專(zhuān)利名稱(chēng)：一種制取杜仲葉中綠原酸的方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及 一種制取杜仲葉中綠原酸的方法，特別是涉及一種采用酶法中溫水提 取、膜分離技術(shù)結(jié)合樹(shù)脂工藝制備綠原酸的方法。
背景技術(shù)：
綠原酸是一種重要的生物活性物質(zhì)，具有利膽、抗菌、抗病毒、降血壓、降血脂、清 除自由基、抗腫瘤、增高白血球、興奮中樞神經(jīng)系統(tǒng)等多種藥理作用，在醫(yī)療、保健品領(lǐng)域應(yīng) 用廣泛。綠原酸主要存在于杜仲、金銀花、咖啡豆等天然植物中。杜仲是我國(guó)特有的經(jīng)濟(jì)型 樹(shù)種，分布區(qū)域大、資源豐富，杜仲葉中綠原酸的含量為ι 5. 5%，是提取綠原酸的理想原 料，國(guó)內(nèi)現(xiàn)有提取工藝方案中存在著提取率不高、產(chǎn)品純度低、能源消耗大、大量使用有機(jī) 溶劑、廢水量大等問(wèn)題，嚴(yán)重制約了杜仲產(chǎn)業(yè)的發(fā)展。中國(guó)專(zhuān)利CN 1273964A “杜仲葉制備綠原酸工藝”公開(kāi)了一種從杜仲葉中制備綠 原酸的工藝，該工藝包括超聲預(yù)處理、高溫提取、超濾、乙酸乙酯萃取、D-140樹(shù)脂分離等步 驟，該方案存在著高溫提取能耗高，萃取時(shí)有機(jī)溶劑用量大，產(chǎn)量易受超濾條件影響，聚砜 中空纖維膜易被污染，膜清洗比較困難，廢水量大等問(wèn)題。

發(fā)明內(nèi)容
為了克服上述現(xiàn)有技術(shù)中存在的問(wèn)題及缺點(diǎn)，本發(fā)明提供一種制取杜仲葉中綠原 酸的方法，該方法是在粉碎后的杜仲葉粉料中，采用添加纖維素酶和中溫水提取杜仲葉中 的綠原酸，再通過(guò)兩級(jí)膜分離技術(shù)結(jié)合樹(shù)脂吸附洗脫工藝對(duì)提取的綠原酸進(jìn)行分離純化， 收集乙醇洗脫液減壓濃縮、真空干燥后得產(chǎn)品綠原酸，有效解決了原來(lái)綠原酸生產(chǎn)中提取 率低、廢水量大和產(chǎn)品純度低的問(wèn)題。本發(fā)明解決其技術(shù)問(wèn)題所采用的技術(shù)方案是在粉碎后的杜仲葉粉料中，采用添 加一定量纖維素酶和中溫水提取杜仲葉中的綠原酸，通過(guò)兩級(jí)膜分離技術(shù)結(jié)合樹(shù)脂吸附洗 脫工藝對(duì)提取的綠原酸進(jìn)行分離純化，收集乙醇洗脫液減壓濃縮、真空干燥后得產(chǎn)品綠原 酸粉末。本發(fā)明制取杜仲葉中綠原酸的方法步驟包括1、原料葉的粉碎干燥的杜仲葉，其含水量< 15%，用常規(guī)方法粉碎后過(guò)200目 篩；2、酶法輔助中溫水提取將粉碎的原料葉中加入一定量的水，調(diào)節(jié)pH為4. 5，并 恒溫至50°C 60°C，加入適量的纖維素酶在下列條件下進(jìn)行提取纖維素酶添加量為底 物濃度的0.2%，即每千克原料葉需消耗0. 002千克的纖維素酶、杜仲葉水的質(zhì)量比= 1 12、提取2次、每次60 80min ；3、過(guò)濾合并兩次提取液后，用常規(guī)過(guò)濾方法除去懸浮物等雜質(zhì)；4、超濾膜除雜本發(fā)明采用過(guò)濾孔徑為0. 02 0. 0. 06 μ m的超濾膜處理杜仲葉水 提液，該膜能截留幾乎全部的大分子蛋白質(zhì)及多糖等雜質(zhì)，而綠原酸分子量在400Dal左右可以完全透過(guò)，該膜的操作條件為P = 0. 2 0. 6Mpa，T = 30 50°C，PH = 4 5，Q = 60 70L/min ；5、納濾濃縮本發(fā)明采用攔截分子量為200 400Dal的納濾膜對(duì)一級(jí)膜濾液進(jìn)行 濃縮，并能部分脫鹽。該級(jí)膜濃縮倍數(shù)可達(dá)15倍以上，無(wú)機(jī)鹽離子去除率可達(dá)60%。該膜 的操作條件為P = 1. 0 1. 5Mpa, T = 30 60°C，PH = 4 5，Q = 20L/min。6、大孔樹(shù)脂的分離純化納濾膜濃縮液通過(guò)大孔樹(shù)脂進(jìn)行吸附洗脫，先用1倍樹(shù) 脂柱體積的純水洗去雜質(zhì)，然后用3倍樹(shù)脂柱體積的體積百分比濃度為20%乙醇洗脫，收 集乙醇洗脫液。7、濃縮及干燥將收集的乙醇洗脫液通過(guò)常規(guī)減壓濃縮和真空干燥后可得到綠原 酸粉末。上述步驟2中杜仲葉綠原酸的提取率可達(dá)95%。上述步驟4、5中兩級(jí)膜濃縮均可將物料濃縮10倍以上，納濾膜脫鹽率可達(dá)60%， 其濾液COD值可以降低到100以下。上述步驟6中大孔樹(shù)脂可以為HPD400A或AB_8型樹(shù)脂。上述步驟7中的減壓濃縮和真空干燥溫度均不高于50°C。本發(fā)明技術(shù)方案的優(yōu)點(diǎn) 在于1、酶法中溫水提取杜仲葉中的綠原酸，纖維素酶的加入有助于打破葉細(xì)胞壁，釋 放細(xì)胞內(nèi)的綠原酸，提取率可達(dá)到95%，水提溫度較低、提取時(shí)間縮短，節(jié)約能耗。2、采用超濾膜對(duì)提取液進(jìn)行分離純化，能有效分離其他副產(chǎn)物，膜操作過(guò)程簡(jiǎn)單， 膜通量能長(zhǎng)時(shí)間穩(wěn)定，易于清洗、使用壽命長(zhǎng)，易于實(shí)現(xiàn)工業(yè)化。3、采用納濾膜對(duì)除雜后的提取液進(jìn)行濃縮，脫鹽率可達(dá)60%，能減輕后續(xù)工藝的 負(fù)荷，延長(zhǎng)樹(shù)脂的使用壽命及節(jié)約能耗，納濾濾液COD值< 100，可以回用生產(chǎn)工序，基本無(wú) 廢水排放。4、采用大孔吸附樹(shù)脂能有效純化綠原酸，本工藝所選用的樹(shù)脂為極性大孔吸附樹(shù) 月旨，其對(duì)綠原酸吸附量大、分離效果好，僅用少量溶媒集中洗脫并分段收集，就能制得較高 純度綠原酸。經(jīng)過(guò)本工藝制得的粉末中綠原酸含量大于60%，提取率大于1.4%。


下面結(jié)合附圖和實(shí)施例對(duì)本發(fā)明作進(jìn)一步說(shuō)明。圖1是本發(fā)明的工藝流程路線示意圖。
具體實(shí)施例方式例1、參見(jiàn)說(shuō)明書(shū)附 圖1，取干燥的杜仲葉10Kg，粉碎后過(guò)200目篩，加120Kg水，調(diào) 節(jié)溫度55°C，恒溫并調(diào)節(jié)pH值至4. 5，再加入IOg纖維素酶，在此條件下提取60min，過(guò)濾， 濾渣再按前述提取條件第二次提取，合并兩次濾液，常規(guī)過(guò)濾，綠原酸提取率為95. 8% ；在 操作條件為P = O. 3Mpa，T = 45°C，PH = 4. 5，Q = 70L/min濾液過(guò)0. 03 μ m超濾膜，提取液 在該條件下濃縮了 11. 2倍，該超濾膜平均通量為226. 3L/m2 · h ；在操作條件P=L 5Mpa, T = 50PH = 4. 5，Q = 20L/min將超濾濾液再過(guò)200分子量納濾膜，超濾濾液在該條件 下濃縮了 16. 6倍，無(wú)機(jī)鹽離子去除率為63%，該納濾膜平均通量為18. 7L/m2 · h，納濾濾液COD為94 ；將納濾濃縮液通過(guò)HPD400A樹(shù)脂純化，先用1倍樹(shù)脂柱體積純水洗脫雜質(zhì)，然后 用3倍樹(shù)脂柱體積的體積百分比濃度為20%乙醇洗脫，收集乙醇洗脫液減壓濃縮、真空干 燥(其減壓濃縮和真空干溫度均不高于50°C)后可得到綠原酸粉末，經(jīng)HPLC檢測(cè)綠原酸純 度為64. 6%，得率為1.45%。

例2、參見(jiàn)說(shuō)明書(shū)附圖1，取干燥的杜仲葉10Kg，粉碎后過(guò)200目篩，加120Kg水，調(diào) 節(jié)溫度50°C，恒溫并調(diào)節(jié)pH值至4. 5，再加入IOg纖維素酶，在此條件下提取80min，過(guò)濾， 濾渣再按前述提取條件第二次提取，合并兩次濾液，常規(guī)過(guò)濾，綠原酸提取率為95. 1% ；在 操作條件為P = O. 3Mpa，T = 45°C，PH = 4. 5，Q = 70L/min濾液過(guò)0. 02 μ m超濾膜，提取液 在該條件下濃縮了 12. 8倍，該超濾膜平均通量為221. 3L/m2 · h ；在操作條件P=L 5Mpa, T = 50PH = 4. 5，Q = 20L/min將超濾濾液再過(guò)400分子量納濾膜濃縮，超濾膜濾液在 該條件下濃縮了 15. 2倍，無(wú)機(jī)鹽離子去除率為60%，該納濾膜平均通量為19. 5L/m2 · h，納 濾濾液COD為91 ；將納濾濃縮液通過(guò)HPD400A樹(shù)脂純化，先用1倍樹(shù)脂柱體積純水洗脫雜 質(zhì)，然后用3倍樹(shù)脂柱體積的體積百分比濃度為20%乙醇洗脫，收集乙醇洗脫液減壓濃縮、 真空干燥(其減壓濃縮和真空干溫度均不高于50°C)后可得到綠原酸粉末，經(jīng)HPLC檢測(cè)綠 原酸純度為67. 3%，得率為1.55%。
權(quán)利要求
1.一種制取杜仲葉中綠原酸的方法，包括以杜仲葉粉料為原料制取杜仲葉中的綠原 酸，其特征在于在粉碎的杜仲葉粉料中添加纖維素酶及中溫水提取杜仲葉中的綠原酸，通 過(guò)兩級(jí)膜分離技術(shù)結(jié)合樹(shù)脂吸附洗脫工藝對(duì)提取的綠原酸進(jìn)行分離純化，收集乙醇洗脫液 減壓濃縮、真空干燥得產(chǎn)品綠原酸粉末。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種制取杜仲葉中綠原酸的方法，其特征在于制取杜仲葉 中綠原酸的方法包括以下步驟(1)、原料葉的粉碎將含水量<15%杜仲葉，用常規(guī)方法粉碎后過(guò)200目篩；(2)、酶法輔助中溫水提取將粉碎的原料葉中加入一定量的水，調(diào)節(jié)PH為4.5，并恒 溫至50°C 60°C，加入適量的纖維素酶在下列條件下進(jìn)行提取纖維素酶添加量為底物濃 度的0.2%，即每千克原料葉需消耗0. 002千克的纖維素酶、杜仲葉粉料水的質(zhì)量比= 1 12、提取2次、每次60 80min;(3)、過(guò)濾合并兩次提取液后，用常規(guī)過(guò)濾方法除去懸浮物等雜質(zhì)；(4)、超濾膜除雜采用過(guò)濾孔徑為0.02 0. 0. 06 μ m的超濾膜處理杜仲葉水提液，用 超濾膜截留大分子蛋白質(zhì)及多糖等雜質(zhì)，而綠原酸分子量在400Dal左右可以完全透過(guò)，該 膜的操作條件為P = 0. 2 0. 6Mpa, T = 30 50°C，PH = 4 5，Q = 60 70L/min ；(5)、納濾濃縮采用攔截分子量為200 400Dal的納濾膜對(duì)一級(jí)膜濾液進(jìn)行濃縮，部 分脫鹽，該級(jí)膜濃縮倍數(shù)可達(dá)15倍以上，無(wú)機(jī)鹽離子去除率可達(dá)60% ；該膜的操作條件為 P = 1. 0 1. 5Mpa, T = 30 60°C，PH = 4 5，Q = 20L/min ；(6)、大孔樹(shù)脂的分離純化納濾膜濃縮液通過(guò)大孔樹(shù)脂進(jìn)行吸附洗脫，先用1倍樹(shù)脂 柱體積的純水洗去雜質(zhì)，然后用3倍樹(shù)脂柱體積的體積百分比濃度為20%乙醇洗脫，收集 乙醇洗脫液；(7)、濃縮及干燥將收集的乙醇洗脫液通過(guò)常規(guī)減壓濃縮和真空干燥后可得到綠原酸 粉末。
3.根據(jù)權(quán)利要求1和2所述的一種制取杜仲葉中綠原酸的方法，其特征在于減壓濃 縮和真空干燥溫度均不高于50°C。
全文摘要
本發(fā)明公開(kāi)了一種制取杜仲葉中綠原酸的方法，將杜仲葉粉碎、纖維素酶輔助中溫水提取、常規(guī)過(guò)濾、超濾膜除雜、納濾濃縮、大孔樹(shù)脂的分離純化、濃縮及干燥制得綠原酸粉；該方法采用纖維素酶輔助中溫水提取杜仲葉中的綠原酸，提取率可達(dá)到95％，水提溫度較低、提取時(shí)間縮短；采用超濾膜對(duì)提取液進(jìn)行除雜、分離其他副產(chǎn)物，膜操作過(guò)程簡(jiǎn)單，膜通量能長(zhǎng)時(shí)間穩(wěn)定，易于清洗、使用壽命長(zhǎng)和實(shí)現(xiàn)工業(yè)化；采用納濾膜對(duì)除雜后的提取液進(jìn)行濃縮，減輕了后續(xù)工藝的負(fù)荷，可延長(zhǎng)樹(shù)脂的使用壽命；納濾濾液其COD值≤100，可以回用生產(chǎn)工序，基本無(wú)廢水排放；采用大孔吸附樹(shù)脂能有效純化綠原酸，制得的粉末中綠原酸純度大于60％，提取率大于1.4％。
文檔編號(hào)B01D15/08GK102040519SQ20091027247
公開(kāi)日2011年5月4日 申請(qǐng)日期2009年10月22日 優(yōu)先權(quán)日2009年10月22日
發(fā)明者萬(wàn)瑞極, 劉冬成, 劉蕓芳, 廉志清, 彭小文, 徐斌, 王金, 王震 申請(qǐng)人:湖北老龍洞杜仲開(kāi)發(fā)有限公司