基于磁性納米吸附劑測定體液中鹽酸阿霉素的方法
【專利摘要】本發(fā)明提供了一種三甲基十八烷基溴化銨（TSAB）修飾的Fe3O4磁性納米吸附劑的制備方法，以及用該方法制得的吸附劑測定血漿和尿液中鹽酸阿霉素的方法。本發(fā)明采用化學(xué)共沉淀法并通過層層組裝制備得到TSAB-coated?Fe3O4/SiO2，將其加入含有鹽酸阿霉素的血漿和尿液樣品中，用磷酸緩沖液調(diào)節(jié)pH至4～5，渦旋震蕩3min后磁分離并棄去上清液，再加入洗脫劑洗脫，然后再次磁分離，收集上清液并采用高效液相色譜-熒光檢測法進(jìn)行分析。本方法制備的磁性吸附劑穩(wěn)定性好，吸附量大，可重復(fù)使用，對(duì)血漿和尿液樣品中蒽環(huán)類抗腫瘤抗生素如阿霉素等具有較強(qiáng)的萃取能力，能夠?qū)崿F(xiàn)樣品中鹽酸阿霉素的快速、有效分離和測定。
【專利說明】基于磁性納米吸附劑測定體液中鹽酸阿霉素的方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明涉及磁性納米吸附劑的制備方法以及鹽酸阿霉素的檢測方法，具體是一種三甲基十八烷基溴化銨(TSAB)修飾的Fe3O4磁性納米吸附劑的制備方法，以及用該方法制得的吸附劑測定血漿和尿液中鹽酸阿霉素的方法。
【背景技術(shù)】
[0002]近年來，F(xiàn)e3O4磁性納米粒子及其復(fù)合體的合成和應(yīng)用屬于研究熱點(diǎn)。它粒徑小、比表面積大、偶聯(lián)容量高且具有超順磁性等特點(diǎn)，在外加磁場作用下可以定向聚集，因此在醫(yī)學(xué)、化學(xué)、環(huán)境和生物等領(lǐng)域展現(xiàn)出廣闊的應(yīng)用前景。另外，F(xiàn)e3O4磁性納米粒子可以很容易進(jìn)行表面修飾，使其具有如吸附等特殊的性質(zhì)，基于修飾后的Fe3O4磁性納米復(fù)合體發(fā)展成為新型的磁性固相萃取技術(shù)，它解決了液液萃取和固相萃取等方法繁瑣耗時(shí)、復(fù)雜昂貴的缺點(diǎn)，通過磁性固相萃取法萃取體液樣品中目標(biāo)分析物簡單省時(shí)，高效快捷，分離容易，且無需大量有機(jī)溶劑，可廣泛用于復(fù)雜樣品的預(yù)濃縮處理。
[0003]鹽酸阿霉素是臨床上常用的蒽環(huán)霉素類抗腫瘤抗生素之一，通過抑制癌細(xì)胞遺傳物質(zhì)核酸的合成，對(duì)多種腫瘤細(xì)胞如乳腺癌、肺癌、惡性淋巴癌和急性白血病等均具有殺滅作用，但是它在治療中伴有的嚴(yán)重心臟毒性、抑制骨髓造血功能和毒副作用等使其應(yīng)用受到了一定的限制。因此，測定體液中鹽酸阿霉素，尤其是血漿和尿液樣品中鹽酸阿霉素的濃度對(duì)于用藥安全具有重要意義。目前，文獻(xiàn)報(bào)道的檢測鹽酸阿霉素的方法有熒光光譜法、超高效液相色譜法、液液萃取-高效液相色譜法和芯片毛細(xì)管電泳熒光檢測法等。然而，體液樣品中鹽酸阿霉素檢測的前處理比較復(fù)雜繁瑣，因此，建立一種能夠簡單、快捷、有效的檢測體液樣品中鹽酸阿霉素的方法尤為重要。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0004]本發(fā)明的目的是提供一種磁性納米吸附劑的制備方法，該吸附劑穩(wěn)定性好，吸附量大，可重復(fù)使用，對(duì)人血漿和尿液樣品中蒽環(huán)類抗腫瘤抗生素如阿霉素等具有較強(qiáng)的萃取能力，可用于測定人血漿和尿液樣品中的鹽酸阿霉素。
[0005]本發(fā)明的另一目的是提供一種利用所述方法制備的磁性納米吸附劑測定人血漿或尿液樣品中鹽酸阿霉素的方法，該方法吸附效果好，分離容易，操作簡便，能夠?qū)崿F(xiàn)復(fù)雜體液樣品中鹽酸阿霉素的快速有效分離。
[0006]本發(fā)明提供的一種磁性納米吸附劑的制備方法，包括如下步驟:
[0007](I) Fe304/Si02 磁性納米粒子的制備:可參照 Dandan Song, Yanqin Gu, LuLiang，Zhihui Aij Lizhi Zhang and Hui Xu.Magnetic solid—phase extraction followedby high performance liquid chromatography for determination of hexanal andheptanal in human urine.Anal.Methods [J]，2011，3，1418 - 1423 文獻(xiàn)制備。
[0008](2)將步驟(I)制得的磁性納米粒子，在超聲作用下分散于二次水中，之后加入三甲基十八烷基溴化銨；所述的磁性納米粒子、三甲基十八烷基溴化銨和二次水的質(zhì)量比為1:0.5-0.9:120-160 ;在氮?dú)獗Ｗo(hù)下1000?1500rpm機(jī)械攪拌，40?80°C下反應(yīng)0.5?1.5小時(shí)后磁分離，將所得固體用二次水洗滌至中性，再用無水乙醇洗滌2?3次；在50?80°C真空干燥8?12小時(shí),研磨，即得TSAB-coated Fe304/Si02磁性納米吸附劑。
[0009]本發(fā)明提供的一種測定人血漿或尿液樣品中鹽酸阿霉素的方法，包括以下步驟:
[0010](I)稱取按權(quán)利要求1所述方法制備的磁性納米吸附劑IOmg置于比色管中，加入血漿或尿液樣品lmL，并用pH4?5的磷酸緩沖液稀釋至2mL ;渦旋震蕩至分散，振搖3?30min達(dá)吸附平衡,磁分離,棄去上清液；
[0011](2)加入1.5?3.0mL乙醇，渦旋震蕩0.5?Imin以進(jìn)行洗脫，磁分離，收集洗脫液；
[0012](3)將洗脫液用50?80°C氮?dú)獯蹈?，所得固體加ImL 二次水溶解，過濾，收集濾液；
[0013](4)采用高效液相色譜-熒光檢測法對(duì)濾液進(jìn)樣分析，將其峰面積值Y代入線性方程Y=13.33Χ-5.1008即可得樣品中鹽酸阿霉素的濃度X ;色譜條件為色譜柱:AgilentEclipseXDB-C18 色譜柱(4.6mmX250mm, 5 μ m);流動(dòng)相:0.5% 甲酸水溶液-乙腈(70:30V/V);波長:498nm/577nm ;流速:0.8mL/min ;柱溫:30°C ;進(jìn)樣量:20 μ L。
[0014]與現(xiàn)有技術(shù)相比本發(fā)明的優(yōu)點(diǎn):
[0015]( I)本發(fā)明提供的磁性納米吸附劑制備過程簡單，快捷，耗時(shí)短，產(chǎn)率高，且無需使用有毒物質(zhì)，條件溫和，操作安全；制得的TSAB-coated Fe304/Si02磁性納米吸附劑的粒徑為?25nm，結(jié)合了 Fe3O4磁性納米粒子特有的磁響應(yīng)性和TSAB對(duì)鹽酸阿霉素的高吸附性等優(yōu)點(diǎn)，穩(wěn)定性好，吸附量大，且可重復(fù)使用，分離容易，操作簡單，能夠?qū)崿F(xiàn)從復(fù)雜體液樣品中快速、高效萃取鹽酸阿霉素的目的，避免了常規(guī)萃取方法如液-液萃取、固相萃取等方法耗時(shí)、復(fù)雜，且需要使用大量有毒有害試劑等缺點(diǎn)；
[0016](2)本發(fā)明使用高效液相色譜-熒光檢測法，線性范圍廣，靈敏度高，檢測限和定量限分別為5.05ng mL—1和16.82ng mL—1，血漿和尿液樣品高、中、低三種濃度的回收率分別在95.17%-107.33%和98.20%-101.55%范圍之間，RSD小于7.44%,本方法準(zhǔn)確簡單，專屬性強(qiáng)，可用于血漿和尿液樣品中鹽酸阿霉素的測定。
【專利附圖】

【附圖說明】
[0017]圖1 為 MNPs 的透射電鏡圖，圖中 a =Fe3O4 ；b:TSAB_coated Fe304/Si02。
[0018]圖2 為 MNPs 的紅外光譜圖，圖中 a =Fe3O4 ；b:TSAB_coated Fe304/Si02。
[0019]圖3為鹽酸阿霉素標(biāo)準(zhǔn)曲線圖。
【具體實(shí)施方式】
[0020]以下結(jié)合附圖和實(shí)施例對(duì)本發(fā)明做進(jìn)一步詳細(xì)說明。
[0021]實(shí)施例1:TSAB-COated Fe304/Si02磁性納米吸附劑的制備
[0022](I)稱取 0.994g FeCl2.4H20 和 2.365g FeCl3.6H20 置于 250mL 三頸瓶中，加入0.4mL濃鹽酸、120mL 二次水成混合液，加熱至70°C，在氮?dú)獗Ｗo(hù)條件下，1000?1500rpm機(jī)械攪拌并緩慢滴加25%氨水調(diào)節(jié)pH至9-10，繼續(xù)反應(yīng)2小時(shí)，得黑色混懸液；
[0023](2)將2.0mL原硅酸四乙酯(TEOS)加入步驟(I)所得混懸液中，繼續(xù)反應(yīng)1.0小時(shí)，得棕黑色混懸液；
[0024](3)將0.697g三甲基十八烷基溴化銨(TSAB)加入步驟(2)所得混懸液中，繼續(xù)反應(yīng)1.0小時(shí)，得棕色混懸液；
[0025](4)將步驟(3)所得混懸液放置至室溫，然后磁分離，將所得固體用二次水洗滌至中性，再用無水乙醇洗滌2~3次；
[0026](5)將步驟(4)所得固體在60°C真空干燥8小時(shí)，研磨，即得產(chǎn)物。
[0027]實(shí)施例2:TSAB-coated Fe304/Si02磁性納米吸附劑的制備
[0028](I)稱取 0.994g FeCl2.4H20 和 2.365g FeCl3.6H20 置于 250mL 三頸瓶中，加入0.4mL濃鹽酸、140mL 二次水成混合液，加熱至70°C，在氮?dú)獗Ｗo(hù)條件下，1000~1500rpm機(jī)械攪拌并緩慢滴加25%氨水調(diào)節(jié)pH至9-10，繼續(xù)反應(yīng)2小時(shí)，得黑色混懸液；
[0029](2)將2.0mL原硅酸四乙酯(TEOS)加入步驟(I)所得混懸液中，繼續(xù)反應(yīng)1.0小時(shí)，得棕黑色混懸液；
[0030](3 )將0.876g三甲基十八烷基溴化銨(TSAB)加入步驟(2 )所得混懸液中，繼續(xù)反應(yīng)1.0小時(shí)，得棕色混懸液；
[0031](4)將步驟(3)所得混懸液放置至室溫，然后磁分離，將所得固體用二次水洗滌至中性，再用無水乙醇洗滌2~3次；
[0032](5)將步驟(4)所得固體在60°C真空干燥8小時(shí)，研磨，即得產(chǎn)物。
[0033]實(shí)施例3:TSAB -coated Fe304/Si02磁性納米吸附劑的制備
[0034](I)稱取 0.994g FeCl2.4H20 和 2.365g FeCl3.6H20 置于 250mL 三頸瓶中，加入0.4mL濃鹽酸、160mL 二次水成混合液，加熱至70°C，在氮?dú)獗Ｗo(hù)條件下，1000~1500rpm機(jī)械攪拌并緩慢滴加25%氨水調(diào)節(jié)pH至9-10，繼續(xù)反應(yīng)2小時(shí)，得黑色混懸液；
[0035](2)將2.0mL原硅酸四乙酯(TEOS)加入步驟(I)所得混懸液中，繼續(xù)反應(yīng)1.0小時(shí)，得棕黑色混懸液；
[0036](3)將1.044g三甲基十八烷基溴化銨(TSAB)加入步驟(2)所得混懸液中，繼續(xù)反應(yīng)1.0小時(shí)，得棕色混懸液；
[0037](4)將步驟(3)所得混懸液放置至室溫，然后磁分離，將所得固體用二次水洗滌至中性，再用無水乙醇洗滌2~3次；
[0038](5)將步驟(4)所得固體在60°C真空干燥8小時(shí)，研磨，即得產(chǎn)物。
[0039]采用透射電子顯微鏡對(duì)所合成的TSAB-coated Fe304/Si02磁性納米吸附劑進(jìn)行表征，從圖1 (a)可以看出，F(xiàn)e3O4磁性納米粒子不規(guī)則球形分布,粒徑為~IOnm ;圖1 (b)顯示，TSAB-coated Fe304/Si02 MNPs 粒徑在~25nm。
[0040]采用傅里葉紅外光譜對(duì)所合成的TSAB-coated Fe304/Si02磁性納米吸附劑進(jìn)行表征，從圖2中可以看出，TSAB-coated Fe304/Si02磁性納米吸附劑的特征峰分布在2924，2855和1070cm-1處，其中2924和2855cm-1為TSAB中十八烷基的C-H伸縮振動(dòng)峰，1070cm-1則為TEOS中S1-O鍵的特征吸收峰，這些特征峰表明TEOS和TSAB均被成功修飾于Fe3O4磁性納米粒子表面。此外，586(^1處可見Fe-O鍵的特征峰,而3435CHT1處則為Fe3O4表面裸露-OH的O-H伸縮振動(dòng)峰。
[0041]實(shí)施例4:高效液相色譜-熒光檢測法測定血漿和尿液樣品中鹽酸阿霉素的方法學(xué)評(píng)價(jià)[0042](1)鹽酸阿霉素儲(chǔ)備液的配制
[0043]精密稱取鹽酸阿霉素標(biāo)準(zhǔn)品適量，配制成0.2mg/mL的儲(chǔ)備液，置于4°C保存。
[0044]( 2 )血漿樣品的制備
[0045]取5mL健康人血液,在3000rpm下離心5min,吸取0.5mL上清血衆(zhòng),加入甲醇-丙酮(25:75v/v)混合溶劑1.5mL,然后再12000rpm下離心5min,收集上清液,二次水稀釋至5.0mL，置于4°C保存；
[0046](3)尿液樣品的制備
[0047]取5mL健康人尿液，加入I~2滴濃鹽酸，搖勻，吸取0.5mL并用二次水稀釋至
5.0mL，置于4°C保存；
[0048](4)色譜條件
[0049]色譜柱:AgilentEclipse XDB-C18 色譜柱(4.6mmX 250mm, 5 μ m);流動(dòng)相:0.5%甲酸水溶液-乙腈(70:30V/V);波長:498nm/577nm ;流速:0.8mL/min ;柱溫:30°C ;進(jìn)樣量:20 μ L ；
[0050](5)方法學(xué)評(píng)價(jià)
[0051]標(biāo)準(zhǔn)曲線:配制鹽酸阿霉素濃度為0.5、1.0,2.5,5.0,7.5、10.Ομ g mL—1系列標(biāo)準(zhǔn)溶液，然后按此實(shí)施例(4)項(xiàng)的色譜條件進(jìn)樣分析。以其峰面積(Y)與對(duì)應(yīng)濃度(X)進(jìn)行線性回歸，回歸方程為Y=13.33X-5.1008 (r=0.9984)，見圖3所示。
[0052]檢測限和定量限:檢測限(LOD)和定量限(LOQ)分別以信噪比S/N=3和S/N=10計(jì)算，LOD 為 5.05ng mL S LOQ 為 16.82ng mL 1O
[0053]回收率和精密度:在血漿或尿液樣品中加入適量鹽酸阿霉素儲(chǔ)備液，配制濃度為0.5,2.5和10.0 μ g mL—1鹽酸阿霉素的血漿或尿液溶液，按此實(shí)施例(4)項(xiàng)的色譜條件進(jìn)樣分析，每個(gè)濃度重復(fù)測定6次，分別計(jì)算日內(nèi)和日間RSD及其回收率，結(jié)果見表1。
[0054]表1血漿和尿液樣品加標(biāo)回收率及其精密度實(shí)驗(yàn)結(jié)果(n=6)
[0055]
【權(quán)利要求】
1.一種磁性納米吸附劑的制備方法，其特征在于，包括如下步驟: (1)Fe304/Si02磁性納米粒子的制備； (2)將步驟(1)制得的磁性納米粒子，在超聲作用下分散于二次水中，之后加入三甲基十八烷基溴化銨；所述的磁性納米粒子、三甲基十八烷基溴化銨和二次水的質(zhì)量比為1:0.5-0.9:120-160 ;在氮?dú)獗Ｗo(hù)下1000?1500rpm機(jī)械攪拌，40?80°C下反應(yīng)0.5?1.5小時(shí)后磁分離，將所得固體用二次水洗滌至中性，再用無水乙醇洗滌2?3次；在50?80°C真空干燥8?12小時(shí),研磨，即得TSAB-coated Fe304/Si02磁性納米吸附劑。
2.一種測定人血漿或尿液中鹽酸阿霉素的方法，其特征在于，包括如下步驟: (1)稱取按權(quán)利要求1所述方法制備的磁性納米吸附劑IOmg置于比色管中，加入血漿或尿液樣1ImL,并用pH4?5的磷酸緩沖液稀釋至2mL ;潤旋震蕩至分散,振搖3?30min達(dá)吸附平衡，磁分離，棄去上清液； (2)加入1.5?3.0mL乙醇，渦旋震蕩0.5?1min以進(jìn)行洗脫，磁分離，收集洗脫液； (3)將洗脫液用50?80°C氮?dú)獯蹈?，所得固體加1mL二次水溶解，過濾，收集濾液； (4)采用高效液相色譜-熒光檢測法對(duì)濾液進(jìn)樣分析，將其峰面積值Y代入線性方程Y=13.33Χ-5.1008即可得樣品中鹽酸阿霉素的濃度X ;色譜條件:色譜柱=AgilentEclipseXDB-C18色譜柱，規(guī)格:4.6mmX250mm, 5 μ m ;流動(dòng)相:0.5%甲酸水溶液-乙腈，體積比70:30 ;激發(fā)波長:498nm ;發(fā)射波長:577nm ;流速:0.8mL/min ;柱溫:30°C ;進(jìn)樣量:20 μ L。
【文檔編號(hào)】B01J20/22GK103464109SQ201310445367
【公開日】2013年12月25日 申請(qǐng)日期:2013年9月23日 優(yōu)先權(quán)日:2013年9月23日
【發(fā)明者】李瑞金, 麻能軒, 張 林, 孫琳琳, 牛衛(wèi)芬, 周葉紅, 雙少敏 申請(qǐng)人:山西大學(xué)