一種醫(yī)用膽紅素選擇性灌流吸附劑及其制備方法
【專利摘要】一種醫(yī)用膽紅素選擇性灌流吸附劑及其制備方法，將用于聚合形成功能載體的各單體混合組成油相，然后與配制的分散劑水相混合均勻，用惰性氣體或氮氣排空反應體系中的氧氣，加入引發(fā)劑在0～90℃反應；反應結(jié)束后過濾出產(chǎn)物；將產(chǎn)物加入溶劑中，加入含有雙官能團的空間分子臂物質(zhì)進行反應，結(jié)束后過濾出產(chǎn)物；得到的產(chǎn)物與含雙官能團的偶聯(lián)劑溶液混合，反應后濾出、洗滌并干燥后加入配制好的白蛋白水溶液中，或直接將得到的產(chǎn)物加入配制好的白蛋白水溶液中，與白蛋白水溶液混合后，在0-65℃反應，反應結(jié)束后過濾出產(chǎn)物，洗滌并干燥后即為吸附劑。所得吸附劑的微觀分子結(jié)構(gòu)和功能與目標被結(jié)合吸附的致病物質(zhì)膽紅素的微觀分子結(jié)構(gòu)和功能匹配，實現(xiàn)更特異性相互結(jié)合作用，增強了選擇性吸附效果；具有重要的衛(wèi)生意義、科學理論意義和應用前景。
【專利說明】一種醫(yī)用膽紅素選擇性灌流吸附劑及其制備方法
【技術領域】
[0001]本發(fā)明涉及一種吸附劑，具體的說是一種醫(yī)用膽紅素選擇性灌流吸附劑及其制備方法。
【背景技術】
[0002]血液凈化療法是自20世紀80年代以來出現(xiàn)的一種非常規(guī)臨床治療方法，其通過清除血液中的特定致病物質(zhì)來實現(xiàn)治療某些病癥的目的，其實質(zhì)是生物分離技術在醫(yī)學領域的應用，其特征是通過在體外建立臨時的人體血液循環(huán)支路，使血液流經(jīng)吸附裝置中特定的吸附/分離材料，以除去血液中的特定致病物質(zhì)，凈化人體的內(nèi)環(huán)境，達到治療某些疾病的目的。利用特定的醫(yī)學吸附/分離材料，使血液中膽紅素被選擇性吸附到材料上，從而被從血液中去除，達到凈化血液、迅速降低膽紅素濃度的目的，是血液凈化療法中用于治療高膽紅素血癥的重要療法。
[0003]由于肝炎黃疸病人的肝臟解毒功能受損，新生兒肝臟的解毒功能未健全，新生兒病理性黃疸時在短時間內(nèi)就會產(chǎn)生和累積大量的膽紅素，遠遠超過新生兒肝臟的解毒功能，所以臨床上單純的藥物治療，以及藍光照射物理治療在治療中、重度高膽紅素血癥時，實際收效甚微，甚至不適用(比如新生兒重度病理性黃疸時)。此時，不得不籍用其他非藥物療法方以能在短時間內(nèi)奏效，比如施行血液凈化療法、換血法/血漿置換療法等。
[0004]采用換血療法/血漿置換療法，則需要有匹配的健康的血液/血漿，但由于血源供應緊張、輸血并發(fā)癥和綜合征、血液制品中可能存在的交叉感染如肝炎病毒、艾滋病毒等潛在風險，以及個體差異致使不能施行換血術等，使得換血療法雖然在治療，特別是搶救治療時，及時、有效且高效，但存在風險性和局限性，是不得已而為之的方法。如果有其他更理想的方法，換血法將會被替代而不被優(yōu)先急救使用。
[0005]采用血液凈化療法，即將高膽紅素血癥患者的血液通過體外循環(huán)引出體外，流經(jīng)裝填有特定醫(yī)學吸附/分離材料的吸附裝置(通常為吸附柱)，在吸附柱中，膽紅素被部分吸附到醫(yī)學材料上，而從血液中被去除，使得血液中的致病物質(zhì)膽紅素的濃度迅速地大為下降(或下降到藥物治療起效的范圍之內(nèi)后再行藥物治療)，為肝臟功能的恢復贏得時間，從而達到治療的目的。由于血液凈化療法無需外來血液，不受外來血液的供應限制、是否匹配、輸血并發(fā)癥等的局限，又不存在血液制品潛在風險交叉感染的問題，是比換血療法更方便、更理想、更安全、更科學的療法，具有廣闊的臨床應用前景和重要的衛(wèi)生意義。
[0006]目前，臨床上采用換血療法治療高膽紅素血癥，雖然有效，但存在明顯的不足和風險，屬于不得以而為之的急救措施；采用血液凈化之血液灌流療法，其關鍵是醫(yī)學安全性高且醫(yī)學療效高的膽紅素吸附/分離材料。由于人體血液體系的復雜性，目前臨床上使用的商品化膽紅素醫(yī)學吸附/分離材料的實際效率低下(據(jù)統(tǒng)計報道在5%-30%)，離期望達到換血療法的效率指標30%-60%，甚至如有可能更高達如70%以上的臨床使用效率還很有大很大的差距。因此，發(fā)明更高效又兼具醫(yī)學安全性的膽紅素醫(yī)學吸附/分離材料具有重要的意義。[0007]科學研究已表明:高膽紅素血癥的發(fā)生是由體內(nèi)的肝臟解毒功能不足，體內(nèi)膽紅素產(chǎn)生過量而又無法及時代謝排泄蓄積而致。如果能及時快速地將過量的膽紅素去除，則可降低血液中膽紅素的濃度，使得病癥得以減輕或者痊愈，有效保護肝臟，為肝臟的功能恢復贏得時間。微觀物質(zhì)之間的相互吸引或結(jié)合作用有范德華力作用、靜電作用、氫鍵作用、相似相容作用(如親油性跟親油性的相容)、親和作用(如鑰匙-鎖的契合作用、抗原-抗體的親和作用等)。膽紅素分子結(jié)構(gòu)已被確證，其分子結(jié)構(gòu)中含有親水基團/區(qū)域、疏水基團/區(qū)域、含有呈正電性的胺基和呈負電性的羧基，白蛋白是其天然的運載物質(zhì)。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0008]本發(fā)明目的是為解決上述技術問題的不足，提供一種醫(yī)用膽紅素選擇性灌流吸附劑及其制備方法，該方法簡單，所制備的醫(yī)用膽紅素選擇性灌流吸附劑，活性高，選擇性吸附效果好，可以制備出系列的、不同等級的醫(yī)學吸附劑，滿足臨床不同效果要求和患者層次的需求。
[0009]本發(fā)明為解決上述技術問題所采用的技術方案是:一種醫(yī)用膽紅素選擇性灌流吸附劑，其成分包括功能載體和功能配基，所述功能載體為以丙烯酸為母體的單體、通過靜電或氫鍵作用吸附膽紅素的功能單體和通過相似相容原理吸附膽紅素的功能單體聚合而成的高聚物；所述的功能配基為白蛋白、白蛋白衍生物和類白蛋白中的一種或兩種以上；所述的功能配基通過偶聯(lián)劑偶聯(lián)固定在功能載體上，且功能載體和功能配基之間通過偶聯(lián)劑和/或空間分子臂進行空間分隔；所述通過靜電或氫鍵作用吸附膽紅素的功能單體為含有羰基、羥基、胺基、酯基或醚基功能基團的單體；所述的通過相似相容原理吸附膽紅素的功能單體為含疏水烷烴或芳烴的單體。
[0010]所述功能載體，每克功能載體上偶聯(lián)固定至少30mg功能配基。
[0011]所述的以丙烯酸為母體的單體為甲基丙烯酸縮水甘油酯、甲基丙烯酸、甲基丙烯酸鈉、丙烯酸、丙烯酸鈉、甲基丙烯酸異辛酯、甲基丙烯酸月桂酸酯、甲基丙烯酸硬脂酸酯或甲基丙烯酸羥乙酯等。
[0012]所述的空間分子臂為至少有兩端分別含有二胺、二醇、二醛、二巰、二酸、二環(huán)氧或二異氰的分子。
[0013]一種醫(yī)用膽紅素選擇性灌流吸附劑的制備方法，其具體制備步驟為:
步驟一、將用于聚合形成功能載體的各單體混合組成油相，然后與配制的分散劑水相混合均勻，用惰性氣體或氮氣排空反應體系中的氧氣，加入引發(fā)劑，在攪拌的作用下，于0-90°C反應l_16h ;反應結(jié)束后過濾出產(chǎn)物，洗滌并干燥后備用；
步驟二、將步驟一的產(chǎn)物加入溶劑中，加入含有雙官能團的空間分子臂物質(zhì)，在0-95°C中反應l_24h，反應結(jié)束后過濾出產(chǎn)物，洗滌并干燥后備用；
步驟三、將步驟二得到的產(chǎn)物與含雙官能團的偶聯(lián)劑溶液混合，并于0-65°C反應IOmin-1Oh后濾出、洗滌并干燥后加入配置好的白蛋白水溶液中，或直接將步驟二得到的產(chǎn)物加入配制好的白蛋白水溶液中，與白蛋白水溶液混合后，在0-65 V反應IOmin-1Oh,反應結(jié)束后過濾出產(chǎn)物，洗滌并干燥后即得到醫(yī)用膽紅素選擇性灌流吸附劑。
[0014]所述分散劑水相為醇解度1%_100%的聚乙烯醇，其水溶液的濃度為0.01%_30%。
[0015]所述分散劑水相的加入量為油相的50%_500%。[0016]所述的引發(fā)劑為過氧類、偶氮類或氧化還原類自由基引發(fā)劑。
[0017]所述引發(fā)劑的加入量為油相質(zhì)量的0.05%_5%。
[0018]所述的干燥，為真空干燥、減壓干燥、常規(guī)熱風干燥、冷凍真空干燥、風干等，干燥溫度從一 80°C _65°C恰當選用。
[0019]有益效果是:
1、本發(fā)明醫(yī)用膽紅素選擇性灌流吸附劑，所選用的載體材料的微觀分子結(jié)構(gòu)和功能要能與膽紅素的微觀分子結(jié)構(gòu)和功能匹配；膽紅素分子中含有親水性基團和區(qū)域，則根據(jù)相似相容原理，吸附劑載體的分子結(jié)構(gòu)中要含有親水性基團和區(qū)域；膽紅素分子中含有疏水性基團和區(qū)域，則根據(jù)相似相容原理，吸附劑載體的分子結(jié)構(gòu)中要含有疏水性基團和區(qū)域；)膽紅素分子中含有呈正電性的基團，則根據(jù)靜電作用異性相吸原理，吸附劑載體的分子結(jié)構(gòu)中要含有呈負電性的基團；膽紅素分子中含有呈負電性的基團，則根據(jù)靜電作用異性相吸原理，吸附劑載體的分子結(jié)構(gòu)中要含有呈正電性的基團；根據(jù)靜電作用和氫鍵作用原理，載體分子結(jié)構(gòu)中要含有羧基、羥基、胺基等功能基團；根據(jù)范德華力原理，載體分子要有一定分子量，不能太小，質(zhì)量越大，范德華力也相應增大，增強相互之間的吸引力。根據(jù)親和作用原理，將膽紅素的內(nèi)源性親和配基(白蛋白或類白蛋白或白蛋白衍生物)以化學共價鍵方式牢固地固定到載體上；為保持親和配基的生物活性，需要在載體中引入特定的分子臂，以削弱空間位阻效應；為提高吸附劑對膽紅素的醫(yī)用效果，要將物質(zhì)之間微觀的多種相互結(jié)合作用原理綜合起來發(fā)揮多維協(xié)同效應，避免因單一作用而致實際醫(yī)用效果不理想或低下。
[0020]2、本發(fā)明醫(yī)用膽紅素選擇性灌流吸附劑的制備，選擇由單體聚合而成為的高聚物作為功能載體材料，原料來源廣泛和易得，原料成分易于調(diào)整和恰當組合，高聚物的分子量可控；選擇由多種單體聚合而成的高聚物作為載體材料，可以便利地調(diào)節(jié)載體材料的親水性、疏水性、含有功能基團的數(shù)量和種類，進而可調(diào)節(jié)固載功能配基的數(shù)量；采用共價鍵結(jié)合方式固定功能配基白蛋白，使得在實際的臨床應用時不會因血液流動而致脫落導致失效，使功能配基跟致病物質(zhì)膽紅素的親和結(jié)合作用得以保持；被固定到載體上的功能配基要更好地發(fā)揮其選擇性吸附膽紅素的功能，則需降低該配基的空間位阻效應，這還需要通過在配基和載體之間再連接上一種中間分子，起“空間分子臂”的作用，目的是起到降低配基的空間位阻效應、增強配基的空間自由度，保持其生物活性，更好地發(fā)揮功能。
[0021]3、本發(fā)明醫(yī)用膽紅素選擇性灌流吸附劑，該吸附劑的微觀分子結(jié)構(gòu)和功能與目標被結(jié)合吸附的致病物質(zhì)膽紅素的微觀分子結(jié)構(gòu)和功能匹配，實現(xiàn)更特異性相互結(jié)合作用，增強了選擇性吸附效果；此吸附劑的功能載體、分子臂、偶聯(lián)劑等成分能夠允許便利地調(diào)節(jié)和配伍，可以制備出系列的、不同等級的醫(yī)學吸附劑，滿足臨床不同效果要求和患者層次的需求。以上的優(yōu)勢在臨床治療上將表現(xiàn)為膽紅素灌流吸附劑醫(yī)學制品的臨床治療效果得以增強，具有重要的衛(wèi)生意義、科學理論意義和應用前景。
【具體實施方式】
[0022]以下實施例可使本專業(yè)技術人員全面理解本發(fā)明，但不以任何方式限制本發(fā)明； 實施示例I
以聚乙烯醇-1799為水溶液相，甲基丙烯酸縮水甘油酯、苯乙烯、丙烯酸鈉、甲基丙烯酸異辛酯為復合單體油相，以偶氮二異丁氰為引發(fā)劑，以己二胺為功能分子臂，以戊二醛為功能分子臂兼偶聯(lián)劑，以人白蛋白為功能配基為例:
稱取6g聚乙烯醇-1799，加入含80ml蒸餾水的三口燒瓶中，于90°C下慢速攪拌2小時，以使聚乙烯醇充分溶解，然后冷卻至室溫，制得聚乙烯醇水溶液即水相。然后于一燒杯中，稱取24g甲基丙烯酸縮水甘油酯、1.5g丙烯酸鈉、1.5g苯乙烯、3g甲基丙烯酸異辛酯，將物料磁力混合攪拌均勻，即為油相，然后加入上述燒瓶中。然后在慢速攪拌下，邊勻化反應體系，邊通入氮氣以排空反應體系中的氧氣。攪拌勻化排空半小時后，加入引發(fā)劑偶氮二異丁氰0.15g，然后在氮氣氛圍中，讓反應體系在邊攪拌下在75°C中反應8個小時。反應結(jié)束后，將反應體系倒入盛有清水的燒杯中，攪拌洗滌，然后真空過濾，將濾餅反復用清水清洗幾次，重復真空抽濾洗滌2-3次，然后再用無水乙醇清洗2-3次，最后將濾餅在60°C下熱風干燥，得到中間產(chǎn)物A，即基本載體。
[0023]然后稱取中間產(chǎn)物A 20g,加入三口燒瓶中，加入30ml水和30ml 二氧六環(huán),加入0.05g己二胺，加入少許氫氧化鈉，在85°C中反應3h。反應結(jié)束后，將反應體系真空抽濾，然后將濾餅倒入盛有清水的燒杯中，攪拌洗滌，然后真空過濾，將濾餅反復用清水清洗幾次直至洗滌液呈中性為止，重復真空抽濾洗滌，最后將濾餅在60°C下熱風干燥，得到中間產(chǎn)物B，即接枝了分子臂的改性載體。
[0024]然后取30ml水,加入I ml 50%的戊二醒水溶液,滴加I滴冰乙酸,混合均勻。升溫至45°C，然后稱取中間產(chǎn)物B 20g,邊攪拌邊分步逐漸加入到水溶液中，加入完畢之后繼續(xù)攪拌反應半小時。反應結(jié)束后,將反應體系真空抽濾,然后將濾餅倒入盛有清水的燒杯中，攪拌洗滌，然后真空過濾，將濾餅反復用清水清洗幾次直至洗滌液無戊二醛味為止，重復真空抽濾洗滌，最后將濾餅在50°C下熱風干燥，得到中間產(chǎn)物C，即接枝了分子臂兼偶聯(lián)劑的改性載體。
[0025]然后取30ml水，加入2g人白蛋白凍干粉，攪拌溶解得到白蛋白水溶液。然后稱取20g中間產(chǎn)物C，邊攪拌邊分散逐步加入到水溶液中，最后在41 °C下反應30min，得到醫(yī)用膽紅素選擇性灌流吸附劑。
[0026]實施示例2
以聚乙烯醇-1799為水溶液相，甲基丙烯酸縮水甘油酯、苯乙烯、丙烯酸鈉、甲基丙烯酸異辛酯為復合單體油相，以偶氮二異丁氰為引發(fā)劑，以己二胺為功能分子臂，以戊二醛為功能分子臂兼偶聯(lián)劑，以牛白蛋白為功能配基為例:
稱取4g聚乙烯醇-1799，加入含80ml蒸餾水的三口燒瓶中，于90°C下慢速攪拌2小時，以使聚乙烯醇充分溶解，然后冷卻至室溫，制得聚乙烯醇水溶液即水相。然后于一燒杯中，稱取24g甲基丙烯酸縮水甘油酯、1.5g丙烯酸鈉、1.5g苯乙烯、3g甲基丙烯酸異辛酯，將物料磁力混合攪拌均勻，即為油相，然后加入上述燒瓶中。然后在慢速攪拌下，邊勻化反應體系，邊通入氮氣以排空反應體系中的氧氣。攪拌勻化排空半小時后，加入引發(fā)劑偶氮二異丁氰0.15g，然后在氮氣氛圍中，讓反應體系在邊攪拌下在75°C中反應8個小時。反應結(jié)束后，將反應體系倒入盛有清水的燒杯中，攪拌洗滌，然后真空過濾，將濾餅反復用清水清洗幾次，重復真空抽濾洗滌2-3次，然后再用無水乙醇清洗2-3次，最后將濾餅在60°C下熱風干燥，得到中間產(chǎn)物A，即基本載體。
[0027]然后稱取中間產(chǎn)物A 20g,加入三口燒瓶中，加入30ml水和30ml 二氧六環(huán),加入0.05g己二胺，加入少許氫氧化鈉，在85°C中反應3h。反應結(jié)束后，將反應體系真空抽濾，然后將濾餅倒入盛有清水的燒杯中，攪拌洗滌，然后真空過濾，將濾餅反復用清水清洗幾次直至洗滌液呈中性為止，重復真空抽濾洗滌，最后將濾餅在60°C下熱風干燥，得到中間產(chǎn)物B，即接枝了分子臂的改性載體。
[0028]然后取30ml水,加入I ml 50%的戊二醒水溶液,滴加I滴冰乙酸,混合均勻。升溫至45°C，然后稱取中間產(chǎn)物B 20g,邊攪拌邊分步逐漸加入到水溶液中，加入完畢之后繼續(xù)攪拌反應半小時。反應結(jié)束后,將反應體系真空抽濾,然后將濾餅倒入盛有清水的燒杯中，攪拌洗滌，然后真空過濾，將濾餅反復用清水清洗幾次直至洗滌液無戊二醛味為止，重復真空抽濾洗滌，最后將濾餅在50°C下熱風干燥，得到中間產(chǎn)物C，即接枝了分子臂兼偶聯(lián)劑的改性載體。
[0029]然后取30ml水，加入3g牛白蛋白凍干粉，攪拌溶解得到白蛋白水溶液。然后稱取20g中間產(chǎn)物C，邊攪拌邊分散逐步加入到水溶液中，最后在41 °C下反應30min，得到醫(yī)用膽紅素選擇性灌流吸附劑。
[0030]實施示例3
以聚乙烯醇-1780為水溶液相，甲基丙烯酸縮水甘油酯、苯乙烯、丙烯酸鈉、甲基丙烯酸異辛酯為復合單體油相，以偶氮二異丁氰為引發(fā)劑，以己二胺為功能分子臂，以戊二醛為功能分子臂兼偶聯(lián)劑，以人白蛋白為功能配基為例:
稱取IOg聚乙烯醇-1780，加入含80ml蒸餾水的三口燒瓶中，于85°C下慢速攪拌2小時，以使聚乙烯醇充分溶解，然后冷卻至室溫，制得聚乙烯醇水溶液即水相。然后于一燒杯中，稱取24g甲基丙烯酸縮水甘油酯、1.5g丙烯酸鈉、1.5g苯乙烯、3g甲基丙烯酸異辛酯，將物料磁力混合攪拌均勻，即為油相，然后加入上述燒瓶中。然后在慢速攪拌下，邊勻化反應體系，邊通入氮氣以排空反應體系中的氧氣。攪拌勻化排空半小時后，加入引發(fā)劑偶氮二異丁氰0.15g，然后在氮氣氛圍中，讓反應體系在邊攪拌下在75°C中反應8個小時。反應結(jié)束后，將反應體系倒入盛有清水的燒杯中，攪拌洗滌，然后真空過濾，將濾餅反復用清水清洗幾次，重復真空抽濾洗滌2-3次，然后再用無水乙醇清洗2-3次，最后將濾餅在60°C下熱風干燥，得到中間產(chǎn)物A，即基本載體。
[0031]然后稱取中間產(chǎn)物A 20g,加入三口燒瓶中，加入30ml水和30ml 二氧六環(huán),加入0.05g己二胺，加入少許氫氧化鈉，在85°C中反應3h。反應結(jié)束后，將反應體系真空抽濾，然后將濾餅倒入盛有清水的燒杯中，攪拌洗滌，然后真空過濾，將濾餅反復用清水清洗幾次直至洗滌液呈中性為止，重復真空抽濾洗滌，最后將濾餅在60°C下熱風干燥，得到中間產(chǎn)物B，即接枝了分子臂的改性載體。
[0032]然后取30ml水,加入I ml 50%的戊二醒水溶液,滴加I滴冰乙酸,混合均勻。升溫至45°C，然后稱取中間產(chǎn)物B 20g,邊攪拌邊分步逐漸加入到水溶液中，加入完畢之后繼續(xù)攪拌反應半小時。反應結(jié)束后,將反應體系真空抽濾,然后將濾餅倒入盛有清水的燒杯中，攪拌洗滌，然后真空過濾，將濾餅反復用清水清洗幾次直至洗滌液無戊二醛味為止，重復真空抽濾洗滌，最后將濾餅在50°C下熱風干燥，得到中間產(chǎn)物C，即接枝了分子臂兼偶聯(lián)劑的改性載體。
[0033]然后取30ml水，加入2g人白蛋白凍干粉，攪拌溶解得到白蛋白水溶液。然后稱取20g中間產(chǎn)物C，邊攪拌邊分散逐步加入到水溶液中，最后在41 °C下反應30min，得到醫(yī)用膽紅素選擇性灌流吸附劑。
[0034]實施示例4
以聚乙烯醇-1799為水溶液相，甲基丙烯酸縮水甘油酯、苯乙烯、丙烯酸鈉、甲基丙烯酸硬脂酸酯為復合單體油相，以偶氮二異丁氰為引發(fā)劑，以己二胺為功能分子臂，以戊二醛為功能分子臂兼偶聯(lián)劑，以人白蛋白為功能配基為例:
稱取2g聚乙烯醇-1799，加入含80ml蒸餾水的三口燒瓶中，于90°C下慢速攪拌2小時，以使聚乙烯醇充分溶解，然后冷卻至室溫，制得聚乙烯醇水溶液即水相。然后于一燒杯中，稱取22g甲基丙烯酸縮水甘油酯、1.5g丙烯酸鈉、1.5g苯乙烯、5g甲基丙烯酸硬脂酸酯，將物料磁力混合攪拌均勻，即為油相，然后加入上述燒瓶中。然后在慢速攪拌下，邊勻化反應體系，邊通入氮氣以排空反應體系中的氧氣。攪拌勻化排空半小時后，加入引發(fā)劑偶氮二異丁氰0.15g，然后在氮氣氛圍中，讓反應體系在邊攪拌下在75°C中反應9個小時。反應結(jié)束后，將反應體系倒入盛有清水的燒杯中，攪拌洗滌，然后真空過濾，將濾餅反復用清水清洗幾次，重復真空抽濾洗滌2-3次，然后再用無水乙醇清洗2-3次，最后將濾餅在60°C下熱風干燥，得到中間產(chǎn)物A，即基本載體。
[0035]然后稱取中間產(chǎn)物A 20g,加入三口燒瓶中，加入30ml水和30ml 二氧六環(huán),加入0.05g己二胺，加入少許氫氧化鈉，在85°C中反應3h。反應結(jié)束后，將反應體系真空抽濾，然后將濾餅倒入盛有清水的燒杯中，攪拌洗滌，然后真空過濾，將濾餅反復用清水清洗幾次直至洗滌液呈中性為止，重復真空抽濾洗滌，最后將濾餅在60°C下熱風干燥，得到中間產(chǎn)物B，即接枝了分子臂的改性載體。
[0036]然后取30ml水,加入Iml 50%的戊二醒水溶液,滴加I滴冰乙酸,混合均勻。升溫至45°C，然后稱取中間產(chǎn)物B 20g,邊攪拌邊分步逐漸加入到水溶液中，加入完畢之后繼續(xù)攪拌反應半小時。反應結(jié)束后,將反應體系真空抽濾,然后將濾餅倒入盛有清水的燒杯中，攪拌洗滌，然后真空過濾，將濾餅反復用清水清洗幾次直至洗滌液無戊二醛味為止，重復真空抽濾洗滌，最后將濾餅在50°C下熱風干燥，得到中間產(chǎn)物C，即接枝了分子臂兼偶聯(lián)劑的改性載體。
[0037]然后取30ml水，加入2g人白蛋白凍干粉，攪拌溶解得到白蛋白水溶液。然后稱取20g中間產(chǎn)物C，邊攪拌邊分散逐步加入到水溶液中，最后在41 °C下反應30min，得到醫(yī)用膽紅素選擇性灌流吸附劑。
[0038]實施示例5
以聚乙烯醇-1799為水溶液相，甲基丙烯酸縮水甘油酯、苯乙烯、丙烯酸鈉、甲基丙烯酸硬脂酸酯為復合單體油相，以過氧化二苯甲酰為引發(fā)劑，以1，12- 二氨基十二胺為功能分子臂，以戊二醛為功能分子臂兼偶聯(lián)劑，以魚白蛋白為功能配基為例:
稱取3g聚乙烯醇-1799，加入含80ml蒸餾水的三口燒瓶中，于90°C下慢速攪拌2小時，以使聚乙烯醇充分溶解，然后冷卻至室溫，制得聚乙烯醇水溶液即水相。然后于一燒杯中，稱取24g甲基丙烯酸縮水甘油酯、1.5g丙烯酸鈉、1.5g苯乙烯、5g甲基丙烯酸硬脂酸酯，將物料磁力混合攪拌均勻，即為油相，然后加入上述燒瓶中。然后在慢速攪拌下，邊勻化反應體系，邊通入氮氣以排空反應體系中的氧氣。攪拌勻化排空半小時后，加入引發(fā)劑過氧化二苯甲酰0.15g，然后在氮氣氛圍中，讓反應體系在邊攪拌下在75°C中反應10個小時。反應結(jié)束后，將反應體系倒入盛有清水的燒杯中，攪拌洗滌，然后真空過濾，將濾餅反復用清水清洗幾次，重復真空抽濾洗滌2-3次，然后再用無水乙醇清洗2-3次，最后將濾餅在60°C下熱風干燥，得到中間產(chǎn)物A，即基本載體。
[0039]然后稱取中間產(chǎn)物A 20g,加入三口燒瓶中，加入30ml水和30ml 二氧六環(huán)，加入
0.05g 1，12-二氨基十二胺，加入少許氫氧化鈉，在85°C中反應6h。反應結(jié)束后，將反應體系真空抽濾，然后將濾餅倒入盛有清水的燒杯中，攪拌洗滌，然后真空過濾，將濾餅反復用清水清洗幾次直至洗滌液呈中性為止，重復真空抽濾洗滌，最后將濾餅在60°C下熱風干燥，得到中間產(chǎn)物B，即接枝了分子臂的改性載體。
[0040]然后取30ml水,加入I ml 50%的戊二醒水溶液,滴加I滴冰乙酸,混合均勻。升溫至45°C，然后稱取中間產(chǎn)物B 20g,邊攪拌邊分步逐漸加入到水溶液中，加入完畢之后繼續(xù)攪拌反應半小時。反應結(jié)束后,將反應體系真空抽濾,然后將濾餅倒入盛有清水的燒杯中，攪拌洗滌，然后真空過濾，將濾餅反復用清水清洗幾次直至洗滌液無戊二醛味為止，重復真空抽濾洗滌，最后將濾餅在50°C下熱風干燥，得到中間產(chǎn)物C，即接枝了分子臂兼偶聯(lián)劑的改性載體。
[0041]然后取30ml水，加入2g魚白蛋白凍干粉，攪拌溶解得到白蛋白水溶液。然后稱取20g中間產(chǎn)物C，邊攪拌邊分散逐步加入到水溶液中，最后在41 °C下反應30min，得到醫(yī)用膽紅素選擇性灌流吸附劑。
[0042]實施示例6
功能配基白蛋白固載量的檢測:采用考馬斯亮藍法，檢測中間產(chǎn)物C與白蛋白水溶液反應前后白蛋白水溶液中白蛋白濃度的變化值，白蛋白濃度的變化差值與初始體積的乘積，得到固載到中間產(chǎn)物C中的總量，然后除以中間產(chǎn)物的質(zhì)量，得到每克吸附劑固載白蛋白的量，檢測結(jié)果為每g吸附劑固載白蛋白的量不少于60mg。
[0043]相關實驗:
實驗一功能配基白蛋白固定在載體上的穩(wěn)定性試驗
取吸附劑100g，裝入吸附柱中，用400mL 37°C的PBS溶液循環(huán)地動態(tài)流經(jīng)吸附柱，循環(huán)4h后，結(jié)束循環(huán)，取最終的循環(huán)液用紫外分光光度計進行全波長掃描，然后觀察在白蛋白紫外特征吸收峰280nm附近是否有明顯的紫外吸收峰出現(xiàn)。檢測結(jié)果觀察不到明顯的紫外吸收峰存在，此表明固定化的牢固性。
[0044]實驗二吸附膽紅素效率試驗
取該吸附劑10克裝入吸附柱中。取400mL抗凝全血，然后注入新配的膽紅素溶液，以配成高膽紅素血液，然后立即用膽紅素濃度分析儀測試全血中的膽紅素初始濃度。然后在恒溫37°C下，在醫(yī)用蠕動泵的驅(qū)動下，使血液循環(huán)經(jīng)過吸附柱2h，最后測試全血中的膽紅素的終末濃度。結(jié)果表明該全血中的膽紅素的實際濃度下降了 38%以上。
【權利要求】
1.一種醫(yī)用膽紅素選擇性灌流吸附劑，其特征在于:其成分包括功能載體和功能配基，所述功能載體為以丙烯酸為母體的單體、通過靜電或氫鍵作用吸附膽紅素的功能單體和通過相似相容原理吸附膽紅素的功能單體復合聚合而成的高聚物；所述的功能配基為白蛋白、白蛋白衍生物和類白蛋白中的一種或兩種以上；所述的功能配基通過偶聯(lián)劑偶聯(lián)固定在功能載體上，且功能載體和功能配基之間通過偶聯(lián)劑和/或空間分子臂進行空間分隔；所述通過靜電或氫鍵作用吸附膽紅素的功能單體為含有羰基、羥基、胺基、酯基或醚基功能基團的單體；所述的通過相似相容原理吸附膽紅素的功能單體為含疏水烷烴或芳烴的單體。
2.如權利要求1所述的一種醫(yī)用膽紅素選擇性灌流吸附劑，其特征在于:每克功能載體上偶聯(lián)固定至少30mg功能配基。
3.如權利要求1所述的一種醫(yī)用膽紅素選擇性灌流吸附劑，其特征在于:所述的以丙烯酸為母體的單體為甲基丙烯酸縮水甘油酯、甲基丙烯酸、甲基丙烯酸鈉、丙烯酸、丙烯酸鈉、甲基丙烯酸異辛酯、甲基丙烯酸月桂酸酯、甲基丙烯酸硬脂酸酯或甲基丙烯酸羥乙酯。
4.如權利要求1所述的一種醫(yī)用膽紅素選擇性灌流吸附劑，其特征在于:所述的空間分子臂為至少有兩端分別含有二胺、二醇、二醛、二巰、二酸、二環(huán)氧或二異氰的分子。
5.如權利要求1所述醫(yī)用膽紅素選擇性灌流吸附劑的制備方法，其特征在于:制備步驟為: 步驟一、將用于聚合形成功能載體的各單體混合組成油相，然后與配制的分散劑水相混合均勻，用惰性氣體或氮氣排空反應體系中的氧氣，加入引發(fā)劑，在攪拌的作用下，于0-90°C反應l_16h ;反應結(jié)束后過濾出產(chǎn)物，洗滌并干燥后備用； 步驟二、將步驟一的產(chǎn)物加入溶劑中，加入含有雙官能團的空間分子臂物質(zhì)，在0-95°C中反應l_24h，反應結(jié)束后過濾出產(chǎn)物，洗滌并干燥后備用； 步驟三、將步驟二得到的產(chǎn)物與含雙官能團的偶聯(lián)劑溶液混合，并于0-65°C反應IOmin-1Oh后濾出、洗滌并干燥后加入配制好的白蛋白水溶液中，或直接將步驟二得到的產(chǎn)物加入配制好的白蛋白水溶液中，與白蛋白水溶液混合后，在0-65 V反應IOmin-1Oh,反應結(jié)束后過濾出產(chǎn)物，洗滌并干燥后即得到醫(yī)用膽紅素選擇性灌流吸附劑。
6.如權利要求5所述的醫(yī)用膽紅素選擇性灌流吸附劑的制備方法，其特征在于:所述分散劑水相為醇解度1%_100%的聚乙烯醇，其水溶液的濃度為0.01%-30%。
7.如權利要求5所述的醫(yī)用膽紅素選擇性灌流吸附劑的制備方法，其特征在于:所述分散劑水相的加入量為油相的50%-500%。
8.如權利要求5所述的醫(yī)用膽紅素選擇性灌流吸附劑的制備方法，其特征在于:所述的引發(fā)劑為過氧類、偶氮類或氧化還原類自由基引發(fā)劑。
9.如權利要求5所述的醫(yī)用膽紅素選擇性灌流吸附劑的制備方法，其特征在于:所述引發(fā)劑的加入量為油相質(zhì)量的0.05%-5%。
【文檔編號】B01J20/30GK104001482SQ201410198736
【公開日】2014年8月27日 申請日期:2014年5月12日 優(yōu)先權日:2014年5月12日
【發(fā)明者】麻開旺, 姚大虎, 李光大, 張玉清, 陳俊平 申請人:河南科技大學