專利名稱：脂質(zhì)體的制備方法及膽固醇溶解方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及脂質(zhì)體的制備方法及膽固醇溶解方法。
背景技術(shù)：
脂質(zhì)體是由脂質(zhì)分子形成的、至少被一層脂質(zhì)雙分子層包裹而成的近似球狀的空 心顆粒。該脂質(zhì)分子具備具有親水性的親水基、和位于其另一側(cè)的具有親油性的親油基，與 水接觸時，會形成雙分子層，親水基朝向該雙分子層的外側(cè)及該雙分子層所包裹的內(nèi)側(cè)，親 油基朝向該雙分子層的層內(nèi)部，脂質(zhì)體形成球狀并使其表面積為最小。形成脂質(zhì)體的雙分子層與構(gòu)成生物體的細胞膜相似，因此容易被生物體內(nèi)環(huán)境所 接受。近年，利用上述性質(zhì)，脂質(zhì)體作為藥物傳輸系統(tǒng)(Drug Delivery System: DDS)中的 藥物用囊泡備受觸目，其將包封于雙分子層包圍的區(qū)域的藥物，輸送至生物體內(nèi)的需藥部 位。作為其它用途，例如，脂質(zhì)體作為包封化妝品的化妝品用微膠囊也備受觸目。脂質(zhì)體的制備方法有逆相蒸發(fā)法、超聲波法、擠壓法、法蘭西加壓法、均質(zhì)法、乙醇 注入法、脫水-再水化法等等，典型的制法之一有Bangham法(薄膜法)。該制法為，在燒瓶等 容器內(nèi)將至少一種磷脂溶解于氯仿等有機溶劑中，使該有機溶劑揮發(fā)，在容器的底部形成 脂質(zhì)膜之后，將緩沖溶液等水溶液加入并進行攪拌，然后得到含有脂質(zhì)體的懸濁液的方法。 (A. D. Bangham et al.，J. Mol. Biol.，13，238—252 (1965) ； A. D. Bangham and R. W. Home, J. Mol. Biol. , 8，660-668 (1964))。另外，在典型的脂質(zhì)體的工業(yè)制備方法中，有將溶解于水溶性有機溶劑的磷脂等 脂質(zhì)成分邊攪拌邊注入添加到水溶液中的方法。這里，雖然水溶性有機溶劑可以適當?shù)夭?用甲醇、乙醇、異丙醇、丁醇等醇類，但是為了維持脂質(zhì)的溶解狀態(tài)，需要邊加溫脂質(zhì)溶液邊 添加混合到水溶液中，有必要精確地控制溫度和添加速度或攪拌速度(特表2006-517594 號公報)。此外，人們也公開了別的使用叔丁醇的前體脂質(zhì)體的制法(特表6-509547號公 報)。在這種制法中，由于能利用以20%左右的低含量含水的叔丁醇作為脂質(zhì)的溶解溶劑， 在接近室溫的溫度下預(yù)先將脂質(zhì)溶解，因此具有能夠進行脂質(zhì)的過濾滅菌和冷凍干燥的優(yōu)
點ο

發(fā)明內(nèi)容
發(fā)明要解決的問題
但是，上述現(xiàn)有的制法及該制法得到的脂質(zhì)體有如下問題脂質(zhì)體的粒徑不均一，或難 以制備具有均一粒徑的脂質(zhì)體。雖然粒徑小者(Small Unilameller Vesicles: SUV)和粒 徑大者(Large Unilameller Vesicles: LUV)各有其利用價值，但兩者混在一起時，利用價 值會低。因此，為了進一步縮窄粒度分布，將粒度分布廣的脂質(zhì)體進行通過具有細孔的過濾 器的處理。但是，采取上述處理的話，會產(chǎn)生具有特定的必需粒度分布的脂質(zhì)體的產(chǎn)量降低 的問題。另一方面，為提高脂質(zhì)雙層膜的膜強度，公知的有將膽固醇加入到脂質(zhì)雙層膜的方法。但是，一般來說膽固醇是難溶于水溶性有機溶劑的脂質(zhì)，因此需要溶解膽固醇的方法。鑒于上述問題，本發(fā)明以提供能夠容易得到粒徑均勻的脂質(zhì)體的方法為目的。此 外，本發(fā)明也以提供提高膽固醇的溶解度的方法為目的。
解決問題的方法
為達成上述目的，本發(fā)明人經(jīng)過多次深入研究后，發(fā)現(xiàn)了通過混合一種以上的脂質(zhì)與 含有水溶性有機溶劑的水溶液，加熱其混合物后，冷卻至預(yù)定的溫度，能夠制備粒徑均勻的 脂質(zhì)體。另外，也發(fā)現(xiàn)了通過混合膽固醇與磷脂及含有水溶性有機溶劑的水溶液，并加熱， 能夠使膽固醇容易地溶解于該水溶液中。這樣，本發(fā)明人完成了本發(fā)明。S卩，本發(fā)明的脂質(zhì)體制備方法包括加熱含有一種以上的脂質(zhì)、水、有機溶劑的混 合物的加熱工序；和所述加熱工序之后，冷卻所述混合物的冷卻工序。所述混合物為，例如所述脂質(zhì)與含有水溶性有機溶劑的水溶液混合而成的混合 物。所述水溶液理想的是，含有占總?cè)萘康捏w積百分比為5 30%的所述水溶性有機溶 劑。作為所述水溶性有機溶劑，可使用從叔丁醇、1-丙醇、2-丙醇及2 - 丁氧基乙醇中 選取的一種或兩種以上的有機溶劑。另外，本發(fā)明的膽固醇溶解方法包括加熱膽固醇與磷脂、水及有機溶劑混合而成 的混合物的工序。此外，本發(fā)明的膽固醇溶解方法包括加熱膽固醇與磷脂及含有水溶性有機溶劑的 水溶液混合而成的混合物的工序。理想的是所述水溶液含有占總?cè)萘康捏w積百分比為5 30%的所述水溶性有機溶 劑。作為所述水溶性有機溶劑，可用從叔丁醇、1-丙醇、2-丙醇及2 -丁氧基乙醇中選 取的一種或兩種以上的有機溶劑。而且，本發(fā)明的能夠應(yīng)用于脂質(zhì)體制備的有機溶劑的選擇方法包括利用作為候 選的有機溶劑通過上述脂質(zhì)體的制備方法制備脂質(zhì)體的工序；和檢測所述脂質(zhì)體是否均一 的工序。
〈相關(guān)申請的參照>
本申請基于2008年12月M日提交的日本發(fā)明專利申請?zhí)卦?008-3^7 號主張優(yōu) 先權(quán)。本說明書援用該文獻。
發(fā)明效果
根據(jù)本發(fā)明，能夠提供容易地得到粒徑均勻的脂質(zhì)體的方法。另外，根據(jù)本發(fā)明，能夠 提供提高膽固醇的溶解度的方法。


圖1為本發(fā)明的實驗例中，在t-BuOH (叔丁醇)的濃度為16vd%的條件下制得的脂質(zhì)體懸濁液的粒度分布圖。圖2為分別表示本發(fā)明的一個實施例中，使用DPPC (二棕櫚酰磷脂酰膽堿)、膽固 醇及硬脂酰胺，在含有各水溶性有機溶劑的水溶液中，制得脂質(zhì)體懸濁液時的各粒度分布 結(jié)果的圖。圖3為分別表示本發(fā)明的一個實施例中，使用DPPC、膽固醇及DPPG ( 二棕櫚酰磷 脂酰甘油)，在含有各水溶性有機溶劑的水溶液中，制得脂質(zhì)體懸濁液時的各粒度分布結(jié)果 的圖。
具體實施例方式以下，說明本發(fā)明的脂質(zhì)體的制備方法及膽固醇溶解方法的最佳實施方式。有關(guān) 膽固醇溶解方法的實施方式，將在脂質(zhì)體的制備方法的實施方式中加以說明。(1)脂質(zhì)體
脂質(zhì)體包括其小泡內(nèi)部不含有藥物等生理活性物質(zhì)的中空脂質(zhì)體 (Empty-Liposome)及內(nèi)含生理活性物質(zhì)的脂質(zhì)體。另外，除了由一層脂質(zhì)雙層膜構(gòu)成的 粒子較小的囊泡(Small Unilameller Vesicles: SUV)、由一層脂質(zhì)雙層膜構(gòu)成的粒子較 大的囊泡(Large Unilameller Vesicles: LUV)外，脂質(zhì)體也包括由多層膜構(gòu)成的囊泡 (Multi-Lameller Vesicles: MLV)。雖然脂質(zhì)體可以為任意大小，但理想的是平均粒徑為 5(T2000nm，更理想的是平均粒徑為10(T700nm。這里的“粒徑”是指通過動態(tài)光散射測定的 粒子的直徑。理想的多分散指數(shù)(PDI)為0. 3以下。作為能夠包封于脂質(zhì)體的內(nèi)部的生理活性物質(zhì)，可以采用各種藥物、化妝品等。例 如，含有順鉬或5 -氟尿嘧啶等的抗癌劑、抗氧化劑、抗菌劑、抗炎癥劑、血流促進劑、防老 化劑、激素劑、維生素劑、血紅蛋白、DNA、RNA、肽、蛋白質(zhì)、疫苗、頭發(fā)生長刺激劑、保濕劑、色 素類、美白劑、顏料、生理鹽水、水中的一種或兩種以上的組合等。但是生理活性物質(zhì)不限定 于上述例子。另外，也可用官能基等修飾脂質(zhì)體的表面。所述官能基的修飾是通過使官能 基預(yù)先結(jié)合磷脂等，或脂質(zhì)體形成后結(jié)合官能基而實現(xiàn)。
(2)脂質(zhì)體的制備方法
本實施方式所述的脂質(zhì)體制備方法只要是包括加熱一種以上的脂質(zhì)與含有水溶性有 機溶劑的水溶液混合而成的混合物的加熱工序、和加熱工序后冷卻混合物的冷卻工序，也 可應(yīng)用公知的制備方法。更具體地說，為了調(diào)節(jié)脂質(zhì)體的粒徑，也可將本發(fā)明的方法結(jié)合超 聲波分散法、擠壓法、法蘭西加壓法、均質(zhì)法等。本發(fā)明的脂質(zhì)體制備中，可以使用大豆卵磷脂、氫化大豆卵磷脂、蛋黃卵磷脂、磷 脂酰膽堿類、磷脂酰絲氨酸類、磷脂酰乙醇胺類、磷脂酰肌醇類、磷雜鞘磷脂類、磷脂酸類、 長鏈烷基磷酸鹽類、神經(jīng)節(jié)苷脂類、糖脂類、磷脂酰甘油類、留醇類等中的一種或兩種以上 的脂質(zhì)。作為磷脂酰膽堿類，可以列舉二肉豆蔻酰磷脂酰膽堿、二棕櫚酰磷脂酰膽堿、二硬 脂酰磷脂酰膽堿等；作為磷脂酰絲氨酸類，可以列舉二棕櫚酰磷脂酰絲氨酸、二棕櫚酰磷脂 酰絲氨酸鈉、來源于牛腦的磷脂酰絲氨酸鈉等；作為磷脂酰乙醇胺類，可以列舉二肉豆蔻酰 磷脂酰乙醇胺、二棕櫚酰磷脂酰乙醇胺、二硬脂酰磷脂酰乙醇胺等；作為磷脂酰肌醇類，可 以列舉來源于小麥的磷脂酰肌醇(鈉鹽)等；作為磷雜鞘磷脂類，可以列舉來源于牛腦的鞘磷脂等；作為磷脂酸類和長鏈烷基磷酸鹽類，包括二肉豆蔻酰磷脂酸、二棕櫚酰磷脂酸、 二硬脂酰磷脂酸、雙十六烷基磷酸等；作為神經(jīng)節(jié)苷脂類，可以列舉神經(jīng)節(jié)苷脂GM1、神經(jīng) 節(jié)苷脂GDla、神經(jīng)節(jié)苷脂GTlb等；作為糖脂類，可以列舉半乳糖神經(jīng)酰胺、葡萄糖、乳糖酶 基(神經(jīng))鞘氨醇、磷脂、紅細胞糖苷酯等；作為磷脂酰甘油類，可以列舉二肉豆蔻酰磷脂酰 甘油、二棕櫚酰磷脂酰甘油、二硬脂酰磷脂酰甘油等；作為留醇類，可以列舉膽固醇、二氫膽 固醇、羊毛留醇、二氫羊毛留醇、谷留醇、菜油留醇、豆留醇、菜子留醇、麥角固醇、及這些的 混合物即植物留醇、以及氫化植物留醇、還有像3β-[Ν_ (二甲基乙胺基)氨基甲?；鵠膽 固醇、N-(三甲基銨乙基)氨基甲?；懝檀歼@樣的帶有正電荷的甾醇類等。作為構(gòu)成脂質(zhì) 體的脂質(zhì)，理想的是含磷的磷脂與膽固醇的組合。特別是，磷脂中的磷脂酰膽堿類與膽固醇 的組合更好。使用磷脂和膽固醇制備脂質(zhì)體時，理想的是磷脂與膽固醇的摩爾比在1 O 1:1. 5范圍內(nèi)，更理想的是在1 :0 . 5 1 :1.2 5范圍內(nèi)。水溶性有機溶劑是指醇類、醚類、酯類、酮類、縮醛類等能夠與水混合的有機溶劑。 作為水溶性有機溶劑，理想的是使用從叔丁醇、1-丙醇、2-丙醇及2 - 丁氧基乙醇中選取的 一種或兩種以上的有機溶劑?；旌戏椒梢允鞘謩訐u動、用攪拌子或攪拌翼攪拌，此外也可 以使用超聲波振動器等進行混合。作為上述水溶液中的水溶性有機溶劑的濃度，必須選脂質(zhì)組成與脂質(zhì)濃度所需的 最適濃度范圍。這是因為水溶性有機溶劑的濃度升高的話，脂質(zhì)的溶解度雖升高，但不能形 成脂質(zhì)體。同時由于水溶性有機溶劑易殘留，向生物體供給脂質(zhì)體時對生物體不利。因此， 理想的是水溶性有機溶劑的濃度為，加熱一種以上的脂質(zhì)與水溶液混合而成的混合物時能 夠溶解脂質(zhì)的最低濃度。具體來說，理想的是所述水溶性有機溶劑占水溶液總?cè)萘康捏w積 百分比為5 30%。水溶性有機溶劑為叔丁醇時，占水溶液總?cè)萘康捏w積百分比為12 18%為 更好；水溶性有機溶劑為1-丙醇時，占水溶液總?cè)萘康捏w積百分比為5 19%為更好；水溶 性有機溶劑為2-丙醇時，占水溶液總?cè)萘康捏w積百分比為13 26%為更好；水溶性有機溶劑 為2 - 丁氧基乙醇時，占水溶液總?cè)萘康捏w積百分比為6 9%為更好?？梢灶A(yù)先將上述水溶性有機溶劑調(diào)制成上述所需濃度的水溶液再添加到脂質(zhì)中； 也可以先將水溶性有機溶劑添加到脂質(zhì)中，溶解脂質(zhì)成分后，再添加水溶劑至達到上述濃 度。加熱方法并沒有特別限定，例如，除可以采用將容器放入裝有熱水的浴槽內(nèi)的熱 水浴外，還可以采用在容器內(nèi)裝有混合物的狀態(tài)下直接烘烤加熱該容器的方法，或者將容 器放入電加熱器內(nèi)的方法等。加熱溫度只要是脂質(zhì)溶解于含有水溶性有機溶劑的水溶液的 溫度，或該溫度以上，但水溶液不產(chǎn)生白色混濁的溫度，就不限定于特定的溫度。加熱溫度 因脂質(zhì)的種類、脂質(zhì)的濃度、水溶性有機溶劑的種類等而不同，一般來說62、0°C的范圍，特 別是65 72°C的范圍為理想范圍。但是，以叔丁醇作為水溶性有機溶劑、用磷脂酰膽堿和膽 固醇作為脂質(zhì)時，加熱溫度的理想范圍為62 72°C。冷卻方法并沒有特別限定，例如，除可以采用將容器放入裝有冷水的浴槽內(nèi)的方 法外，還可以采用在容器內(nèi)裝有混合物的狀態(tài)下將該容器放入冰箱等的方法。冷卻溫度只 要是比加熱溫度低，并能生成脂質(zhì)體的溫度，就不作限定。例如，脂質(zhì)中使用了磷脂酰膽堿 和膽固醇時，冷卻溫度為62°C以下為理想。特別是加熱到72°C以上后，最好冷卻到62°C以 下。另外，冷卻速度為0. 50C /min以上為理想，1°C /min以上更為理想。
脂質(zhì)與含有水溶性有機溶劑的水溶液混合時，也可以加入作為滲透壓調(diào)節(jié)劑的二 糖類、多糖類等糖。理想的糖是二糖類中的蔗糖。蔗糖還能夠在水溶液狀態(tài)下與含有水溶 性有機溶劑的水溶液混合使用。這時，蔗糖水溶液的合適的濃度為5 70wt/Vol%，更合適的 濃度為8 50wt/vol%。在本發(fā)明的脂質(zhì)體的制備中，為使脂質(zhì)體懸濁液的粒度更均一，也可以配合運用 公知的整粒方法。例如，可用氣壓使脂質(zhì)體懸濁液通過有特定孔徑的膜，制備能適合所希望 的孔徑的脂質(zhì)體。通過該特定孔徑的膜的處理，可以進行一次或數(shù)次。
(3)膽固醇溶解方法(增大膽固醇對含有水溶性有機溶劑的水溶液的溶解量的方法) 脂質(zhì)中的膽固醇通常難溶于水，溶解于上述水溶性有機溶劑的比率低。但是，使上述含 有水溶性有機溶劑的水溶液與磷脂共存的話，通過加熱，膽固醇變得易溶解。具體地說，加 熱磷脂、膽固醇與上述水溶液混合而成的混合物，能夠使膽固醇在水溶液中容易溶解。加熱溫度只要是膽固醇溶于含有磷脂、水溶性有機溶劑等的水溶液的溫度，或該 溫度以上，但水溶液不產(chǎn)生白色渾濁的溫度便可。例如，用叔丁醇作為水溶性有機溶劑、用 L- α - 二棕櫚酰磷脂酰膽堿作為磷脂時，在62 72°C的溫度范圍，能夠使膽固醇在水溶液中 充分溶解。1摩爾磷脂對0.纊1.5摩爾范圍內(nèi)的膽固醇，膽固醇更易溶解。在62 72°C的溫 度范圍，膽固醇溶于含叔丁醇的水溶液中，全部液體呈透明色。進一步冷卻其溫度，使混合 液的溫度比62°C低時，產(chǎn)生白色渾濁，形成具有磷脂與膽固醇成分的脂質(zhì)體懸濁液。反之， 使溫度高于72°C時，混合液也成為白色懸濁液。(4)能夠使用的有機溶劑的選擇方法
通過以上的制備方法，能夠得到粒徑均勻的脂質(zhì)體。但是，某些有機溶劑不適用。因此， 通過使用作為候選的有機溶劑利用上述脂質(zhì)體的制備方法制備脂質(zhì)體，并檢查所制得的脂 質(zhì)體是否均一，能夠判斷該有機溶劑是否適用于這種制備方法，并選出實際上能夠適用的 有機溶劑。 實施例以下，說明本發(fā)明的實施例，但本發(fā)明不限于下述的實施例。1.脂質(zhì)體的原料
(a)磷脂
使用了日油株式會社制的L- α - 二棕櫚酰磷脂酰膽堿(DPPC)。(b)膽固醇
使用了 SIGMA公司制的膽固醇(Choi.)。(C)穩(wěn)定劑
使用了和光純藥工業(yè)株式會社制的蔗糖。(d)水溶性有機溶劑
使用了和光純藥工業(yè)株式會社制的叔丁醇(t-BuOH，特級)、和光純藥工業(yè)株式會社制 的1-丙醇(特級)、和光純藥工業(yè)株式會社制的2-丙醇(特級)、和光純藥工業(yè)株式會社制的 2 -丁氧基乙醇(特級)。
(e) (a)及(b)以外的脂質(zhì)
DPPG (二棕櫚酰磷脂酰甘油)、DPPE (二棕櫚酰磷脂酰乙醇胺)及HSPC (氫化大豆卵磷 脂)從日油株式會社購入。硬脂酰胺(SA)及雙十六烷基磷酸鹽(DCP)分別購自和光純藥工 業(yè)株式會社及SIGMA公司。
2.脂質(zhì)體的粒度分布測定方法
用動態(tài)光散射式粒度分布儀(英國馬爾文儀器有限公司〈Malvern Instruments Ltd.) 制，觀TA SIZER Nano-ZS)進行脂質(zhì)體的粒度分布的測定。用磷酸鹽緩沖生理鹽水(PBS) 稀釋并測定后述的實施例中調(diào)制的脂質(zhì)體。稀釋倍數(shù)為500(Γ10000倍左右。^TA SIZER Nano-ZS的測定值以平均粒徑Z-Average (d. nm)算出，同時算出的多分散系數(shù)(PDI)的值 作為評價脂質(zhì)體的粒度分布均一性的指標。另外，上述粒度分布儀的“Result quality”所示的測定結(jié)果，作為是否生成了具 有均一粒度分布的脂質(zhì)體的判斷標準。即滿足Malvern公司的粒徑測定的質(zhì)量判斷標準 時，"Result quality”顯示為“Good” ；測定結(jié)果不顯示為“Good”時，即判斷為測試樣品不 符合動態(tài)光散射、粒度分布不均一。
3.實驗例
3. 1關(guān)于磷脂及膽固醇的溶解溫度范圍
稱量380mg的DPPC及200mg的膽固醇放入玻璃樣品小瓶中，然后添加20mL的IOwt/ 蔗糖及4. 25mL的t_Bu0H的混合液。該樣品小瓶在80°C水浴中邊保溫邊攪拌10分鐘。 在80°C時溶液呈白色渾濁。然后，繼續(xù)攪拌的同時停止水浴的保溫，在室溫下進行自然冷 卻。水浴的水溫從80°C冷卻至35°C大概需要90分鐘。80°C時溶液呈白色渾濁，而從72°C 左右開始成為稍青白色透明狀態(tài)并維持該狀態(tài)直到62°C左右。62°C左右溶液開始出現(xiàn)白色 渾濁，58°C時完全成為白色渾濁狀態(tài)。以上的狀態(tài)變化為可逆，從室溫開始逐步升溫的情況 下也可以觀察到同樣的狀態(tài)變化。
3. 2關(guān)于有無磷脂單獨溶解及膽固醇單獨溶解
分別稱量75.9mg的DPPC或40mg的膽固醇放入玻璃樣品小瓶中，然后向各自的玻璃樣 品小瓶中添加4mL的lOwt/voW蔗糖及0. 85mL的t_Bu0H的混合液，進行與3. 1 一樣的實 驗。僅使用了 DPPC時，從80°C到50°C之間，水溶液為透明狀態(tài)。48°C左右成為稍青白色透 明狀態(tài)并維持其狀態(tài)直到大約35°C，從大約35°C開始急劇變成白色渾濁狀態(tài)。另一方面， 僅使用了膽固醇時，在任何溫度下，都出現(xiàn)附著在樣品小瓶壁的膽固醇凝聚塊，不能達到透 明狀態(tài)。
3. 3 t-Bu0H的濃度
向玻璃樣品小瓶中加入32. 7mg的DPPC和17. 2mg的膽固醇。以表1所示的容量比混 合t-BuOH和2mL的50%蔗糖溶液到該脂質(zhì)混合物中之后，添加純水使最終容量為10mL，從 而調(diào)制到t-BuOH的濃度發(fā)生各種變化的溶液。表 1CN 102137713 A
說明書
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t-BmOH的最終濃度I I-BbOH f' (volfto ) (iaL) 10 1糖S I純水ii加后的容籰 (ml ) (inL) 2 10I^m ι ‘ Π Τ5 “ _16__IA_ IIFs ,.、 I .1 24 4 6 26 _2S_I_2 S_2 丨 2 1 10 ‘ _2_I_10_ 2 I 10 2 I 10 2 I 10 2 1 10 2 I 10 2 1 10
將各樣品小瓶在90°C的熱水浴中攪拌10分鐘后，從熱水浴中取出，在室溫下攪拌冷 卻。冷卻后，取出一部分生成的脂質(zhì)體懸濁液用PBS (或lOwt/voW)蔗糖)稀釋，用觀TA SIZER Nano-ZS進行粒度分布測定。表2表示其結(jié)果。另外，作為其中一個例子，圖1表示 在t-BuOH的濃度為16voW)的條件下制備的脂質(zhì)體懸濁液的粒度分布圖。表2中的星號 (* )表示不滿足Malvern公司的粒徑測定的質(zhì)量判斷標準的不均一的粒子。
表 2
如表2及圖1所示，在t-BuOH的濃度為12 18vol%的范圍中，能夠制備粒徑極均一的 脂質(zhì)體。
3.4 1-丙醇、2-丙醇、2 - 丁氧基乙醇等的濃度
除了將t-BuOH變更為1-丙醇、2-丙醇或2 - 丁氧基乙醇外，用與3. 3同樣的方法，測 出獲得理想的水溶性溶劑時的濃度范圍。
表 權(quán)利要求
1.一種脂質(zhì)體的制備方法，包括加熱含有一種以上的脂質(zhì)、水、有機溶劑的混合物的加熱工序；所述加熱工序之后，冷卻所述混合物的冷卻工序。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的脂質(zhì)體的制備方法，其特征在于，所述混合物為所述脂質(zhì)與 含有水溶性有機溶劑的水溶液混合而成的混合物。
3.根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的脂質(zhì)體的制備方法，其特征在于，所述水溶液含有占總 容量的體積百分比為5 30%的所述水溶性有機溶劑。
4.根據(jù)權(quán)利要求廣3任一項所述的脂質(zhì)體的制備方法，其特征在于，所述水溶性有機 溶劑含有從叔丁醇、1-丙醇、2-丙醇及2 - 丁氧基乙醇中選取的一種或兩種以上的有機溶 劑。
5.一種膽固醇溶解方法，包括加熱膽固醇與磷脂及含有水溶性有機溶劑的水溶液混 合而成的混合物的工序。
6.根據(jù)權(quán)利要求5所述的膽固醇溶解方法，其特征在于，所述水溶液含有占總?cè)萘康?體積百分比為5 30%的所述水溶性有機溶劑。
7.根據(jù)權(quán)利要求5或6所述的膽固醇溶解方法，其特征在于，所述水溶性有機溶劑含 有從叔丁醇、1-丙醇、2-丙醇及2 - 丁氧基乙醇中選出的一種或兩種以上的有機溶劑。
8.—種能夠用于脂質(zhì)體制備的有機溶劑的選擇方法，包括使用作為候選的有機溶劑通過權(quán)利要求廣3所述的任一種方法制備脂質(zhì)體的工序；檢查所述脂質(zhì)體是否均一的工序。
全文摘要
一種脂質(zhì)體的制備方法，包括將一種以上的脂質(zhì)、與含有水溶性有機溶劑的水溶液混合的第一混合工序，將上述脂質(zhì)與上述水溶液混合而成的混合物加熱到上述脂質(zhì)溶解于上述水溶液中的溫度的加熱工序，上述加熱工序后冷卻至脂質(zhì)體生成的溫度的冷卻工序，通過上述能夠容易得到粒徑均勻的、高包封率的脂質(zhì)體。
文檔編號B01J13/04GK102137713SQ20098013371
公開日2011年7月27日 申請日期2009年12月24日 優(yōu)先權(quán)日2008年12月24日
發(fā)明者三部泰彥, 清水佳隆 申請人:生物制藥開發(fā)股份有限公司