專利名稱：多孔過濾板及其制備方法
技術領域：
本發(fā)明涉及一種新型的多孔過濾板，優(yōu)選為96-孔或384-孔的規(guī)格，其由二個單個部分構成，這二部分牢固地和緊密地互相連接。第一部分為具有過濾小板的試樣接收部分，第二部分在進行了過濾后起到作為流出口部分的作用。根據(jù)本發(fā)明的板特別適合于核酸技術中的高滲透應用以及適合于蛋白質的凈化和分析。
最近幾年，核酸的分離和凈化過程中的自動化程度呈現(xiàn)出不斷增長的趨勢。原因基本在于，在所有的現(xiàn)代生物技術的研究領域中越來越多地運用分子生物學的方法。特別地還有，通過在全球基因組計劃(例如人類基因組計劃)內(nèi)的DNA-排序，原漿-DNA的分離和凈化的自動化已經(jīng)是一個強制性的先決條件。在此，研發(fā)自動化方案的必要性不僅僅局限于原漿-DNA分離領域。而且從不同的起始材料和量的基因的DNA的自動分離以及RNA的分離具有越來越重要的意義。這包括分子基礎研究的所有領域，并且還包括越來越多的診斷學領域。核酸的自動化分離方法例如通過具有設置有過濾材料的微測試板得以實現(xiàn)。在此，例如應用可得到的所謂的96-孔或384-孔規(guī)格的微測試板。
然而，現(xiàn)在可得到的具有過濾材料的96-孔微測試板對于高滲透應用是太昂貴了。這是由于用來將過濾材料置入微測試板的較復雜的制備方法導致的(US-A4,948,442)。此外，迄今為止還沒有已知的具有過濾材料的微測試板在應用于核酸的分離和凈化時實現(xiàn)足夠高交叉污染的保護。原因在于流向多孔過濾板的底部的短得太多的流出口接管。另一個問題是反應的空穴體積較小，此在如EP-A1 0,098,534中有述?，F(xiàn)有技術已知的384-孔板也只允許各自的分析方法中較小體積的滲透，這一體積約為50-80μl。然而對于進行分析，特別是用來自動化分析，和對于聯(lián)合使用實驗室機器人，在許多情況下允許大體積的滲透的測試板是必需的。
因此，本發(fā)明的任務在于，制備一種多孔過濾板，其提供樣品的交叉污染的保護，制備成本低，并可在多方面使用，如在核酸技術中和在蛋白質技術中的高滲透應用。
新型的多孔過濾板由二個緊密連接的單個部分構成。板的上面部分定義為試樣接收部分1，板的下面部分為具有過濾器3的流出口部分2。該流出口部分2包括對于每種孔的根據(jù)本發(fā)明所形成的流出口接管4，通過該接管濾出物流入接收容器，例如深-孔-板(Deep-Well-Platten)以進行進一步的測定。流出口部分基本上就是通過相應構成的流出口接管4為特征的，根據(jù)優(yōu)選的96或384規(guī)格板不同而定。
這個流出口接管具有15-25°的內(nèi)傾角，優(yōu)選為20°，并且在與上部連接的位置各具有約1,0-1,5mm，優(yōu)選為1,0mm的用來穩(wěn)定濾器器具3的墊板間隔(緊密間隔)5。它的長度為約5-15mm。96-孔板具有根據(jù)本發(fā)明的具有10-15mm長的流出口接管，它們優(yōu)選為12mm的長度。384-孔板具有根據(jù)本發(fā)明的具有5-8mm長的流出口接管，優(yōu)選為5-6mm的長度。過濾板也可以連接到流出口容器。
所以，流出口接管通常是圓的，在另一個實施方案中它們可在流出口末端具有至少8個孔的完全星狀的構成。
內(nèi)傾角為15-25°，優(yōu)選為20°，特別的流出口設計使得過濾了的試樣毫無問題地和完全地流向接收容器，例如深-孔板(死體積最小化，幾乎為0)成為可能。通過對于96-孔板具有的優(yōu)選為12mm的流出口接管的長度和對于384-孔板具有的優(yōu)選為5-6mm的長度(已知的微過濾板具有9mm(96孔)和＜5mm(384孔)的最大長度的流出口)可避免問題嚴重的交叉污染。所以根據(jù)本發(fā)明的多孔過濾板也可應用于基于PCR的傳染病診斷。
所以，不同于迄今為止已知的過濾板，流出口接管的加長導致了根據(jù)本發(fā)明的過濾板對于96孔板具有超過1ml的室體積的最大接收體積容量，對于384孔板約300μl，這就是說，可處理比迄今為止常用的更大的總的試樣體積。所以這也導致了可重復性的結果。這特別地被視為本領域的專業(yè)人員所非常期望的應用384-孔板，它的滲透性可提高4-6倍。
本發(fā)明的主題還包括制備新型多孔過濾板的方法。多孔過濾板的二部分在一個特別的生產(chǎn)過程中通過液壓擠壓法互相牢固地連接在一起。擠壓各自根據(jù)流出口接管的切口進行(96或384)。內(nèi)擠壓角用工具這樣制成，即在擠壓過程中過濾器具3，如過濾墊子置入上-1和下部2之間，相應過濾器的切口整齊地被沖壓。該沖壓好了的過濾器具與上部一起擠壓入下部，放入下部的墊板間隔5上。通過液壓壓力，板的上部、過濾小板和板的下部牢固地和緊密地互相擠壓在一起。
一種這樣的根據(jù)本發(fā)明的擠壓是可能的，因為新型的多孔過濾板的上部和下部用二個最大公差為1/1000mm的絕對精密的工具(熱槽技術)制得，這二個精密工具是完全互相匹配的。二個板部分的擠壓部分處的尖銳的切角使得在用本身的擠壓工作過程中由過濾板構成的單個過濾器的沖壓成型成為可能。擠壓是直接進行的，這就是說，根據(jù)本發(fā)明不需要鍵槽(如由通常的現(xiàn)有技術已知的那樣)，這意味著一個很大的技術優(yōu)點。優(yōu)選地以仔細精心調節(jié)了的壓鑄參數(shù)用壓鑄法制備多孔過濾板。根據(jù)本發(fā)明的過濾板由已知的材料構成，如聚苯乙烯或聚丙烯。所使用的壓鑄材料優(yōu)選是高價的聚苯乙烯。因為只有應用完全合適的壓鑄件，擠壓才能無密封滑動松動而進行。
以這樣的最完美的方式解決了所有存在的問題。通過一個新的技術方法而制備板，該方法使得高效地和成本低廉地將過濾材料置入多孔過濾板中成為可能。此外，新型的多孔過濾板在它的結構計算尺寸上是這樣構造的，即通過流出口接管的形狀可消除迄今為止已知的交叉污染。板的外部尺寸(寬和長)和切口的設置(優(yōu)選為8×12矩陣)相當于一個標準的微滴定板，在此，另一個優(yōu)點在于反應空穴的體積提高到約1ml(96孔)或約300μl(384孔)。所以原則上用一塊板可沒有問題地實現(xiàn)核酸的自動化分離和凈化的所有標準應用。此外，這種板也可毫無問題地用在蛋白質凈化和分析中。
接著在下列的實施例中更清楚地解釋本發(fā)明。


圖1 96-孔裝置的總2a 單個裝置部分的縱斷2b 過濾器薄膜的縱斷3 流出口接管的橫斷面圖例說明表1 試樣接收部分(上部)2 流出口部分(下部)3 過濾器具4 流出口接管5 墊板間隔6 流出口末端(圓的或星狀的)
權利要求
1.一種多孔過濾板，其特征在于具有試樣接收部分(1)和流出口部分(2)，流出口部分對于每個孔都具有流出口接管(4)，流出口接管具有15-25°的內(nèi)傾角，并且至少為10mm長，同時在試樣接收部分和流出口部分的連接處有一支承過濾器具(3)的墊板間隔(5)。
2.根據(jù)權利要求1的多孔過濾板，其特征在于，流出口接管(4)具有20°的傾角。
3.根據(jù)權利要求1或2的多孔過濾板，其特征在于，流出口接管(4)的構造是圓形的，或具有星狀的流出口末端(6)。
4.根據(jù)權利要求3的多孔過濾板，其特征在于，星狀的流出口末端(6)具有八個孔。
5.根據(jù)權利要求1-4的多孔過濾板，其特征在于，流出口接管(4)為5-15mm長。
6.根據(jù)權利要求5的多孔過濾板，其特征在于，其是96-孔的板，在此，流出口接管(4)具有5-10mm的長度，優(yōu)選為7mm的長度。
7.根據(jù)權利要求4的多孔過濾板，其特征在于，其是384-孔的板，在此，流出口接管(4)具有5-8mm的長度，優(yōu)選為5-6mm的長度。
8.一種用于制備根據(jù)權利要求1-7之一的多孔過濾板的方法，其特征在于，試樣接收部分(1)和具有流出口接管(4)的流出口部分(2)是用熱槽技術直接按照如下方式完全地互相匹配制備的，即它們具有1/1000mm的最大公差，并且流出口接管的切口是液壓擠壓成的。
9.根據(jù)權利要求8的方法，其特征在于，內(nèi)擠壓角是這樣用工具制成的，即在擠壓過程中在試樣接收部分(1)和流出口部分(2)置入過濾器具(3)，并且沖壓相應過濾器的切口，其與試樣接收部分(1)一起壓入流出口部分(2)，并且置入墊板間隔(5)上。
10.權利要求1-7之一的多孔過濾板應用于核酸技術中的高滲透應用中。
11.權利要求1-7之一的多孔過濾板應用于蛋白質凈化和分析中。
全文摘要
本發(fā)明涉及一種新型的多孔過濾板，優(yōu)選為96－孔或384－孔的規(guī)格，其由二個牢固地和緊密地連接在一起的單個部分構成。第一部分作為具有過濾小板(3)的試樣接收部分(1)，第二部分在過濾進行完后起作為流出口部分(2)的作用。根據(jù)本發(fā)明的板特別適合于在核酸技術中的高滲透應用以及蛋白質的凈化和分析。
文檔編號B01L3/00GK1471432SQ01817926
公開日2004年1月28日 申請日期2001年8月22日 優(yōu)先權日2000年8月25日
發(fā)明者H·J·霍夫曼, T·希勒布蘭德, P·本茨可, H J 霍夫曼, 目, 詹祭嫉 申請人:茵微特克生化技術設計有限公司, Ahn生化技術有限公司