專利名稱：組合攪動器的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明報道一種攪拌器、一種包括該攪拌器的裝置和該攪拌器用于細(xì)胞培育的用途。該攪拌器包括至少一個軸向輸送元件和至少一個徑向輸送元件，例如作為徑向輸送元件的錨式葉輪和作為軸向輸送元件的一個或多個傾斜葉片式葉輪的組合。使用該攪拌器使得改善了滲析過程中的混合且特別是降低了生物淤積(biofowl)并提高了傳質(zhì)速率。
背景技術(shù)：
借助于原核細(xì)胞和真核細(xì)胞產(chǎn)生重組蛋白質(zhì)、疫苗和抗體在現(xiàn)代藥品生產(chǎn)中起到重要作用。為了產(chǎn)生復(fù)雜的翻譯后修飾的蛋白質(zhì)和抗體，主要使用動物衍生細(xì)胞。然而，使用動物衍生細(xì)胞由于這些細(xì)胞的特定特征例如培養(yǎng)介質(zhì)、對限制和抑制(例如受乳酸鹽、 CO2、氨酸鹽等限制和抑制)的敏感、敏感的外隔膜(剪切應(yīng)力)、低比率(specific rate) 和對培養(yǎng)條件的變化的敏感(例如，由于局部不同質(zhì)、PH變化、p02變化等)而對發(fā)酵過程的需求高。當(dāng)設(shè)計生物反應(yīng)器時且對于過程控制必須考慮這些特性。近年來，已開發(fā)各種用于培養(yǎng)細(xì)胞的反應(yīng)器。不論類型如何，反應(yīng)器都必須能夠滿足以下基本技術(shù)功能充足的懸浮及同質(zhì)化、充足的材料和熱傳遞以及細(xì)胞上最小化的剪切應(yīng)力。攪拌罐式反應(yīng)器尤其適合工業(yè)使用。在這種反應(yīng)器中，通過機械攪拌傳入滿足基本功能所需的能量。為了實現(xiàn)高產(chǎn)品滴定度和符合規(guī)格的產(chǎn)品質(zhì)量，除細(xì)胞株發(fā)育、介質(zhì)組分和反應(yīng)器設(shè)計以外該反應(yīng)器的操作模式特別地起到重要作用。一般采用以下操作模式分批過程、 補料分批過程、保留或不保留細(xì)胞的連續(xù)過程(例如灌注或恒化)以及半連續(xù)過程例如內(nèi)部滲析或外部滲析。為了防止?fàn)I養(yǎng)限制，以濃縮溶液的形式對反應(yīng)器添加補料溶液(所謂的補料分批過程)。為了避免受細(xì)胞新陳代謝的最終產(chǎn)物抑制，必須從反應(yīng)器或者從反應(yīng)器中的培養(yǎng)介質(zhì)去除細(xì)胞的新陳代謝產(chǎn)物。這例如能夠通過灌注或滲析來執(zhí)行。在滲析的情況下，外部滲析與內(nèi)部滲析之間有一定區(qū)別。EP 1474223報道了一種動態(tài)混合器。DE 102005053333中報道了一種動物細(xì)胞培養(yǎng)裝置，該動物細(xì)胞培養(yǎng)裝置包括用于攝取細(xì)胞懸浮液的容器、用于將氣體供給到細(xì)胞懸浮液內(nèi)和從細(xì)胞懸浮液排出氣體的裝置和用于在細(xì)胞懸浮液中產(chǎn)生電流的裝置。EP 0224800中報道了用于細(xì)胞培養(yǎng)的方法和設(shè)備。Nomura, Τ.等人，J. Chem. Eng. Jap. 29(1996) 134-138報道了用于圓底燒瓶的折疊錨式葉輪的發(fā)育和混合特征。WO 01/41919中報道了一種用于在攪拌罐式反應(yīng)器中混合氣體-液體的葉輪通氣管式攪拌系統(tǒng)。US 4，438，074中報道了一種連續(xù)聚合式反應(yīng)器。EP-A 0200886中報道了一種用于將氣體轉(zhuǎn)移到液體中的攪拌系統(tǒng)和方法。EP-B 0049229中報道了一種具有攪拌裝置的烹飪設(shè)備
發(fā)明內(nèi)容
如本文報道的攪拌器至少i)與其它攪動器相比允許培養(yǎng)介質(zhì)的快速混合，例如， 以用于經(jīng)由液體或培育介質(zhì)表面導(dǎo)入諸如酸或堿之類的修正劑，ii)減少泡沫形成，iii) 減少滲析過程中的生物積垢，和iv)由于作為不同的輸送元件的組合的結(jié)果的朝滲析模塊的直接正交流動而增加滲析過程中的傳質(zhì)。本文報道一種攪拌器(組合攪動器)，該攪拌器包括相對于攪拌器的軸的至少一個軸向輸送元件和至少一個徑向輸送元件，其中所述至少一個軸向輸送元件的最大直徑等于或小于徑向輸送元件的內(nèi)徑屯。如本文報道的一方面是一種攪拌器，該攪拌器包括-包括至少兩個攪動器葉片的一個徑向輸送元件，和- 一個或多個軸向輸送元件，每個軸向輸送元件都包括至少兩個攪動器葉片，其中徑向輸送元件的攪動器葉片彼此平行并與攪拌器的軸心線(shaft axis)平行，并且其中所有軸向輸送元件的外徑等于或小于徑向輸送元件的內(nèi)徑，并且其中所有軸向輸送元件單獨連接到徑向輸送元件，并且其中所有軸向輸送元件位于徑向輸送元件內(nèi)，并且其中所有輸送元件相對于彼此和相對于攪拌器的軸心線具有固定的空間取向。在一個實施例中，該攪拌器包括1至5個軸向輸送元件，或者，在另一個實施例中， 包括1至3個軸向輸送元件，或者，在再一個實施例中，包括1個或2個軸向輸送元件。在一個實施例中，所述至少一個軸向輸送元件位于從攪拌器的頭部確定的攪拌器的上部五分之四中并與攪拌器的頭部相距最大距離h4/5。在再一個實施例中，一個軸向輸送元件從徑向輸送元件的葉片頂部位于80%的最大距離處(S卩，相距0.他的最大距離)和/或一個軸向輸送元件從徑向輸送元件的葉片頂部位于20%的最大距離處(即，相距0. 2h的最大距離)。 在又一個實施例中，所述至少一個軸向輸送元件和所述至少一個徑向輸送元件一起形成單個元件。在另一個實施例中，徑向輸送元件的相對的攪動器葉片通過軸向輸送元件的兩個相對的攪動器葉片彼此連結(jié)。在一個實施例中，所有軸向輸送元件的直徑相同。在另一個實施例中，從旋槳式攪拌器、斜葉式(pitched-blade)攪拌器或傾斜葉片式攪拌器中彼此獨立地選擇軸向輸送元件。如果軸向輸送元件的直徑小于徑向輸送元件的內(nèi)徑，則軸向輸送元件的攪動器葉片的末端與徑向輸送元件的內(nèi)緣之間的空間距離通過連接器搭接/橋接。在一個實施例中，該連接器選自金屬絲、桿、薄板和盤狀件。在又一個實施例中，所有輸送元件——即軸向輸送元件及徑向輸送元件——當(dāng)攪拌器在培育器皿中操作時以每時間單位相同的轉(zhuǎn)數(shù)圍繞攪拌器的軸心線旋轉(zhuǎn)。在一個實施例中，輸送元件被永久地結(jié)合在一起并且攪拌器由一個部件組成，即，兩種元件由同一旋轉(zhuǎn)軸驅(qū)動并且圍繞攪拌器的軸心線每時間單位具有相同的轉(zhuǎn)數(shù)。攪拌器直徑(d)與培育器皿直徑(D)的比例d/D在一個實施例中為從0.2至0.8， 在另一個實施例中為從0. 3至0. 6，并且在再一個實施例中為從0. 33至0. 5。葉片高度(h) 與攪拌器直徑(d)的比例h/d在另一個實施例中為從0.5至5，在另一個實施例中為從1 至4，并且在再一個實施例中為從1至3。攪拌器葉片寬度(b)與攪拌器直徑(d)的比例 b/d在再另一個實施例中為從0. 05至0. 3，在另一個實施例中為從0. 1至0. 25。術(shù)語“為從...至”表示包括所列邊界值的范圍。在另一個實施例中，攪拌器直徑(d)選自500mm、 600mm、700mm、800mm、1000mm、1200mm、1400mm、1600mm、1800mm 和 2000mm。在又一個實施例中，攪拌器葉片寬度(b)選自 42mm、60mm、89mm、108mm、133mm。 在一個實施例中，所述一個徑向輸送元件是錨式葉輪。在又一個實施例中，連接徑向輸送元件的單獨的攪動器葉片的元件是軸向輸送元件的攪動器葉片(連接用攪動器葉片)。在一個實施例中，連接用攪動器葉片起到軸向輸送元件作用的20%至100%，在另一個實施例中，起到軸向輸送元件作用的50%到100%，并且在再一個實施例中，起到軸向輸送元件作用的大約100%。術(shù)語“大約”表示給出的值是跨越該值左右+/-10%的范圍的中心點。如果該值是百分比值，則“大約”還表示平均(數(shù))+/-10%，但不能超過值100%。在又一個實施例中，軸向輸送元件是傾斜葉片式攪動器。在另一個實施例中，徑向輸送元件是錨式葉輪并且軸向輸送元件是傾斜葉片式攪動器，其中該傾斜葉片式攪動器設(shè)計成起到錨式葉輪的葉片的連接元件的作用。在另一個實施例中，徑向輸送元件的所有相對的葉片經(jīng)由軸向輸送元件的葉片彼此連接。在一個實施例中，攪拌器由一個或兩個軸向輸送元件和一個徑向輸送元件相對于攪拌器的軸心線的組合組成。在另一個實施例中，徑向輸送元件是錨式葉輪并且軸向輸送元件是兩個傾斜葉片式攪動器，其中傾斜葉片式攪動器的葉片設(shè)計成起到相對的錨式葉輪葉片的連接元件的作用。軸向輸送元件的高度與徑向輸送元件的葉片寬度的比例hSB/b為從0. 5至4，在另一個實施例中為從0. 8至3，并且在再一個實施例中為從1至2。在另一個實施例中，傾斜葉片式攪動器的攪動器葉片相對于攪拌器的軸心線的傾角/俯仰角為從10°至80°，在又一個實施例中為從至60°，并且在再一個實施例中為從40°至50°。在一個實施例中，徑向輸送元件具有1至8個攪動器葉片，在另一個實施例中具有 1至4個攪動器葉片，并且在再一個實施例中具有4個攪動器葉片。軸向輸送元件在一個實施例中具有1至10個攪動器葉片，在另一個實施例中具有2至6個攪動器葉片，并且在再一個實施例中具有4個攪動器葉片。在另一個實施例中，徑向輸送元件和軸向輸送元件具有相同的攪動器葉片數(shù)。在一個實施例中，攪拌器的軸上的鎖緊裝置從攪拌器頭部看去位于下部三分之一中并且縮小部分(減縮部，漸縮部)的高度OO與緊固蓋的高度OO的比例hu/hm為從ο. 05 至1，在另一個實施例中為從0. 2至0. 8，并且在再一個實施例中為從0. 3至0. 5。攪拌器在一個實施例中具有至少200mm的高度，在另一個實施例中具有從200mm 至5000mm的高度。在另一個實施例中，攪拌器的高度是徑向輸送元件的葉片的高度h。本文一方面還報道了一種包括培育器皿和如本文報道的攪拌器的裝置。在一個實施例中，攪拌器和培育器皿形成功能單元，即，攪拌器位于培育器皿內(nèi)并且能夠不受任何空間限制地在培育器皿內(nèi)旋轉(zhuǎn)。在一個實施例中，該裝置還包括滲析模塊。在一個實施例中， 培育器皿為攪拌罐式反應(yīng)器。在又一個實施例中，培育器皿是充氣的或浸入充氣攪拌罐式反應(yīng)器。在一個實施例中，培育器皿包括從2至4個擋板。在另一個實施例中，擋板在培育器皿的內(nèi)表面的圓周周圍等距地隔開。攪拌器直徑(d)與培育器皿直徑(D)的比例d/D在一個實施例中為從0.2至0.8， 在另一個實施例中為從0. 3至0. 6，并且在再一個實施例中為從0. 33至0. 5。在另一個實施例中，反應(yīng)器皿的填充高度(H)與培育器皿直徑(D)的比例H/D為從1.0至2. 5，在又一個實施例中為從1. 1至2.0，并且在再一個實施例中為從1.4至1.8。在一個實施例中，培育器皿具有從5L至25，000L的工作容積。本文在一方面還報道了如本文報道的攪拌器或裝置的用途。在一個實施例中，該用途是用于培育細(xì)胞以用于產(chǎn)生多肽，即，用于培育表達(dá)由異源核酸編碼的多肽的細(xì)胞。在一個實施例中，所述培養(yǎng)為滲析。在又一個實施例中，在浸入充氣攪拌罐式反應(yīng)器中執(zhí)行所述培育。在另一個實施例中，所述細(xì)胞是真核細(xì)胞。在再一個實施例中，所述細(xì)胞是哺乳動物細(xì)胞。在再又一個實施例中，所述細(xì)胞選自CHO細(xì)胞、BHK細(xì)胞、NSO細(xì)胞、COS細(xì)胞、PER. C6細(xì)胞、Sp2/0細(xì)胞和HEK 293細(xì)胞。在一個實施例中，所述多肽是抗體。在又一個實施例中，所述抗體是抗 CD20、CD22、HLA-DR、CD33、CD52、EGFR、G250、GD3、HER2、PSMA, CD56、VEGF, VEGF2、CEA、Lewis Y抗原、IL-6受體或IGF-1受體的抗體。本文在一方面還報道了一種用于產(chǎn)生多肽的方法，該方法包括a)提供包含編碼多肽的核酸的細(xì)胞，b)提供如本文報道的裝置，c)在裝置中在培育介質(zhì)中培育細(xì)胞，其中攪拌器在培育器皿中提供湍流，和d)從細(xì)胞或培育介質(zhì)回收多肽并由此產(chǎn)生多肽。在一個實施例中，該方法用于培育表達(dá)由異源核酸編碼的多肽的細(xì)胞。在一個實施例中，所述培育為滲析。在又一個實施例中，在浸入充氣攪拌罐式反應(yīng)器中執(zhí)行所述培育。在另一個實施例中，所述細(xì)胞是真核細(xì)胞。在再一個實施例中，所述細(xì)胞是哺乳動物細(xì)胞。在再又一個實施例中，所述細(xì)胞選自CHO細(xì)胞、BHK細(xì)胞、NSO細(xì)胞、COS細(xì)胞、PER. C6 細(xì)胞、Sp2/0細(xì)胞和HEK 293細(xì)胞。在一個實施例中，所述多肽是抗體。在另一個實施例中， 所述抗體是抗 CD20、CD22、HLA-DR, CD33、CD52、EGFR, G250、GD3、HER2、PSMA, CD56、VEGF, VEGF2、CEA、Lewis Y抗原、IL-6受體或IGF-1受體的抗體。本發(fā)明的詳細(xì)描述本文報道一種攪拌器，該攪拌器為組合攪動器，包括軸向輸送元件和一個或多個限定和一體的軸向輸送元件。術(shù)語“元件”表示攪動器葉片的(功能)單元，該攪動器葉片關(guān)于距離和角度相對于彼此處于固定的空間構(gòu)型。徑向輸送元件表示攪動器葉片相對于軸心線不具有俯仰角的攪動器。軸向輸送元件表示攪動器葉片相對于軸心線具有一俯仰角的攪動器。在一個實施例中，輸送元件的攪動器葉片是矩形板，不過可以使用其它幾何形狀。 相對于攪拌器的軸心線來表示元件的輸送方向。軸向輸送元件，尤其是其單獨的葉片，作為連接件布置在徑向輸送元件的葉片之間。本文還報道了一種包括該攪拌器和培育器皿的裝置。還報道了該攪拌器和該裝置在細(xì)胞培育方面的用途，特別是在諸如內(nèi)部滲析或外部滲析的半連續(xù)過程中的用途。

圖1示出如本文報道的攪拌器的示例性實施例。輸送元件中的每一個都由限定數(shù)量的攪動器葉片組成。每個葉片要么與旋轉(zhuǎn)軸直接連接，要么經(jīng)由輪轂與旋轉(zhuǎn)軸連接。獨立于輸送元件的每個攪動器葉片具有外緣和內(nèi)緣。 每個攪動器葉片的與軸心線的距離最大的部分被表示為葉片的末端。每個輸送元件都具有外徑和內(nèi)徑。例如，軸向輸送元件的外徑是相對的攪動器葉片的末端之間的最大距離并且徑向輸送元件的內(nèi)徑是相對的攪動器葉片的內(nèi)緣之間的最小距離。在如本文報道的攪拌器中，軸向輸送元件位于徑向輸送元件內(nèi)。因此，(所有)軸向輸送元件的外徑等于或小于徑向輸送元件的內(nèi)徑，從而允許軸向輸送元件被安放在徑向輸送元件內(nèi)部。軸向輸送元件(中的每一個)的一些攪動器葉片連接徑向輸送元件的相對的攪動器葉片。由于徑向輸送元件未通過該連接彼此直接連接，因此軸向輸送元件(中的每一個)單獨(即，自行)與徑向輸送元件連接。軸向輸送元件的連接攪動器葉片不需要作為用于徑向輸送元件的攪動器葉片之間的整個距離的攪動器葉片形成。因此，軸向輸送元件的連接葉片不需要在整個距離上具有軸向輸送功能，即，不必在整個距離上作為攪動器葉片形成。也就是說，軸向輸送元件的攪動器葉片可以比與徑向輸送元件的攪動器葉片的內(nèi)緣的空間距離短。該空間間隙由不具有特殊形式但可供用于將軸向輸送元件的葉片末端與徑向輸送元件的葉片內(nèi)緣連接的連接器填充。徑向輸送元件的高度h大于軸向輸送元件的高度hSB的10倍。因此，軸向輸送元件中的每一個能夠被安放在相對于徑向輸送元件的高度不同的位置。在一個實施例中，軸向輸送元件位于(即，被安放在)徑向輸送元件相對于攪拌器的頭部K的總高度h的80% 的最大距離內(nèi)。這表示軸向輸送元件與攪拌器的頭部的最大距離為0.他。旋轉(zhuǎn)軸(也稱為驅(qū)動軸)延伸通過其中使用了攪拌器的培育器皿的縱向軸線。對主徑向輸送葉輪、例如對錨式葉輪的修改是一體形成在徑向輸送元件的上部和 /或中部和/或下部區(qū)域內(nèi)的(沿軸向)向下輸送的傾斜葉片式攪動器。如本文報道的攪拌器尤其提供了液體溶液的改善的混合，例如以便經(jīng)由液體表面導(dǎo)入修正劑，例如，酸或堿、營養(yǎng)溶液、消泡劑或者還有(X)2或02。此外，該攪拌器減少了泡沫形成且在滲析過程中減少了生物積垢并且通過向滲析模塊的直接正交流動而增加了傳質(zhì)。已發(fā)現(xiàn)，另外的軸向輸送元件出乎意料地并未增加剪切應(yīng)力，同時改善了滲析模塊中的混合和傳質(zhì)。在半連續(xù)培養(yǎng)過程例如外部滲析或內(nèi)部滲析中，跨隔膜將基質(zhì)供給至反應(yīng)器并同時抑制所培養(yǎng)的細(xì)胞的成分/新陳代謝產(chǎn)物被引走。通過擴散進(jìn)行這種材料交換。因此， 主要影響因素是占主導(dǎo)的濃度差、隔膜材料、隔膜表面、隔膜材料內(nèi)部的相應(yīng)化合物的擴散系數(shù)和由抵靠隔膜的流動決定的相界面的厚度。當(dāng)在高細(xì)胞密度發(fā)酵中采用滲析時，該滲析是類似于灌注的半連續(xù)過程，其中附裝于反應(yīng)器內(nèi)的(中空纖維)滲析模塊提供培養(yǎng)介質(zhì)與新鮮營養(yǎng)介質(zhì)之間的交換區(qū)。營養(yǎng)介質(zhì)經(jīng)滲析模塊從存儲容器泵送并此后再次回到存儲容器內(nèi)(示意圖參見圖幻。該滲析模塊能夠位于反應(yīng)器外部(外部滲析)或反應(yīng)器內(nèi)(內(nèi)部滲析)。相同的物理定律適用于兩種操作模式。因此，本文報道了一種包括如本文報道的攪拌器和培育器皿的裝置。在一個實施例中，該裝置還包括滲析模塊。該裝置的構(gòu)件以如下方式確定尺寸，即，它們能夠發(fā)揮它們的預(yù)期作用，即，培育器皿能夠攝取培育介質(zhì)，攪拌器能夠混合介質(zhì)并且將添加的化合物分散到其中，并且滲析模塊能夠提供新鮮介質(zhì)并引走由所培育的細(xì)胞分泌的新陳代謝化合物。因此，該攪拌器具有允許在有滲析模塊和無滲析模塊的情況下都可以在器皿內(nèi)不受妨礙地旋轉(zhuǎn)的直徑。已發(fā)現(xiàn)，在如本文報道的裝置下，能夠有利地執(zhí)行作為灌注培育或者作為滲析培育的高細(xì)胞密度培育。在一個實施例中，在能夠?qū)崿F(xiàn)到培育介質(zhì)的獨立于雷諾數(shù)的恒定功率輸入的攪拌器轉(zhuǎn)速下執(zhí)行培育，即，在培育期間在培育器皿中提供湍動的培育介質(zhì)流。在如本文報道的裝置下，與已知的攪動器相比可以在較低的攪拌器轉(zhuǎn)速但在相同的功率輸入下培育對剪切敏感的哺乳動物細(xì)胞。培育器皿的形式不受限制。在一個實施例中，培育器皿是圓柱形器皿。在另一個
8實施例中，培育器皿為攪拌罐式反應(yīng)器。培育器皿可具有任何尺寸。在一個實施例中，培育器皿具有從5L至25，000L的工作容積。來自新鮮營養(yǎng)介質(zhì)的成分從滲析模塊的內(nèi)部經(jīng)半滲透中空纖維膜擴散到反應(yīng)器內(nèi)，同時所培育的細(xì)胞的代謝物借助于濃度差沿反方向從反應(yīng)器擴散到營養(yǎng)介質(zhì)中。其目的在于保持抑制反應(yīng)器中的代謝物的絕對濃度盡可能低(稀釋)并同時將必需營養(yǎng)物的濃度盡可能長時間地維持在最佳培育水平。這使得培育條件與不進(jìn)行滲析的過程相比得到改善，從而能夠?qū)崿F(xiàn)更高的最大細(xì)胞密度或產(chǎn)品滴定度。滲析模塊中的傳輸過程能夠以等同的方式被描述為與第一菲克(Fick’ s)定律相結(jié)合地通過雙膜理論在氣泡上傳質(zhì)。因此，假設(shè)線性梯度基于中空纖維滲析模塊的交換面積AH，那么根據(jù)方程1有效傳遞的擴散通量Jrff為
權(quán)利要求
1.一種攪拌器，包括-包括至少兩個攪動器葉片的一個徑向輸送元件，和-一個或多個軸向輸送元件，每個軸向輸送元件都包括至少兩個攪動器葉片，其中所述徑向輸送元件的所述攪動器葉片彼此平行，其中所有軸向輸送元件的外徑等于或小于所述徑向輸送元件的內(nèi)徑，其中所有軸向輸送元件單獨連接到所述徑向輸送元件，其中所有軸向輸送元件位于所述徑向輸送元件內(nèi)，并且其中所有輸送元件相對于彼此具有固定的空間取向。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的攪拌器，其特征在于，所述軸向輸送元件的數(shù)量為1或2或3。
3.根據(jù)前述權(quán)利要求中任一項所述的攪拌器，其特征在于，一個軸向輸送元件位于從所述徑向輸送元件的所述葉片的頂部80%的最大距離處和/或一個軸向輸送元件位于從所述徑向輸送元件的所述葉片的頂部20%的最大距離處。
4.根據(jù)前述權(quán)利要求中任一項所述的攪拌器，其特征在于，所述徑向輸送元件的相對的攪動器葉片通過軸向輸送元件的兩個相對的攪動器葉片彼此連結(jié)。
5.根據(jù)前述權(quán)利要求中任一項所述的攪拌器，其特征在于，所述徑向輸送元件是錨式葉輪。
6.根據(jù)前述權(quán)利要求中任一項所述的攪拌器，其特征在于，所述軸向輸送元件是傾斜葉片式攪動器。
7.根據(jù)權(quán)利要求6所述的攪拌器，其特征在于，所述傾斜葉片式攪動器的所述攪動器葉片相對于所述攪拌器的軸心線的俯仰角介于10°與80°之間。
8.根據(jù)前述權(quán)利要求中任一項所述的攪拌器，其特征在于，所述徑向輸送元件具有1 至8個攪動器葉片。
9.根據(jù)前述權(quán)利要求中任一項所述的攪拌器，其特征在于，所述一個或多個軸向輸送元件具有彼此獨立的1至10個攪動器葉片。
10.根據(jù)前述權(quán)利要求中任一項所述的攪拌器，其特征在于，所述徑向輸送元件具有至少為200mm的高度。
11.一種在培育器皿內(nèi)包括根據(jù)權(quán)利要求1至10中任一項所述的攪拌器的裝置。
12.根據(jù)權(quán)利要求11所述的裝置，其特征在于，還包括滲析模塊。
13.根據(jù)權(quán)利要求11或12所述的裝置，其特征在于，所述培育器皿為攪動罐式反應(yīng)器。
14.根據(jù)權(quán)利要求11至13中任一項所述的裝置，其特征在于，所述培育器皿是浸入充氣攪動罐式反應(yīng)器。
15.根據(jù)權(quán)利要求11至14中任一項所述的裝置，其特征在于，攪拌器直徑(d)與培育器皿直徑⑶的比例d/D為從0. 2至0. 8。
16.根據(jù)權(quán)利要求11至15中任一項所述的裝置，其特征在于，所述培育器皿的充裝高度(H)與培育器皿寬度⑶的比例H/D為從1. 0至2. 5。
17.根據(jù)權(quán)利要求1至10中任一項所述的攪拌器或根據(jù)權(quán)利要求11至16中任一項所述的裝置用于培育表達(dá)多肽的細(xì)胞的用途。
18.一種用于產(chǎn)生多肽的方法，包括a)提供包含對所述多肽進(jìn)行編碼的核酸的細(xì)胞，b)提供如本文報道的裝置，c)在所述裝置中在培育介質(zhì)中培育細(xì)胞，其中所述攪拌器在所述培育器皿內(nèi)提供湍流，和d)從所述細(xì)胞或培育介質(zhì)回收所述多肽并由此產(chǎn)生多肽。
19.根據(jù)權(quán)利要求17所述的用途或根據(jù)權(quán)利要求18所述的方法，其特征在于，所述培育為滲析。
20.根據(jù)權(quán)利要求17或19所述的用途或根據(jù)權(quán)利要求18或19所述的方法，其特征在于，所述細(xì)胞為哺乳動物細(xì)胞。
21.根據(jù)權(quán)利要求20所述的用途或方法，其特征在于，所述哺乳動物細(xì)胞選自CHO細(xì)胞、BHK細(xì)胞、NSO細(xì)胞、COS細(xì)胞、PER. C6細(xì)胞、Sp2/0細(xì)胞、或HEK 293細(xì)胞。
22.根據(jù)權(quán)利要求17和19至21中任一項所述的用途或根據(jù)權(quán)利要求18至21中任一項所述的方法，其特征在于，所述多肽為抗體。
全文摘要
本發(fā)明申請描述一種攪拌器，該攪拌器包括至少一個軸向輸送元件和至少一個徑向輸送元件相對于攪拌器的旋轉(zhuǎn)軸的組合，其中所述至少一個軸向輸送元件的最大直徑等于或小于徑向輸送元件的內(nèi)徑di。在一個實施例中，根據(jù)本發(fā)明的攪拌器是一個錨式攪動器與至少一個傾斜葉片式攪動器的組合。此外，描述了根據(jù)本發(fā)明的攪拌器在滲析方法中用于培養(yǎng)細(xì)胞的用途。
文檔編號B01F7/00GK102458629SQ201080024799
公開日2012年5月16日 申請日期2010年6月2日 優(yōu)先權(quán)日2009年6月5日
發(fā)明者A·肖爾茨, C·雷澤, H·特貝, M·延茨施, M·波爾沙伊特, M·萊希納 申請人:弗·哈夫曼-拉羅切有限公司