專利名稱：一種表面多孔的plga微球的制備方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及聚合物微球的制備技術(shù)，特別涉及一種用0/W溶劑揮發(fā)法制備PLGA表面多孔微球的方法。
背景技術(shù)：
聚乳酸-羥基乙酸(PLGA)是一種可生物降解且降解速度可控的功能性高分子有機(jī)化合物，無毒，具有良好的生物相容性、成囊性和成膜性，因其是由兩種單體-乳酸和羥基乙酸聚合而成，乳酸(LA)和羥基乙酸(GA)的比例，會(huì)影響PLGA的機(jī)械強(qiáng)度和可降解性。在美國PLGA通過FDA認(rèn)證，被正式作為藥用輔料收錄進(jìn)美國藥典，其在生物醫(yī)學(xué)工程領(lǐng)域有廣泛的用途目前已被制作為可降解縫合線、藥物緩釋載體和組織工程支架材料等，其中 PLGA微球作為蛋白質(zhì)、酶類或藥物的載體，是研究的熱點(diǎn)。制備微球的物理化學(xué)方法主要有3大類即相分離法、噴霧干燥法和溶劑蒸發(fā)法。噴霧干燥法制備微球，操作相對(duì)簡單，但需針對(duì)不同的聚合物材料選擇適當(dāng)?shù)母稍餃囟?，且?duì)微球粒徑的控制非常困難。相分離法制備微球需要使用大量有機(jī)溶劑作為凝聚劑，但這些溶劑最終較難從微球產(chǎn)品中移除，從而帶來毒性、環(huán)境污染、有機(jī)溶劑殘留等問題，且相分離方法不適合制備更小粒徑的微球。溶劑揮發(fā)法，溶劑揮發(fā)法是一種制備多孔微球的常規(guī)簡單方法?，F(xiàn)在也普遍采用。是從乳狀液中除去分散相揮發(fā)性溶劑以制備微球的方法，可以將微球的粒徑控制在微納米尺度范圍內(nèi)，既不需要提高溫度，引入高壓裝置，也不需要引起相分離的凝聚劑。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的在于為了提供一種表面多孔的PLGA微球的制備方法，工藝簡單，周期短，且適用于大規(guī)模生產(chǎn)。本發(fā)明的另一個(gè)目的在于提供一種表面多孔的PLGA微球，粒徑均一，表面多孔，
形貌結(jié)構(gòu)統(tǒng)一。本發(fā)明提供的技術(shù)方案如下一種表面多孔的PLGA微球的制備方法，其特征在于包括以下步驟(I)油相溶液的制備將PLGA加入到有機(jī)溶劑中，攪拌溶解后，加入油相表面活性齊U，混勻，滴加入致孔劑溶液，攪拌混勻；PLGA的分子量從IOK到50K ;LA與GA的摩爾比例范圍為50:50-100:0且不取為0的情況；所用有機(jī)溶劑為二氯甲烷，氯仿，乙酸乙酯，乙腈，優(yōu)選二氯甲烷，且二氯甲烷在使用之前用氫化鈣或五氧化二磷作為干燥劑加熱回流3小時(shí)以去除水分；PLGA有機(jī)溶劑的濃度為 3-20% (w/v)；致孔劑為2-甲基戊烷，甲苯，水，碳酸氫鈉；PLGA:致孔劑=1-4 (w/w)；油相表面活性劑為Span20, Span60, Span80,優(yōu)選 Span80。
(2)水相溶液的制備；水相穩(wěn)定劑水溶液中加入一定量的水相表面活性劑，混勻；水相表面活性劑為Tween20, Tween60, Tween80,輕丙基甲基纖維素。其中優(yōu)選Tween80 ；水相穩(wěn)定劑為聚乙烯醇(PVA)，丙三醇；優(yōu)選PVA，且PVA的分子量為10000-80000 ；水相穩(wěn)定劑溶液的濃度為1-5% (w/v)。
(3)0/W相的形成將步驟(I)得到的油相溶液用注射器逐滴滴入步驟(2)的水相溶液中；水相溶液油相溶液=5-10 (v/v)(水油相體積比例=(PVA水溶液+水相表面活性劑)/ (油相溶劑+致孔劑+油相表面活性劑))；持續(xù)攪拌，使其中的有機(jī)溶劑揮發(fā)完全；在該步驟持續(xù)攪拌過程種，使添加的致孔劑小液滴在PLGA液滴表面粘附，微球固化的同時(shí)，小液滴離開微球表面，留下均勻的孔洞；步驟(3)溶劑揮發(fā)過程中的攪拌速率為200rpm - 3000rpm，溫度控制在5 - 40°C ;溶劑揮發(fā)采用室溫蒸發(fā)。(4)微球的制備，反應(yīng)后溶液離心、用去離子水清洗得到含微球的水溶液，除去上清液，得到的固體置于真空干燥箱，室溫干燥，即可獲得表面多孔的PLGA微球。與其他制備PLGA多孔微球的方法相比，本發(fā)明采用0/W溶劑揮發(fā)法方法制備微球簡單易操作，在室溫條件下即可實(shí)現(xiàn)，不涉及冷凍干燥技術(shù)。


圖I是本發(fā)明實(shí)施例I獲得的PLGA微球的掃描電鏡圖；可見，本發(fā)明制備得到PLGA微球尺寸均一，表面多孔形貌結(jié)構(gòu)統(tǒng)一。圖2是采用傳統(tǒng)方法獲得的PLGA微球的掃描電鏡圖(圖2來自J MaterSci, 2011，46:2510-2517);與圖I相比，圖2中微球尺寸不均一，表面的孔洞結(jié)構(gòu)也不統(tǒng)一。
具體實(shí)施例方式以下實(shí)施例所采用的原料來源說明PLGA購自山東濟(jì)南岱罡生物科技有限公司；PVA購自美國Sigma-Aldrich ;2_甲基戊烷購自阿拉丁 ；二氯甲燒，氯仿，乙酸乙酯，乙腈，甲苯，碳酸氫!納，Span20, Span60, Span80, Tween20, Tween60, Tween80,輕丙基甲基纖維素，丙
三醇均購自國藥集團(tuán)。以下實(shí)施例在取表面活性劑等試劑時(shí)，采用“滴”為單位，此處，一滴約為0. 3ml。實(shí)施例I一種表面多孔的PLGA微球的制備方法，包括以下步驟I)將二氯甲烷用氫化鈣加熱回流干燥3小時(shí)，除去其中的水分。2)將0. 29gPLGA20K (LA:GA=75:25)加入到2. 6mL上述干燥的二氯甲烷中，不斷攪拌，使其完全溶解。用一次性滴管吸取Span80向上述溶液中滴加I滴，混勻。向溶液中滴加0. ImL的2-甲基戊烷，并不斷攪拌。攪拌速率為500rpm。3)配制lwt%的PVA (Mw=31000)水溶液28. 5mL。用一次性滴管吸取Tween80向PVA水溶液中滴加5滴，混勻；4)用注射器取步驟2中的油相溶液逐滴滴加入步驟3的PVA水溶液中，并不斷攪拌過夜，直至其中的二氯甲烷揮發(fā)完全，攪拌速率為500rpm。
5)將步驟3中的溶液離心5min，然后離心、用去離子水清洗3次，每次5min，轉(zhuǎn)速為3500rpm。除去上層液體，將產(chǎn)物置于真空干燥箱室溫干燥24h。經(jīng)上述處理程序后，就獲得了表面多孔的PLGA微球。粒徑分布為158±8. 3 Um0實(shí)施例2一種表面多孔的PLGA微球的制備方法，包括以下步驟I)將0. 31gPLGA5QK(LA:GA=65:35)加入到5. 5mL氯仿中，不斷攪拌，使其完全溶解。用一次性滴管吸取Span20向上述溶液中滴加I滴，混勻。向溶液中滴加0. 2mL的甲苯，并不斷攪拌。攪拌速率為800rpm。 2)配制3wt%的PVA (Mw=IOOOO)水溶液28. 5mL。用一次性滴管吸取Tween20向PVA水溶液中滴加5滴，混勻。3)用注射器取步驟I中的溶液逐滴滴加入步驟2的PVA水溶液中，并不斷攪拌過夜，直至其中的氯仿?lián)]發(fā)完全，攪拌速率為800rpm。4)將步驟3中的溶液離心5min。然后離心、用去離子水清洗3次，每次5min，轉(zhuǎn)速為3500rpm。除去上層液體，將產(chǎn)物置于真空干燥箱室溫干燥24h。經(jīng)上述處理程序后，就獲得了表面多孔的PLGA微球。粒徑分布為135±4. 2 Um0實(shí)施例3一種表面多孔的PLGA微球的制備方法，包括以下步驟I)將0. 26gPLGA10K (LA:GA=50:50)加入到4. 5mL乙酸乙酯中，不斷攪拌，使其完全溶解。用一次性滴管吸取Span60向上述溶液中滴加I滴，混勻。向溶液中滴加0. 2mL的去離子水，并不斷攪拌。攪拌速率為200rpm。2)配制5wt%的PVA (Mw=50000)水溶液28. 5mL。用一次性滴管吸取Tween60向PVA水溶液中滴加5滴，混勻。3)用注射器取步驟I中的溶液逐滴滴加入步驟2的PVA水溶液中，并不斷攪拌過夜，直至其中的乙酸乙酯揮發(fā)完全，攪拌速率為200rpm。4)將步驟3中的溶液離心5min。然后離心、用去離子水清洗3次，每次5min，轉(zhuǎn)速為3500rpm。除去上層液體，將產(chǎn)物置于真空干燥箱室溫干燥24h。經(jīng)上述處理程序后，就獲得了表面多孔的PLGA微球。粒徑分布為182±9. 2 Um0實(shí)施例4一種表面多孔的PLGA微球的制備方法，包括以下步驟I)將0. 29gPLGA20K (LA:GA=85:15)加入到2. 6mL乙腈中，不斷攪拌，使其完全溶解。用一次性滴管吸取Span80向上述溶液中滴加I滴，混勻。待PLGA完全溶解，向溶液中滴加0. ImL 1% (w/v)碳酸氫鈉溶液，不斷攪拌。攪拌速率為500rpm。2)配制lwt%的PVA (Mw=80000)水溶液28. 5mL。用一次性滴管吸取5% (w/v)羥丙基甲基纖維素向PVA水溶液中滴加5滴，混勻。3)用注射器取步驟I中的溶液逐滴滴加入步驟2的PVA水溶液中，并不斷攪拌過夜，直至其中的乙腈揮發(fā)完全，攪拌速率為500rpm。4)將步驟3中的溶液離心5min。然后離心、用去離子水清洗3次，每次5min，轉(zhuǎn)速為3500rpm。除去上層液體，將產(chǎn)物置于真空干燥箱室溫干燥24h。經(jīng)上述處理程序后，就獲得了表面多孔的PLGA微球。粒徑分布為146±11.2iim。
實(shí)施例5一種表面多孔的PLGA微球的制備方法，包括以下步驟I)將二氯甲烷用氫化鈣加熱回流干燥3小時(shí)，除去其中的水分。2)將0. 20gPLGA20K (LA:GA=65:35)加入到2. 5mL上述干燥的二氯甲烷中，不斷攪拌，使其完全溶解。用一次性滴管吸取Span80向上述溶液中滴加I滴，混勻。向溶液中滴加0. 2mL的水，并不斷攪拌。攪拌速率為3000rpm。3)配制lwt%的丙三醇水溶液28. 5mL。用一次性滴管吸取Tween80向丙三醇水溶液中滴加5滴，混勻。4)用注射器取步驟2中的溶液逐滴滴加入步驟3的丙三醇水溶液中，并不斷攪拌過夜，直至其中的二氯甲烷揮發(fā)完全，攪拌速率為3000rpm。 5)將步驟3中的溶液離心5min。然后用去離子水離心清洗3次,每次5min,轉(zhuǎn)速為3500rpm。除去上層液體，將產(chǎn)物置于真空干燥箱室溫干燥24h。經(jīng)上述處理程序后，就獲得了表面多孔的PLGA微球。粒徑分布為2±0. 8 ii m。
權(quán)利要求
1.一種表面多孔的PLGA微球的制備方法，其特征在于包括以下步驟 (1)將PLGA加入到有機(jī)溶劑中，攪拌溶解后，加入油相表面活性劑，混勻，滴加入致孔劑溶液，攪拌混勻； (2)水相穩(wěn)定劑水溶液中加入水相表面活性劑，混勻； (3)將步驟(I)得到的油相溶液用注射器逐滴滴入步驟(2)的水相溶液中，持續(xù)攪拌，使其中的有機(jī)溶劑揮發(fā)完全； (4)反應(yīng)后溶液離心，用去離子水清洗，除去上清液，得到的固體置于真空干燥箱，室溫干燥，即可獲得表面多孔的PLGA微球。
2.根據(jù)權(quán)利要求I所述的表面多孔的PLGA微球的制備方法，其特征在于所用的PLGA的分子量從IOK到50K。
3.根據(jù)權(quán)利要求I所述的表面多孔的PLGA微球的制備方法，其特征在于所用的PLGA的LA與GA的摩爾比例范圍為50:50-85:15。
4.根據(jù)權(quán)利要求I所述的表面多孔的PLGA微球的制備方法，其特征在于所用有機(jī)溶劑為二氯甲烷，氯仿，乙酸乙酯或者乙腈。
5.根據(jù)權(quán)利要求4所述的表面多孔的PLGA微球的制備方法，其特征在于二氯甲烷在使用之前用氫化鈣或五氧化二磷作為干燥劑加熱回流以除去水分。
6.根據(jù)權(quán)利要求I所述的表面多孔的PLGA微球的制備方法，其特征在于所使用的致孔劑為2-甲基戊烷，甲苯，水或者碳酸氫鈉。
7.根據(jù)權(quán)利要求I所述的表面多孔的PLGA微球的制備方法，其特征在于所用的油相表面活性劑為 Span20，Span60, Span80。
8.根據(jù)權(quán)利要求I所述的表面多孔的PLGA微球的制備方法，其特征在于所使用的水相表面活性劑為Tween20, Tween60, Tween80或者輕丙基甲基纖維素。
9.根據(jù)權(quán)利要求I所述的表面多孔的PLGA微球的制備方法，其特征在于所使用的水相穩(wěn)定劑為聚乙烯醇或者丙三醇；其中，PVA的分子量為10000-80000。
10.根據(jù)權(quán)利要求I所述的表面多孔的PLGA微球的制備方法，其特征在于步驟(3)溶劑揮發(fā)過程中的攪拌速率為200rpm - 3000rpm，溫度控制在5 - 40°C ;溶劑揮發(fā)采用室溫蒸發(fā)。
全文摘要
本發(fā)明涉及一種表面多孔的PLGA微球的制備方法，包括以下步驟(1)將PLGA加入到有機(jī)溶劑中，攪拌溶解后，加入油相表面活性劑，混勻，滴加入致孔劑溶液，攪拌混勻；(2)水相穩(wěn)定劑水溶液中加入一定量的水相表面活性劑，混勻；(3)將步驟(1)得到的油相溶液用注射器逐滴滴入步驟(2)的水相溶液中，持續(xù)攪拌，使其中的有機(jī)溶劑揮發(fā)完全；(4)反應(yīng)后溶液離心、用去離子水清洗，除去上清液，得到的固體置于真空干燥箱，室溫干燥，即可獲得表面多孔的PLGA微球。這種通過O/W溶劑揮發(fā)法制備得到的PLGA多孔微球成球率高，微球圓整。制備過程簡單，易于實(shí)現(xiàn)，不涉及采用高溫高壓裝置，不采用冷凍干燥技術(shù)也可制備出多孔PLGA微球。
文檔編號(hào)B01J13/02GK102728287SQ201210186540
公開日2012年10月17日 申請(qǐng)日期2012年6月7日 優(yōu)先權(quán)日2012年6月7日
發(fā)明者張啟英, 張?zhí)熘? 顧寧 申請(qǐng)人:東南大學(xué)