專利名稱：通過(guò)毛細(xì)管電泳法分離蛋白質(zhì)的改良方法以及用于毛細(xì)管電泳法的緩沖劑組合物的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種在樣品中存在脂蛋白的條件下，通過(guò)毛細(xì)管電泳法分離蛋白質(zhì)和肽的方法，同時(shí)涉及用于所述分離的包括添加劑的緩沖劑組合物。
背景技術(shù)：
分析生物液體，如血清中的蛋白質(zhì)含量以用于分析目的，特別是用于診斷目的是公知的，通常通過(guò)電泳法來(lái)分離蛋白質(zhì)，該方法中既可使用凝膠電泳又可使用毛細(xì)管電泳法。毛細(xì)管電泳法的一個(gè)優(yōu)勢(shì)在于僅需分析極少量生物液體。此外，只要可以使用高電壓，則使用該技術(shù)的分離操作會(huì)非?？焖?，而且在分離過(guò)程中不會(huì)對(duì)樣品過(guò)度加熱。
為分離血清蛋白，通常在堿性緩沖劑存在下使用毛細(xì)管電泳法。通常，所得到的蛋白質(zhì)剖析圖中含有5或6個(gè)部分，其對(duì)應(yīng)于蛋白質(zhì)成分，即白蛋白成分、α1-和α2-成分，β-球蛋白成分，β1-和β2-成分，以及γ-球蛋白成分。這些成分中的每個(gè)成分都包括一種或多種血清蛋白。
可使用毛細(xì)管電泳法和分析緩沖劑，如美國(guó)專利US Re36011和歐洲專利EP-A-0518475、EP-A-1229325或EP-A-1258724中所描述的那些技術(shù)來(lái)實(shí)現(xiàn)這種分離。
然而，血清蛋白的分離有時(shí)并不能令人滿意。
實(shí)際上，術(shù)語(yǔ)“蛋白質(zhì)成分”此處并不僅僅意味著蛋白質(zhì)成分，即α1-；α2-；β-或β1-和β2-；和γ-球蛋白成分，同時(shí)還意味著脂蛋白成分，主要是α-脂蛋白、β-脂蛋白以及前-β-脂蛋白，對(duì)于“高密度脂蛋白”、“低密度脂蛋白”和“極低密度脂蛋白”，其還被稱為HDL，LDL和VLDL，即剖析圖有時(shí)是不精確的，這主要是由于那些脂蛋白，主要為β-脂蛋白和前-β-脂蛋白出現(xiàn)在α1-和α2-球蛋白以及β1-球蛋白所對(duì)應(yīng)的剖析圖區(qū)內(nèi)。

發(fā)明內(nèi)容
申請(qǐng)人現(xiàn)已證明，使用陰離子表面活性劑作為分析緩沖劑中的添加劑可改善分離，特別是能夠使電泳剖析圖中的α1-和α2-以及β1-球蛋白區(qū)域更純。所述添加劑選自陰離子表面活性劑，其能夠與一種或多種脂蛋白成分，特別是脂蛋白疏水殘基產(chǎn)生疏水作用。其可向脂蛋白成分提供一個(gè)或多個(gè)負(fù)電荷。其可使電泳遷移率相對(duì)于其它蛋白質(zhì)成分的電泳遷移率有所改變，特別是有所降低。
在根據(jù)本發(fā)明而使用的低濃度的所述添加劑下(其中，濃度低是相對(duì)于在其它應(yīng)用中所用的添加劑濃度而言)，正如在實(shí)施例中顯而易見的，在毛細(xì)管電泳法中得到的剖析圖可以為除去肩峰的非常純的峰，特別是對(duì)于α1和α2成分而言。這對(duì)于解釋高血脂血清的剖析圖是非常有用的，特別地，對(duì)正常血脂樣品的分析也同樣有用。
因此，本發(fā)明涉及一種在堿性pH下的游離溶液毛細(xì)管電泳法，該方法用于分析含有蛋白質(zhì)成分的樣品，該蛋白質(zhì)成分包括脂蛋白成分，在該方法中，樣品被引入到含有分析緩沖劑的毛細(xì)管中，所述分析緩沖劑還包括至少一種能夠與一種(或多種)脂蛋白成分發(fā)生疏水作用的陰離子表面活性劑型添加劑。所述添加劑能夠向所述脂蛋白成分提供一個(gè)或多個(gè)負(fù)電荷，因此可使電泳遷移率相對(duì)于其它非脂類蛋白質(zhì)成分的電泳遷移率有所改變。
所述步驟之后通常還要通過(guò)遷移來(lái)分離蛋白質(zhì)成分，并檢測(cè)各成分。
本發(fā)明還涉及一種通過(guò)電泳法在分析緩沖劑中分離樣品的蛋白質(zhì)成分的方法，該樣品至少包括白蛋白和α1-、α2-和β1-球蛋白成分以及脂蛋白，其中分析緩沖劑還包括至少一種能夠與脂蛋白發(fā)生疏水作用的陰離子表面活性劑型添加劑。
本發(fā)明還涉及一種在堿性pH下，通過(guò)游離溶液毛細(xì)管電泳法從包括脂蛋白的液體樣品中電泳分離蛋白質(zhì)成分的方法，在該方法中，使包括所述成分的樣品通過(guò)含有分析緩沖劑的毛細(xì)管，該分析緩沖液進(jìn)一步含有能夠與脂蛋白發(fā)生特定作用的添加劑；該添加劑可為陰離子表面活性劑，其包括疏水部分，如C10-C20的烷基鏈，還包括陰離子部分，其在pH大于9時(shí)供給強(qiáng)負(fù)電荷。
陰離子表面活性劑類型的添加劑以低濃度用于緩沖劑中，從而其與白蛋白或其它非脂類的蛋白質(zhì)成分的相互作用很弱，并特別集中于脂蛋白上，此處稱為“脂蛋白-特異性”。對(duì)于此脂蛋白-特異性的相互作用，優(yōu)選以低濃度使用陰離子型表面活性劑添加劑。對(duì)于每一種陰離子表面活性劑，所述濃度部分取決于其對(duì)脂蛋白的親和性，部分取決于其對(duì)白蛋白的親和性或?qū)ζ渌侵惖鞍踪|(zhì)成分的親和性。因此每一種表面活性劑的最佳濃度都不同。其在緩沖劑中可為小于1mM的數(shù)量級(jí)，例如為0.001mM-0.2mM的數(shù)量級(jí)，優(yōu)選大于0.01mM并小于0.1mM，例如在0.01mM-0.09mM的范圍內(nèi)。
申請(qǐng)人已證明，特別是對(duì)SDS而言，大約0.05mM的濃度無(wú)法促成脂蛋白成分的充分遷移，而當(dāng)濃度大于0.2mM時(shí)，剖析圖就會(huì)變形(當(dāng)濃度為0.25mM時(shí)，β2部分縮小，α1部分變形，當(dāng)濃度為0.5mM時(shí)，所得的剖析圖甚至?xí)耆冃?。
因此，在本發(fā)明毛細(xì)管電泳法的分析緩沖劑中用作添加劑，且能夠與脂蛋白發(fā)生特定疏水作用的化合物可為陰離子表面活性劑，如用在MECC(膠束動(dòng)電毛細(xì)管色譜)中的那些物質(zhì)，但所用濃度基本上低于臨界膠束濃度。在本發(fā)明中，將所述化合物用于如上所述的游離溶液CE中，并且脂蛋白通過(guò)所述脂蛋白的疏水殘基與所述化合物的疏水部分之間的疏水作用而帶有負(fù)電荷，從而導(dǎo)致與其它蛋白質(zhì)相比，所述脂蛋白的遷移減慢。一個(gè)結(jié)果就是改善了α1、α2和β1成分的分離，使脂蛋白遷移到其通常遷至的區(qū)域之外，即α1、α2和β1區(qū)。其使用濃度低于EP-A-1229325中所述的濃度。
此外，本發(fā)明涉及用于毛細(xì)管電泳法的電解質(zhì)組合物，其包括，在可接受的載體中的至少一種緩沖劑和如上所述的陰離子表面活性劑類添加劑，其能夠使脂蛋白遷移到其通常遷至的區(qū)域之外，特別是在成分α1、α2和β1的區(qū)域之外。
如實(shí)施例中所示，使用本發(fā)明的添加劑，通過(guò)使脂蛋白遷移到通常區(qū)域之外可顯著改善α1、α2和β1成分的分離。因此，與使用常用緩沖劑所進(jìn)行的分析相比，其可改善血清蛋白定量分析的速度和準(zhǔn)確度。所述添加劑對(duì)富含β-脂蛋白和前-β-脂蛋白的生物樣品的分析具有特殊的優(yōu)勢(shì)。
最后，本發(fā)明涉及用于分析生物樣品的蛋白質(zhì)成分的試劑盒，其包括至少一種分析緩沖劑和陰離于表面活性劑類型的添加劑，該添加劑能夠使脂蛋白遷移到它們通常遷至的區(qū)域之外，特別是遷移至α1、α2和β1成分的區(qū)域之外，和/或包括疏水部分，例如C10-C20的烷基鏈，以及在pH大于9時(shí)提供強(qiáng)負(fù)電荷的陰離子部分，和/或一種或多種毛細(xì)管沖洗液，和/或稀釋部分，和/或一種或多種用于被分析的樣品的稀釋劑。在該試劑盒中，緩沖劑和添加劑以及稀釋劑可分別存儲(chǔ)以備臨時(shí)混合，或可混合存儲(chǔ)。所述試劑盒任選包括進(jìn)行分析的操作說(shuō)明。
本發(fā)明進(jìn)一步的特征和優(yōu)勢(shì)將通過(guò)下列詳細(xì)描述和實(shí)施例以及附圖而得以明確。
附圖簡(jiǎn)述

圖1表示根據(jù)EP-A-1229325，使用緩沖劑通過(guò)毛細(xì)管電泳法分析得到的人體血清的電泳圖譜。
圖2表示使用進(jìn)一步包括本發(fā)明的陰離子表面活性劑添加劑的相同緩沖劑，通過(guò)毛細(xì)管電泳法分析得到的相同血清的電泳圖譜。
圖3A、3B、3C和3D顯示通過(guò)EC法得到的相同正常血脂血清的電泳圖譜，該方法中使用相同的緩沖劑，并向其中分別加入0；0.05；0.07和0.25mM的SDS。
圖4A、4B、4C和4D顯示通過(guò)EC法得到的相同高血脂血清的電泳圖譜，該方法中使用相同的緩沖劑，并向其中分別加入0；0.05；0.07和0.25mM的SDS。
毛細(xì)管電泳法(CE)的操作條件是本領(lǐng)域公知的。通常包括使用清洗劑清洗毛細(xì)管，用分析緩沖劑清洗，任選一次或多次稀釋樣品，注射樣品，遷移以及檢測(cè)。所述步驟可使用自動(dòng)儀器進(jìn)行操作。
毛細(xì)管電泳法的操作條件是，例如，適于使用毛細(xì)管(SEBIA)自動(dòng)儀器的條件。
包括在堿性pH下提供強(qiáng)負(fù)電荷的陰極和疏水部分的化合物可用作根據(jù)本發(fā)明的緩沖劑的添加劑，且其能夠與脂蛋白的疏水部分發(fā)生相互作用。
疏水烷基鏈可由至少一個(gè)C10-C24的烷基鏈組成，其可帶有或不帶有支鏈，并包括至少一個(gè)約10個(gè)碳原子，特別是10-20個(gè)碳原子的直鏈部分。如本領(lǐng)域熟練技術(shù)人員容易理解的，所述疏水部分可包括不會(huì)在本質(zhì)上改變其疏水特性的殘基或官能團(tuán)。
陰極可由下列的一種或多種基團(tuán)或化學(xué)官能團(tuán)組成磺酸根、羧酸根、硫酸根以及磷酸根。
特別地，可列舉下列陰離子表面活性劑如C10-C24烷基單-、二-或三硫酸根，C10-C24烷基單-、二-或三磺酸根，C10-C24烷基單-、二-或三羧酸根，C10-C24烷基單-、二-或三磷酸根，以及C10-C24烷基羧基-磺酸根、-硫酸根和-磷酸根，特別是C10-C24烷基硫酸根。
因此，上述二-或三-羧酸根、二-或三-磺酸根、二-或三-硫酸根和二-或三-磷酸根以及羧基-磺酸根、硫酸根和磷酸根在含有10-24個(gè)碳原子的烷基鏈上結(jié)合了一個(gè)或多個(gè)羧酸根、硫酸根、磺酸根或磷酸根官能團(tuán)。
上面列舉的那些物質(zhì)中優(yōu)選的陰離子表面活性劑是C10-C24單烷基硫酸根，特別是C10-C20烷基硫酸根，以及在這些中，優(yōu)選C10-C16烷基硫酸根。
所述化合物本身是已知的，且可通過(guò)市售獲得。其可以為酸的形式或鹽的形式，特別是堿金屬鹽的形式。
月桂基硫酸根是特別優(yōu)選的，更具體為月桂基硫酸鈉(SDS)。
在上述命名中，烷基優(yōu)選為直鏈烷基。
上述陰離子表面活性劑類型的添加劑也可作為混合物使用。
此外，可在已知與白蛋白發(fā)生相互作用的其它添加劑存在下，通過(guò)如EP-A-1229325中所述的改善α1-球蛋白和白蛋白之間的距離來(lái)有利地使用該陰離子表面活性劑類型的添加劑。
EP-A-1229325中提到的用于與白蛋白發(fā)生相互作用的添加劑優(yōu)選為C6-C10烷基磺酸根，在這些C6-C10烷基磺酸根中，辛烷磺酸根是特別優(yōu)選的，因?yàn)槠渫ㄟ^(guò)對(duì)α1-球蛋白和白蛋白進(jìn)行分離而基本上改善了剖析圖的清晰度。
術(shù)語(yǔ)“根據(jù)本發(fā)明的樣品”意味著待分析的生物樣品，其例如先用合適的稀釋溶液或分析緩沖劑進(jìn)行稀釋，或采用純樣品進(jìn)行分析。
可分析任何健康或患病者的液態(tài)生物樣品。因此，人體液態(tài)生物樣品可為正?；蚍钦Ｑ澹约叭苎?、血漿、尿液或腦脊液體。除了人體生物樣品，還可分析來(lái)源于動(dòng)物的樣品。樣品也可為合成蛋白質(zhì)，那么本發(fā)明的方法就旨在進(jìn)行例如，生產(chǎn)控制。
本發(fā)明的添加劑可特別用于分析血清，以及分離人體樣品中的血清蛋白質(zhì)。
在血清樣品中，欲分離的血清蛋白質(zhì)為白蛋白和α1-；α2-；β(或β1-和β2-)；以及γ-球蛋白成分，和α-脂蛋白、β-脂蛋白和-β-脂蛋白，特別是β-脂蛋白和前-β-脂蛋白。所述命名可包括所述種類的所有子類型的蛋白質(zhì)成分。
分析緩沖劑可為任何已知的適于進(jìn)行所需分離，并適用于通常的電泳法，尤其是毛細(xì)管電泳法的分析緩沖劑?？闪信e的例子為硼酸鹽、磷酸根和碳酸鹽緩沖劑，基于氨基酸和生物緩沖劑的緩沖劑。特別地，可使用Capillarys B1B2+緩沖劑(SEBIA)。
可列舉的生物緩沖劑為下列的已知緩沖劑Bis-TRIS(2-雙[2-羥乙基]氨基-2-羥甲基-1，3-丙二醇)、ADA(N-[2-乙酰氨基]-2-亞氨二乙酸)、ACES(2-[2-乙酰氨基]-2-氨基乙烷磺酸)、PIPES(1，4-哌嗪二乙烷磺酸)，MOPSO(3-[N-嗎啉代]-2-羥基丙烷磺酸)、Bis-TRIS PROPANE(1，3-雙[三(羥甲基)甲基氨基丙烷])、BES(N，N-雙[2-羥乙基]-2-氨基乙烷磺酸)、MOPS(3-[N-嗎啉代]丙烷磺酸)、TES(2-[2-羥基-1，1-雙(羥甲基)乙基氨基]乙烷磺酸)、HEPES(N-[2-羥乙基]哌嗪-N’-(2-乙烷磺)酸)、DIPSO(3-N，N-雙[2-羥乙基]氨基-2-羥基丙烷磺)酸)、MOBS(4-N-嗎啉代丁烷磺酸)、TAPSO(3-[N-三-羥甲基-甲基氨基]-2-羥基丙烷磺酸)、TRIS(2-氨基-2-[羥甲基]-1，3-丙二醇)、HEPPSO(N-[2-羥乙基]哌嗪-N’-[2-羥基丙烷磺]酸)、POPSO(哌嗪-N，N’-雙[2-羥基丙烷磺]酸)、TEA(三乙醇胺)、EPPS(N-[2-羥乙基]-哌嗪-N’-[3-丙烷磺]酸)、TRICINE(N-三[羥甲基]甲基甘氨酸)、GLY-GLY(二甘氨酸)、BICINE(N，N-雙[2-羥乙基]-甘氨酸)、HEPBS(N-[2-羥乙基]哌嗪N’-[4-丁烷磺]酸)、TAPS(N-三[羥甲基]甲基-3-氨基丙烷磺酸)、AMPD(2-氨基-2-甲基-1，3-丙二醇)、TABS(N-三[羥甲基]甲基-4-氨基丁烷磺酸)、AMPSO(3-[(1，1-二甲基-2-羥乙基)氨基]-2-羥基丙烷磺酸)、CHES(2-(N-環(huán)己基氨基)乙烷磺酸)、CAPSO(3-[環(huán)己基氨基]-2-羥基-1-丙烷磺酸)、AMP(2-氨基-2-甲基-1-丙醇)、CAPS(3-環(huán)己基氨基-1-丙烷磺酸)或CABS(4-[環(huán)己基氨基]-1-丁烷磺酸)，優(yōu)選AMPD、TABS、AMPSO、CHES、CAPSO、AMP、CAPS或CABS。
在堿性pH毛細(xì)管電泳法中，分析緩沖劑的pH在8-12的范圍內(nèi)，優(yōu)選在9-11的范圍內(nèi)，更特別優(yōu)選的值為約10。
本發(fā)明的分析緩沖劑還可包括至少一種調(diào)節(jié)pH的化合物?？墒褂玫膒H調(diào)節(jié)劑例如選自下列化合物氫氧化鋰、氫氧化鈉、氫氧化鉀、氫氧化銣、氫氧化銫、氫氧化鈁以及在烷基部分含有1-8個(gè)碳原子的單-、二-、三-或四-烷基氫氧化銨。
根據(jù)本發(fā)明，在常規(guī)條件和常規(guī)濃度下使用該分析緩沖劑，即在10-500mM的濃度級(jí)別，優(yōu)選20-400mM下使用。
本發(fā)明的添加劑在上述濃度下使用，該濃度低于EP-A-1229325中所述的與白蛋白相互作用時(shí)所用的濃度?？偟膩?lái)說(shuō)，該濃度為0.001-0.2mM的數(shù)量級(jí)，優(yōu)選0.01-0.09mM，如果是SDS的話，則該濃度小于能與白蛋白或其它非脂類蛋白質(zhì)成分產(chǎn)生強(qiáng)烈相互作用的濃度，即會(huì)強(qiáng)烈干擾剖析圖的濃度。
已知與白蛋白發(fā)生相互作用的更特殊的添加劑應(yīng)以0.1mM-500mM的濃度使用，但是不能超過(guò)其在分析緩沖劑中的臨界膠束濃度。該臨界膠束濃度值對(duì)表面活性劑添加劑來(lái)說(shuō)是有效的。
當(dāng)使用辛烷磺酸根時(shí)，其在緩沖劑中的濃度為1-10mM數(shù)量級(jí)，優(yōu)選2.5-5mM。
在SDS存在下其可能阻礙SDS對(duì)最大位移的影響，特別是在白蛋白區(qū)域。
此外，緩沖劑還可包括一種或多種添加劑，其可增加離子強(qiáng)度。
用于緩沖劑并可增強(qiáng)電解質(zhì)離子強(qiáng)度的所述添加劑例如可列舉為選自下列的化合物堿金屬的氯化物、硫酸根、磺酸根、碳酸鹽、羧酸根、氟化物和磷酸根，及其混合物。其中，堿金屬的氯化物、硫酸根、磺酸根及其混合物是優(yōu)選的。
更優(yōu)選使用硫酸根。優(yōu)選選擇鈉鹽、鋰鹽或鉀鹽。如上所列舉的添加劑中，硫酸鈉和/或硫酸鋰是優(yōu)選的。
本發(fā)明的緩沖劑細(xì)合物通過(guò)制備分析緩沖劑組合物的常規(guī)方法制得，即通過(guò)將液態(tài)形式或固態(tài)形式的待稀釋組分加入到可接受的載體中而制得。該載體通常為水，其可為蒸餾水或軟化水。
用于毛細(xì)管的材料為通常在毛細(xì)管電泳法中使用的材料。因此，可使用石英玻璃毛細(xì)管。其內(nèi)徑可為5-2000μm。優(yōu)選地，可使用內(nèi)徑小于200μm的毛細(xì)管，更優(yōu)選小于100μm。優(yōu)選使用內(nèi)表面未處理的毛細(xì)管。本領(lǐng)域熟練技術(shù)人員能夠按照分析的要求來(lái)改變毛細(xì)管性質(zhì)及尺寸。
具體實(shí)施例方式
實(shí)施例方法及裝置A)毛細(xì)管電泳法使用CE裝置進(jìn)行臨床樣品的毛細(xì)管電泳試驗(yàn)，該CE裝置試劑盒有內(nèi)徑為25微米的熔融硅毛細(xì)管。在200nm下進(jìn)行檢測(cè)。樣品置于毛細(xì)管裝置(SEBIA)的樣品托盤中，并通過(guò)流體注射進(jìn)行自動(dòng)注射。通過(guò)施加約400V/cm的電場(chǎng)而在小于5分鐘的時(shí)間內(nèi)對(duì)樣品進(jìn)行分離。在每次分析之前使用0.25M氫氧化鈉，然后再使用分析緩沖劑對(duì)毛細(xì)管進(jìn)行清洗。
分析緩沖劑使用的化學(xué)藥品為分析級(jí)。
在1升的去離子水中溶解9.3g硼酸(摩爾質(zhì)量61.83g/mol)，和5.1g氫氧化鈉(摩爾質(zhì)量40.0g/mol)，從而制得150mM的硼酸鹽緩沖劑。最終濃度為150mM，pH為10.0。
B)臨床樣品對(duì)于CE法，則在分析緩沖劑中將人體血清稀釋到五分之一。
實(shí)施例1(對(duì)比例)按照如上所述制備硼酸鹽分析緩沖劑。
使用上述方法時(shí)高血脂人體血清(甘油三酯5.73g/1)進(jìn)行電泳操作。
如圖1所示，所得的電泳圖譜具有從左至右的六個(gè)連續(xù)峰值，分別為白蛋白、α1、α2、β1、β2和γ-球蛋白成分。

實(shí)施例2將SDS以0.07mM的濃度加入到實(shí)施例1的分析緩沖劑中。
如實(shí)施例1所述進(jìn)行電泳操作。
如圖2所示，所得的電泳圖譜具有從左至右的六個(gè)連續(xù)峰值，分別為白蛋白、α1、α2、β1、β2和γ-球蛋白成分。與實(shí)施例1相比較可知，兩個(gè)成分之間的分離基本上得以改善。α1峰(相當(dāng)于前β-脂蛋白)上用箭頭標(biāo)記的肩峰從剖析圖中消除。

實(shí)施例3按照與前面實(shí)施例相同的方式對(duì)正常血脂的人體血清(甘油三酯1.10g/l)進(jìn)行電泳操作，但向緩沖劑中加入濃度為0.00；0.05；0.07和0.25mM的SDS。
所得這些電泳圖譜從左至右的六個(gè)連續(xù)峰分別為白蛋白成分和α1-、α2-、β1-、β2-和γ-球蛋白成分。下表表示所得結(jié)果。

實(shí)施例4使用如實(shí)施例3中相同的方法處理高血脂人體血清(甘油三酯5.63g/l)。所得這些電泳圖譜從左至右的六個(gè)連續(xù)峰值分別為白蛋白成分和α1-、α2-、β1-、β2-和γ-球蛋白成分。下表表示所得結(jié)果。

權(quán)利要求
1.一種堿性pH下用于樣品分析的游離溶液毛細(xì)管電泳法，該樣品包括含有一種或多種脂蛋白成分的蛋白質(zhì)成分，其特征在于該方法包括至少一個(gè)步驟，該步驟中樣品被引入到含有分析緩沖劑的毛細(xì)管中，所述分析緩沖劑進(jìn)一步包括至少一種陰離子表面活性劑類型的添加劑，其能夠與脂蛋白成分發(fā)生疏水作用，并能夠使電泳遷移率相對(duì)于其它蛋白質(zhì)成分的電泳遷移率有所改變，緩沖劑中添加劑的濃度在0.001mM-0.2mM的范圍內(nèi)。
2.根據(jù)權(quán)利要求1的方法，其特征在于其進(jìn)一步包括通過(guò)遷移來(lái)分離該成分和檢測(cè)所述成分。
3.根據(jù)權(quán)利要求1或2的方法，其特征在于所述樣品為生物樣品。
4.根據(jù)權(quán)利要求1-3之一的方法，其特征在于所述樣品為血清、溶血血液、血漿、尿液或腦脊液。
5.根據(jù)權(quán)利要求1-4之一的方法，其特征在于所述成分為血清成分。
6.根據(jù)權(quán)利要求1-5之一的方法，其特征在于所述成分為白蛋白和α1-、α2-、β-或(β1-和β2-)、γ-球蛋白成分，所述脂蛋白成分為α-脂蛋白、β-脂蛋白和/或前-β-脂蛋白。
7.根據(jù)權(quán)利要求1-6之一的方法，其特征在于所述添加劑包括pH大于9下的陰極和疏水部分。
8.根據(jù)權(quán)利要求1-7之一的方法，其特征在于所述添加劑包括疏水部分和陰極，該疏水部分由至少一個(gè)C10-C24烷基鏈組成，其可具有或沒有支鏈，并包括含有至少10個(gè)碳原子的直鏈部分，該陰極由一種或多種選自磺酸根、羧酸根、硫酸根以及磷酸根的基團(tuán)所細(xì)成。
9.根據(jù)權(quán)利要求1-8之一的方法，其特征在于所述添加劑選自陰離子表面活性劑，如C10-C24烷基單-、二-或三硫酸根，C10-C24烷基單-、二-或三磺酸根，C10-C24烷基單-、二-或三羧酸根，C10-C24烷基單-、二-或三磷酸根，以及C10-C24烷基羧基磺酸根、硫酸根和磷酸根，特別是C10-C24烷基硫酸根。
10.根據(jù)權(quán)利要求1-9之一的方法，其特征在于所述添加劑為C10-C20烷基硫酸根。
11.根據(jù)權(quán)利要求1-10之一的方法，其特征在于所述添加劑為月桂基硫酸鈉。
12.根據(jù)權(quán)利要求1-11之一的方法，其特征在于所述緩沖劑中添加劑的濃度在0.01mM-0.09mM的范圍內(nèi)。
13.根據(jù)權(quán)利要求1-12之一的方法，其特征在于所述緩沖劑中添加劑的濃度為0.07mM數(shù)量級(jí)。
14.根據(jù)權(quán)利要求1-13之一的方法，其特征在于所述緩沖劑進(jìn)一步包括辛烷磺酸根類型的添加劑，其在所述緩沖劑中的濃度為1-10mM，優(yōu)選2.5-5mM。
15.根據(jù)權(quán)利要求1-14之一的方法，其特征在于所述分析緩沖劑的pH在9-11的范圍內(nèi)。
16.根據(jù)權(quán)利要求1-15之一的方法，其特征在于毛細(xì)管由熔融硅形成。
17.根據(jù)權(quán)利要求1-16之一的方法，其特征在于所述分析緩沖劑進(jìn)一步包含至少一種pH調(diào)節(jié)劑。
18.根據(jù)權(quán)利要求17的方法，其特征在于所述pH調(diào)節(jié)劑選自氫氧化鋰、氫氧化鈉、氫氧化鉀、氫氧化銣、氫氧化銫、氫氧化鈁以及在烷基部分含有1-8個(gè)碳原子的單-、二-、三-或四-烷基氫氧化銨。
19.一種通過(guò)電泳法在緩沖劑中分離樣品蛋白質(zhì)成分和脂蛋白的方法，該樣品包含α1-、α2-和β1-球蛋白成分，在該方法中，使含有所述成分的樣品通過(guò)含有分析緩沖劑的毛細(xì)管，分析緩沖劑中進(jìn)一步包括至少一種能夠與脂蛋白發(fā)生疏水作用的添加劑，緩沖劑中添加劑的濃度在0.001-0.2mM的范圍內(nèi)。
20.一種通過(guò)堿性pH下的游離溶液毛細(xì)管電泳法來(lái)電泳分離液體樣品中的蛋白質(zhì)成分的方法，在該方法中，使含有所述成分的樣品通過(guò)含有分析緩沖劑的毛細(xì)管，該分析緩沖液能夠與脂蛋白發(fā)生作用，且該緩沖劑還含有至少一種添加劑，該添加劑為包括下列部分的化合物在pH大于9時(shí)帶負(fù)電荷的陰極和包含至少一個(gè)C10-C20烷基鏈的疏水部分，緩沖劑中添加劑的濃度在0.001-0.2mM的范圍內(nèi)。
21.根據(jù)權(quán)利要求1-20之一的方法，其特征在于分析緩沖劑進(jìn)一步包括硫酸鈉或硫酸鋰。
22.一種用于毛細(xì)管電泳法的電解質(zhì)組合物，其特征在于其包含至少一種緩沖劑，還包含至少一種在合適支持物中的能夠與脂蛋白發(fā)生疏水作用的添加劑，緩沖劑中添加劑的濃度在0.001-0.2mM的范圍內(nèi)。
23.一種用于毛細(xì)管電泳法的組合物，其特征在于其包含至少一種分析緩沖劑和至少一種添加劑，該添加劑包含疏水部分和陰極，該疏水部分由至少一個(gè)C10-C24烷基鏈組成，其可有或沒有支鏈，并包括至少一個(gè)含有10個(gè)碳原子的直鏈部分，該陰極由一種或多種選自磺酸根、羧酸根、硫酸根以及磷酸根的基團(tuán)所組成，緩沖劑中添加劑的濃度在0.001-0.2mM的范圍內(nèi)。
24.根據(jù)權(quán)利要求22或23的用于毛細(xì)管電泳法的組合物，其特征在于所述添加劑選自陰離子表面活性劑，如C10-C24烷基單-、二-或三硫酸根，C10-C24烷基單-、二-或三磺酸根，C10-C24烷基單-、二-或三羧酸根，C10-C24烷基單-、二-或三磷酸根，以及C10-C24烷基羧基單-、二-或三-磺酸根、硫酸根和磷酸根，特別是C10-C24烷基硫酸根。
25.根據(jù)權(quán)利要求22-24之一的用于毛細(xì)管電泳法的組合物，其特征在于所述添加劑選自C10-C24烷基硫酸根陰離子表面活性劑及其混合物。
26.根據(jù)權(quán)利要求22-25之一的組合物，其特征在于所述添加劑為C10-C16烷基硫酸根。
27.根據(jù)權(quán)利要求22-26之一的組合物，其特征在于所述添加劑為月桂基硫酸鈉。
28.一種用于分析生物樣品中蛋白質(zhì)成分的試劑盒，包括至少一種分析緩沖劑和陰離子表面活性劑類型的添加劑，該添加劑能夠使脂蛋白遷移到它們通常遷至的區(qū)域之外，特別是遷到α1、α2和β1成分區(qū)之外，和/或包括疏水部分，例如C10-C20烷基鏈，以及在pH大于9時(shí)提供強(qiáng)負(fù)電荷的陰離子部分；和/或一種或多種用于沖洗毛細(xì)管的溶液，和/或一種或多種合適的稀釋劑和/或稀釋部分，在任選將所述緩沖劑和所述添加劑進(jìn)行混合之后，緩沖劑中添加劑的濃度在0.001-0.2mM的范圍內(nèi)。
全文摘要
本發(fā)明涉及一種在堿性pH下用于分析含有蛋白質(zhì)成分的樣品的游離溶液毛細(xì)管電泳法，該蛋白質(zhì)成分包括一種或多種脂蛋白成分，其特征在于包括至少一個(gè)步驟，在該步驟中樣品被引入含有分析緩沖劑的毛細(xì)管中，所述分析緩沖劑進(jìn)一步含有至少一種陰離子表面活性劑類型的添加劑，該添加劑能夠與脂蛋白成分發(fā)生疏水作用，并能夠調(diào)節(jié)電泳遷移率。該方法還涉及一種用于毛細(xì)管電泳法的組合物，以及分析蛋白質(zhì)成分的試劑盒。
文檔編號(hào)B01D57/02GK1727887SQ20051009220
公開日2006年2月1日 申請(qǐng)日期2005年5月10日 優(yōu)先權(quán)日2004年5月10日
發(fā)明者F·羅伯特, D·西蒙尼 申請(qǐng)人:莎碧亞公司