chǎn)品時(shí)并非從水產(chǎn)養(yǎng)殖水體控制的目標(biāo)出發(fā)，而主要側(cè)重于環(huán)保 領(lǐng)域。因此在菌株的選擇上主要考慮其降解性能，沒(méi)有考慮其對(duì)水產(chǎn)養(yǎng)殖生物的安全性問(wèn) 題。如有些產(chǎn)品中含有熒光假單胞菌和銅綠假單胞菌(綠膿桿菌)等，這些菌株對(duì)養(yǎng)殖水 生生物來(lái)說(shuō)是致病菌。綜合來(lái)看目前尚無(wú)一種比較適合我國(guó)水產(chǎn)養(yǎng)殖業(yè)的高效復(fù)合菌制劑 及其控制技術(shù)。傳統(tǒng)生物脫氮包括硝化和反硝化兩作用過(guò)程。一般認(rèn)為硝化作用只發(fā)生在好氧 條件下，而反硝化只能在厭氧或缺氧的條件下進(jìn)行。但是，在蝦等特產(chǎn)高密度養(yǎng)殖中，由于 必須連續(xù)充氧以保證水中一定的溶解氧，厭氧反硝化細(xì)菌的反硝化作用不能充分發(fā)揮(Pai s L, Chong N M, Chen C H. Bioresource Technology, 1999,68 179—85)。20 世紀(jì) 80 年代 以來(lái)，科學(xué)家對(duì)好氧反硝化的研究日趨活躍，一些好氧反硝化菌被陸續(xù)篩選出來(lái)作為新型 脫氮細(xì)菌。目前國(guó)外已發(fā)現(xiàn)的好氧反硝化菌有異養(yǎng)球硫細(xì)菌(Thiosphaera Pantotropha) (Robertson, L. Α. ,Ε. W. J. van Niel, R. A. M. Torres mans, et al. Appl. Environ. Microbiol, 1988,54 :2812-2818.)、海洋假單胞菌(Pseudomonas nautical) (Frette L, Gejlsbjerg B, Westermann P. FEMS Microbiology Ecology, 1997,24 :363_370.)和奈瑟菌科的
3Microvirgula aerodenitrifica等。國(guó)內(nèi)對(duì)好氧反硝化菌的篩選、研究和應(yīng)用研究還處于 起步階段。目前尚未見(jiàn)到有關(guān)專門篩選選育可脫除亞硝酸鹽氮、改良水體氮素富營(yíng)養(yǎng)化的菌 株以及微生物制劑和它的用途方面的報(bào)道。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的在于，克服現(xiàn)有技術(shù)的缺陷，通過(guò)人工馴化，篩選得到一株好氧反硝 化菌，研究了在不同濃度亞硝酸鹽氮、硝態(tài)氮和多種配合菌協(xié)同條件下該菌反硝化能力的 強(qiáng)弱，并且試驗(yàn)了混合微生物菌劑降解氨態(tài)氮和實(shí)際大田應(yīng)用的效果，探討了該菌和脫氮 微生物制劑脫除水中亞硝酸鹽氮和氨氮的能力，為水產(chǎn)養(yǎng)殖生物除氮尋求了更為高效、經(jīng) 濟(jì)的水質(zhì)改良方法。本發(fā)明通過(guò)以下技術(shù)方案實(shí)現(xiàn)本發(fā)明所述的脫除廢水或環(huán)境中殘留的亞硝酸鹽氮的菌株，是產(chǎn)堿桿菌 (Alcaligenes sp. )MB_N6，保藏在 CCTCC,保藏編號(hào) M2010014。一種脫除微生物菌株脫除廢水或環(huán)境中殘留的亞硝酸鹽氮的方法，是用產(chǎn)堿桿菌 CCTCCM2010014脫除廢水中殘留的亞硝酸鹽氮。本發(fā)明公開(kāi)了上述產(chǎn)堿桿菌在脫除水體中亞硝酸態(tài)氮素污染中的應(yīng)用。本發(fā)明所述的亞硝酸鹽氮素是亞硝酸及其可溶性鹽。本發(fā)明所用的菌株分離篩選方法、脫除力測(cè)定方法及所分離篩選得到的菌株的特 性如下采集南京市一市政污水處理廠曝氣池污污水樣品本，依據(jù)Naoki Takaya等建立的 有氧反硝化菌平板分離方法進(jìn)行初步篩選。將菌落劃線培養(yǎng)于添加亞硝酸鹽的培養(yǎng)基進(jìn)行 復(fù)篩和純化。通過(guò)測(cè)定純化菌株對(duì)亞硝酸鹽的降解能力作進(jìn)一步的驗(yàn)證。將初篩時(shí)出現(xiàn)的 陽(yáng)性結(jié)果挑選到反硝化培養(yǎng)基中，搖瓶培養(yǎng)并測(cè)定硝酸鹽氮和亞硝酸鹽氮濃度。根據(jù)亞硝 酸鹽氮脫除的速度和能力選出的高活性反硝化細(xì)菌取合適稀釋度的純培養(yǎng)菌液涂平板培 養(yǎng)。待長(zhǎng)出菌落后，觀察菌落的大小、顏色等特征。革氏染色，顯微鏡觀察其個(gè)體形態(tài)。經(jīng) 革蘭氏染色陰性，芽孢染色觀察，不產(chǎn)芽孢。葡萄糖氧化不產(chǎn)酸產(chǎn)氣，接觸酶試驗(yàn)陽(yáng)性，吲哚 試驗(yàn)陰性，甲基紅試驗(yàn)陽(yáng)性，伏普試驗(yàn)陰性，檸檬酸鹽試驗(yàn)陰性，硫化氫試驗(yàn)陰性。經(jīng)《伯杰 氏細(xì)菌鑒定手冊(cè)》鑒定，初步鑒定該菌為產(chǎn)堿桿菌。將其命名為MB-N6。菌株MB-N6的系統(tǒng) 發(fā)生樹的結(jié)構(gòu)如圖1所示。菌株MB-N6于2010年1月18日提交中國(guó)典型培養(yǎng)物保藏中心保藏，保藏單位 地址武漢大學(xué)。分類命名為產(chǎn)堿桿菌MB-N6 (Alcaligenes sp. MB-N6)，保藏在，保藏編號(hào) CCTCCNo. M2010014ο在好氧條件下菌株MB-N6對(duì)亞硝酸鹽氮的脫除實(shí)驗(yàn)證明，在最適脫除溫度下 MB-N6菌株在60小時(shí)內(nèi)對(duì)不同濃度的亞硝酸鹽氮均有反硝化能力，且亞硝酸鹽氮濃度越高 反硝化能力越強(qiáng)?，F(xiàn)據(jù)報(bào)道已知多數(shù)反硝化菌的反硝化能力在50%左右，而MB-N6菌株最 高反硝化脫除能力可達(dá)78%，明顯高于其他。在脫除過(guò)程中沒(méi)有積累中間代謝產(chǎn)物。且在 不同濃度的硝態(tài)氮脅迫條件下，MB-N6均可在60小時(shí)內(nèi)高效脫除亞硝酸鹽氮，反硝化能力 增強(qiáng)達(dá)到90%以上，反硝化能力提高。
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采用對(duì)氨氮脫除和蛋白質(zhì)降解效果較好的菌株MB-HKF(購(gòu)自南京尊微生物技術(shù) 有限公司)和MB-LA(購(gòu)自南京尊微生物技術(shù)有限公司)與MB-N6協(xié)同作用脫除亞硝酸鹽 氮試驗(yàn)方法證明混合菌劑在模擬自然水體中能有效脫除氨態(tài)氮素，其脫除率在48小時(shí)內(nèi) 達(dá)到最大。將混合菌劑田間對(duì)亞硝酸鹽氮和氨氮脫除顯示使用混合菌劑后亞硝酸鹽氮和氨 氮濃度均有顯著降低，同時(shí)水色在使用后有明顯改善，由含有綠藻和綠藻的青綠色轉(zhuǎn)變?yōu)?含有綠藻和硅藻的黃綠色。本發(fā)明的積極效果亞硝酸鹽是一種有毒、致癌的化合物，對(duì)含亞硝酸鹽廢水的處理是環(huán)保工作者面 臨的重要課題。本發(fā)明分離篩選的脫除亞硝酸鹽氮的產(chǎn)堿桿菌菌株MB-N6不但具有較強(qiáng)的 好氧脫除亞硝酸鹽氮的能力，和其他微生物復(fù)配后能更好的發(fā)揮好氧反硝化作用，其性能 穩(wěn)定。菌株MB-N6是從污水處理系統(tǒng)中取樣，并經(jīng)過(guò)馴化和純化分離出來(lái)的，對(duì)有毒環(huán)境有 一定的適應(yīng)能力，有望在含亞硝酸鹽廢水處理中發(fā)揮重要作用。


圖1 是基于16S rDNA序列同源性構(gòu)建的本發(fā)明菌株MB-N6和其它相關(guān)細(xì)菌的系 統(tǒng)發(fā)生樹。圖2 是本發(fā)明的產(chǎn)堿桿菌MB-N6對(duì)不同濃度亞硝酸鹽氮的脫除曲線。圖中縱坐 標(biāo)代表亞硝酸鹽氮的濃度；橫坐標(biāo)代表時(shí)間。圖3 是本發(fā)明的產(chǎn)堿桿菌MB-N6在不同硝酸鹽氮濃度下對(duì)亞硝酸鹽氮的脫除曲 線。圖中縱坐標(biāo)代表亞硝酸鹽氮的濃度；橫坐標(biāo)代表時(shí)間。圖4 是本發(fā)明的產(chǎn)堿桿菌MB-N6和另外兩種功能菌復(fù)配后制成的微生物制劑對(duì) 亞硝酸鹽氮的脫除曲線。圖中縱坐標(biāo)代表亞硝酸鹽氮的濃度；橫坐標(biāo)代表時(shí)間。圖5 是本發(fā)明的產(chǎn)堿桿菌MB-N6和另外兩種功能菌復(fù)配后制成的微生物制劑對(duì) 氨氮的脫除曲線。圖中縱坐標(biāo)代表氨氮的濃度；橫坐標(biāo)代表時(shí)間。
具體實(shí)施例方式本發(fā)明所述培養(yǎng)基配方中百分?jǐn)?shù)均指質(zhì)量百分?jǐn)?shù)實(shí)施例一、菌株MB-N6的分離篩選(1)樣品采集和馴化采集南京市江心洲污水處理廠曝氣池污污水樣品本。將樣品放置于20 30°C搖 床150r/min，并經(jīng)常向其中添加一定量的亞硝酸鹽以對(duì)其中的微生物進(jìn)行馴化。經(jīng)過(guò)幾個(gè) 月處理后，即開(kāi)始從該樣品中分離亞硝酸鹽氮脫除菌株。剩余樣品繼續(xù)按上述方法保存和 馴化。(2)菌株分離篩選分離篩選用溴百里酚(BTB)培養(yǎng)基0. L-天冬酰胺酸，0. KN03，0. KH2P04,0. 005 % FeC12 · 6H20,0. 02 % CaCl2 · 2H20,0. 1 % MgS04 · 7H20,0. 1 % BTB, 2 % 瓊 脂，ρΗ 7. 0 7. 2，培養(yǎng)基呈墨綠色。溴百里酚(BTB)培養(yǎng)基配方為上述液體培養(yǎng)基再添 加瓊脂1.6%。LB培養(yǎng)基蛋白胨，0. 酵母膏，0. 8% NaCl，pH 7. 0 7. 5。以上培養(yǎng)基配制后均采用濕熱滅菌(121°C ) 30分鐘。菌株純化將BTB培養(yǎng)基加熱熔化，搖勻后倒平板。挑取在無(wú)機(jī)鹽固體培養(yǎng)基平板 上長(zhǎng)出的藍(lán)色菌落，劃線接種于其表面，置28°C培養(yǎng)24 48小時(shí)。挑取單菌落，按上述方 法再次純化一至三次，直至最后長(zhǎng)出的菌落均一、鏡檢后確定為純種為止。亞硝酸鹽氮脫除能力測(cè)定脫除力測(cè)定用反硝化培養(yǎng)基，其配方為0. 472%琥珀 酸鈉，10mmol/L NaNO3,0. 11% KH2PO4,0. 042% Na2HPO4,0. 06% NH4Cl, 0. 5 % 酪蛋白，0. 1% MgSO4 · 7H20, 2mL的微量元素溶液/L，pH 7. 2。。濕熱滅菌(121°C ) 30分鐘。亞硝酸鹽氮于 接種前分別添加。用接種環(huán)挑取2 3環(huán)純化菌株，接種于上述添加亞硝酸鹽氮的反硝化 培養(yǎng)基中，置28°C搖震培養(yǎng)2 7天。將培養(yǎng)液離心，采用N-(l-萘基)-乙二胺鹽酸比色 法測(cè)定一次樣品中的亞硝酸鹽氮含量。采用有氧反硝化菌平板分離方法初篩得到6個(gè)BTB陽(yáng)性反應(yīng)菌株，搖瓶復(fù)篩中發(fā) 現(xiàn)其中1株即使周圍有較高濃度溶解氧存在仍具有較強(qiáng)的反硝化能力。經(jīng)革蘭染色，鏡檢 觀察，該菌株為革蘭陰性桿菌、短桿狀、不產(chǎn)芽孢、不發(fā)酵葡萄糖產(chǎn)酸產(chǎn)氣。將其命名為菌株 ΜΒ-Ν6。實(shí)施例二、斜面菌種及其培養(yǎng)培養(yǎng)基配方胰化蛋白胨10g，酵母提取物5g，氯化鈉10g，瓊脂15 20g，水1000 毫升，pH7. 2。培養(yǎng)基分裝試管(18X 180mm)，裝量10ml，塞上棉塞，濕熱滅菌(121°C ) 30分 鐘。待溫度降至50°C左右時(shí)，搖勻后擺成斜面。采用無(wú)菌操作接種MB-N6菌株于試管斜面，28°C培養(yǎng)24 48小時(shí)，肉眼觀察菌苔 豐滿。置4°C可保存三個(gè)月至六個(gè)月。實(shí)施例三、菌株MB-N6在液態(tài)條件下對(duì)亞硝酸鹽氮的脫除(1)菌株MB-N6在LA培養(yǎng)基表面擴(kuò)大培養(yǎng)LA培養(yǎng)基配方胰化蛋白胨10g，酵母提取物5g，氯化鈉10g，瓊脂15 20g，水 1000毫升，PH7.2。培養(yǎng)基濕熱滅菌(121°C)30分鐘。將上述固體培養(yǎng)基加熱熔化，待溫度 降至50°C左右時(shí)搖勻倒平板。取試管斜面菌種，接種于液體LA培養(yǎng)基中，置28°C培養(yǎng)24 48小時(shí)。(2)對(duì)亞硝酸鹽氮的脫除人工模擬池塘母液蔗糖27. 5克，酵母膏0. 3克，NH4Cl 7. 3克，KH2PO4 2. 5克， K2HPO4 · 3Η201· 3克，NaHCO3 33. 0克，水1000ml。將母液稀釋60倍后作使用液。濕熱滅菌 (121°C)30分鐘。根據(jù)實(shí)驗(yàn)要求，將50-150mg/L的亞硝酸鹽氮于接種前添加。用接種環(huán) 挑取2 3環(huán)試管斜面菌種，接種于上述添加亞硝酸鹽氮的人工模擬池塘污水培養(yǎng)基中，置 28°C搖震培養(yǎng)4 7天，培養(yǎng)過(guò)程中取樣測(cè)定培養(yǎng)液中的亞硝酸鹽氮含量。方法為將培養(yǎng) 液離心，每12h采用N-(l-萘基)-乙二胺鹽酸比色法測(cè)定一次樣品中的亞硝酸鹽氮含量。在上述液態(tài)條件下，菌株ΜΒ-Ν6對(duì)亞硝酸鹽氮的最適脫除溫度為25-30°C，脫除 期在25-30°C溫度下為12-60h ；在15°C溫度下，48h開(kāi)始脫除。在最適脫除溫度下MB-N6 菌株在60小時(shí)內(nèi)對(duì)不同濃度的亞硝酸鹽氮均有反硝化能力，且亞硝酸鹽氮濃度越高反硝 化能力越強(qiáng)?，F(xiàn)據(jù)報(bào)道已知多數(shù)反硝化菌的反硝化能力在50%左右，而MB-N6菌株最高反 硝化脫除能力可達(dá)78%，明顯高于其他。典型的脫除曲線見(jiàn)圖2所示。實(shí)施例四、菌株MB-N6在硝態(tài)氮脅迫下對(duì)亞硝酸鹽氮的脫除
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(1)菌株MB-N6在添加亞硝酸鹽氮的LA培養(yǎng)基表面擴(kuò)大培養(yǎng)和活化LA培養(yǎng)基配方胰化蛋白胨10g，酵母提取物5g，氯化鈉10g，瓊脂15 20g，水 1000毫升，PH7.2。培養(yǎng)基濕熱滅菌(121°C)30分鐘。將上述固體培養(yǎng)基加熱熔化，待溫度 降至50°C左右時(shí)搖勻倒平板。取試管斜面菌種，接種于液體LA培養(yǎng)基中，置28°C培養(yǎng)24 48小時(shí)。(2)在硝態(tài)氮脅迫下對(duì)亞硝酸鹽氮的脫除人工模擬池塘母液蔗糖27. 5克，酵母膏0. 3克，NH4Cl 7. 3克，KH2PO4 2. 5克， K2HPO4 · 3Η201· 3克，NaHCO3 33. 0克，水1000ml。將母液稀釋60倍后作使用液。濕熱滅菌 (12ΓΟ30分鐘。根據(jù)實(shí)驗(yàn)要求，調(diào)整初始亞硝酸鹽氮濃度為30mg/L，硝態(tài)氮濃度分別為 50mg/L、100mg/L、150mg/L、200mg/L、250mg/L ；在 30°C，100r/min 搖床培養(yǎng) 60h，培養(yǎng)基 DO 值為(9.0士0.5)mg/L。每12h采用N-(l-萘基)-乙二胺鹽酸比色法測(cè)定一次樣品中的亞 硝酸鹽氮含量。在不同濃度的硝態(tài)氮脅迫條件下，ΜΒ-Ν6均可在60小時(shí)內(nèi)高效脫除亞硝酸鹽氮， 反硝化能力增強(qiáng)達(dá)到90%以上，反硝化能力提高。實(shí)施例五、菌株ΜΒ-Ν6和其他功能菌復(fù)配制劑對(duì)亞硝酸鹽氮和氨氮的脫除(1)菌株ΜΒ-Ν6、BMB-LA和BMB-HKF的擴(kuò)大培養(yǎng)和活化LA培養(yǎng)基配方胰化蛋白胨10g，酵母提取物5g，氯化鈉10g，瓊脂15 20g，水 1000毫升，PH7.2。培養(yǎng)基濕熱滅菌(121°C)30分鐘。將上述固體培養(yǎng)基加熱熔化，待溫度 降至50°C左右時(shí)搖勻倒平板。分別取試管斜面菌種，接種于液體LA培養(yǎng)基中，置28°C培養(yǎng) 24 48小時(shí)。按照3 2 1的比例進(jìn)行復(fù)配制成混合制劑。(2) MB-N6和其他功能菌BMB-LA、BMB-HKF復(fù)配制劑對(duì)亞硝酸鹽氮和氨氮的脫除將混合菌劑接種于IOOmL無(wú)氮源人工模擬池塘水三角瓶中，調(diào)整初始亞硝酸鹽氮 濃度為 211^/1，301，10017/1^11搖床培養(yǎng)6011，培養(yǎng)基00值為(10. 0士0. 5)mg/L。每 12h 采 用N-(l-萘基)-乙二胺鹽酸比色法測(cè)定一次樣品中的亞硝酸鹽氮含量。結(jié)果顯示(圖3)， 在模擬自然水體的亞硝酸鹽氮濃度下，配合菌協(xié)同ΜΒ-Ν6脫除亞硝酸鹽氮的速度很快，脫 除率在12小時(shí)內(nèi)即可達(dá)到95%以上。相比較ΜΒ-Ν6單獨(dú)進(jìn)行反硝化脫除亞硝酸鹽氮，加入 配合菌后其脫除率有了較大提高。將混合菌劑轉(zhuǎn)接IOOmL無(wú)氮源人工模擬池塘水三角瓶中；調(diào)整初始氨態(tài)氮濃度為 10mg/L, 30°C，100r/min搖床培養(yǎng)60h混合培養(yǎng)，培養(yǎng)基DO值為(8. 0 士0. 5)mg/L ；每12h按 納氏比色法測(cè)定一次樣品中的氨氮含量。結(jié)果顯示(圖4)，混合菌劑在模擬自然水體中能 有效脫除氨態(tài)氮素，其脫除率在48小時(shí)內(nèi)達(dá)到最大。實(shí)施例六、菌株MB-N6和其他功能菌復(fù)配制劑在大田條件下對(duì)亞硝酸鹽氮和氨氮 的脫除(1)菌株MB-N6、MB-LA和MB-HKF的擴(kuò)大培養(yǎng)和活化擴(kuò)增培養(yǎng)基一級(jí)培養(yǎng)基蛋白胨，葡萄糖2%，0. 5% NaCl, 0. 5%酵母浸取汁， pH 7. 0 7. 5 ；二級(jí)培養(yǎng)基蛋白胨，葡萄糖 2%，0. 5% NH4H2PO4,0. 3 % KH2PO4,0. 2% MgSO4,0. 2%酵母膏，3mL的微量元素素溶液化―1，pH 7. 0 7. 5。挑取單菌落分別將MB-N6、 MB-LA和MB-HKF接種一級(jí)培養(yǎng)基，過(guò)夜活化。按1 %接種量轉(zhuǎn)接擴(kuò)增二級(jí)培養(yǎng)基，30°C， 120r/min搖床培養(yǎng)48h。把三種擴(kuò)培的菌液按3 2 1的比例復(fù)配制成混合菌劑。
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(2) MB-N6和其他功能菌MB_LA、MB_HKF復(fù)配制劑大田條件下對(duì)亞硝酸鹽氮和氨氮 的脫除2007年8月，在江蘇省吳江市某南美白對(duì)蝦養(yǎng)殖池塘中先后進(jìn)行了兩次田間試 驗(yàn)第一次塘口面積12. 5畝，水深1. 3米，水體中初始氨氮濃度0. 5mg mg/L，亞硝酸鹽氮濃 度0.9mg/L。使用濃度2畝 米/500mL(0.25mg mg/L)；第二次使用，塘口面積15畝，用量3 畝 米/500mL (0. 167mgmg/L)，水體中亞硝酸鹽氮初始濃度0. 35mg/L,氨氮初始濃度0. 4mg/ L。分別各連續(xù)使用六天。通過(guò)試劑盒測(cè)定池塘水中亞硝酸鹽氮和氨氮的含量；通過(guò)水色觀 察水質(zhì)是否得到改善。結(jié)果顯示(表1、表2)，使用混合菌劑后亞硝酸鹽氮和氨氮濃度均有顯著降低，同 時(shí)水色在使用后有明顯改善，由含有綠藻和綠藻的青綠色轉(zhuǎn)變?yōu)楹芯G藻和硅藻的黃綠 色。表1是本發(fā)明的復(fù)配微生物制劑在第一次田間實(shí)驗(yàn)時(shí)對(duì)亞硝酸鹽氮和氨氮的脫 除情況。表2是本發(fā)明的復(fù)配微生物制劑在第一次田間實(shí)驗(yàn)時(shí)對(duì)亞硝酸鹽氮和氨氮的脫
除情況。
權(quán)利要求
一種產(chǎn)堿桿菌菌株，其特征在于，是產(chǎn)堿桿菌MB N6(Alcaligenes sp.MB N6)，保藏編號(hào)是CCTCC M2010014。
2.權(quán)利要求1所述產(chǎn)堿桿菌在脫除水體中亞硝酸態(tài)氮素污染中的應(yīng)用。
3.根據(jù)權(quán)利要求2的所述的應(yīng)用，其特征在于，所述的亞硝酸鹽氮素是亞硝酸及其可 溶性鹽。
全文摘要
本發(fā)明屬于治理水產(chǎn)養(yǎng)殖及廢水中氮素污染的微生物菌株的發(fā)明以及該菌株在好氧條件下脫除亞硝酸鹽氮和其它殘留物質(zhì)的用途發(fā)明。本發(fā)明的主要特征包括，馴化篩選和選育成一種專門在好氧條件下脫除亞硝酸鹽氮的產(chǎn)堿桿菌菌株MB-N6(Alcaligenes sp.MB-N6)，保藏編號(hào)是CCTCC M2010014。該菌株可在高溶氧條件下充分脫除目前水產(chǎn)養(yǎng)殖中產(chǎn)生的高濃度亞硝酸鹽氮的污染。與已有技術(shù)相比，本發(fā)明的菌株專一性和適應(yīng)性強(qiáng)，便于增殖和脫除開(kāi)發(fā)。
文檔編號(hào)C02F3/02GK101914464SQ20101016611
公開(kāi)日2010年12月15日 申請(qǐng)日期2010年5月7日 優(yōu)先權(quán)日2010年5月7日
發(fā)明者何偉, 鐘文輝 申請(qǐng)人:南京師范大學(xué)