專利名稱：由可相互對折疊合的構(gòu)件構(gòu)成的色譜測定裝置的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及用于測定試樣的特性的測試條、整體構(gòu)成的殼體和內(nèi)裝有試驗(yàn)條和殼體的箱，以及利用這些試驗(yàn)條和殼體測定試樣特性的一些方法。
有許多用于檢測和/或測定分析物，尤其是具有生物問題的分析物的分析系統(tǒng)，其中包括一些色譜測定系統(tǒng)。用這種系統(tǒng)經(jīng)常測定的分析物中有(1)激素，如人類絨毛膜促性腺激素(human chorionicgonadotropin)(HCG)，它通常是作為人類懷孕的一種標(biāo)志來測定的；(2)抗原，尤其是對細(xì)菌的、病毒的和原生動物病原(protozoan pathogens)具有特異性的抗原，如鏈球菌(Streplococcus)，肝炎病毒(hepetitis virus)，和賈第鞭毛蟲(Grardia)；(3)抗體，尤其是由于由病原體感染引發(fā)的抗體，如針對幽門螺桿菌(Helicobacter pylori)細(xì)菌的抗體，和針對人類免疫缺陷病毒(HTV)的抗體；(4)其它蛋白質(zhì)，如血紅蛋白(hemoglobin)，它通常用于測定糞便隱血，是腸胃紊亂如結(jié)腸癌的一種早期指示。
(5)酶，如天冬氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶(aspartateaminolransferase)，乳酸鹽脫氫酶(lactate dehydrogenase)，堿性磷酸鹽(alkaline phosphatase)，和谷氨酸脫氫酶(glutamatedehydrogenase)，通常作為生理功能和組織損傷的指示來測定；(6)藥物，既包括醫(yī)療用藥品，如抗生素，安定劑(tranquilizers)和抗驚厥劑(anticon vulsants)，也包括非法毒品，如可卡因，海洛因和馬力球哪(mariguana)；(7)環(huán)境污染劑，如殺蟲劑(pesticides)和芳香族碳?xì)浠衔?aromatic hydrocarbons)；和(8)維生素。
醫(yī)生和醫(yī)務(wù)技術(shù)人員經(jīng)常使用這種色譜系統(tǒng)用以對各種病況和紊亂進(jìn)行快速的現(xiàn)場診斷和醫(yī)療監(jiān)測。這種色譜系統(tǒng)也越來越多地由病人自己在家中使用，來監(jiān)測這些病況和紊亂。
在這種系統(tǒng)中最重要的系統(tǒng)是“薄層”系統(tǒng)，其中，一種溶劑(移動相)在一個薄而平的吸收劑介質(zhì)上移動。
在能夠用這種薄層系統(tǒng)實(shí)施的測試中最重要的試驗(yàn)是免疫測定，這種免疫測定依賴于抗原或半抗原與相應(yīng)的抗體之間的特異性相互作用。人們知道用免疫測定法作為檢測醫(yī)療上重要的分子的存在和/或數(shù)量的手段已經(jīng)有一定的時間了。早在1956年，J.M.Singer就報導(dǎo)了利用一種免疫基的膠乳粘合試驗(yàn)來檢測一種與類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎有關(guān)聯(lián)的因素(參見Singer等人的文章，美國醫(yī)療雜志22888-892頁，1956年)。
在與免疫測定一起使用的色譜技術(shù)中有一種稱為免疫色譜法的方法。一般地，這種技術(shù)采用一種暴露試劑(disclosingreagent)或顆粒，這種暴露試劑或顆粒已連接到一個針對要測定的分子的抗體上，形成一個結(jié)合物。這個結(jié)合物然后與一個試樣混合，如果試樣中存在要測定的分子，與暴露試劑直接的抗體就結(jié)合到要測定的分子上，由此指示出要測定的分子是存在的。這種暴露試劑或顆?；蛞杂妙伾⒋判?、放射性、與另一個分子的特異性反應(yīng)、或另一種物理的或化學(xué)的特性加以識別。采用的特異性反應(yīng)隨著要測定的分子和要測試的試樣的性質(zhì)的不同而不同。
免疫色譜測定法分成兩個主要的類別即“夾心法”和“競爭法”，這是按照要檢測的抗原-抗體復(fù)合物的性質(zhì)和產(chǎn)生這種復(fù)合物所要求的反應(yīng)的順序來分類的。要檢測的抗原本身可以是一種抗體，如在血清學(xué)測定中對幽門螺桿菌有特異性的抗體。在這種情況下，要檢測的抗體可以被結(jié)合到一種特異性抗原上。另一種方式是，要檢測的抗原可以利用一種結(jié)合到針對要檢測的分析物的第一抗體上的加標(biāo)記的第二抗體間接地得到檢測。
一般地，夾心免疫色譜法要求將可能含有要測定的分析物的試樣與分析物的抗體相混合。這些抗體是活動的，并且典型地，被連接到一種標(biāo)記物或一種暴露試劑上，例如染色膠乳(dyedlatex)、膠肪金屬膠(colloidal metal sol)，或者一種放射性同位素。然后將這種混合物施加到一個色譜介質(zhì)上，該色譜介質(zhì)含有一個針對要研究的分析物的固定抗體的帶區(qū)或區(qū)域。這種色譜介質(zhì)通常是一種類似于一個量尺的小片條形狀。當(dāng)要測定的分子和加標(biāo)記的抗體的復(fù)合物到達(dá)色譜介質(zhì)上的固定抗體區(qū)域時，就發(fā)生結(jié)合，而被結(jié)合的加標(biāo)記的抗體被設(shè)定在該區(qū)域中，這就指示出存在著要測定的分子。這種技術(shù)可以用于獲得定量的或半定量的結(jié)果。
美國專利文件第4,168,146號(Grubb等人)和第4,366,241號(Tom等人)中描述了一些在試驗(yàn)條上進(jìn)行的夾心法免疫測定的例子，此處引用這兩篇專利文獻(xiàn)作為參考。
在競爭法免疫測定中，標(biāo)記物的典型情況是一種加標(biāo)記的分析物或分析物的模擬物，它為了與一個抗體結(jié)合而與試樣中任何不加標(biāo)記的分析物競爭。典型的情況是采用競爭法免疫測定來檢測諸如半抗原這樣的分析物，其中，每個半抗原都是單克隆的并只能夠結(jié)合一個抗體分子。在美國專利文件第4,235,601(Deutsch等人)，第4,442,204(Liotta)和第5,208,535(Buechler等人中公開了一些競爭法免疫測定裝置的例子。這些文獻(xiàn)在此引用作為參考。
目前存在的采用試驗(yàn)條的色譜技術(shù)是有用的，但它們有一些缺陷。許多試樣，如糞便試樣，含有可能會堵塞色譜介質(zhì)的孔的顆粒物質(zhì)，而大大地阻礙了免疫色譜過程。其它一些試樣，如血液，含有細(xì)胞和有色組分，使得難以讀出試驗(yàn)結(jié)果。即使試樣不產(chǎn)生干擾，也常常難以用現(xiàn)有的色譜試驗(yàn)裝置將試樣施加到色譜介質(zhì)上，以使試樣前沿在色譜介質(zhì)中均勻地移動，保證試樣到達(dá)在其中要以一種均勻的直線的方式發(fā)生結(jié)合的區(qū)域中。
由于要測定的試樣特性的不同或要實(shí)施的測定的不同性質(zhì)，現(xiàn)有試驗(yàn)條也存在一些其它問題。這種裝置不實(shí)用于實(shí)施洗滌步驟，在為了提高敏感性，減少本底，常常要求有這種洗滌步驟。而且在裝置內(nèi)難以進(jìn)行預(yù)培養(yǎng)步驟，而且在許多情況下是不可能的。
此外，需要一種能夠?qū)嵤┓秶鷮拸V的分離的免疫色譜測定裝置，例如從牛奶中分離脂肪，或分離有機(jī)化學(xué)物，如從甲苯中分離苯。
試樣的制備和廢物的產(chǎn)生是現(xiàn)有的免疫色譜法裝置和技術(shù)所面臨的其它問題。由污染的血液或血液組分所擴(kuò)散的疾病如艾滋病和肝炎的不斷傳播已經(jīng)使這些問題更加嚴(yán)重。將一個試樣(如糞便)和一個取樣器(如一個喉嚨拭片)直接施加到色譜介質(zhì)上幾乎是不可能的。在試樣能夠加到色譜介質(zhì)上之前通常需要進(jìn)行一些提取和預(yù)處理反應(yīng)。典型地，這些反應(yīng)是由實(shí)施試驗(yàn)的醫(yī)生或技術(shù)人員在幾個小的容器，如試管或邁克福志(microfuge)管中進(jìn)行的，這需要使用傳輸裝置，如吸液管。這樣，所有這些裝置都受到污染而必須用特殊措施進(jìn)行處理，以便那些可能無意地接觸到這些廢物的工人或人員不會被感染。
醫(yī)務(wù)人員或技術(shù)人員所用的現(xiàn)有色譜裝置的另一個局限性是它們不能實(shí)施雙向的或兩維的色譜法。很久以來人們就知道這些技術(shù)是很有力的分析工具，但它們相對于簡單的單向色譜法而言則很復(fù)雜，使得它們很難用于醫(yī)生的辦公室或醫(yī)療實(shí)驗(yàn)室中的試驗(yàn)條裝置上。
因此，需要有一種能夠進(jìn)行寬廣范圍的色譜測定的先進(jìn)測定裝置。這種裝置應(yīng)該能夠處理各種類型的免疫測定，包括夾心法和競爭法，以及應(yīng)用色譜法的其它類型的測定。這種裝置應(yīng)該能夠直接接收一種可能被污染的試樣或一種試樣制備裝置，以便消除對提取容器和傳輸裝置的需要。這樣的一種裝置，最好的是為一種試驗(yàn)條的形式，也應(yīng)該能夠?qū)τ猩脑嚇踊蚝蓄w粒的試樣實(shí)施免疫色譜測定，而不會發(fā)生干擾，并且能夠?qū)⒃嚇泳鶆虻貍魉偷缴V介質(zhì)上，以改善試驗(yàn)的準(zhǔn)確度和精度。此外，這種改進(jìn)的試驗(yàn)條應(yīng)該能夠在醫(yī)療實(shí)驗(yàn)室或醫(yī)生辦公室中使用時實(shí)施雙向或兩維的色譜法。
我們已經(jīng)開發(fā)了一種滿足于這些需要的測定裝置，這種測定裝置改善了對生物研究的分析物所進(jìn)行的測定，同時簡化了測定的實(shí)施過程并且避免了污染。這種裝置能夠?qū)嵤┧蓄愋偷拿庖邷y定，包括夾心法免疫測定、競爭法免疫測定，和采用這些原理的各種組合的測定。這種裝置能夠?qū)嵤┢渲幸獧z測的抗原本身是一種抗體，如幽門螺桿菌抗體的血清測定。這種裝置能夠?qū)嵤┻@樣的測定，其中要檢測的抗原是通過用一種結(jié)合到針對分析物的第一抗體上的加標(biāo)記的第二抗體間接檢測的。
一種按照本發(fā)明的測定裝置利用壓力將液體從一個可對折構(gòu)件傳輸?shù)搅硪粋€可對折構(gòu)件上，而且也驅(qū)使液體流過色譜介質(zhì)。該壓力不僅加快了裝置的工作速度，而且也能夠?qū)嵤└郊拥牟襟E，例如用于在單一的裝置中除去干擾顆粒組分的提取步驟。壓力是通過用位于每個可對折構(gòu)件上的接合件如互鎖件將可對折的構(gòu)件保持在一起而產(chǎn)生的。更好的情況是施加一個預(yù)定壓力，以保證測定過程的每個步驟的最佳地實(shí)施。
此外，這種裝置能夠?qū)嵤┢渌愋偷奶禺愋越Y(jié)合測定，例如(1)基于特異性結(jié)合蛋白質(zhì)，如植物凝血素、激素受體，或它們的特異性配體的病毒受體的親合力的測定；(2)基于其相應(yīng)的底物或抑制劑的酶的親合力的測定；或(3)基于按照Watson-Crick基礎(chǔ)配對方案的一個核酸(DNA或RNA)節(jié)(Segment)對一個互補(bǔ)核酸節(jié)的親合力的測定。
這種裝置包括(1)至少兩個基本上平面的可對折構(gòu)件，其中的一個基本上平面的可對折構(gòu)件在其表面上有一個色譜介質(zhì)；和(2)用于將可對折構(gòu)件相互對折疊合并在其上施加壓力的部件，該壓力大到足以能沿著一個大致垂直于可對折構(gòu)件的方向?qū)⒁后w從一個可對折構(gòu)件傳輸?shù)搅硪粋€可對折構(gòu)件上，從而將試樣施加到色譜介質(zhì)上，以檢測和/或測定其上的分析物。
按照本發(fā)明的裝置也可以包括(1)至少三個基本上平面的可對折構(gòu)件，其中一個基本上平面的可對折構(gòu)件在其表面上有一個色譜介質(zhì)，該色譜介質(zhì)具有一第一端和一第二端；(2)用于以至少兩種不同的組合成對地將可對折構(gòu)件相互對折疊合并在其上施加壓力的部件，該壓力大到足以能沿著一個大致垂直于可對折構(gòu)件的方向?qū)⒁后w從一個可對折構(gòu)傳輸?shù)搅硪粋€可對折構(gòu)件，從而將一種試樣施加到色譜介質(zhì)上并通過色譜介質(zhì)從第一端流動到第二端，以檢測和/或測定色譜介質(zhì)上的分析物；(3)至少一個點(diǎn)樣器和一個吸收體，它們位于其中的一個可對折構(gòu)件上并這樣地設(shè)置，即當(dāng)其上設(shè)有點(diǎn)樣器和吸收體的可對折構(gòu)件與其上設(shè)有色譜介質(zhì)的可對折構(gòu)件相互對折疊合后，則將一第二液體施加到色譜介質(zhì)上并通過色譜介質(zhì)從第二端流動到第一端，由此使通過色譜介質(zhì)的流動反向，在接著通過色譜介質(zhì)的流動反向后對分析物作出檢測和/或測定。
在一個方面，按照本發(fā)明的色譜測定裝置包括
(1)一個包含一個適于接收一個要測定的試樣的試樣制備區(qū)的第一可對折構(gòu)件；和(2)一個包含一個色譜介質(zhì)的第二可對折構(gòu)件。
適用于夾心法免疫測定的色譜測定裝置的一個實(shí)施例包括(1)一個第一可對折構(gòu)件；它包括(a)一個具有一第一端和一第二端的色譜介質(zhì)；(b)一個與色譜介質(zhì)的第一端有作用性接觸的檢測器點(diǎn)樣墊；(c)一個與檢測器點(diǎn)樣墊有作用性接觸并與色譜介質(zhì)的第一端間接接觸的傳導(dǎo)體；(d)一個與色譜介質(zhì)的第二端有作用性接觸的吸收體；和(2)一第二可對折構(gòu)件，它包含一個用于接收要測試的試樣的試樣制備區(qū)。
在這個裝置中，第一和第二可對折構(gòu)件的結(jié)構(gòu)是這樣設(shè)計的，即當(dāng)將第一和第二可對折構(gòu)件相互對折疊合后，則使試樣制備區(qū)與傳導(dǎo)體接觸，而將要測試的試樣施加到傳導(dǎo)體上，然后通過檢測器點(diǎn)樣墊流到色譜介質(zhì)的第一端。
典型的情況是，試樣制備區(qū)含有至少一種用于處理試樣的試劑。在某些情況下，如在測定一種尿樣或血清試樣時，不需要對試樣進(jìn)行提取或其它處理。也是典型的情況是，檢測器點(diǎn)樣墊含有一個針對分析物的、其形式為通過向檢測器點(diǎn)樣墊中加入一種含水液體能被溶解的第一特異性結(jié)合體，該第一特異性結(jié)合體用一種可檢測的標(biāo)記物來標(biāo)記，色譜介質(zhì)進(jìn)一步包含一個其面積大大小于色譜介質(zhì)的面積的檢測區(qū)。在這個布置中，該檢測區(qū)包括在其上固定有一種針對分析物的特異性結(jié)合體，這樣，如果試樣中存在分析物，則在檢測區(qū)中形成一個包括第一特異性結(jié)合體、分析物和第二特異性結(jié)合體的三元復(fù)合物。
更好的情況是，可檢測的標(biāo)記物是一種可用肉眼檢測的標(biāo)記物。
更好的情況是，第一和第二可對折構(gòu)件由一個鉸鏈連接。典型地，該鉸鏈?zhǔn)呛后w不能透過的?？蓪φ蹣?gòu)件最好也包含周邊直立的壁，當(dāng)將裝置閉合并鎖定時，這些壁則靠接地接合起來。
一種試驗(yàn)箱可以在分開的容器中包括前面所述的色譜測定裝置和一種針對分析物的、標(biāo)記有一種可檢測的標(biāo)記物的并要被施加到檢測器點(diǎn)樣墊上的特異性結(jié)合體，或者，如果檢測器點(diǎn)樣墊含有一種可溶解的加標(biāo)記的第一特異性結(jié)合體時，試驗(yàn)箱可以包括測定裝置和一種用于溶解加標(biāo)記的特異性結(jié)合體的含水液體?？梢栽O(shè)計構(gòu)造類似的試驗(yàn)箱，用于本發(fā)明的測定裝置的其它實(shí)施例。
一種利用這種測定裝置實(shí)施一種夾心法免疫測定，以檢測和/或測定在一種試樣中的一種分析物的方法，它包括以下步驟(1)將含水試樣施加到色譜測定裝置的檢測器點(diǎn)樣墊上，檢測器點(diǎn)樣墊上含有一種可溶解的加標(biāo)記的第一特異性結(jié)合體；(2)將色譜測定裝置的第一和第二可對折構(gòu)件相互對折疊合，這樣，含有含水液體的試樣溶解在檢測器點(diǎn)樣墊中的加標(biāo)記的特異性結(jié)合體，并且該試樣和被溶解的加標(biāo)記的特異性結(jié)合體被施加到傳導(dǎo)體上；(3)使試樣和加標(biāo)記的特異性結(jié)合體在傳導(dǎo)體中移動，然后至少通過一部分色譜介質(zhì)，使得加標(biāo)記的特異性結(jié)合體給出試樣中存在分析物和/或分析物的數(shù)量的一種可檢測的指示；和(4)觀測和/或測定在至少一部分色譜介質(zhì)上的加標(biāo)記的特異性結(jié)合體，以便檢測和/或測定分析物。
在該實(shí)施例的另一方案中，第二可對折構(gòu)件也包含一個與試樣制備區(qū)有作用性接觸的第一檢測器點(diǎn)樣墊。在這個方案中，第二檢測器點(diǎn)樣墊含有一個針對分析物的、其形式為通過將一種試樣加到試樣制備區(qū)中而能被溶解的第二特異性結(jié)合體，該第二特異性結(jié)合體用一種可檢測的標(biāo)記來標(biāo)記。第二檢測器點(diǎn)樣墊是這樣設(shè)置，使得將試樣施加到試樣制備區(qū)而溶解第二特異性結(jié)合體，從而試樣制備區(qū)含有一種由試樣和加標(biāo)記的第二特異性結(jié)合體構(gòu)成的混合物。加標(biāo)記的第一和第二特異性結(jié)合體最好是相同的并且用相同的標(biāo)記物來標(biāo)記。
本發(fā)明的測定裝置的另一個實(shí)施例包括(1)一第一可對折構(gòu)件，它包含(a)一個具有一第一端和一第二端的色譜介質(zhì)；(b)一個與色譜介質(zhì)的第一端有作用性接觸的傳導(dǎo)體；(2)一第二可對折構(gòu)件，它含有(a)一個用于接收要測定的試樣的試樣制備區(qū)；和(b)一個與試樣制備區(qū)隔離開的吸收體。
在這個裝置中，第一和第二可對折構(gòu)件的結(jié)構(gòu)是這樣設(shè)計的，即當(dāng)將第一和第二可對折構(gòu)件相互對折疊合后，則使試樣制備區(qū)與傳導(dǎo)體有作用性接觸，而將要測試的試樣施加到傳導(dǎo)體上，使之然后流到色譜介質(zhì)的第一端，同時使吸收體與色譜介質(zhì)的第二端有作用性接觸，而從色譜介質(zhì)的第二端抽取液體。將吸收體移動到第二可對折構(gòu)件上時可以應(yīng)用一個較大的吸收體，這在要求測定一個相對較大體積的試樣時可能是有利的。
本發(fā)明的將吸收體設(shè)置在第二可對折構(gòu)件上的測定裝置的另一個方案包括一個位于第一可對折構(gòu)件上的試樣制備區(qū)、一個色譜介質(zhì)、和一個與試樣制備區(qū)和色譜介質(zhì)的第一端有作用性接觸的傳導(dǎo)體，從而傳導(dǎo)體將試樣制備區(qū)和色譜介質(zhì)進(jìn)行橋接。第二可對折構(gòu)件有一個點(diǎn)樣器和一個與點(diǎn)樣器隔離開的吸收體，點(diǎn)樣器含有一種針對一種分析物的、其形式為通過向點(diǎn)樣器中加入一種含水液體能被溶解的特異性結(jié)合體。點(diǎn)樣器中所含的特異性結(jié)合體用一種可檢測的標(biāo)記物來標(biāo)記。在這個裝置中，當(dāng)將第一和第二可對折構(gòu)件相互對折疊合后，則使點(diǎn)樣器與試樣制備區(qū)有作用性接觸，從而當(dāng)已經(jīng)將一種試樣加到試樣制備區(qū)時，則對分析物的加標(biāo)記的特異性結(jié)合體就被溶解，并導(dǎo)致吸收體與色譜介質(zhì)的第二端有作用性接觸，從而從色譜介質(zhì)中抽取液體。
在本發(fā)明的將吸收體設(shè)置在第二可對折構(gòu)件上的測定裝置的另一個方案中，第一可對折構(gòu)件包含一個色譜介質(zhì)和一個傳導(dǎo)體。第二可對折構(gòu)件含有一第一點(diǎn)樣器。一第二點(diǎn)樣器和一吸收體。吸收體與第一和第二點(diǎn)樣器隔離開。第一和第二點(diǎn)樣器這樣地設(shè)置在第二可對折構(gòu)件上，使得當(dāng)?shù)谝缓偷诙蓪φ蹣?gòu)件未對折疊合時，它們不處于有作用性接觸。吸收體這樣地設(shè)置，使得當(dāng)?shù)谝缓偷诙蓪φ蹣?gòu)件相互對折疊合后，它與色譜介質(zhì)的第二端有作用性接觸。第一和第二可對折構(gòu)件的結(jié)構(gòu)是這樣設(shè)計的，即當(dāng)將第一和第二可對折構(gòu)件相互對折疊合后，則導(dǎo)致傳導(dǎo)體與第一點(diǎn)樣器有作用性接觸，并導(dǎo)致傳導(dǎo)體與第二點(diǎn)樣器有作用性接觸，由此導(dǎo)致第一和第二點(diǎn)樣器相互間有作用性接觸。
在這個裝置中，第二點(diǎn)樣器可以包含一個檢測器點(diǎn)樣墊，檢測器點(diǎn)樣墊含有一種可溶解形式的加標(biāo)記的第一特異性結(jié)合體。
一種應(yīng)用本發(fā)明的這種裝置的方法包括將試樣施加到第一點(diǎn)樣器上，并將第一和第二可對折構(gòu)件相互對折疊合，從而使試樣溶解檢測器點(diǎn)樣墊中的加標(biāo)記的特異性結(jié)合體，色譜法和檢測步驟如上所述。
本發(fā)明的將一個吸收體設(shè)置在第二可對折構(gòu)件上的另一個測定裝置包括(1)一第一可對折構(gòu)件；它包含(a)一個具有一第一端和一第二端的色譜介質(zhì)；(b)一個與色譜介質(zhì)的第一端有作用性接觸的傳導(dǎo)體；(c)一個檢測器點(diǎn)樣墊，它與傳導(dǎo)體直接接觸，并設(shè)置得與色譜介質(zhì)的第一端間接接觸；和(2)一第二可對折構(gòu)件；它含有(a)一個試樣點(diǎn)樣墊；和(b)一個與試樣點(diǎn)樣墊隔離開的吸收體。
在這個裝置中，第一和第二可對折構(gòu)件的結(jié)構(gòu)是這樣設(shè)計的，即當(dāng)?shù)谝缓偷诙蓪φ蹣?gòu)件相互對折疊合時則導(dǎo)致(1)試樣點(diǎn)樣墊將試樣施加到檢測器點(diǎn)樣墊上，由此通過傳導(dǎo)體施加到色譜介質(zhì)的第一端；(2)吸收體與色譜介質(zhì)的第二端有作用性接觸。
一種采用這種方案的測定裝置的檢測方法類似于上面所述的那些方法。
本發(fā)明的將一個吸收體設(shè)置在第二可對折構(gòu)件上的另一個方案的測定裝置包括(1)一第一可對折構(gòu)件；它包含(a)一個具有一第一端和一第二端的色譜介質(zhì)；(b)一個與色譜介質(zhì)的第一端直接接觸的檢測器點(diǎn)樣墊；(2)一第二可對折構(gòu)件；它包含(i)一個試樣點(diǎn)樣墊；和(ii)一個與試樣點(diǎn)樣墊隔離開的吸收體。
在這個裝置中，第一和第二可對折構(gòu)件的結(jié)構(gòu)是這樣設(shè)計的，即當(dāng)?shù)谝缓偷诙蓪φ蹣?gòu)件相互對折疊合時，則除了檢測器點(diǎn)樣墊直接與色譜介質(zhì)的第一端相鄰的區(qū)域外，將使檢測器點(diǎn)樣墊和試樣點(diǎn)樣墊接觸。將這個裝置的第一和第二可對折構(gòu)件相互對折疊合后導(dǎo)致；(1)要測試的試樣被施加到檢測器點(diǎn)樣墊上，然后施加到色譜介質(zhì)的第一端；和(2)吸收體與色譜介質(zhì)的第二端有作用性接觸。
本發(fā)明的將一個吸收體設(shè)置在第二可對折構(gòu)件上的另一個測定裝置包括(1)一第一可對折構(gòu)件；它包含(a)一個具有一第一端和一第二端的色譜介質(zhì)；(b)一個傳導(dǎo)體，它是這樣設(shè)置的，即當(dāng)?shù)谝缓偷诙蓪φ蹣?gòu)件未對折疊合時，它不與色譜介質(zhì)的第一端有作用性接觸；和(2)一第二可對折構(gòu)件；它包含
(i)一第一點(diǎn)樣器；(ii)一第二點(diǎn)樣器；(iii)一個與第一和第二點(diǎn)樣器隔離開的吸收體，第一和第二點(diǎn)樣器是這樣設(shè)置在第一可對折構(gòu)件上的，即當(dāng)?shù)谝缓偷诙蓪φ蹣?gòu)件未對折疊合時，它們之間不處于有作用性接觸。
在這個裝置中，第一和第二可對折構(gòu)件的結(jié)構(gòu)是這樣設(shè)置的，即當(dāng)將第一和第二可對折構(gòu)件相互對折疊合時，則有(1)導(dǎo)致傳導(dǎo)體與第一點(diǎn)樣器有作用性接觸，傳導(dǎo)體與第二點(diǎn)樣器有作用性接觸，以及第二點(diǎn)樣器與色譜介質(zhì)的第一端有作用性接觸，由此使第一和第二點(diǎn)樣器相互間處于有作用性接觸，使第一和第二點(diǎn)樣器的內(nèi)含物被施加到色譜介質(zhì)上；和(2)導(dǎo)致吸收體與色譜介質(zhì)的第二端有作用性接觸。
本發(fā)明適用于實(shí)施夾心法免疫測定的測定裝置的另一個實(shí)施例能夠用一部分試樣洗滌色譜介質(zhì)，以除去未結(jié)合的加標(biāo)記的特異性結(jié)合體，減少本底。這個實(shí)施例包括(1)一第一可對折構(gòu)件；它包含(a)一個具有一第一端和一第二端的色譜介質(zhì)；(b)一個與色譜介質(zhì)的第一端有作用性接觸的傳導(dǎo)體；(c)一個與色譜介質(zhì)的第二端有作用性接觸的吸收體；(2)一個含有一個點(diǎn)樣器的第二可對折構(gòu)件，點(diǎn)樣器被分成兩個扇區(qū)(sector)(a)一第一扇區(qū)，其含有一個針對分析物的、其形式為通過將一種含水液體加到點(diǎn)樣器中而能被溶解的第一特異性結(jié)合體，該第一特異性結(jié)合體用一種可檢測的標(biāo)記物來標(biāo)記；和
(b)一個不合有加標(biāo)記的特異性結(jié)合體的第二扇區(qū)。
在這個裝置中，第一和第二可對折構(gòu)件的結(jié)構(gòu)是這樣設(shè)計的，即當(dāng)將第一和第二可對折構(gòu)件相互對折疊合時，則使點(diǎn)樣器的第一扇區(qū)，而不是第二扇區(qū)與傳導(dǎo)體直接接觸，將點(diǎn)樣器的第一扇區(qū)的內(nèi)含物施加到色譜介質(zhì)上。在將點(diǎn)樣器的第一扇區(qū)的內(nèi)含物施加到色譜介質(zhì)上之后，接著將點(diǎn)樣器的第二扇區(qū)的內(nèi)含物施加到色譜介質(zhì)上，以提供一次洗滌。
本發(fā)明的另一個實(shí)施例包含能利用一種加標(biāo)記的分析物的模擬物來實(shí)施競爭法免疫測定的的測定裝置。這個實(shí)施例的一個方案包括(1)一第一可對折構(gòu)件；它包含(a)一個具有一第一端和一第二端的色譜介質(zhì)，且在它上面的一個大大小于其面積的分散區(qū)域中固定有分析物或它的一個免疫學(xué)模擬物；(b)一個與色譜介質(zhì)的第一端有作用性接觸的第一傳導(dǎo)體；知(c)一個與色譜介質(zhì)的第二端有作用性接觸的第二傳導(dǎo)體；(2)一第二可對折構(gòu)件，它有一第一點(diǎn)樣器，第一點(diǎn)樣器含有一個針對分析物的、其形式為通過將一種第一含水液體加到第一點(diǎn)樣器中而能被溶解的第一特異性結(jié)合體；(3)一第三可對折構(gòu)件；它包含(a)一第二點(diǎn)樣器，第二點(diǎn)樣器含有一個針對分析物的、其形式為通過一種第二含水液體加到第二點(diǎn)樣器中而能被溶解的第二特異性結(jié)合體，第二特異性結(jié)合體用一種可檢測的標(biāo)記物來標(biāo)記，(b)一個與第二點(diǎn)樣器隔離開的吸收體。
在這個裝置中，第一和第二可對折構(gòu)件的結(jié)構(gòu)是這樣設(shè)計的，即當(dāng)將第一和第二可對折構(gòu)件相互對折疊合時，則使第一傳導(dǎo)體與第一點(diǎn)樣器有作用性接觸，從而使第一點(diǎn)樣器的內(nèi)含物被施加到色譜介質(zhì)，并至少流過一部分色譜介質(zhì)。第一和第三可對折構(gòu)件的結(jié)構(gòu)是這樣設(shè)計的，即當(dāng)將第一和第三可對折構(gòu)件相互對折疊合時，則使吸收體與第一傳導(dǎo)體有作用性接觸從而從色譜介質(zhì)中抽取液體。將第一和第三可對折構(gòu)件相互對折疊合時，也使第二點(diǎn)樣器與第二傳導(dǎo)體有作用性接觸，從而第二點(diǎn)樣器的內(nèi)含物被施加到色譜介質(zhì)，并至少流過一部分色譜介質(zhì)，這部分色譜介質(zhì)與抽吸第一點(diǎn)樣器的內(nèi)含物所通過的部分是重疊的。
在這個裝置中，第一特異性結(jié)合體和加標(biāo)記的第二特異性結(jié)合體最好都是分析物的抗體，更好的是，固定的分析物或其模擬物包括共價地連接到一種對分析物缺乏特異性結(jié)合活性的蛋白質(zhì)上的分析物。
一種應(yīng)用這種測定裝置通過競爭法免疫測定來檢測一種分析物的方法包括(1)將試樣施加到色譜測定裝置的第一點(diǎn)樣器上，試樣包含第一含水液體；(2)將一種重新構(gòu)成液體施加到第二點(diǎn)樣器上，重新構(gòu)成液體包含第二含水液體；(3)將色譜測定裝置的第一和第二可對折構(gòu)件相互對折疊合，從而該試樣和針對分析物的被溶解的特異性結(jié)合體被施加到第一傳導(dǎo)體上，然后被施加到色譜介質(zhì)的第一端上；(4)使試樣和被溶解的第一特異性結(jié)合體移動至少通過一部分色譜介質(zhì)，阻斷固定在離散區(qū)域中的免疫學(xué)模擬物上的結(jié)合點(diǎn)；(5)將第一和第二可對折構(gòu)件分離開，使之不再疊合在一起；(6)將第一和第三可對折構(gòu)件相互對折疊合，從而被溶解的加標(biāo)記的第二特異性結(jié)合體被施加到第二傳導(dǎo)體，然后被施加到色譜介質(zhì)的第二端上；(7)讓被溶解的加標(biāo)記的第二特異性結(jié)合體移動至少通過一部分色譜介質(zhì)，這部分色譜介質(zhì)與試樣和被溶解的第一特異性結(jié)合體被抽吸所通過的整個色譜介質(zhì)部分是重疊的，從而當(dāng)試樣中存在分析物時，由于試樣和分析物與第一特異性結(jié)合體結(jié)合，加標(biāo)記的第二特異性結(jié)合體就結(jié)合到固定在分散區(qū)域中的分析物或它的免疫學(xué)模擬物上；(8)觀測和/或測定分散區(qū)域中的第二特異性結(jié)合體，以便檢測和/或測定分析物。
更好的情況是，這種方法進(jìn)一步包括以下步驟，即在將試樣施加到第一點(diǎn)樣器上之后，對色譜測定裝置進(jìn)行培養(yǎng)，以便促進(jìn)分析物和第一特異性結(jié)合體之間的反應(yīng)。
在應(yīng)用這種裝置的測定方法的另一種選擇方案中，除了將一第一重新構(gòu)成的液體加到試樣上外，還可以將其加到第一點(diǎn)樣器上。
本發(fā)明的適用于競爭法免疫測定的測定裝置的其它一些方案可以以類似的方式來應(yīng)用。
本發(fā)明的用于實(shí)施競爭法免疫測定的測定裝置的又一個方案包括(1)一第一可對折構(gòu)件；它包含(a)一個具有一第一端和一第二端的色譜介質(zhì)，且在它上面的一些其面積都大大小于色譜介質(zhì)的分散的和非重疊的區(qū)域中固定有(i)對分析物的一種特異性結(jié)合體；和(ii)一種次特異性結(jié)合體，該次特異性結(jié)合體能夠與一個對分析物缺乏親合力的特異性結(jié)合體對中的一個組分相結(jié)合，次特異性結(jié)合體設(shè)置得比第一特異性結(jié)合體更靠近色譜介質(zhì)的第一端；(b)一個與色譜介質(zhì)的第一端有作用性接觸的第一傳導(dǎo)體；和(c)一個與色譜介質(zhì)的第二端有作用性接觸的第二傳導(dǎo)體；(2)一第二可對折構(gòu)件；它包含(a)一個含有一種分析物的模擬物的點(diǎn)樣器，該分析物的模擬物包括與一個對分析物缺乏親合力的特異性結(jié)合體對中的一個組分共價地相結(jié)合的、并能被次特異性結(jié)合體結(jié)合的分析物，特異性結(jié)合體對中的那個組分上標(biāo)記有一種可檢測的標(biāo)記物，分析物的模擬物的形式為通過將一種含水液體加到點(diǎn)樣器中而能被溶解；和(b)一個與點(diǎn)樣器隔離開的吸收體。
在這個裝置中，第一和第二可對折構(gòu)件的結(jié)構(gòu)是這樣設(shè)計的，即當(dāng)將第一和第二可對折構(gòu)件相互對折疊合時，則使第二傳導(dǎo)體與點(diǎn)樣器有作用性接觸，從而將點(diǎn)樣器的內(nèi)含物施加到色譜介質(zhì)上，并至少流過一部分色譜介質(zhì)，同時使吸收體與第一傳導(dǎo)體有作用性接觸，以便從色譜介質(zhì)中抽取液體。
裝置的這個方案最好進(jìn)一步包括一個鉸接在第一可對折構(gòu)件上的蓋子，當(dāng)將第一和第二可對折構(gòu)件相互對折疊合時，蓋子可以折疊在第一和第二可對折構(gòu)件上面，蓋子上開有孔口，用以在將第一和第二可對折構(gòu)件相互對折疊合并且將蓋子折疊在第一和第二可對折構(gòu)件上面后觀察至少一部分色譜介質(zhì)。
更好的情況是，在這種方案中，第一特異性結(jié)合體是一個對分析物有特異性的抗體，而次特異性結(jié)合體是一個能夠結(jié)合對分析物缺乏特異性的一種免疫球蛋白的第二抗體。更好的情況是，分析物的模擬物包括共價地連接到一種取自一種生物種類的免疫球蛋白上的分析物，而特異性結(jié)合體是這種生物種類有特異性的抗體。
這種方案可以進(jìn)一步包括一個其上含有一個吸收體的第三可對折構(gòu)件，吸收體是這樣設(shè)置的，即當(dāng)?shù)谝缓偷谌蓪φ蹣?gòu)件相互對折疊合后，則使吸收體與整個色譜介質(zhì)和兩個傳導(dǎo)體接觸。在這種方案中，在色譜介質(zhì)的后面設(shè)有一個開孔，可以在第二可對折構(gòu)件折疊到第一可對折構(gòu)件上面和第三可對折構(gòu)件折疊到第二可對折構(gòu)件上面之后從后面觀察至少一部分色譜介質(zhì)。
在另一種變型中，固定在色譜介質(zhì)上的次特異性結(jié)合體的面積被分成至少兩個分散的且不重疊的帶區(qū)，每個帶區(qū)中的次特異性結(jié)合體的數(shù)量是確定的，從而由分析物的模擬物所結(jié)合的帶區(qū)的數(shù)目指示出結(jié)合到檢測區(qū)中的分析物的模擬物的數(shù)量，因而指示出測試試樣中的分析物的濃度。
本發(fā)明的適用于實(shí)施競爭法免疫測定的測定裝置的又一個方案采用一種生物素-抗生物素蛋白連接(link)。裝置的這個方案包括(1)一第一可對折構(gòu)件，它包含一個具有一第一端和一第二端的色譜介質(zhì)，且在它上面的一些單獨(dú)的、其面積都大大小于色譜介質(zhì)的分散的和非重疊的區(qū)域中固定有(a)一種能夠與生物素特異性結(jié)合的物質(zhì)，該生物素選自由抗生物素蛋白(avidin)，抗生物蛋白鏈菌素(Streptavidin)，抗-生物素抗體，和它們的衍生物組成的組；(b)一種次特異性結(jié)合體，該次特異性結(jié)合體能夠與一個三元復(fù)合物特異性結(jié)合體地相結(jié)合，該三元復(fù)合物包括(i)分析物；(ii)一個對分析物缺乏親合力的特異性結(jié)合體對中的一個組分，該組合共價地結(jié)合到分析物上；和(iii)一個結(jié)合到特異性結(jié)合體對中的這個組分上的可檢測的標(biāo)記物；(2)一第二可對折構(gòu)件，它包含一第一點(diǎn)樣器，該第一點(diǎn)樣器含有一種針對分析物的、形式為通過將一種含水試樣加到第一點(diǎn)樣器中而能被溶解的第一特異性結(jié)合體，第一特異性結(jié)合體共價地結(jié)合到生物素上，第一特異性結(jié)合體不能被次特異性結(jié)合體結(jié)合；(3)一第三可對折構(gòu)件；它包括(a)一個含有三元復(fù)合物的第二點(diǎn)樣器，三元復(fù)合物的形式為通過將一種第二含水液體加到第二點(diǎn)樣器中而能被溶解；(b)一個與第二點(diǎn)樣器隔離開的吸收體。
在這個裝置中，第一和第二可對折構(gòu)件的結(jié)構(gòu)是這樣設(shè)計的，即當(dāng)將第一和第二可對折構(gòu)件相互對折疊合時，則使第一傳導(dǎo)體與第一點(diǎn)樣器有作用性接觸，從而將第一點(diǎn)樣器的內(nèi)含物施加到色譜介質(zhì)上，并至少被抽吸通過一部分色譜介質(zhì)，其中，第一和第三可對折構(gòu)件的結(jié)構(gòu)是這樣設(shè)計的，即當(dāng)將第一和第三可對折構(gòu)件相互對折疊合時，則使吸收體與第一傳導(dǎo)體接觸，從而從色譜介質(zhì)中抽取液體，并使第二點(diǎn)樣器與第二傳導(dǎo)體有作用性接觸，從而將第二點(diǎn)樣器的內(nèi)含物施加到色譜介質(zhì)，并至少被抽吸通過與第一點(diǎn)樣器的內(nèi)含物被抽吸通過的那部分色譜介質(zhì)相重疊的一部分色譜介質(zhì)。
更好的是，第一特異性結(jié)合體是一種抗分析物的抗體。在三元復(fù)合物中的特異性結(jié)合體對的那個組分可以是家兔免疫球蛋白G，在這種情況下，次特異性結(jié)合體可以是山羊抗家兔(goatanti-rabbit)IgG。更好的是，能夠特異性地結(jié)合生物素的物質(zhì)是抗生物蛋白鏈菌素。
固定在色譜介質(zhì)上的次特異性結(jié)合體的區(qū)域分成至少兩個分散的且不重疊的帶區(qū)，每個帶區(qū)中的次特異性結(jié)合體的數(shù)量是確定的，從而由三元復(fù)合物結(jié)合的帶區(qū)的數(shù)目指示出結(jié)合到檢測上的三元復(fù)合物的數(shù)量，由此指示出試樣中原始分析物的濃度。
本發(fā)明的適用于實(shí)施競爭法免疫測定的色譜測定裝置的又一個方案包括(1)一第一可對折構(gòu)件；它包含(a)一個具有一第一端和一第二端的色譜介質(zhì)，且在它上面的一些其面積都大大小于色譜介質(zhì)的單獨(dú)的和非重疊的離散區(qū)域中固定有(i)一種能夠結(jié)合針對分析物的特異性結(jié)合體的分析物的模擬物；和(ii)一種次特異性結(jié)合體，該次特異性結(jié)合體能夠與一個對分析物具有親合力的特異性結(jié)合體對中的一個組分相結(jié)合，次特異性結(jié)合體本身缺乏對分析物的親合力；(b)一個與色譜介質(zhì)的第一端有作用性接觸的傳導(dǎo)體；(2)一個有一個點(diǎn)樣器的第二可對折構(gòu)件，點(diǎn)樣器含有一種針對分析物的、形式為通過將一種含水液體加到點(diǎn)樣器中而能被溶解的特異性結(jié)合體。
在這個裝置中，第一和第二可對折構(gòu)件的結(jié)構(gòu)是這樣設(shè)計的，即當(dāng)將第一和第二可對折構(gòu)件相互對折疊合時，則使傳導(dǎo)體與點(diǎn)樣器有作用性接觸，從而將點(diǎn)樣器的內(nèi)含物施加到色譜介質(zhì)上并使之至少通過一部分色譜介質(zhì)。
更好的是，第一特異性結(jié)合體是對分析物有特異性的抗體，而分析物的模擬物包括共價地連接到一種蛋白上的分析物，該蛋白對分析物或分析物的特異性結(jié)合體缺乏特異性結(jié)合活性，更好的是，在不涉及分析物抗體的抗原結(jié)合點(diǎn)的生物種類-特異性相互作用的基礎(chǔ)上，次特異性結(jié)合體與對分析物有特異性的抗體相結(jié)合。
在這個裝置中，固定在色譜介質(zhì)上的次特異性結(jié)合體的區(qū)域可以分成至少兩個分散的且不重疊的帶區(qū)，每個帶區(qū)中的次特異性結(jié)合體的數(shù)量是確定的，從而由針對分析物的加標(biāo)記的特異性結(jié)合體結(jié)合的帶區(qū)的數(shù)目指示出結(jié)合到檢測區(qū)上的針對分析物的加標(biāo)記的特異性結(jié)合體的數(shù)量，由此指示出試樣中分析物的數(shù)量。
本發(fā)明適用于實(shí)施競爭法免疫測定的測定裝置的又一個方案是一種三構(gòu)件型裝置，它涉及試劑在色譜介質(zhì)中遷移的兩個步驟，這兩個步驟發(fā)生在相同的方向上。這個裝置包括(1)一第一可對折構(gòu)件；它包含(a)一個具有一第一端和一第二端的色譜介質(zhì)，且在它上面的一些單獨(dú)的、其面積都大大小于色譜介質(zhì)的離散的和非重疊的區(qū)域中固定有(i)一種針對分析物的特異性結(jié)合體；和(ii)一種如前所述的次特異性結(jié)合體，該次特異性結(jié)合體能夠與一個對分析物缺乏親合力的特異性結(jié)合體對中的一個組分相結(jié)合，分析物的特異性結(jié)合體設(shè)置得更靠近色譜介質(zhì)的第一端，(b)一個與色譜介質(zhì)的第一端有作用性接觸的第一傳導(dǎo)體，第一傳導(dǎo)體能起著一第一點(diǎn)樣器的功能；和(c)一個與色譜介質(zhì)的第二端有作用性接觸的第二傳導(dǎo)體；(2)一第二可對折構(gòu)件，它包含(a)一個含有如前所述的一種分析物的模擬物的第二點(diǎn)樣器，該分析物的模擬物的形式為通過將一種含水液體加到點(diǎn)樣器中而能被溶解；(b)一個與第二點(diǎn)樣器隔離開的第一吸收體；(3)一個含有第二吸收體的第三可對折構(gòu)件。
在這個裝置中，第一和第二可對折構(gòu)件的結(jié)構(gòu)是這樣設(shè)計的，即當(dāng)將第一和第二可對折構(gòu)件相互對折疊合時，則使第二點(diǎn)樣器與第一傳導(dǎo)體有作用性接觸，以及使第一吸收體與第二傳導(dǎo)體有作用性接觸。第一和第三可對折構(gòu)件的結(jié)構(gòu)是這樣設(shè)計的，即當(dāng)將第一和第三可對折構(gòu)件相互對折疊合時，則使第二吸收體與第一傳導(dǎo)體和色譜介質(zhì)直接接觸，從而從色譜介質(zhì)中抽取液體。
通過參閱以下的說明、所附的權(quán)利要求書和附圖，將會更好地理解本發(fā)明的這些和其它特征、結(jié)構(gòu)、方法和優(yōu)點(diǎn)。附圖中

圖1A是本發(fā)明的兩構(gòu)件型色譜測定裝置的一個實(shí)施例的示意圖；圖1B是圖1A所示兩構(gòu)件型色譜測定裝置在兩構(gòu)件已經(jīng)相互對折疊合后的示意圖；圖2是本發(fā)明的兩構(gòu)件型色譜測定裝置的另一個實(shí)施例的示意圖，其中第一可對折構(gòu)件包含一個試樣制備區(qū)和一個與試樣制備區(qū)不連通的色譜介質(zhì)，及第二可對折構(gòu)件包含一個傳導(dǎo)體的連接件；圖3是本發(fā)明的兩構(gòu)件型色譜測定裝置的又一個實(shí)施例的示意圖，其中將一個試樣制備區(qū)包含在第一可對折構(gòu)件上；圖4是圖3所示實(shí)施例的另一種選擇方案的示意圖，其中將一個吸收體設(shè)置于第二可對折構(gòu)件上，而不是設(shè)置于第一可對折構(gòu)件上；圖5是本發(fā)明的兩構(gòu)件型色譜測定裝置的又一個實(shí)施例的示意圖，其中將一個試樣制備區(qū)和一吸收體設(shè)置在同一個可對折構(gòu)件上；
圖6是本發(fā)明的兩構(gòu)件型色譜測定裝置的又一個實(shí)施例的示意圖，其中將兩個檢測器點(diǎn)樣墊設(shè)置于不同的可對折構(gòu)件上；圖7是本發(fā)明的兩構(gòu)件型色譜測定裝置的又一個實(shí)施例的示意圖，其中將兩個點(diǎn)樣器設(shè)置于其中一個構(gòu)件上；圖8是圖7所示實(shí)施例的另一種選擇方案的示意圖，其中將一個吸收體設(shè)置于第二可對折構(gòu)件上，而不是設(shè)置于第一可對折構(gòu)件上；圖9是本發(fā)明的又一個實(shí)施例的示意圖，其中在一個傳導(dǎo)體和色譜介質(zhì)之間包含一個間斷部分，它在裝置閉合時被橋接起來；圖10A是本發(fā)明的兩構(gòu)件型色譜測定裝置的又一個實(shí)施例的示意圖，其中包含一個與色譜介質(zhì)處于有作用性接觸的檢測器點(diǎn)樣墊；圖10B是圖10A所示的兩構(gòu)件型色譜測定裝置的一個剖面后視圖，其示出了處于相互對折疊合起來的構(gòu)件的細(xì)節(jié)；圖11A是本發(fā)明的兩構(gòu)件型色譜測定裝置的又一個實(shí)施例的示意圖，它大體上類似于圖10的實(shí)施例，但檢測器點(diǎn)樣墊與色譜介質(zhì)則為直接接觸；圖11B是圖11A所示的兩構(gòu)件型色譜測定裝置的一個剖面后視圖，其示出了處于相互對折疊合起來的構(gòu)件的細(xì)節(jié)；圖12A是本發(fā)明的適合于實(shí)施雙向色譜過程的兩構(gòu)件型色譜測定裝置的一個實(shí)施例的示意圖；圖12B是圖12A所示的兩構(gòu)件型色譜測定裝置的一個頂視圖，其示出了已經(jīng)處于相互對折疊合起來的兩個構(gòu)件；
圖13A是本發(fā)明的適合用于實(shí)施雙向色譜過程的兩個構(gòu)件型色譜測定裝置的又一個實(shí)施例的示意圖，它有兩個點(diǎn)樣器和一個傳導(dǎo)體；圖13B是圖13A所示的兩構(gòu)件型色譜測定裝置的一個頂視圖，其示出了已經(jīng)處于相互對折疊合起來的兩個構(gòu)件；圖14是本發(fā)明的兩構(gòu)件型色譜測定裝置的又一個實(shí)施例的示意圖，其中一個檢測器點(diǎn)樣墊設(shè)置于第一可對折構(gòu)件上，而一個試樣制備區(qū)設(shè)置于第二可對折構(gòu)件上；圖15是本發(fā)明的兩構(gòu)件型色譜測定裝置的又一個實(shí)施例的示意圖，其中點(diǎn)樣器被分成兩個扇區(qū)，可以用不加標(biāo)記的試樣沖洗色譜介質(zhì)；圖16A是適合用于實(shí)施雙向色譜過程的兩構(gòu)件型色譜測定裝置的又一個實(shí)施例的示意圖，它帶有一個蓋子；圖16B是圖16A所示的兩構(gòu)件型色譜測定裝置的一個頂視圖，其示出了已經(jīng)牌相互對折疊合起來的兩個構(gòu)件；圖17A是本發(fā)明的一種三構(gòu)件型色譜測定裝置的示意圖；圖17B是圖17A所示的三構(gòu)件型色譜測定裝置的一個剖面后視圖，其示出了處于相互對折疊合起來的構(gòu)件的細(xì)節(jié)；圖18是本發(fā)明的三構(gòu)件型色譜測定裝置的又一個實(shí)施例的示意圖，其中第三構(gòu)件用于從整個色譜介質(zhì)和兩個傳導(dǎo)體中吸收液體；圖19是本發(fā)明的一種多重型色譜測定裝置的一個示意圖，適用于測量一個或多個試樣；圖20是本發(fā)明的一種多重型色譜測定裝置的一個實(shí)施例的示意圖，其中包含一個用于容納試樣的可收縮的槽；圖21是本發(fā)明的能接受一個試驗(yàn)卡的一種多重型色譜測定裝置的一個不同實(shí)施例的示意圖；圖22是本發(fā)明的能接受一個試驗(yàn)卡的一種多重型色譜測定裝置的另一個實(shí)施例的示意圖；圖23是本發(fā)明的一種三構(gòu)件型色譜測定裝置的一個實(shí)施例的示意圖，它適用于利用一種與穩(wěn)定在色譜介質(zhì)上的一種分析物的模擬物結(jié)構(gòu)的標(biāo)記抗體實(shí)施一種競爭法免疫測定；圖24是一種帶有蓋子的兩構(gòu)件型色譜測定裝置的一個示意圖，它適用于利用一種加標(biāo)記的分析物的模擬物實(shí)施一種競爭法免疫測定；圖25是一種三構(gòu)件型色譜測定裝置的一個示意圖，它適用于利用一種加標(biāo)記的分析物的模擬物實(shí)施一種單向競爭法免疫測定，其中第三構(gòu)件用于從整個色譜介質(zhì)和兩個傳導(dǎo)體中吸收液收；圖26是本發(fā)明的一種三構(gòu)件型色譜測定裝置的一個示意圖，它適用于實(shí)施一種競爭法免疫測定，該裝置采用一種生物素一抗生物素蛋折連接(link)；圖27是一種適用于利用一種加標(biāo)記的抗分析物的抗體實(shí)施一種競爭法免疫測定的兩構(gòu)件型色譜測定裝置的一個示意圖；以及圖28是本發(fā)明的一種測定裝置的一個說明示意圖，這個裝置適用于接受一個簽條或類似的試樣裝置，且設(shè)計成用于檢測鏈球菌A抗原。
在本發(fā)明的上下文中，除非另有說明，以下術(shù)語定義如下特異性結(jié)合體(Specific Binding Partner)指借助于特異性非共價相互作用而發(fā)生相互作用的一對分子中的一個分子，其中相互作用取決于所涉及的分子的三維結(jié)構(gòu)。典型的特異性結(jié)合體對包括抗原-抗體，半抗原-抗體，激素-受體，核酸束(nucleicstrand)-補(bǔ)體梳酸束(strand)，底物(substrate)-酶，抑制劑-酶，碳水化合物-外源凝集素，生物素-抗生物素蛋白，以及病毒-細(xì)胞受體。
作用性接觸指當(dāng)兩個固體構(gòu)件不論是直接地，還是間接地接觸時，如果一種含水液體能夠借毛細(xì)作用或其它方式基本上不間斷地從兩個構(gòu)件中的一個構(gòu)件流動到另一個構(gòu)件，則兩個構(gòu)件處于作用性接觸?！爸苯咏佑|”是指兩個構(gòu)件處于實(shí)際接觸，例如邊緣對邊緣，或前面對后面。典型的情況是，當(dāng)兩個構(gòu)件直接接觸時，它們大約重疊0.5毫米至3毫米。但是兩個構(gòu)件可以用對接邊緣放置。“間接接觸”是指兩個構(gòu)件不是處于實(shí)際接觸，而是由一個或多個導(dǎo)體橋連接起來。
有限容量指在裝置中進(jìn)行正常的測定期間，位于裝置中的一種吸收體(劑)要吸收液體，當(dāng)吸收體被所吸收的液體浸透而飽和時，則這種吸收體具有有限容量。此時吸收體可以釋放所吸收的額外液體并成為至少具有部分傳導(dǎo)性。
分析物術(shù)語“分析物”既包括要測定的實(shí)際的分子，也包括其模擬物和衍生物，此時這種模擬物和衍生物以基本上等同于分析物本身的方式與測定分析中采用的另一個分子相結(jié)合。
抗體術(shù)語“抗體”既包括具有恰當(dāng)特異性的完整的抗體分子，也包括抗體片段(包括Fab，F(xiàn)(ab′)，和F(ab′)2片段)，以及經(jīng)過化學(xué)變型的完整的抗體分子和抗體片段，包含經(jīng)體外亞單位再結(jié)合體所組成的雜交抗體。
次特異性結(jié)合體指當(dāng)一對特異性結(jié)合體相互作用時，這對特異性結(jié)合體中的一個組分結(jié)合的一個附加的特異性結(jié)合體稱之為次特異性結(jié)合體。例如，一對特異性結(jié)合體可以包括賈第鞭毛蟲病(Giardia)抗原和家兔抗賈第鞭毛蟲病抗體。在這種情況下，次特異性結(jié)合體可以是山羊抗家兔IgG抗體。次特異性結(jié)合體可以對它要結(jié)合的一個抗體特異性結(jié)合體的品種、級別或次級是特異性的。另一種形式是，當(dāng)其中的一個特異性結(jié)合體被用生物素標(biāo)記后，次特異性結(jié)合體可以包含一個與抗生物素蛋白結(jié)合的分子。
為了方便讀者和幫助讀者理解本說明書公開內(nèi)容的構(gòu)成，給出了以下的內(nèi)容概要，它以章節(jié)標(biāo)題的形式陳述了本說明書公開內(nèi)容的構(gòu)成。
I.色譜測定裝置A.兩構(gòu)件型裝置1.總體布置2.兩構(gòu)件型裝置的具體實(shí)施例a.在第二構(gòu)件上設(shè)置有傳導(dǎo)性連接件的裝置b.在第一可對折的構(gòu)件上設(shè)有試樣制備區(qū)的裝置c.在第二可對折的構(gòu)件上設(shè)有吸收體(吸收劑)的裝置d.在同一個可對折的構(gòu)件上設(shè)有試樣制備區(qū)和吸收體的裝置
e.在不同的可對折構(gòu)件上設(shè)有兩個檢測器點(diǎn)樣墊的裝置f.在同一可對折構(gòu)件上包括有兩個獨(dú)立點(diǎn)樣器的裝置g.在第二可對折的構(gòu)件上設(shè)有兩個點(diǎn)樣器和一個吸收體的裝置h.在傳導(dǎo)體和色譜介質(zhì)之間設(shè)有間隙或間斷的裝置i.在與色譜介質(zhì)同一可對折構(gòu)件上設(shè)有用于加標(biāo)記的特異性結(jié)合體的墊的裝置j.檢測器點(diǎn)樣墊與色譜介質(zhì)的第一端直接接觸的裝置k.在第二可對折的構(gòu)件上設(shè)有第二點(diǎn)樣器和吸收體的雙方向的裝置l.包括有兩個點(diǎn)樣器和一個傳導(dǎo)體的雙方向的裝置m.在第一構(gòu)件上設(shè)有檢測器點(diǎn)樣墊的裝置n.設(shè)有提供洗滌的兩扇區(qū)點(diǎn)樣器的裝置B.帶有蓋子的兩構(gòu)件型裝置C.三構(gòu)件型裝置D.多構(gòu)件型裝置1.基本的多構(gòu)件型裝置2.帶有可收縮的槽(collapsible well)的多構(gòu)件型裝置3.可以接受試驗(yàn)卡片的多構(gòu)件型裝置H.用于競爭法測定分析的色譜測定裝置A.三構(gòu)件雙向流動裝置B.帶有蓋子的兩構(gòu)件雙向流動裝置C.帶有吸收體的三構(gòu)件單向流動裝置D.應(yīng)用生物素的特異性的三構(gòu)件雙向流動裝置
E.用于競爭法抑制免疫測定分析的兩構(gòu)件型裝置III.在測定裝置中應(yīng)用的分析物和抗體IV.試驗(yàn)箱(test kits)I.色譜測定裝置本發(fā)明的一個方面包括尤其使用于測定生物試樣中的分析物測定的色譜測定裝置。這些裝置適用于生物試樣的直接點(diǎn)樣，不需要初始的提取步驟，并且所具有結(jié)構(gòu)能夠使由顆?；蚪?jīng)著色的試樣引起的對測定結(jié)果的干擾減小的最小程度。
該裝置具有至少兩個基本上平面的可對折構(gòu)件，其中一個基本上平面的可對折構(gòu)件在其表面上有一種色譜介質(zhì)。
該裝置還有用于對折可對折構(gòu)件和向其上施加壓力的部件。所施加的壓力足以將液體從一個可對折構(gòu)件沿基本上垂直于可對折構(gòu)件的方向傳送到另一個可對折構(gòu)件上，從而將試樣施加到色譜介質(zhì)上，以便檢測和/或測定其上的分析物。壓力也驅(qū)使液體通過色譜介質(zhì)，來加快色譜分析過程，從而在較少的時間內(nèi)得出一個可檢測的結(jié)果。此外，壓力也使得在裝置中實(shí)施一些步驟，例如提取步驟，成為可能，并且能夠用于通過吸收體從色譜介質(zhì)中除去多余的液體，以減少測定分析中的本底。壓力是通過將可對折構(gòu)件置于相對折疊位置并用連接件如鎖件或扣緊件使構(gòu)件保持在對折疊合位置而形成的。
按照本發(fā)明的裝置，其結(jié)構(gòu)的構(gòu)成即可為夾心法測定分析又可為競爭法測定分析。
當(dāng)裝置被設(shè)計成用于實(shí)施一種夾心法免疫測定分析形式時，典型的情況是，至少裝置的其中一個可對折構(gòu)件上有一個相對于分析物的一第一加標(biāo)記的特異性結(jié)合體。這個相對于分析物的第一加標(biāo)記的特異性結(jié)合體處于一種能夠被一種含水液體溶解的形式。用于溶解的含水液體可以是試樣。第一加標(biāo)記的特異性結(jié)合體設(shè)置在能使之與試樣中的分析物反應(yīng)的位置。
在一個適合實(shí)施一種夾心法免疫測定分析的裝置中，色譜介質(zhì)上包含有一第二加標(biāo)記的特異性結(jié)合體的檢測區(qū)，用于固定在其上的分析物。檢測區(qū)大大地小于色譜介質(zhì)。對這些構(gòu)件進(jìn)行布置，使得若在試樣中有分析物時則在檢測區(qū)處形成一個包含(1)第一加標(biāo)記的特異性結(jié)合體，(2)分析物和(3)第二不加標(biāo)記特異性結(jié)合體的三元復(fù)合物。
在一個適合實(shí)施一種競爭法免疫測定分析的裝置中，色譜介質(zhì)上在至少一個大大地小于色譜介質(zhì)的區(qū)域中包含有一對特異性結(jié)合體中的一個組分，該特異性結(jié)合體對選自于由分析物或它的一個模擬物和該分析物的一個特異性結(jié)合體組成的組。可以有一些不同的布置用于本發(fā)明的適合實(shí)施競爭法免疫測定分析的裝置。這些不同的布置描述如下。
在一個色譜介質(zhì)中加入試樣之后，典型地是利用一個可肉眼檢測的加標(biāo)記的組分檢測和/或測定分析物。加標(biāo)記的組分最好是分析物或者是它的一個聯(lián)結(jié)到可肉眼檢測的標(biāo)記上的模擬物，或者是一個聯(lián)結(jié)到一個可肉眼檢測的標(biāo)記上的分析物的特異性結(jié)合體。
本發(fā)明的測定裝置可以設(shè)計成用于同時實(shí)施一個以上的測定。在這種裝置中，基本上平面的構(gòu)件中的一個上面至少有兩個獨(dú)立的不接觸的色譜介質(zhì)。
裝置的一種變型尤其適用于雙向色譜法，盡管并不局限于這種用途。這種裝置至少有三個基本上平面的可對折構(gòu)件。其中一個基本上平面的構(gòu)件上其表面上有一個具有一第一端和一第二端的色譜介質(zhì)。這種三構(gòu)件裝置也有至少以兩種不同的組合成對地折合可對折構(gòu)件并在其上施加壓力的部件，利用象鎖件或扣緊件這樣的聯(lián)結(jié)件將被折合的構(gòu)件保持在一起。施加的壓力足以將液體從一個可對折構(gòu)件沿基本上垂直于可對折構(gòu)件的方向傳送到另一個可對折構(gòu)件上，并驅(qū)使液體通過色譜介質(zhì)，從而將試樣施加到色譜介質(zhì)上，使試樣通過色譜介質(zhì)從第一端流動到第二端。
裝置還有至少一個點(diǎn)樣器和一個吸收體，它們位于其中的一個可對折構(gòu)件上，并這樣地設(shè)置，即當(dāng)其上設(shè)有點(diǎn)樣器和吸收體的可對折構(gòu)件被置于其上設(shè)有色譜介質(zhì)的可對折構(gòu)件相對疊合的位置時，則一第二液體被施加到色譜介質(zhì)上。該第二液體通過色譜介質(zhì)從第二端流動到第一端。它使通過色譜介質(zhì)中的流動反向。在流動反向后對分析物進(jìn)行檢測和/或測定。
A.兩構(gòu)件型裝置本發(fā)明的測定裝置的一個實(shí)施例是一種在一維空間內(nèi)以單向流工作的兩構(gòu)件色譜測定裝置。
1.兩構(gòu)件型裝置的總體布置總體上，本發(fā)明的兩構(gòu)件色譜測定裝置包括(1)一第一可對折構(gòu)件，它包含一個適于接受要測定的一種試樣的試樣制備區(qū)；和(2)一個包含一個色譜介質(zhì)的第二可對折構(gòu)件。
在這個裝置中，當(dāng)裝置閉合時可以將第一和第二可對折構(gòu)件置于相互對折疊合位置，從而使試樣制備區(qū)將被測定的試樣施加到色譜介質(zhì)上。在使用時，典型地是在將一種檢測試劑加到試樣制備區(qū)之后將第一和第二可對折構(gòu)件置于相互對折疊合位置。當(dāng)將第一和第二可對折構(gòu)件置于相互對折疊合位置后，試樣制備區(qū)將試樣和檢測試劑施加到色譜介質(zhì)上。在允許試樣和檢測試劑至少橫向移過色譜介質(zhì)的一部分，使得檢測試劑給出分析物存在的和/或其數(shù)量的可檢測指示后，則在至少一部分色譜介質(zhì)中觀察和/或測定檢測試劑，其結(jié)果是檢測和/或測定分析物。
只要可能，對這個基本裝置的結(jié)構(gòu)細(xì)節(jié)的描述也適用于本發(fā)明的其它兩構(gòu)件和三構(gòu)件測定裝置。
檢測試劑包括上述用于分析物的第一特異性結(jié)合體，它也可以包括一些附加的組分。
依賴于檢測區(qū)中的第二特異性結(jié)合體的密度和檢測區(qū)的大小，這種方法可以給出分析物的一個定性和/或定量的指示。
典型地，為了獲得結(jié)果，這種測定需要的時間為30秒至10分鐘，更典型地是1至5分鐘，包括試樣在試樣制備區(qū)上的培養(yǎng)(潛伏)期以及色譜分析本身所需要的時間。雖然根據(jù)分析物和特異性結(jié)合體的特性的不同，在某些情況下，可以在4℃或直到37℃或更高溫度下實(shí)施這種測定，但典型地是在室溫下實(shí)施這種測定的。在某些情況下，可能要求在較低的溫度下，以便限制降解(degradation)，而在某些其它情況下，在較高的溫度下對合適的分析物和特異性結(jié)合體進(jìn)行測定則可以使測定的速度加快。
色譜測定裝置的這種總體布置示于圖1A中。色譜測定裝置10有一第一可對折構(gòu)件11和一第二可對折構(gòu)件12，第一可對折構(gòu)件11包含一個試樣制備區(qū)13，第二可對折構(gòu)件12包含一個色譜介質(zhì)14。色譜介質(zhì)14有一第一端15和一第二端16，并且其還包含一個檢測區(qū)17和一個控制區(qū)18。第一可對折構(gòu)件11和第二可對折構(gòu)件12由一個鉸鏈19連接起來。第一可對折構(gòu)件11和第二可對折構(gòu)件12最好還包括使它們固定在相互對折疊合位置上的一些連接件。這些連接件可以包括鎖件，例如鎖件20和21，它們在第一可對折構(gòu)件11和第二可對折構(gòu)件12被置于相對的疊合位置上時相互接合。鎖件20和21的結(jié)構(gòu)和尺寸可以改變，以便在可對折構(gòu)件11和12上施加的壓力為最佳程度。最合適的壓力程度可能取決于色譜介質(zhì)14的厚度和結(jié)構(gòu)，預(yù)計試樣的體積，和其它一些因素。為了防止試樣或試劑的泄漏，在第一和第二可對折構(gòu)件11和12的周邊上設(shè)置有一個密封凸緣或密封墊22。雖然一般還是應(yīng)用連接件，如鎖件20和21，和密封凸緣或密封墊22更好，但是構(gòu)造出本發(fā)明的一個基本裝置并不是必須有這些部件，第二可對折構(gòu)件12有一第一窗口23，第一可對折構(gòu)件11也可以有選擇地有一第二窗口24，以便能從任一側(cè)來觀測色譜介質(zhì)14。由第二窗口24可以從與施加試劑的表面相對的表面來觀測色譜介質(zhì)14。作為另一種選擇，可以沒有第一窗口23，而用第二窗口24來觀測色譜介質(zhì)14。一般地，本發(fā)明的兩構(gòu)件型裝置即可以有一個窗口也可以有兩個窗口(也稱為開孔)，以便即能通過沒裝有色譜介質(zhì)14的可對折構(gòu)件上來觀測色譜介質(zhì)14，如圖1中的窗口23，也能通過裝有色譜介質(zhì)14的可對折構(gòu)件來觀測色譜介質(zhì)14，如圖1的窗口24。另一種方式是，可以用透明的或半透明的材料制作第一和/或第二可對折構(gòu)件11和12，從而沒有單獨(dú)開的開孔或窗口也能觀測色譜介質(zhì)14。
圖1B示出了在可對折構(gòu)件11和12被置于相互對折疊合位置之后的裝置10。包含有檢測區(qū)17和控制區(qū)18的色譜介質(zhì)14可以通過窗口23看到。試樣制備區(qū)13在第一端15處或第一端15的附近與色譜介質(zhì)14接觸，從而試樣制備區(qū)13中的物質(zhì)可以流過包含檢測區(qū)17和控制區(qū)18的色譜介質(zhì)14。
裝置10可以有選擇地進(jìn)一步包括一個與色譜介質(zhì)14的第一端15有作用性接觸的傳導(dǎo)體25，如圖1A所示。傳導(dǎo)體25可以是一種能夠傳導(dǎo)一種含水液體而不會大量吸收該液體的材料，如纖維素材料或其它材料?？梢杂靡环N表面活性劑處理傳導(dǎo)體25，以便能更均勻地將試劑施加到色譜介質(zhì)14上。在設(shè)置傳導(dǎo)體25的情況下，當(dāng)?shù)谝缓偷诙蓪φ蹣?gòu)件11和12被置于相互對折疊合位置之后，試樣制備區(qū)13最好與傳導(dǎo)體25接觸。
裝置10可以進(jìn)一步包括一個與色譜介質(zhì)14的第二端16有作用性接觸的吸收體26，以幫助將液體從第一端15通過色譜介質(zhì)14引向第二端16，如圖1A中所示。
試樣制備區(qū)13可以用任何合適的材料制作，例如，纖維素、紙、尼龍、人造絲、玻璃纖維、羊毛、非織造合成材料，但不限于這些材料?？梢赃x擇試樣制備區(qū)13的空隙度來過濾出試樣(如全血液試樣或糞便試樣)中的細(xì)胞或顆粒物質(zhì)。試樣制備區(qū)13可以包含至少一種試劑，用于在將試樣施加到色譜介質(zhì)14上之前處理該試樣。
可以用于試樣制備區(qū)13中的試劑隨著要施加到試樣制備區(qū)13上的試樣和要測定的分析物的不同而改變，它們可以包含調(diào)節(jié)pH值的酸或堿，穩(wěn)定pH值的緩沖劑，與金屬結(jié)合成螯合物的螯合劑(如EDTA或EGTA)，溶解動物細(xì)胞的細(xì)胞膜或細(xì)菌的細(xì)胞壁以釋放分析物的水解酶，酶的底物(作用物)或輔酶，等等，但也不局限于這些試劑。一種特別有用的提取試劑是亞硝酸鈉和醋酸的一種混合物，用于產(chǎn)生亞硝酸。亞硝酸鈉可以干化形式呈現(xiàn)在試樣制備區(qū)13中，醋酸可以在加入試樣以后再加到試樣制備區(qū)13中。
試樣，或一個取樣裝置，如喉嚨簽板或微孔過濾器，可以由操作者放置到試樣制備區(qū)13上，如果需要，也可以加入其它試劑。
第一和第二可對折構(gòu)件11和12的本體最好是用具有足夠的不透水性而能夠盛住實(shí)施測定所含有液體的層壓硬紙板制成，也可以使用其它纖維素基的材料，如紙板或固體漂白的亞硫酸鹽。或者用不透水的塑料材料制成上述本體。一種合適的塑料材料是諸如Lexan商標(biāo)的聚碳酸脂塑料。
鉸鏈19最好用不使含水液體可透過的材料制成，例如可以與第一和第二可對折構(gòu)件11和12的本體使用的材料兼容相連的塑料，或者與之相同的材料。
典型地，色譜介質(zhì)14、吸收體26、傳導(dǎo)體25、和其它接受液體的部件都用粘膠劑固定到第一和第二可對折構(gòu)件11和12的本體上。合適的粘膠劑在本技術(shù)領(lǐng)域是公知的。也可以采用其它的連接方法，如用訂書釘釘住或用圖釘釘住。
分析物的測定，或者利用分析物的一個加標(biāo)記的特異性結(jié)合體來進(jìn)行，或者利用分析物的特異性結(jié)合體的一個加標(biāo)記的次特異性結(jié)合體來進(jìn)行。在大多數(shù)情況下，更愿意采用分析物的一個加標(biāo)記的特異性結(jié)合體。加標(biāo)記的特異性結(jié)合體的標(biāo)記最好是一種可肉眼檢測的標(biāo)記物，如一種膠態(tài)金屬標(biāo)記物。更好地是該膠態(tài)金屬標(biāo)記物是金、銀、銅、鐵、或錫；最好是金。在德邁(I.DeMey)的文章“金制探針的制備和使用”中描述了用金標(biāo)記的抗體的制備方法，這篇文章刊登在1986年英國布里斯托爾的J.M.Polak&S.VanNoorden出版的雜志《免疫細(xì)胞化學(xué)現(xiàn)代方法和應(yīng)用》，第8章，第115-145頁中，在此一并作參考。用膠態(tài)金標(biāo)記的抗體可以在市場上買到，例如從密蘇里州圣路易斯的Sigma化學(xué)公司購買。
另一種方式是，也可以采用其它的膠態(tài)標(biāo)記物，如膠態(tài)硫標(biāo)記物或染色二氧化硅標(biāo)記物。在另一種較差的選擇方案中，可肉眼檢測的標(biāo)記物可以是一種著色的膠乳標(biāo)記物。也可以采用其它標(biāo)記物，例如放射性標(biāo)記。
雖然申請人并不一定想要受這一理論的約束，當(dāng)含有一種試樣的含水液體施加到一種用一個膠態(tài)金屬標(biāo)記物(如膠態(tài)金)所標(biāo)記的可溶解特異性結(jié)合體上時，分析物和加標(biāo)記的特異性結(jié)合體之間的反應(yīng)速度是極快的。這種極快速度導(dǎo)致在分析物和加標(biāo)記的特異性結(jié)合體的組合物被施加到色譜介質(zhì)上之前分析物就基本上完全被標(biāo)記。因此，在用本發(fā)明的測定裝置進(jìn)行一種單向色譜過程時，受色譜檢測的對象主要是分析物和相應(yīng)加標(biāo)記的特異性結(jié)合體中的二元復(fù)合物。這可以使這種復(fù)合物從不與特異性結(jié)合體結(jié)合的污染體中分離出來，提高檢測的精確性。
在本實(shí)施例中，置于試樣制備區(qū)13中的加標(biāo)記的特異性結(jié)合體最好呈能夠通過向試樣制備區(qū)中加入一種含水液體而溶解的形式。典型地，含水液體就是試樣本身。在某些情況下，尤其是采用小的試樣體積時，可能希望在試樣制備區(qū)中加入附加的緩沖劑或其它含水液體。
在下面討論的其它實(shí)施例中，加標(biāo)記的特異性結(jié)合體可以置于色譜測定裝置的一個構(gòu)件上，該構(gòu)件與試樣制備區(qū)分開，但在實(shí)施檢測期間與試樣制備區(qū)相接觸。在這些實(shí)施例中，加標(biāo)記的特異性結(jié)合體最好以可溶解的形式置于這個構(gòu)件上，并且在試樣與該構(gòu)件接觸時被溶解。在某些情況下，可以在構(gòu)件上加入一種不同于試樣的單獨(dú)的含水液體來溶解標(biāo)記特異性結(jié)合體。
在第二可對折構(gòu)件12上的色譜介質(zhì)14是一個平的帶條，典型地，帶條是矩形的，其有一第一端15和一第二端16。在整個說明書中，術(shù)語“第一端”15是指色譜介質(zhì)14上施加有試樣的那一端，而術(shù)語“第二端”16是指相對的那一端。試樣的原始流動方向是從色譜介質(zhì)14的第一端15至第二端16。色譜介質(zhì)14是一種適于用作對分析物和分析物-抗體結(jié)合體進(jìn)行薄層色譜法測定的介質(zhì)的材料構(gòu)成，例如，硝化纖維素、尼龍、人造絲、纖維素、紙、或硅膠。如果需要，色譜介質(zhì)14可以預(yù)處理或改型。典型的色譜介質(zhì)14是半透明的，從而作為檢測結(jié)果出現(xiàn)在其上的著色區(qū)可以從兩側(cè)觀測到。
在一些應(yīng)用中，較好的方式是在色譜介質(zhì)14的頂部放置一第二柔性透明載體，以調(diào)節(jié)試樣通過膜的流動，并防止遷移到膜的頂部上方。合適的柔性透明載體包括聚乙烯、乙烯樹脂、聚脂薄膜、和玻璃紙。
當(dāng)色譜測定裝置10用于象夾心法免疫測定這樣的測定時，色譜介質(zhì)可以進(jìn)一步包括一個大大小于色譜介質(zhì)14的檢測區(qū)17。這個檢測區(qū)可以包含一個針對固定在其上而防止擴(kuò)散的分析物的第二特異性結(jié)合體。第二特異性結(jié)合體可以以共價方式或非共價方式結(jié)合到色譜介質(zhì)上。如果要測定的分析物是一個抗原或半抗原，那么第二特異性結(jié)合體可以是這個抗原或半抗原的一個抗體。另一方案是，分析物可以是一種抗體，而第二特異性結(jié)合體可以是一種能夠被這個抗體所特異性結(jié)合的半抗原或抗原。
色譜介質(zhì)14可以進(jìn)一步包括一個大大小于色譜介質(zhì)14的控制區(qū)18，并其與檢測區(qū)17分離開?？刂茀^(qū)18可以包括不擴(kuò)散地固定在其上的分析物，以便結(jié)合在檢測區(qū)17沒有結(jié)合的加標(biāo)記的抗體，形成一個三元“夾心”復(fù)合物。任何這樣的抗體都被固定的分析物所結(jié)構(gòu)，形成一個可檢測區(qū)或可檢測帶。這對測定的操作和試劑的正確結(jié)合提供了一種檢查，正如下文所述的那樣。結(jié)合檢測區(qū)17的第二特異性結(jié)合體和控制區(qū)18的分析物所用的方法是本領(lǐng)域公知的，不需要做進(jìn)一步的說明。
另一方面，對于某些分析物來說，例如碳水化合物，將分析物穩(wěn)定地固定在色譜介質(zhì)14上也許很困難或者不可能。在這種情況下，控制區(qū)18可以包含一個對于加標(biāo)記的抗分析物抗體具有特異性的抗體固定區(qū)。例如，如果分析物是鏈球菌A-特異性碳水化合物，加標(biāo)記的抗體是針對鏈球菌A抗原具有特異性的家兔IgC，那么控制區(qū)18可以包含針對家兔IgC的山羊抗體。在這種情況下，為了在高分析物濃度下防止完全捕獲檢測區(qū)17中的加標(biāo)記的抗分析物抗體，而產(chǎn)生加標(biāo)記的抗分析物抗體從控制區(qū)18消失的結(jié)果，可能希望加入對于分析物不具有特異性的如標(biāo)記的抗體，并且它與加標(biāo)記的抗分析物抗體是不同的種類。這種抗體可以構(gòu)成免疫學(xué)上中性的免疫球蛋白或一種在試樣中未發(fā)現(xiàn)的一種分析物的抗體?？刂茀^(qū)18則將包括抗體生物種類抗體或在試樣中未發(fā)現(xiàn)的分析物。
這種裝置可以有一些變型。在一種改型中，如上所述，試樣制備區(qū)13可以進(jìn)一步包含一個針對分析物、用一種可檢測的標(biāo)記予以標(biāo)記的特異性結(jié)合體，加標(biāo)記的特異性結(jié)合體的形式能夠通過在試樣制備區(qū)13中加入一種含水液體而溶解。含水液體可以是試樣本身。加標(biāo)記的特異性結(jié)合體可以冷凍干燥，或者可逆地沉淀析出，從而通過將試樣加到試樣制備區(qū)而使之溶解和移動。在這種變型中，不必在試樣制備區(qū)13中加入一種檢測試劑，因?yàn)橥ㄟ^將試樣添加到試樣制備區(qū)13中可以自動產(chǎn)生檢測試劑。
在另一種變型中，與第二可對折構(gòu)件上的色譜介質(zhì)14的第一端15處于作用性接觸的傳導(dǎo)體25可以由一個具有有限容量的處于作用性接觸的吸收體25a代替。吸收體25a設(shè)置在這樣的位置上，即當(dāng)在第一可對折構(gòu)件11和第二可對折構(gòu)件12被相對疊合起來時，它則與試樣制備區(qū)13相接觸，將試樣施加到吸收體上。這在控制試樣向色譜介質(zhì)14中的流動，不使色譜介質(zhì)14過載可能是有用的。
在這種變型中，吸收體25a可以包含一個針對分析物的。處于一種能夠溶解的形式的加標(biāo)記的特異性結(jié)合體，如上所述。在這種布置中，當(dāng)?shù)谝豢蓪φ蹣?gòu)件11和第二可對折構(gòu)件12被相互對折疊合起來時，加標(biāo)記的特異性結(jié)合體則被溶解，將試樣施加到吸收體25a上。然后，試樣和溶解的加標(biāo)記的特異性結(jié)合體的組合物在其第一端15進(jìn)入色譜介質(zhì)14。
2.兩構(gòu)件型裝置的具體實(shí)施例a.在第二構(gòu)件上有傳導(dǎo)性連接件的裝置在本發(fā)明的一個兩構(gòu)件型裝置的一個實(shí)施例中，第一可對折構(gòu)件包括(1)一個試樣制備區(qū)；和(2)一個與試樣制備區(qū)不連通的色譜介質(zhì)。
第二可對折構(gòu)件包括一傳導(dǎo)性連接件。第一和第二可對折構(gòu)件可以被相對疊合起來，使連接件在試樣制備區(qū)和色譜介質(zhì)之間建立一個連通；以便將試樣施加到色譜介質(zhì)。
這個實(shí)施例示于圖2中。色譜測定裝置40包括一第一可對折構(gòu)件41和一第二可對折構(gòu)件42。第一可對折構(gòu)件包含一個試樣制備區(qū)43和一個具有一第一端50和一第二端51的色譜介質(zhì)44。色譜介質(zhì)44有一個檢測區(qū)45和一個控制區(qū)46。第二可對折構(gòu)件42包含一個傳導(dǎo)性連接件47。第一可對折構(gòu)件41和第二可對折構(gòu)件42由一個鉸鏈48連接起來。第一可對折構(gòu)件41和第二可對折構(gòu)件42也包含諸如鎖件52和53這樣的接合件，一個墊子54包圍著第一可對折構(gòu)件41和第二可對折構(gòu)件42。第二可對折構(gòu)件42有一個可以觀測色譜介質(zhì)44的開孔49。
當(dāng)?shù)谝豢蓪φ蹣?gòu)件41和第二可對折構(gòu)件42被相對疊合起來時，第一可對折構(gòu)件41上的試樣的制備區(qū)43和第二可對折構(gòu)件42上的傳導(dǎo)性連接件47接觸，連接件47又與色譜介質(zhì)44的第一端50接觸，以將試樣施加到色譜介質(zhì)。
在圖2中的裝置的一些變型中，傳導(dǎo)性連接件47可以包含一個針對分析物的、用一種可檢測的標(biāo)記予以標(biāo)記的特異性結(jié)合體，加標(biāo)記的特異性結(jié)合體處于能夠通過加入一種含水液體而被溶解的形式。在這種變型中，將試樣施加到試樣制備區(qū)43。另一種方法是，試樣制備區(qū)43可以用于加入針對分析物的、以液體形式的加標(biāo)記的特異性結(jié)合體，試樣本身加到傳導(dǎo)性連接件47上。在又一種方案中，試樣制備區(qū)43可以包含針對分析物的、可溶解的特異性結(jié)合體，試樣也加到傳導(dǎo)性連接件47上。
b.試樣制備區(qū)在第一可對折構(gòu)件上的裝置本發(fā)明的色譜測定裝置的另一個實(shí)施例是一個在第一可對折構(gòu)件上，亦即在其上有色譜介質(zhì)的構(gòu)件上包含一個試樣制備區(qū)的裝置。在該實(shí)施例中，典型的情況是，第二可對折構(gòu)件包括一個點(diǎn)樣器，它包含一個針對分析物的、呈可溶解形式的加標(biāo)記的特異性結(jié)合體結(jié)合體。
在這個實(shí)施例中，當(dāng)?shù)谝缓偷诙蓪φ蹣?gòu)件相互疊合后，點(diǎn)樣器就與試樣制備區(qū)接觸，使加標(biāo)記的特異性結(jié)合體溶解。
更好的情況是，第一可對折構(gòu)件進(jìn)一步包括一個傳導(dǎo)體，且通過使試樣制備區(qū)和色譜介質(zhì)都與傳導(dǎo)體有作用性接觸，而實(shí)現(xiàn)試樣制備區(qū)和色譜介質(zhì)之間的作用性接觸。
更好的情況是，第一可對折構(gòu)件進(jìn)一步包括一個與色譜介質(zhì)的第二端有作用性接觸的吸收體。
色譜介質(zhì)最好是設(shè)計成上面所述的結(jié)構(gòu)，其具有一檢測區(qū)和一控制區(qū)。
測定裝置的這個實(shí)施例示于圖3中。色譜測定裝置60具有一個第一可對折構(gòu)件61和一第二可對折構(gòu)件62。第一可對折構(gòu)件61包含一個試樣制備區(qū)63、一個與試樣制備區(qū)63有作用性接觸的傳導(dǎo)體64，一個具有一第一端66和一第二端67的色譜介質(zhì)65，和一個與色譜介質(zhì)65的第二端67有作用性接觸的吸收體68。色譜介質(zhì)65包含一個檢測區(qū)69和一個控制區(qū)70。第二可對折構(gòu)件62包含一個點(diǎn)樣器71，它最好有一個呈可溶解形式的加標(biāo)記的特異性結(jié)合體。第一和第二可對折構(gòu)件61和62由一個鉸鏈72連接起來。第二可對折構(gòu)件62包含一個窗口73，以觀察至少一部分色譜介質(zhì)65。第一和第二對折構(gòu)件61和62具有諸如鎖件74和75這樣的接合件，一個墊子76包圍住第一和第二可對折構(gòu)件61和62。
在操作中，將一種試樣施加到試樣制備區(qū)63中。然后使第一和第二可對折構(gòu)件61和62相互對折疊合在一起，使試樣制備區(qū)63中的試樣溶解點(diǎn)樣器71的內(nèi)含物，包含加標(biāo)記的特異性結(jié)合體。然后通過試樣制備區(qū)63和傳導(dǎo)體64將試樣制備區(qū)63和點(diǎn)樣器71中的內(nèi)含物施加到色譜介質(zhì)65上。
C.吸收體在第二構(gòu)件上的裝置在這個實(shí)施例的另一個方案中，可以將吸收體放置在第二可對折構(gòu)件上，而不是放在第一可對折構(gòu)件上。在這一方案中，當(dāng)?shù)谝缓偷诙蓪φ蹣?gòu)件相互對折疊合后，吸收體則與色譜介質(zhì)的第二端有作用性接觸。這樣可以考慮采用一個較大的吸收體，這在必須使用較大的試樣時是所希望的，例如在檢測只以低濃度下出現(xiàn)的一種分析物的情況下。
本實(shí)施例的這個替換方案示于圖4中。色譜測定裝置80包括一第一可對折構(gòu)件81和一第二可對折構(gòu)件82。第一可對折構(gòu)件81包含試樣制備區(qū)83，與試樣制備區(qū)83有作用性接觸的傳導(dǎo)體83和具有一第一端86和一第二端87的色譜介質(zhì)85，并帶有檢測區(qū)8和控制區(qū)89。第二可對折構(gòu)件82包含點(diǎn)樣器90和吸收體91，點(diǎn)樣器90在第二可對折構(gòu)件82上與吸收體91分隔開。第一和第二可對折構(gòu)件81和82由一個鉸鏈92連接。第二可對折構(gòu)件82也有一個開孔93，用以觀察至少一部分色譜介質(zhì)85。第一和第二可對折構(gòu)件81和82也包含如上所述的諸如鎖件94和95的接合件和一個墊子96。
在使用中，試樣被施加到試樣制備區(qū)83，在該區(qū)中可以進(jìn)行試樣抽取或?qū)υ嚇拥钠渌幚?。然后試樣通過流過傳導(dǎo)體84而進(jìn)入色譜介質(zhì)85的第一端86，如上所述。當(dāng)?shù)谝缓偷诙蓪φ蹣?gòu)件81和82相互對折疊合之后，點(diǎn)樣器90與傳導(dǎo)體84有作用性接觸，以溶解點(diǎn)樣器90中的加標(biāo)記的特異性結(jié)合體，并將溶解的加標(biāo)記的特異性結(jié)合體施加到傳導(dǎo)體84上，然后施加到色譜介質(zhì)85的第一端86，從而使溶解的加標(biāo)記的特異性結(jié)合體進(jìn)入色譜介質(zhì)85中，同時也使吸收體91與色譜介質(zhì)85的第二端87有作用性接觸，而從色譜介質(zhì)85中抽取液體。
d.試樣制備區(qū)和吸收體在同一個可對折構(gòu)件上的裝置本發(fā)明的色譜測定裝置的另一個實(shí)施例是一個兩構(gòu)件裝置，在該裝置中，試樣制備區(qū)和吸收體位于同一個可對折構(gòu)件上。這在某些應(yīng)用情況下具有優(yōu)點(diǎn)表現(xiàn)在能夠采用一個較大的吸收體，以便更快且更有效地從色譜介質(zhì)的第二端抽取液體。
兩構(gòu)件色譜測定裝置的這個實(shí)施例示于圖5中。色譜裝置100具有由一個鉸鏈103連接在一起的一第一可對折構(gòu)件101和一第二可對折構(gòu)件102。第一可對折構(gòu)件101包含一個具有一第一端105和一第二端106的色譜介質(zhì)104，和一個與色譜介質(zhì)104的第一端105有作用性接觸的傳導(dǎo)體107。色譜介質(zhì)105一個檢測區(qū)108和有選擇地包含一個控制區(qū)109。
第二可對折構(gòu)件102包含一個用以接收要測定的試樣的試樣制備區(qū)110和一個與試樣制備區(qū)110間隔開的吸收體111。試樣制備區(qū)110可以包含一個用于分析物的、呈可溶解形式的加標(biāo)記的特異性結(jié)合體。第二可對折構(gòu)件102上有一個開孔112，以觀察色譜介質(zhì)。第一和第二可對折構(gòu)件101和102有諸如鎖件113和114這樣的接合件和一個墊子115，如上所述。
當(dāng)?shù)谝缓偷诙蓪φ蹣?gòu)件101和102相互對折疊合后，試樣制備區(qū)110與傳導(dǎo)體107有作用性接觸，將試樣施加到傳導(dǎo)體107，然后施加到色譜介質(zhì)104的第一端105。吸收體111與色譜介質(zhì)104的第二端106有作用性接觸，以從色譜介質(zhì)104的第二端106抽取液體。在其它方面，該裝置的設(shè)計結(jié)構(gòu)和操作都類似于上面圖4中所描述的裝置。
e.在不同的可對折構(gòu)件上設(shè)有兩個檢測點(diǎn)樣墊的裝置本發(fā)明的兩構(gòu)件測定裝置的又一個實(shí)施例包含有在不同的可對折構(gòu)件上的兩上單獨(dú)的檢測器點(diǎn)樣墊。當(dāng)一種加標(biāo)記的抗體只能在稀釋形式下獲得，且將其濃縮會使之變性或不能激活時，就希望采用大體積的加標(biāo)記的特異性結(jié)合體，此時，裝置采取這種布置結(jié)構(gòu)就特別有用。
兩構(gòu)件的色譜測定裝置的這個實(shí)施例示于圖6中。色譜測定裝置120包括有由一個鉸鏈133連接起來的一第一可對折構(gòu)件121和一第二可對折構(gòu)件122。第一可對折構(gòu)件121包含一個具有一第一端125和一第二端126的色譜介質(zhì)124。色譜介質(zhì)124包含一個檢測區(qū)127和有選擇地包含一個控制區(qū)128。
第一可對折構(gòu)件121也有一個與色譜介質(zhì)124的第一端125有作用性接觸的第一檢測器點(diǎn)樣墊129。第一檢測器點(diǎn)樣墊129包含一個用于分析物的第一特異性結(jié)合體，第一特異性結(jié)合體為一種通過在第一檢測器點(diǎn)樣墊129中加入一種含水液體能夠被溶解的形式。典型地，第一特異性結(jié)合體用一種可檢測的標(biāo)記予以標(biāo)記。第一可對折構(gòu)件121也有一個與第一檢測器點(diǎn)樣墊129有作用性接觸的傳導(dǎo)體130，從而第一檢測器點(diǎn)樣墊129將傳導(dǎo)體130與色譜介質(zhì)124的第一端125橋接起來。第一可對折構(gòu)件121也有一個與色譜介質(zhì)124的第二端126有作用性接觸的吸收體131。
第二可對折構(gòu)件122包含一個用以接收要測定的試樣的試樣制備區(qū)132。第二可對折構(gòu)件122也有一個與試樣制備區(qū)132有作用性接觸的第二檢測器點(diǎn)樣墊133，且試樣制備區(qū)132放置在第二檢測器點(diǎn)樣墊133的上面。試樣制備區(qū)132和第二檢測器點(diǎn)樣墊133可以用一緊固件或粘膠劑保持在一起。第二檢測器點(diǎn)樣墊133的和試樣制備區(qū)132設(shè)置在這樣的位置上，即使得向試樣制備區(qū)132施加的試樣在進(jìn)入第二檢測器點(diǎn)樣墊133之前必須通過試樣制備區(qū)132。第二檢測器點(diǎn)樣墊133包含一個分析物的第二特異性結(jié)合體，第二特異性結(jié)合體為一種通過在試樣制備區(qū)132中加入一種試樣能夠被溶解的形式。第二檢測器點(diǎn)樣墊133設(shè)置在這樣的位置上，即使得施加在試樣制備區(qū)132的試樣能溶解第二特異性結(jié)合體，從而試樣制備區(qū)132包含一種由試樣和第二特異性結(jié)合體構(gòu)成的混合物。
第二特異性結(jié)合體由一種可檢測的標(biāo)記物予以標(biāo)記。更好的是，第一和第二特異性結(jié)合體是相同的，標(biāo)記在第一和第二特異性結(jié)合體上的可檢測的標(biāo)記是相同的。
第二可對折構(gòu)件122中也有一個用以觀測至少一部分色譜介質(zhì)124的開孔134，色譜介質(zhì)包含檢測區(qū)127和(如果有的話)控制區(qū)128。第一和第二可對折構(gòu)件121和122也有諸如鎖件135和136這樣的接合件和一個墊子137，如上面針對基本的兩構(gòu)件型裝置所述的那樣。
當(dāng)?shù)谝缓偷诙蓪φ蹣?gòu)件121和122相互對折疊合后，試樣制備區(qū)132則與傳導(dǎo)體130進(jìn)行接觸，將試樣和第二特異性結(jié)合體施加到傳導(dǎo)體130上，然后通過第一檢測器點(diǎn)樣墊129施加到色譜介質(zhì)124的第一端125。因此，試樣在施加到色譜介質(zhì)124的第一端125進(jìn)行色譜過程之前，依次地接觸第二特異性結(jié)合體，然后接觸第一特異性結(jié)合體這樣導(dǎo)致較大體積的加標(biāo)記的特異性結(jié)合體與試樣接觸，增加了測定的敏感性。
f.在同一個可對折構(gòu)件上有兩個分開的點(diǎn)樣器的裝置本發(fā)明的色譜測定裝置的又一個實(shí)施例包含有在同一個可對折構(gòu)件上的兩個分開的點(diǎn)樣器。這兩個點(diǎn)樣器并不處在有作用性接觸的狀態(tài)，直到兩個構(gòu)件相互對折疊合后由在相對的構(gòu)件上的一個傳導(dǎo)體連接為止。
色譜測定裝置的這個實(shí)施例示于圖7中。色譜測定裝置140包括一第一可對折構(gòu)件141和一第二可對折構(gòu)件142。第一可對折構(gòu)件141包含有一個具有一第一端144和一第二端145的色譜介質(zhì)143、一個與第一端144有作用性接觸的傳導(dǎo)體146、和一個與色譜介質(zhì)143的第二端145有作用性接觸的吸收體147。色譜介質(zhì)143包含一個檢測區(qū)148和一個控制區(qū)149。第二可對折構(gòu)件142包括有一第一點(diǎn)樣器(試樣點(diǎn)樣墊)150和一第二點(diǎn)樣器(檢測器點(diǎn)樣墊)151。在第一和第二可對折構(gòu)件141和142相互對折疊合之前，第一和第二點(diǎn)樣器150和151并不處在有作用性接觸的狀態(tài)，當(dāng)?shù)谝缓偷诙蓪φ蹣?gòu)件141和142相互對折疊合之后，第一點(diǎn)樣器150與傳導(dǎo)體146有作用性接觸，而第二點(diǎn)樣器151與傳導(dǎo)體146和色譜介質(zhì)143的第一端144有作用性接觸。重疊的范圍典型地為幾個毫米，亦即足以保證液體傳送。這就導(dǎo)致由傳導(dǎo)體146將第一和第二點(diǎn)樣器150和151橋接起來，從而第一和第二點(diǎn)樣器150和151的內(nèi)含物被施加到色譜介質(zhì)143上。第一和第二可對折構(gòu)件141和142由一個鉸鏈152連接起來。第二可對折構(gòu)件142上有一個用以觀測色譜介質(zhì)143的窗口153。第一和第二可對折構(gòu)件141和142也有諸如鎖件154和155這樣的接合件和一個墊子156。
第一點(diǎn)樣器150可以包括一個試樣點(diǎn)樣墊，而第二點(diǎn)樣器151可以包括一個檢測器點(diǎn)樣墊，其上可以施加檢測試劑。當(dāng)?shù)谝缓偷诙蓪φ蹣?gòu)件141和142相互對折疊合之后，試樣點(diǎn)樣墊和檢測器點(diǎn)樣墊的內(nèi)含物經(jīng)傳導(dǎo)體146被施加到色譜介質(zhì)143上。
更好的方式是，第二點(diǎn)樣器151(檢測器點(diǎn)樣墊)包含一個用于分析物的特異性結(jié)合體，該特異性結(jié)合體標(biāo)記有一種可檢測的標(biāo)記物并且處于一種通過在第二點(diǎn)樣器151中加入一種含水液體能夠被溶解的形式。典型地，含水液體是試樣本身，當(dāng)?shù)谝缓偷诙蓪φ蹣?gòu)件141和142相互對折疊合后，該含水液體使加標(biāo)記的特異性結(jié)合體溶解。在某些測定中，可能希望在檢測器點(diǎn)樣墊加入一種單獨(dú)的重新構(gòu)成的含水液體。另一種方案是，可以將加標(biāo)記的特異性結(jié)合體的液體形式下施加到第二點(diǎn)樣器151上。
g.在第二可對折構(gòu)件上帶有兩個點(diǎn)樣器和一個吸收體的裝置在這個實(shí)施例的又一種變型中，可以將吸收體從第一可對折構(gòu)件(亦即含有色譜介質(zhì)的可對折構(gòu)件)上移置到第二可對折構(gòu)件(亦即含有第一和第二點(diǎn)樣器的可對折構(gòu)件)上。這樣可以使用較大的試樣，這在檢測在低濃度情況下存在的分析物時可能是所希望的。
這個變型示于圖8中。色譜測定裝置160有一第一可對折構(gòu)件162和一第二可對折構(gòu)件164。第一可對折構(gòu)件162包含一個具有一第一端168和一第二端170的色譜介質(zhì)166和一個與色譜介質(zhì)166的第一端168有作用性接觸的傳導(dǎo)體172。色譜介質(zhì)166包含有一個檢測區(qū)174和一個控制區(qū)176。第二可對折構(gòu)件164包含有一個第一點(diǎn)樣器(試樣點(diǎn)樣墊)178和一第二點(diǎn)樣器(檢測器點(diǎn)樣墊)180。第一點(diǎn)樣器178和第二點(diǎn)樣器180并不處于有作用性接觸的狀態(tài)，直到第一和第二可對折構(gòu)件162和164被相互對折疊合后而將它們橋接起來為止，如上面在圖7所示的測定裝置中所述的那樣。第二可對折構(gòu)件164也包含一個吸收體182，吸收體182與第一和第二點(diǎn)樣器178和180分離開。當(dāng)?shù)谝缓偷诙蓪φ蹣?gòu)件162和164相互對折疊合后，由傳導(dǎo)體172將第一和第二點(diǎn)樣器178和180橋接起來，從而第一和第二點(diǎn)樣器178和180的內(nèi)含物被施加到色譜介質(zhì)166上。同時，吸收體182與色譜介質(zhì)166的第二端170進(jìn)入有作用性接觸，以從色譜介質(zhì)166中吸收液體。第一和第二可對折構(gòu)件162和164由一個鉸鏈184連接起來。第二可對折構(gòu)件164包含一個窗口186，用以觀察色譜介質(zhì)166。第一和第二可對折構(gòu)件162和164也包含象鎖件185和187這樣的接合件和一個墊子188。
h.在傳導(dǎo)體和色譜介質(zhì)之間有間隙或中斷部分的裝置這種裝置的又一種變型包括在傳導(dǎo)體和色譜介質(zhì)之間有一個間隙或中斷部分，從而液體流動的路線是從第一點(diǎn)樣器，通過傳導(dǎo)體，再通過第二點(diǎn)樣器，最后通過色譜介質(zhì)。
裝置的這種變型示于圖9中。色譜測定裝置190具有一第一可對折構(gòu)件191和一第二可對折構(gòu)件192。第一可對折構(gòu)件191包含一個具有一第一端194和一第二端195的色譜介質(zhì)193，一個在色譜裝置190處于打開位置時而不與色譜介質(zhì)193的第一端194有作用性接觸的傳導(dǎo)體196，和一個與色譜介質(zhì)193的第二端195有作用性接觸的吸收體197。色譜介質(zhì)193含有一個檢測區(qū)198和一個控制區(qū)199。第二可對折構(gòu)件192含有一第一點(diǎn)樣器(試樣點(diǎn)樣墊)200和一第二點(diǎn)樣器(檢測器點(diǎn)樣墊)201。在第一和第二可對折構(gòu)件191和192相互對折疊合之前，第一和第二點(diǎn)樣器200和201并不處在有作用性接觸的狀態(tài)。當(dāng)通過閉合連接第一和第二可對折構(gòu)件191和192的鉸鏈203。使第一和第二可對折構(gòu)件191和192相互對折疊合后，第一和第二點(diǎn)樣器200和201由傳導(dǎo)體196橋接起來并且第二點(diǎn)樣器201接觸色譜介質(zhì)193。因此，液體流動的路線是從第一點(diǎn)樣器200，通過傳導(dǎo)體196，然后通過第二點(diǎn)樣器201，再進(jìn)入色譜介質(zhì)193。第二可對折構(gòu)件192上設(shè)有一個窗口193，用以觀察色譜介質(zhì)193。第一和第二可對折構(gòu)件191和192也有象鎖件204和205這樣的接合件和一個墊子206，如上所述。
i.在與色譜介質(zhì)相同的可對折構(gòu)件上設(shè)有用于加標(biāo)記的特異性結(jié)合體的墊的裝置。
本發(fā)明的色譜測定裝置的又一個實(shí)施例是一個含有一個位于與色譜介質(zhì)同一個可對折構(gòu)件上的、用于加標(biāo)記的特異性結(jié)合體的墊的兩構(gòu)件裝置。在這個裝置中，試樣點(diǎn)樣器設(shè)置在另一個可對折構(gòu)件上。
本發(fā)明的色譜測定裝置的這個實(shí)施例示于圖10A中。色譜測定裝置210具有一第一可對折構(gòu)件212和一第二可對折構(gòu)件214。第一可對折構(gòu)件212包含一個具有一第一端218和一第二端220的色譜介質(zhì)216。色譜介質(zhì)具有一個檢測區(qū)222和有選擇地包含一個控制區(qū)224，如上面對適合于夾心法免疫測定所用的測定裝置的其它變型的描述的那樣。第一可對折構(gòu)件212也包含有一個與色譜介質(zhì)216的第一端218有作用性接觸的傳導(dǎo)體226和一個與色譜介質(zhì)216的第二端220有作用性接觸的吸收體228。第一可對折構(gòu)件212也有一個與傳導(dǎo)體226直接接觸的檢測器點(diǎn)樣墊230，并且處于與色譜介質(zhì)216的第一端218間接接觸的位置。第二可對折構(gòu)件214有一個試樣點(diǎn)樣墊232。第一和第二可對折構(gòu)件212和214由一個鉸鏈234來連接。當(dāng)?shù)谝缓偷诙蓪φ蹣?gòu)件212和214相互對折疊合后，試樣點(diǎn)樣墊232則與檢測器點(diǎn)樣墊230進(jìn)行接觸。第二可對折構(gòu)件214包含一個窗口236，用以觀察色譜介質(zhì)216。第一和第二可對折構(gòu)件212和214有象鎖件233和235這樣的接合件和一個密封墊237，如前所述。
裝置210的一個截面后視圖示于圖10B中。圖10B中所示的截面是沿圖10A中的線10B截取的，它位于色譜介質(zhì)216和鉸鏈234之間，朝對著鉸鏈234緣邊方向看。圖10B示出了相互對折疊合后的第一和第二可對折構(gòu)件212和214。圖中可見試樣點(diǎn)樣墊232與檢測器點(diǎn)樣墊230相接觸。檢測器點(diǎn)樣墊230接觸傳導(dǎo)體226，傳導(dǎo)體226又接觸色譜介質(zhì)216的第一端218。圖中示出了色譜介質(zhì)216的檢測區(qū)222和控制區(qū)224。色譜介質(zhì)216更接近于控制區(qū)224的第二端220接觸吸收體228。
將第一和第二可對折構(gòu)件212和214相互對折疊合起來，使試樣點(diǎn)樣墊232將要測試的試樣施加到檢測點(diǎn)樣墊230上，由此通過傳導(dǎo)體226將試樣施加到色譜介質(zhì)的第一端218上。
更好的情況是，檢測器點(diǎn)樣墊230含有一個針對分析物的第一特異性結(jié)合體，它處于能夠通過在檢測器點(diǎn)樣墊230上加入一種含水液體而被溶解的形式，并且該第一特異性結(jié)合體標(biāo)記有一種可檢測的標(biāo)記物。
最好的是，在將試樣施加到試樣點(diǎn)樣墊232上之后，點(diǎn)樣墊232的內(nèi)含物包括一種含水液體，而加到檢測器點(diǎn)樣墊230上的含水液體包括試樣點(diǎn)樣器的內(nèi)含物。在這種布置下，不需要用額外的液體來溶解加標(biāo)記的特異性結(jié)合體。
在這種裝置的一個變型中，吸收體不是設(shè)置在第一可對折構(gòu)件上，而是設(shè)在第二可對折構(gòu)件上。吸收體與同樣設(shè)置在第二可對折構(gòu)件上的試樣點(diǎn)樣墊分離開，在第一和第二可對折構(gòu)件相互對折疊合后與色譜介質(zhì)的第二端有作用性接觸，如上面圖5中所示。
j.檢測器點(diǎn)樣墊直接接觸色譜介質(zhì)的第一端的裝置這種裝置的又一種變型是省去了檢測器點(diǎn)樣墊和色譜介質(zhì)之間的傳導(dǎo)體，從而檢測器點(diǎn)樣墊為直接接觸色譜介質(zhì)的第一端。在這種變型中，當(dāng)?shù)谝缓偷诙蓪φ蹣?gòu)件相互對折疊合后，除了檢測器點(diǎn)樣墊與色譜介質(zhì)的第一端直接相鄰的區(qū)域外，檢測器點(diǎn)樣墊和試樣點(diǎn)樣墊處于接觸狀態(tài)。在檢測器點(diǎn)樣墊的這個區(qū)域中內(nèi)有一個小的間隙或錯位，從而試樣不能直接從試樣點(diǎn)樣墊流動到色譜介質(zhì)。一般這個間隙或錯位的大小約為0.5～2毫米，更典型地，約為0.5～1毫米。
這種變型尤其適用于利用加標(biāo)記的抗血紅蛋白抗體檢測糞便隱血，可以檢測的血紅蛋白的濃度相應(yīng)于每100g糞便17毫升血(每克糞便含13毫克血紅蛋白)之多，而不會由于高劑量“誘惑”(hook)效應(yīng)產(chǎn)生假的陰性結(jié)果。
這個變型示于圖11A中。色譜測定裝置250具有一第一可對折構(gòu)件252和一第二可對折構(gòu)件254。第一可對折構(gòu)件252包含一個具有一第一端258和一第二端260的色譜介質(zhì)256。色譜介質(zhì)256有一個檢測區(qū)262和一個控制區(qū)264。第一可對折構(gòu)件252也有一個與色譜介質(zhì)256的第二端260有作用性接觸的吸收體266，第一可對折構(gòu)件252還有一個與色譜介質(zhì)256的第一端258直接接觸的檢測器點(diǎn)樣墊268。第二可對折構(gòu)件254有一個試樣點(diǎn)樣墊270。第一和第二可對折構(gòu)件252和254由一個鉸鏈272連接起來。當(dāng)?shù)谝缓偷诙蓪φ蹣?gòu)件252和254相互對折疊合后，除了在與色譜介質(zhì)256的第一端258相接觸的檢則器點(diǎn)樣墊268的端部處的一個窄間隙或錯位274以外，試樣點(diǎn)樣墊270接觸檢測器點(diǎn)樣墊268。這個間隙274防止施加到試樣點(diǎn)樣墊270上的試樣直接地流入色譜介質(zhì)266。第二可對折構(gòu)件254上有一個窗口276，用以觀察色譜介質(zhì)256。第一和第二可對折構(gòu)件252和254有象鎖件278和280這樣的接合件和一個密封墊282，如前所述。
圖11B中示出了沿圖11A所示裝置250中的線11A截取的一個截面后視圖。圖11B所示的這個截面圖是從圖11A中色譜介質(zhì)256和鉸鏈272之間朝對著鉸鏈272的邊緣方向看所截取的視圖。圖11B示出了處于相互對折疊合狀態(tài)下的第一可對折構(gòu)件252和第一可對折構(gòu)件254，鉸鏈272處于閉合位置。如圖所示，除了在最靠近色譜介質(zhì)256的檢測器點(diǎn)樣墊268的端部處有一個小間隙274外，試樣點(diǎn)樣墊270與檢測器點(diǎn)樣墊268處于相接觸狀態(tài)。檢測器點(diǎn)樣墊268直接接觸色譜介質(zhì)256的第一端258。圖中示出了色譜介質(zhì)256的檢測區(qū)262和控制區(qū)264。色譜介質(zhì)256的較為靠近的控制區(qū)264的第二端260與吸收體266相接觸。
k.在第二可對折構(gòu)件上含有點(diǎn)樣器和吸收體的雙向裝置本發(fā)明的色譜測定裝置的又一個實(shí)施例包括一種能夠?qū)嵤╇p向色譜法的裝置。
色譜測定裝置的這個實(shí)施例示于圖12A中。測定裝置300具有一第一可對折構(gòu)件302和一第二可對折構(gòu)件304。第一可對折構(gòu)件302有一個具有一第一端308和一第二端310的色譜介質(zhì)306，第一可對折構(gòu)件302也有一個與色譜介質(zhì)306的第一端308有作用性接觸的第一點(diǎn)樣器312。色譜介質(zhì)306也包含一個檢測器314，和有選擇地包含一個控制區(qū)316，它位于檢測區(qū)314和色譜介質(zhì)306的第二端310之間。檢測區(qū)314和控制區(qū)316的構(gòu)成與前面對適用于夾心法免疫測定的裝置的其它實(shí)施例討論的情況一樣。第二可對折構(gòu)件304包含一個吸收體318，該吸收體可以是一個吸收墊，和一個第二點(diǎn)樣器320。第一和第二可對折構(gòu)件302和304由一個鉸鏈322連接起來。第二可對折構(gòu)件304包含一個窗口324，用以觀察色譜介質(zhì)306。第一和第二可對折構(gòu)件302和304包含有接合件323和325，和一個密封墊326，如上所述。
當(dāng)鉸鏈322被閉合時，裝置300呈現(xiàn)如圖12B中的一個頂視圖所示。從窗口324可以看見包含檢測區(qū)314和控制區(qū)(如果有的話)316的色譜介質(zhì)306。
在裝置的這個實(shí)施例中，將一第一液體加到第一點(diǎn)樣器312上可使第一液體被施加到色譜介質(zhì)306的第一端308上。然后將第一和第二可對折構(gòu)件302和304相互對折疊合，使得第二點(diǎn)樣器320與色譜介質(zhì)306的第二端310有作用性接觸，從而將一第二液體施加到色譜介質(zhì)306的第二端310上，同時也使吸收體318與第一點(diǎn)樣器312發(fā)生有作用性接觸，從而通過第一點(diǎn)樣器312從色譜介質(zhì)306中抽吸液體，而使流動反向。在操作這個裝置時，試樣被施加到第一點(diǎn)樣器312上，而一種加標(biāo)記的特異性結(jié)合體的一種溶液被施加到第二點(diǎn)樣器320上。然后試樣通過色譜介質(zhì)306從第一端308向第二端310移動，從而試樣中存在的任何分析物都被結(jié)合到檢測區(qū)314處的固定的抗體上。當(dāng)將第一和第二可對折構(gòu)件302和304相互對折疊合后，加標(biāo)記的特異性結(jié)合體則被施加到色譜介質(zhì)306上，并通過色譜介質(zhì)306從第二端310移動到第一端308。然后加標(biāo)記的特異性結(jié)合體與結(jié)合在檢測區(qū)314處的固定抗體上的任何分析物相結(jié)合，產(chǎn)生一種可檢測的三元復(fù)合物。加標(biāo)記的特異性結(jié)合體也與控制區(qū)316處的固定分析物或模擬物相結(jié)合，提供正確實(shí)施測定的一種指示。
1.含有兩個點(diǎn)樣器和一個傳導(dǎo)器的雙向裝置本發(fā)明的色譜測定裝置的又一個實(shí)施例是一種適用于雙向色譜法的裝置，之包含有一個使流動反向的吸收體和一個與色譜介質(zhì)有作用性接觸的試劑墊。
色譜測定裝置的這個實(shí)施例示于圖13A中。測定裝置340包括一第一可對折構(gòu)件342和一第二可對折構(gòu)件344。第一可對折構(gòu)件342包括一個具有一第一端348和一第二端350的色譜介質(zhì)346。與色譜介質(zhì)346的第一端348相鄰并且有作用性接觸的是一第一點(diǎn)樣器352。與色譜介質(zhì)346的第二端350相鄰并且有作用性接觸的是一個傳導(dǎo)體354。色譜介質(zhì)346包含一個檢測區(qū)356，和有選擇地包含一個控制區(qū)358。第二可對折構(gòu)件344包括一個吸收體360和一第二點(diǎn)樣器362。第一和第二可對折構(gòu)件342和344由一個鉸鏈364連接起來。第二可對折構(gòu)件344上有一個窗口366，用以觀察色譜介質(zhì)346。第一和第二可對折構(gòu)件342和344包含接合件365和369，和一個密封墊368，如上所述。
當(dāng)將第一和第二可對折構(gòu)件342和344相互對折疊合后，則使吸收體360與第一點(diǎn)樣器352有作用性接觸，而使第二點(diǎn)樣器362與傳導(dǎo)體354有作用性接觸，由此使流動反向，此時，包含檢測區(qū)356和控制區(qū)(如果存在的話)358的色譜介質(zhì)346的這部分在第一和第二可對折構(gòu)件342和344相互對折疊合起來時可從第二可對折構(gòu)件344中的窗口366觀察到。
圖13B示出了在第一和第二可對折構(gòu)件342和344相互對折疊合后裝置340的一個頂視圖，此時通過第二可對折構(gòu)件344中的窗口366可以看到檢測區(qū)356和控制區(qū)358。
在這個裝置中，第一點(diǎn)樣器352可以包括一個試樣點(diǎn)樣墊，要測定的試樣被施加到該試樣點(diǎn)樣墊上；第二點(diǎn)樣器362可以包括一個其上施加緩沖劑的緩沖劑點(diǎn)樣墊。第一點(diǎn)樣器352(試樣點(diǎn)樣墊)可以包含至少一種試劑，用于在試樣被施加到色譜介質(zhì)上之前對試樣進(jìn)行處理，如前所述。第二點(diǎn)樣器362(緩沖劑點(diǎn)樣墊)典型地包含一種用于分析物的特異性結(jié)合體，該結(jié)合體處于能夠通過加一種含水液體被溶解的形式，如前所述。
第一點(diǎn)樣器352(試樣點(diǎn)樣墊)最好進(jìn)一步包括一種惰性染料，從而可以用肉眼監(jiān)測試樣在色譜介質(zhì)346中的流動。更好的是，惰性染料相對可檢測標(biāo)記物的顏色是一種對比色，例如，如果可檢測標(biāo)記物是粉紅色膠態(tài)金，則惰性染料可以是蘭色。通過觀察惰性染料來監(jiān)測試樣的遷移。當(dāng)試樣遷移了一段足夠長的距離后，例如為色譜介質(zhì)346的長度的三分之二或四分之三之后，將第一和第二可對折構(gòu)件342和344相互對折疊合后，使吸收體360與第一點(diǎn)樣器352相接觸。這就使試樣通過色譜介質(zhì)346的流動反向，從而能夠在檢測區(qū)356處捕獲額外的分析物。此外也使第二點(diǎn)樣器362與傳導(dǎo)體354接觸，而將含有已溶解的用于分析物的加標(biāo)記特異性結(jié)合體的緩沖劑溶液被施加到色譜介質(zhì)346上。緩沖劑溶液通過色譜介質(zhì)346從第二端350向第一端348遷移。當(dāng)它到達(dá)檢測區(qū)356時，用于分析物的加標(biāo)記的特異性結(jié)合體則結(jié)合到已經(jīng)結(jié)合在檢測區(qū)356上的分析物上。然后如前述那樣對分析物實(shí)施檢測和/或測定。
用于在將試樣作為第一液體施加到第一點(diǎn)樣器352時，第一和第二可對折構(gòu)件342和344沒有接觸，因此有可能或者先將試樣施加到第一點(diǎn)樣器352上，或者先將緩沖劑施加到第二點(diǎn)樣器362，以重新構(gòu)造加標(biāo)記的特異性結(jié)合體。
這種雙向裝置的一種變型是用一個具有有限容量的第一吸收體354a代替第一可對折構(gòu)件342上的傳導(dǎo)體354。在第二可對折構(gòu)件344上的吸收體360則為一第二吸收體。第一可對折構(gòu)件342上的有限容量的吸收體354a具有這樣的特性，即在第二點(diǎn)樣器362(其含有一種可溶解的加標(biāo)記的特異性結(jié)合體)被置于與該吸收體354a有作用性接觸，和第二吸收體360被置于與第一點(diǎn)樣器352有作用性接觸時，通過它可以將液體抽回。
m.檢測器點(diǎn)樣墊在第一構(gòu)件上的裝置本發(fā)明的一個兩構(gòu)件色譜測定裝置的又一個實(shí)施例有一個位于第一可對折構(gòu)件上的檢測器點(diǎn)樣墊和一個位于第二可對折構(gòu)件上的試樣制備區(qū)。在這個裝置中，檢測器點(diǎn)樣墊設(shè)置成與色譜介質(zhì)的第一端有作用性接觸的狀態(tài)。檢測器點(diǎn)樣墊最好含有一種針對分析物的以能夠通過向檢測器點(diǎn)樣墊加入一種含水液體而溶解的形式加標(biāo)記的特異性結(jié)合體。該裝置進(jìn)二步包括一個與檢測器點(diǎn)樣墊有作用性接觸并與色譜介質(zhì)的第一端間接接觸的傳導(dǎo)體以及一個與色譜介質(zhì)的第二端有作用性接觸的吸收體。
在操作裝置的這個實(shí)施例時，先將試樣施加到第二可對折構(gòu)件上的試樣制備區(qū)，然后將第一和第二可對折構(gòu)件相互對折疊合。這樣試樣制備區(qū)的內(nèi)含物被施加到傳導(dǎo)體上，然后通過檢測器點(diǎn)樣墊施加到色譜介質(zhì)的第一端上。當(dāng)試樣到達(dá)檢測器點(diǎn)樣墊時，就使檢測器點(diǎn)樣墊的內(nèi)含物溶解。當(dāng)檢測器點(diǎn)樣墊的內(nèi)含物含有一種針對分析物的特異性結(jié)合體時，試樣從檢測器點(diǎn)樣墊中通過導(dǎo)致特異性結(jié)合體結(jié)合到存在于試樣中的任何分析物上。
裝置的這個實(shí)施例示于圖14中。色譜測定裝置380包括一第一可對折構(gòu)件382和一第二可對折構(gòu)件384。第一可對折構(gòu)件382包含一個具有一第一端388和一第二端390的色譜介質(zhì)386。第一可對折構(gòu)件382也包含一個與色譜介質(zhì)386的第一端388有作用性接觸的檢測器點(diǎn)樣墊392、一個與檢測器點(diǎn)樣墊392有作用性接觸的并和色譜介質(zhì)386的第一端388間接接觸的傳導(dǎo)體394，一個與色譜介質(zhì)386的一第二端390有作用性接觸的吸收體396。色譜介質(zhì)386包含一個檢測區(qū)398和一個控制區(qū)400。第二可對折構(gòu)件384包含一個試樣制備區(qū)403。第一和第二可對折構(gòu)件382和384由一個鉸鏈404連接起來。第二可對折構(gòu)件384中有一個的開口406。用以觀測至少一部分色譜介質(zhì)386。第一和第二可對折構(gòu)件有接合件405和407，和一個密封墊408。
這個實(shí)施例的一個變形包含以能夠溶解的形式設(shè)置在第一可對折構(gòu)件382上也設(shè)置在第二可對折構(gòu)件384上的一種針對分析物的特異性結(jié)合體。當(dāng)可溶解的特異性結(jié)合體設(shè)置在第二可對折構(gòu)件384上時，最好不將它直接設(shè)置在試樣制備402中，而在設(shè)置在包圍試樣制備區(qū)402的一個區(qū)域403中，使得試樣首先通過試樣制備區(qū)402，然后移動到包圍著試樣制備區(qū)402的區(qū)域403中，溶解特異性結(jié)合體。例如，試樣制備區(qū)402可以包含一張經(jīng)合適處理的過濾紙，用一種膠或固定件固定在第二可對折構(gòu)件384的表面上。這樣在試樣接觸可溶解的特異性結(jié)合體之前就可以處理試樣，例如，調(diào)節(jié)pH值，溶解完整的細(xì)胞，和/或除去顆粒物。這個實(shí)施例的這種變形可以提供一個較寬的動態(tài)范圍，并且在可獲得的抗體具有低的親合力或者要檢測低濃度的分析物時，會是有用的。
n.帶有提供洗滌的兩扇區(qū)點(diǎn)樣器的裝置本發(fā)明的兩構(gòu)件測定裝置的又一個實(shí)施例具有一個兩扇區(qū)點(diǎn)樣器，它在試樣和加標(biāo)記的特異性結(jié)合體混合物已經(jīng)通過色譜介質(zhì)之后，對沒有與加標(biāo)記的特異性結(jié)合體進(jìn)行反應(yīng)的試樣提供洗滌。這個實(shí)施例的優(yōu)點(diǎn)在于它提供了一個更清楚的背景，更容易讀出微弱的陽性結(jié)果。
在該實(shí)施例中，第一可對折構(gòu)件包含一個具有一第一端和一第二端的色譜介質(zhì)，一個與色譜介質(zhì)的第一端有作用性接觸的傳導(dǎo)體和一個與色譜介質(zhì)的第二端有作用性接觸的吸收體。第二可對折構(gòu)件包含一個點(diǎn)樣器，它被分為兩個扇區(qū)；包含一個用于分析物的以可溶解形式的加標(biāo)記的特異性結(jié)合體的第一扇區(qū)，和一個沒有加標(biāo)記的特異性結(jié)合體的第二扇區(qū)，當(dāng)?shù)谝缓偷诙蓪φ蹣?gòu)件相互對折疊合后，使點(diǎn)樣器的第一扇區(qū)而不是第二扇區(qū)與傳導(dǎo)體直接接觸，從而將點(diǎn)樣器的第一扇區(qū)的內(nèi)含物施加到傳導(dǎo)體上，然后施加到色譜介質(zhì)的第一端上。第二扇區(qū)與傳導(dǎo)體處于間接接觸，此時，第二扇區(qū)的內(nèi)含物流過第一扇區(qū)，然后到達(dá)傳導(dǎo)體。這樣，在將點(diǎn)樣器的第一扇區(qū)的內(nèi)含物施加到傳導(dǎo)體之后，接著將點(diǎn)樣器的第二扇區(qū)的內(nèi)含物施加到傳導(dǎo)體。第二扇區(qū)的內(nèi)含物(包含試樣，但沒有加標(biāo)記的特異性結(jié)合體)用于從色譜介質(zhì)中洗掉未結(jié)合的加標(biāo)記的特異性結(jié)合體，從而減少在色譜介質(zhì)中可看見的標(biāo)記物的背景，而改善測定裝置的讀出性。這一點(diǎn)對于弱陽性測定來說特別有利。
測定裝置的這個實(shí)施例示于圖15中。色譜測定裝置420包括一第一可對折構(gòu)件422和一第二可對折構(gòu)件424。第一可對折構(gòu)件422包含一個具有一第一端428和一第二端430的色譜介質(zhì)426，一個與色譜介質(zhì)426的第一端428有作用性接觸的傳導(dǎo)體432、一個與色譜介質(zhì)426的第二端430有作用性接觸的吸收體434。第一可對折構(gòu)件424有一個被分成兩個扇區(qū)的點(diǎn)樣器436；當(dāng)?shù)谝缓偷诙蓪φ蹣?gòu)件422和424相互對折疊合后與傳導(dǎo)體432直接接觸的為第一扇區(qū)438，和當(dāng)?shù)谝缓偷诙蓪φ蹣?gòu)件422和424相互對折疊合后與傳導(dǎo)體432間接接觸的為第二扇區(qū)440。色譜介質(zhì)426包含一個檢測區(qū)442和一個控制區(qū)444。第一和第二可對折構(gòu)件422和424由一個鉸鏈446連接起來。第二可對折構(gòu)件424中有一個窗口448，用以觀測至少一部分色譜介質(zhì)426。第一和第二可對折構(gòu)件422和424也有接合件423和425，和一個密封墊427，如上所述。
B.帶有蓋子的兩構(gòu)件型裝置本發(fā)明的色譜測定裝置的又一個實(shí)施例是一個帶有一個蓋子的兩構(gòu)件型裝置。
測定裝置的這個實(shí)施例示于圖16a中。色譜測定裝置460包括一第一可對折構(gòu)件462、一第二可對折構(gòu)件464，和一個蓋子466。第二可對折構(gòu)件464由一第一鉸鏈468鉸接在第一可對折構(gòu)件462的一側(cè)邊上，蓋子466由一第二鉸鏈470鉸接在第一可對折構(gòu)件462的相對的側(cè)邊上。第一可對折構(gòu)件462包含一個具有一第一端474和一第二端476的色譜介質(zhì)472。與色譜介質(zhì)472的第一端474相鄰且有作用性接觸地設(shè)置在一個凹陷480中的是一第一點(diǎn)樣器或試樣墊478。第一點(diǎn)樣器478可以包含一個試樣制備區(qū)，該試樣制備區(qū)可以包含至少一種用于在試樣施加到色譜介質(zhì)之前對試樣進(jìn)行處理的試劑，如上所述。第一點(diǎn)樣器478也可以包含一種惰性染料，以指示色譜法的進(jìn)程，如上所述。一第一吸收體482與色譜介質(zhì)472的第二端476相鄰且有作用性接觸。色譜介質(zhì)472包含一個檢測區(qū)484和一個控制區(qū)486，并且有選擇地用一條限制線588標(biāo)記。限制線488也可以有選擇地標(biāo)記在第一可對折構(gòu)件462上。第二可對折上464包括一第一點(diǎn)樣器490，它典型地包含一種用于分析物的加標(biāo)記的特異性結(jié)合體，和一第二吸收體492。蓋子466有一第一開孔494。更好的是，第二可對折構(gòu)件464有一第二開孔496。在這個裝置中，第二可對折構(gòu)件464和蓋子466也包含接合件491和493。裝置460用一個密封墊495包圍住，如上所述。蓋子466也可以有一個將其保持到位的接合件497。
圖16B示出了這個裝置460的一個頂視圖，此時，第二可對折構(gòu)件464折疊在第一可對折構(gòu)件462之上，而蓋子466折疊在第一可對折構(gòu)件464的上面。通過蓋子466的第一開孔494和第二可對折構(gòu)件464的第二開孔496可以看到一部分色譜介質(zhì)472，該色譜介質(zhì)包含檢測區(qū)484和控制區(qū)486。
在操作這個裝置時，向第一點(diǎn)樣器478加入一第一液體則使第一液體被施加到色譜介質(zhì)472的第一端474。典型地，第一液體是一種可以包含一種分析物的試樣。
在這個裝置中，在第一可對折構(gòu)件462中的凹陷480的作用是使第二吸收體492定位，從而可以使之至少部分地與色譜介質(zhì)472直接接觸，以便除去過多的試樣，同時不使第一點(diǎn)樣器478阻礙這種接觸。
在使用中，將試樣施加到第一點(diǎn)樣器478上，從而色譜分析可以在色譜介質(zhì)472中從第一端474行進(jìn)到第二端476。當(dāng)染料到達(dá)限制線488時，將第一和第二可對折構(gòu)件462和464相互對折疊合，這就使第二點(diǎn)樣器490與第一吸收體482有作用性接觸，從而將第二液體施加到色譜介質(zhì)472的第二端476，同時也使第二吸收體492與第一點(diǎn)樣器478有作用性接觸，從而經(jīng)第一點(diǎn)樣器478從色譜介質(zhì)472中抽取液體。這使得色譜流反向，并將加標(biāo)記的特異性結(jié)合體通過色譜介質(zhì)472從第二端476向第一端474回抽。因此，這個裝置對于雙向色譜法是有用的。
蓋子466可以折疊在第二可對折構(gòu)件464的上面，以便將第二可對折構(gòu)件464更牢固地鎖定和保持在第一可對折構(gòu)件462上。這樣在裝置使用完后就能作為一個醫(yī)學(xué)記錄更方便地儲藏裝置。
C.三構(gòu)件型裝置本發(fā)明的色譜測定裝置的又一個實(shí)施例是一種應(yīng)用雙向色譜法的三構(gòu)件型裝置。
三構(gòu)件測定裝置的這個實(shí)施例示于圖17A中。測定裝置520包括一第一可對折構(gòu)件522、一第二可對折構(gòu)件524，和一第三可對折構(gòu)件526。第二可對折構(gòu)件524由一第一鉸鏈528鉸接在第一可對折構(gòu)件522的一側(cè)邊上，第三可對折構(gòu)件526由一第二鉸鏈530鉸接在第一可對折構(gòu)件522的相對的側(cè)邊上。第一可對折構(gòu)件522包含一個具有一第一端534和一第二端536的色譜介質(zhì)532。色譜介質(zhì)532包含一個檢測區(qū)538和一個控制區(qū)540。與色譜介質(zhì)532的第一端534有作用性接觸的是一第一傳導(dǎo)體542，而與色譜介質(zhì)532的第二端536有作用性接觸的是一第二傳導(dǎo)體544。第二可對折構(gòu)件24可以包含一第一吸收體546和一第一點(diǎn)樣器548，用于試樣施加。典型地，第一點(diǎn)樣器548包含一種用于分析物的以通過向第一點(diǎn)樣器548中加入一種含水試樣能夠溶解的形式的特異性結(jié)合體。在第二可對折構(gòu)件524中開有一第一開孔550，用以觀測至少一部分色譜介質(zhì)532。第一開孔550位于第一吸收體546和第一點(diǎn)樣器548之間。第三可對折構(gòu)件526包括一個用于一個加標(biāo)記的次特異性結(jié)合體的第二點(diǎn)樣器552，和一第二吸收體554。在第三可對折構(gòu)件526中開有一第二開孔556，用以觀測至少一部分色譜介質(zhì)532。第二開孔556位于第二吸收體554和第二點(diǎn)樣器552之間。當(dāng)裝置520閉合時，第二可對折構(gòu)件524折疊在第一可對折構(gòu)件522之上，而第三可對折構(gòu)件526折疊在第一可對折構(gòu)件522的上面，通過第一開孔550和第二開孔556(見圖17B)至少可以看見一部分色譜介質(zhì)532。第二和第三可對折構(gòu)件524和526有接合件551和555，將它們保持在一起。一條柔性凸起或密封墊557包圍著這些構(gòu)件的邊緣，而將試劑和試樣保持在裝置520內(nèi)。接合件和一條凸起或密封墊的一種類似布置用于其它的三構(gòu)件型裝置，如下文所述。
在這個裝置中，將第一和第二可對折構(gòu)件522和524相互對折疊合使得第一吸收體546與第二傳導(dǎo)體544有作用性接觸和使得第一點(diǎn)樣器548與第一傳導(dǎo)體542有作用性接觸，以將液體施加到色譜介質(zhì)532上，從而通過至少一部分色譜介質(zhì)532(包括檢測區(qū)538和控制區(qū)540)抽吸施加到第一點(diǎn)樣器548上的第一液體。
然后將第一和第二可對折構(gòu)件522和524從相對對折疊合位置上拉開，而將第一和第三可對折構(gòu)件522和526相互對折疊合。這使得第二傳導(dǎo)體554與第一傳導(dǎo)體542進(jìn)入有作用性接觸，以從色譜介質(zhì)532中抽吸液體，并且使得第二點(diǎn)樣器552與第二傳導(dǎo)體544進(jìn)入有作用性接觸，而將液體施加到色譜介質(zhì)532上。這就使流動反向，從而至少通過一部分色譜介質(zhì)抽吸施加到第二點(diǎn)樣器552上的一第二液體，經(jīng)過這部分色譜介質(zhì)已經(jīng)沿著經(jīng)過色譜介質(zhì)532抽吸第一液體的方向的相反方向抽吸第一液體。第一、第二和第三可對折構(gòu)件522，524和526具有這樣的結(jié)構(gòu)，即當(dāng)?shù)谌蓪φ蹣?gòu)件526與第一可對折構(gòu)件522相互對折疊合后，可以將第二可對折構(gòu)件524折疊在第一和第三可對折構(gòu)件522和526的上面，以形成一個蓋子。
在使用這種裝置進(jìn)行一種血清學(xué)測定時，在第二吸收體554和第一傳導(dǎo)體542之間的穩(wěn)定的壓力是很重要的；以保證在加標(biāo)記的次特異性結(jié)合體的前沿之前從色譜介質(zhì)532中抽吸非特異性免疫球蛋白，或者保證在加標(biāo)記的特異性抗分析物的前沿之前抽吸自由的分析物。如果抗免疫球蛋白標(biāo)記和非特異性免疫球蛋白之間發(fā)生混合，那么非特異性免疫球蛋白使投免疫球蛋白標(biāo)記(結(jié)合物)中性化，從而難以或不能標(biāo)記被特異性捕獲的免疫球蛋白。該裝置的第三可對折構(gòu)件526有助于維持所施加的壓力的一致性，從而可靠地實(shí)現(xiàn)這種功能。這是本發(fā)明的測定裝置的優(yōu)點(diǎn)之一。
第一特異性結(jié)合體可以直接標(biāo)記一個可檢測標(biāo)記物。另一種方式是采用間接標(biāo)記第一特異性結(jié)合體。在間接標(biāo)記的情況下，第一特異性結(jié)合體沒有被加標(biāo)記，而是通過利用第二點(diǎn)樣器加入一個加標(biāo)記的次特異性結(jié)合體，使該次特異性結(jié)合體與第一特異性結(jié)合體相結(jié)合來檢測第一特異性結(jié)合體。間接標(biāo)記方式在測試賈第鞭毛蟲或其它抗原時尤其有用，因?yàn)橛糜谶@些抗原的在市場上能購得的抗體都很難被直接標(biāo)記。當(dāng)?shù)谝惶禺愋越Y(jié)合體未被直接標(biāo)記時，第二點(diǎn)樣器552最好含有一種用于第一特異性結(jié)合體的加標(biāo)記的次特異性結(jié)合體，如下面第III節(jié)中所述。
三構(gòu)件裝置的又一個實(shí)施例采用位于第三可對折構(gòu)件上的一個吸收體，其設(shè)置成可以除去整個色譜介質(zhì)中和與其有作用性接觸的構(gòu)件中的液體。其目的是除去可能產(chǎn)生一種背景顏色因而降低敏感性的多過試樣。
這個實(shí)施例示于圖18中。測定裝置560有一第一、一第二和一第三可對折構(gòu)件561，562和563。第二可對折構(gòu)件562由一個第一鉸鏈564鉸接在第一可對折構(gòu)件561的一側(cè)邊上，第三可對折構(gòu)件563由一第二鉸鏈565鉸接在第一可對折構(gòu)件561的另一側(cè)邊上。第一可對折構(gòu)件561有一個具有一第一端567和一第二端568的色譜介質(zhì)566。與色譜介質(zhì)566的第一端567相鄰并有作用性接觸的是一第一點(diǎn)樣器569。與色譜介質(zhì)566的第二端568相鄰并有作用性接觸的是一個傳導(dǎo)體570。色譜介質(zhì)包含一個檢測區(qū)571并有選擇地包含一個控制區(qū)572。第二可對折構(gòu)件562包括一第一吸收體573和一第二點(diǎn)樣器574，典型地，第二點(diǎn)樣器574含有一種針對分析物的以可溶解形式的加標(biāo)記特異性結(jié)合體，第三可對折構(gòu)件563包括一第二吸收體575，它基本上沿色譜介質(zhì)566的長度延伸，以便在將第三可對折構(gòu)件563與第一可對折構(gòu)件561相互對折疊合后從色譜介質(zhì)566、第一點(diǎn)樣器569和傳導(dǎo)體570中吸收液體。第一可對折構(gòu)件561有一位于色譜介質(zhì)后面的開孔576，用于在第一可對折構(gòu)件561的背面處觀察至少一部分色譜介質(zhì)566。第二和第三可對折構(gòu)件562和563也有如前所述的接合件577和579，和一個密封墊580。
在使用時，將要測試的試樣施加到第一點(diǎn)樣器569上，并將一種緩中劑溶液施加到第二點(diǎn)樣器574。然后讓試樣流過包含檢測區(qū)571和控制區(qū)572的色譜介質(zhì)566。然后將第一和第二可對折構(gòu)件561和562相互對折疊合起來，使第二點(diǎn)樣器574接觸第一點(diǎn)樣器569，而第一吸收體573接觸在色譜介質(zhì)566的第二端568處的傳導(dǎo)體570。這樣就造成已溶解的原先位于第二點(diǎn)樣器574中的加標(biāo)記的特異性結(jié)合體流過色譜介質(zhì)。在試樣和已溶解的特異性結(jié)合體完全流過色譜介質(zhì)566之后，將第三可對折構(gòu)件563與第一可對折構(gòu)件561相互對折疊合，從而第二吸收體575可以移去色譜介質(zhì)566、第一點(diǎn)樣器569、和傳導(dǎo)體570中的液體。然后將第二可對折構(gòu)件562折疊到第三可對折構(gòu)件563的上面，并通過位于色譜介質(zhì)566后面的開孔576觀察包含檢測區(qū)576和控制區(qū)568的色譜介質(zhì)566。
D.多重型裝置本發(fā)明的色譜測定裝置的又一種實(shí)施例是一種能夠同時實(shí)施多重測定的多重型裝置，這些測定可以對同一分析物實(shí)施，也可以對不同的分析物實(shí)施。一般地，通過在第一和第二可對折構(gòu)件上，必要時也在第三可對折構(gòu)件上設(shè)置多重色譜介質(zhì)，試樣制備區(qū)、點(diǎn)樣器、傳導(dǎo)體、吸收體和其它所需要的組分(元素)，上面所述裝置的所有型式都能適用于多重應(yīng)用。
1.基本的多重型裝置本發(fā)明的一種型式的多重型測定裝置示于圖19中。測定裝置590有一第一可對折構(gòu)件592和一第二可對折構(gòu)件594。第二可對折構(gòu)件594由一個鉸鏈596鉸接在第一可對折構(gòu)件592上。第一可對折構(gòu)件592包括多個色譜介質(zhì)598，每個色譜介質(zhì)598具有一第一端600和一第二端602，和有一個檢測區(qū)604及一個控制區(qū)606。每個色譜介質(zhì)598的第二端602與一個吸收體608有作用性接觸，以促使通過色譜介質(zhì)的液體流動。每個色譜介質(zhì)598都有一個單獨(dú)的吸收體608。第二可對折構(gòu)件594包含多個試樣制備區(qū)610，每一個對應(yīng)于一個色譜介質(zhì)598。典型的情況是，每個試樣制備區(qū)610含有用于要試驗(yàn)的分析物的以通過向試樣制備區(qū)610加入一種液體試樣而能夠溶解的形式的加標(biāo)記的特異性結(jié)合體。另一種方案是，在向試樣制備區(qū)610中加入試樣之前或之后，可以將液體形式的加標(biāo)記的特異性結(jié)合體加到試樣制備區(qū)610。將第一和第二可對折構(gòu)件592和594相互對折疊合，使每個試樣制備區(qū)610在第一端600處接觸對應(yīng)的色譜介質(zhì)598。第二可對折構(gòu)件594包含多個開孔612，每一個開孔612對應(yīng)于一個色譜介質(zhì)598。第一和第二可對折構(gòu)件592和594包含如上所述的接合件614和616，和一個密封墊618。
這種多重型裝置可以包含2～12或更多個試樣制備區(qū)和色譜介質(zhì)，這取決于使用該裝置進(jìn)行的測定情況。典型地，裝置包含2～5個單獨(dú)的試樣制備區(qū)和色譜介質(zhì)。
該裝置的這個實(shí)施例可以用于利用同一種試樣的不同分量試樣來測定一些不同的分析物，或者用一些不同的試樣測定同一種分析物，這后一種情況在以下的情況中進(jìn)行的測定是極其有用的，即為了確定所注意的分析物，必須測定在不同時刻從同一病人身上取得的試樣，例如糞便中的隱血；糞便隱血的存在通常由一天取一次或按一預(yù)定的時間間隔提取的一系列便樣來確定的。另一種方式是，可以采用二次或多次測定作為控制或?qū)φ諛?biāo)準(zhǔn)。
2.帶有可收縮凹槽的多重型裝置在多重型裝置的又一種變型中，至少一個試樣制備區(qū)中可以有一個可收縮的凹槽，可以將一種抽取簽條或其它含有試樣的部件加入該凹槽中。在這種變型中，第一可對折構(gòu)件進(jìn)一步包括可以鉸接折疊的翼板，當(dāng)?shù)谝缓偷诙蓪φ蹣?gòu)件相互對折疊合后，這些鉸接折疊的翼板則折疊在第二可對折構(gòu)件的上面。
多重型裝置的這種變型示于圖20中。裝置620具有一第一和第二可對折構(gòu)件622和624。第二可對折構(gòu)件624由一個鉸鏈626鉸接在第一可對折構(gòu)件622上。在第一可對折構(gòu)件622上還鉸接有兩個可折疊的翼板628和630。第一可對折構(gòu)件622有一個控制凹槽632和一個可收縮的試樣凹槽634，亦即它是由類似于海綿這樣的材料制成的。第二可對折構(gòu)件624有數(shù)個色譜介質(zhì)636，在本實(shí)施例中為兩個，每一個都有一個檢測區(qū)638和一個控制區(qū)640。第二可對折構(gòu)件624有一個開孔642，用于觀察每個色譜介質(zhì)636的一部分，色譜介質(zhì)包括檢測區(qū)638和控制區(qū)640。第一和第二可對折構(gòu)件622和624有接合件641和643。當(dāng)將第一和第二可對折構(gòu)件622和624相互對折疊合后，控制凹槽632和可收縮凹槽634中的試樣就被施加到相應(yīng)的色譜介質(zhì)636中，用以進(jìn)行色譜分析。
3.能夠接收試驗(yàn)卡片的多重型裝置多重型裝置的又一種變型對于測定糞便隱血中的血紅蛋白尤其有用。這種裝置能夠接收一個含有幾個干燥的糞便試樣(典型的情況是在連續(xù)的幾天內(nèi)留取的)的試驗(yàn)卡片。
這個裝置示于圖21中。測定裝置660包括一第一可對折構(gòu)件662，一個由一第一鉸鏈666鉸接在第一可對折構(gòu)件662上的第二可對折構(gòu)件664，和一個由一第二鉸鏈670鉸接在第一可對折構(gòu)件662上的第三可對折構(gòu)件668。第一可對折構(gòu)件662適于接收一個其上裝有幾個干燥的標(biāo)本674的試驗(yàn)卡片672。第二可對折構(gòu)件664上面有一個試劑墊676。第三可對折構(gòu)件668有多個色譜介質(zhì)678，每個色譜介質(zhì)都有如前所述的一個檢測區(qū)680和一個控制區(qū)682。每個要測試的試樣都有一個單獨(dú)的色譜介質(zhì)678。第三可對折構(gòu)件668上有一個開孔684，用以觀察至少一部分色譜介質(zhì)678，每個色譜介質(zhì)包括一檢測區(qū)680和一控制區(qū)682。第二和第三可對折構(gòu)件包含接合件681和685，裝置660也如前面對三構(gòu)件裝置所述的那樣有一個密封墊686。
在使用時，將含有多個干燥標(biāo)本674的試驗(yàn)卡片672插入到第二可對折構(gòu)件664中。第二可對折構(gòu)件664折疊到含有試劑墊676的第一可對折構(gòu)件662的上面，使試劑墊676接觸試驗(yàn)卡片664上的多個干燥標(biāo)本674，進(jìn)而從干燥標(biāo)本674中提取分析物。然后從第一可對折構(gòu)件662上面打開第二可對折構(gòu)件664。最后將第三可對折構(gòu)件668折疊到第一可對折構(gòu)件662的上面，以使試劑墊676上的內(nèi)含物和從干燥標(biāo)本上提取的分析物施加到色譜介質(zhì)678上，由此可以發(fā)生色譜過程。
在這個裝置中，試劑墊676含有一種用于分析物的標(biāo)記有一種可檢測標(biāo)記物的以通過向試劑墊676加入一種含水試劑能夠被溶解的形式的特異性結(jié)合體。所加入的試劑是用于要測定的分析物的一種提取試劑，如血紅蛋白。
當(dāng)將第二可對折構(gòu)件664對折到第一可對折構(gòu)件662的上面之后，分析物就從試驗(yàn)卡片672上的試樣中提取出并結(jié)合到加標(biāo)記的特異性結(jié)合體上，當(dāng)隨后將第三可對折構(gòu)件668對折到第二可對折構(gòu)件上面后，結(jié)合在加標(biāo)記的特異性結(jié)合體上的任何分析物都通過色譜介質(zhì)668遷移，并結(jié)合到每個色譜介質(zhì)678中的檢測區(qū)680上。
本發(fā)明的多重型裝置的又一種變型是一種類似于圖19所示的多重型裝置，但它能接收一個試驗(yàn)卡片。該試驗(yàn)卡片包含多個試樣，例如在進(jìn)行一種糞便隱血檢測時，這些試樣是一些糞便試樣。
這種變型示于圖22中。測定裝置700有一第一可對折構(gòu)件702和一第二可對折構(gòu)件704。第二可對折構(gòu)件704由一個鉸鏈706鉸接到第一可對折構(gòu)件702上。第一可對折構(gòu)件702包括多個色譜介質(zhì)708。每個色譜介質(zhì)708都有一第一端710和一第二端712，并包括一個檢測區(qū)718和一個控制區(qū)720。每個色譜介質(zhì)708的第一端710和一個傳導(dǎo)體714有作用性接觸，而每個色譜介質(zhì)708的第二端712與一個吸收體716有作用性接觸。每個色譜介質(zhì)708都對應(yīng)有一個單獨(dú)的傳導(dǎo)體714和吸收體716。第一可對折構(gòu)件702適于接收一個含有多個干燥標(biāo)本724的試驗(yàn)卡片722，標(biāo)本724設(shè)置成其能與每個傳導(dǎo)體714有作用性接觸。第二可對折構(gòu)件704包括多個點(diǎn)樣器726，每一個對應(yīng)一個色譜介質(zhì)708。更好的是，每個點(diǎn)樣器726包含用于分析物的處于能被溶解的形式的加標(biāo)記的特異性結(jié)合體。
在使用時，將一種緩沖劑或其它含水液體施加到每個點(diǎn)樣器726上，以重新構(gòu)造加標(biāo)記的特異性結(jié)合體。將第一和第二可對折構(gòu)件702和704相互對折疊合，使得每個點(diǎn)樣器726被施加到對應(yīng)的干燥標(biāo)本724上，從而將每個干燥標(biāo)本724和每個點(diǎn)樣器726的內(nèi)含物施加到每個傳導(dǎo)體714上，并因此而施加到每個色譜介質(zhì)708上。試驗(yàn)卡片722將每個標(biāo)本724保持在其位上，使得它們能夠接收點(diǎn)樣器726的內(nèi)含物，并使得標(biāo)本724中的分析物被提取，與加標(biāo)記的特異性結(jié)合體發(fā)生反應(yīng)，并施加到傳導(dǎo)體714上。第二可對折構(gòu)件704包含多個開孔728，每個開孔對應(yīng)一個色譜介質(zhì)708，用以觀察每個色譜介質(zhì)708。第一和第二可對折構(gòu)件702和704各有接合件725和727和一個密封墊730，以保持試樣和試劑。
II.用于競爭法測定的色譜測定裝置結(jié)構(gòu)上類似于前面所公開的那些裝置的測定裝置可以用于對單價分析物采用的競爭法測定。典型的單價分析物是半抗原，但是相同的原理可以用于測定任何是單價的分析物，如一個其上附加的抗體結(jié)合點(diǎn)被阻礙或改變的通常的多價抗原?？蓽y定的分析物包括如下茶堿(theophylline)，地谷新(digoxin)，雙異丙吡胺(disopyramide)，利度卡因鹽酸鹽(lidocaine)，普魯卡因酰胺(procainamide)，萘心安(prop ranolol)，奎尼定(quinidin)，氨基羥丁基卡那霉素A(amikacin)，青霉素和其它一內(nèi)酰胺抗生素，氯霉素，艮他霉素(gentamicin)，卡那霉素，乙基紫蘇霉素(netilmycin)，托普霉素(tobramycin)，三環(huán)抗抑郁劑(tricyclicantidepressants)，乙琥胺柴浪丁(ethosuximide)，苯巴比妥(phenobarbital)安定(diazepam)，二苯基乙丙酰脲納(phenytoin)，普奈米東(primidone)，丙戊酸(valproic acid)，醋氨酚(acetaminophen)，乙酰水楊酸(acetylsalicylic acid)，布洛勞(ibuprofen)，氨甲喋呤(methotrexate)，毒品，如嗎啡(morphine)，可卡因，可待因(codeine)，芬太尼(fentanyl)，3-甲基芬太尼(3-methylfentanyl)，安非他明(amphetamines)，麥角酸二乙胺(lysergic acid diethylamide)，苯環(huán)己哌啶(phencyclidine)，和海洛因和它們的代謝物，DNP，1-取代的-4-羥基-2-硝基苯(1-substituted-4-hydroxy-2-nitrobenzenes)，4-取代的-硝基三烷基苯胺鹽(4-substituted-2-nitrotrialkylaniliniumsalt)，和環(huán)境污染劑，如苯，甲苯(toluene)，二甲苯(xylene)，乙基苯(ethylbenzene)，氯丹(chlordane)，DDT和它的代謝物，2，4，-D，2，4，5-T，和阿特拉津(atrazine)。
適合用于進(jìn)行這些測定的特異性結(jié)合體包括一些抗體和特異性結(jié)合蛋白質(zhì)，但并不限于這些，后者的一個例子是從芽胞桿菌耐熱硬脂酸(Bacillus stearothermophilus)隔離出來的毒霉素結(jié)合蛋白質(zhì)(PBP)。
與以前適用于實(shí)施競爭法免疫測定的測定裝置不同，本發(fā)明的這些裝置的優(yōu)點(diǎn)在于，在試樣中存在的分析物會給出一個陽性結(jié)果或可檢測的結(jié)果，每個結(jié)果都是以裝置的檢測區(qū)中的一條有色線形式出現(xiàn)。典型的情況是，在競爭法免疫測定中，一個可檢測的信號的展開表示一個陰性結(jié)果(即沒有分析物存在)。因此，在被觀察的結(jié)果和檢測之間存在一個相反的關(guān)系。本發(fā)明的這些裝置產(chǎn)生一個在分析物濃度和可檢測信號之間的直接關(guān)系，產(chǎn)生假陰性結(jié)果的可能性較小。這些裝置也具有擴(kuò)大的動態(tài)范圍。
A.三構(gòu)件雙向流動裝置本發(fā)明用于競爭法測定的色譜測定裝置的一個實(shí)施例是一種三構(gòu)件雙向流動裝置。
該裝置有三個可對折構(gòu)件。第一可對折構(gòu)件包含一個具有一第一端和一第二端的色譜介質(zhì)，沿第一方向的流動是從第一端流向第二端及沿第二方向的流動是從第二端流向第一端。在色譜介質(zhì)上的一個大大小于色譜介質(zhì)的面積的分散區(qū)域中固定有分析物或它們免疫學(xué)模擬物。
一種較好的免疫學(xué)模擬物是一種共價地連接在一個蛋白質(zhì)缺乏的、用于分析物的特異性結(jié)合活性體上的分析物，諸如通常的IgG或其它非免疫IgG。這種IgG最好抵制從要測定的分析物中被吸收，以便除去具有特異性結(jié)合活性的任何免疫球蛋白片段，無論是分析物的天然抗體，還是能夠與分析物交叉反應(yīng)的抗體。
半抗原與蛋白質(zhì)，包含非免疫IgG的結(jié)合在本領(lǐng)域中是公知的，并且有過描述，例如參見P.Tijssen所撰寫的“酶免疫測定的實(shí)踐和理論”(1985年阿姆斯特丹.Elsevier)第279-296頁。此處引用作為參考。簡言之，含有羧基(carboxyl groups)的或者能夠被羧化的(carboxylated)半抗原可以通過混合的酐(anhydride)反應(yīng)，通過與一種水溶性碳化二亞胺(carbodiimide)反應(yīng)，或者與N-羥基丁二酰胺(N-hydroxysuccinimide)的脂化反應(yīng)而被偶合。通過諸如氧或氮的取代基與鹵化酯(haloesters)的烷基化作用(alkylation)，接著是脂的水解作用，或在類固醇的羥基或酮基上形成半琥珀酸酯(hemisuccinate)或羧甲基肟(carboxymethyloximes)這樣的反應(yīng)，可以進(jìn)行羥化反應(yīng)。
具有氨基類的半抗原，或者有能還原成氨基類的硝基類的半抗原可以轉(zhuǎn)化成重氮化鹽(diazonium salt)，與弱堿性pH值下的蛋白質(zhì)反應(yīng)，生成芳香胺(aromatic amines)。具有脂肪胺(aliphatic amines)的半抗原可以用不同的方法結(jié)合到蛋白質(zhì)上，這包括與碳化二亞胺(carbodiimides)的反應(yīng)，與高雙功能的(homobifunctional)試劑甲代亞苯基-2，4-聚氨脂(tolylene-2，4-diisocyanate)的反應(yīng)，或者與馬來酰亞胺(maleimide)化合物的反應(yīng)。脂肪胺通過與P-硝基苯甲酰氯(nitrobenzoylchloride)反應(yīng)，接著還原成P-氨基苯甲酰胺(P-amiobenzoylamide)也可以轉(zhuǎn)變成芳香胺，在重氮化后與蛋白質(zhì)相偶合。而且，具有雙重功能的亞胺酸酯(imidate esters)，如二甲基庚二酰亞胺酸酯(dimethylpimelimidate)，二甲基已酰亞胺酸脂(dimethyladipimidate)，或二甲基辛二酰亞胺酸酯(dimethysuberimidate)，可以用于將含有氨基團(tuán)的半抗原結(jié)合到蛋白質(zhì)上。
含有硫羥(Thiol)的半抗原可以結(jié)合到有馬來酰亞胺的蛋白質(zhì)上，例如4-(N-馬來酰亞胺基甲基)-環(huán)己烷-1-羧酸-N-羥基琥珀酰亞胺脂(4-(N-maleimidomethyl)-cyclohexane-1-carboxylic acid N-bydroxysuccinimide ester)。
對于具有羥基類的半抗原，一種乙醇功能(alcohol function)可以轉(zhuǎn)變成半丁二酸脂(hemisuccinate)，它引入一個可用于結(jié)合的碳基類。另一方面是，雙功能的試劑癸二酰氯(sebacoyldichloride)將一種乙醇轉(zhuǎn)變成一種酰基氨(phosgene)，它然后與蛋白質(zhì)反應(yīng)。
酚可以用重氮化的P-氨基苯甲酸(P-nitrophenyl)(它引入一個碳基)激活，然后可以通過混合酐反應(yīng)而與蛋白質(zhì)進(jìn)行反應(yīng)。通過形成一種P-硝基苯苷(P-nitrophenyl glycoside)可以使糖激活，接著通過重氮化作用將硝基還原成一個氨基類。其它方法包含通過與高碘酸鹽反應(yīng)使糖的鄰位二醇類(Vicinal glycol)分解成醛類，然后通過與硼氫化鈉(sodium borohydride)的還原性烷化作用而與胺偶合。另一種方法是，含有羥基的半抗原在通過與碳酰氯反應(yīng)，轉(zhuǎn)變成氯甲酸酯(chlorocarbonates)之后可以被結(jié)合。
對于有乙醛或酮類的單抗原，可以通過形成O-羧甲基肟(O-carboxymethyloximes)引入碳基類。酮類也可用P-肼基苯甲酸(P-hydrazinobenzoic acid)衍生出，以產(chǎn)生碳基類，含有乙醛的半抗原可以通過形成席夫(schiff)基直接被結(jié)合，席夫基(Schiff bases)通過與一種還原劑如硼氫化鈉反應(yīng)而得到穩(wěn)定。
色譜介質(zhì)是硝基纖維素較好，分析物的模擬物則通過一種疏水性相互作用非共價地結(jié)合到硝基纖維素上?？梢圆捎闷渌V介質(zhì)，而分析物的模擬物也可以共價地結(jié)合到色譜介質(zhì)上。
第一可對折構(gòu)件進(jìn)一步包括一個與色譜介質(zhì)的第一端有作用性接觸的第一傳導(dǎo)體，和一個與色譜介質(zhì)的第二端有作用性接觸的第二傳導(dǎo)體。
第二可對折構(gòu)件包含一第一點(diǎn)樣器，該第一點(diǎn)樣器含有一個針對分析物的以通過向第一點(diǎn)樣器加入一第一含水液體能夠被溶解的形式的第一特異性結(jié)合體。第一點(diǎn)樣液體可以是試樣，但更好的是試樣和一第一重新構(gòu)成液體的組合物，其中先加入這種第一重新構(gòu)成液體。
第三可對折構(gòu)件包含一第二點(diǎn)樣器，它含有一種針對分析物的以通過向第二點(diǎn)樣器中加入一第二重新構(gòu)成液體能夠被溶解的形式的第二特異性結(jié)合體。第二特異性結(jié)合體上標(biāo)記有一種可檢測的標(biāo)記物，更好地是一種肉眼可檢測的標(biāo)記物，如前面所公開的膠態(tài)金。第三可對折構(gòu)件也含有一個與其上的第二點(diǎn)樣器分隔開的吸收體。
第一和第二特異性結(jié)合體是針對分析物的典型抗體，它們可以是相同的，但不是必須相同?？梢杂脝蝺r抗體片段如Fab或Fab′片段代替完整的二價抗體。這在某些應(yīng)用情況下可能更好，只要不要求在這種競爭法測定中讓抗體分子與一個以上的對應(yīng)分析物反應(yīng)。
在使用中，將第一點(diǎn)樣器上的第一特異性結(jié)合體溶解，較好的做法是只加入試樣來溶解，或者也可以先加入一第一重新構(gòu)成液體，再加入試樣。第二點(diǎn)樣器上的第二特異性結(jié)合體也通過加入一第二重新構(gòu)成液體而被重新構(gòu)成。典型地情況是，第一和第二重新構(gòu)成液體是相同的。重新構(gòu)成液體最好是一種緩沖液，它含有附加的成分，如螯合劑，清潔劑，抗菌劑和防腐劑。一種合適的重新構(gòu)成液體的制備如下即混合相等容積的磷酸鹽緩沖液(0.1克分子，pH7.2，含80％的Tween-20)和HEPES緩沖液(2.5毫克分子，pH7.5，含0.005％氚核X-100，0.003％乙二胺四乙酸的四鈉鹽(tetrasodium EDTA)和0.65％疊氮化鈉(sodiumazide))。較好的是，施加到第一和第二點(diǎn)樣器的每一個上的重新構(gòu)成液體的量是從約為5μl至200μl，更好的是從約為10μl～100μl，最好是20μl。施加的試樣的量是在大約5μl～40μl的范圍較好，最好是30μl。
在將試樣施加到第一點(diǎn)樣器上之后，將裝置置于培養(yǎng)箱中，以使可溶解的特異性結(jié)合體溶解，并使第一特異性結(jié)合體與分析物反應(yīng)，更好的情況是，培養(yǎng)期為約5分鐘～30分鐘左右，最好是大約15分鐘。典型地情況是在室溫下進(jìn)行培養(yǎng)，但也可以在較低或較高的溫度下進(jìn)行。在較高溫度下培養(yǎng)可以加快反應(yīng)速度，而在較低溫度下培養(yǎng)則可以是希望避免敏感試樣受到氧化或其它分裂。
在培養(yǎng)之后，將第一和第二可對折構(gòu)件相互對折疊合，使試樣和已溶解的針對分析物的第一特異性結(jié)合體施加到第一傳導(dǎo)體上，然后施加到色譜介質(zhì)的第一端上。然后試樣和已溶解的特異性結(jié)合體就可以通過至少一部分色譜介質(zhì)移動，并通過固定在色譜介質(zhì)上的分散區(qū)域中的分析物或免疫學(xué)模擬物。這一般需要大約10～20秒的時間。
此時，打開第一和第二可對折構(gòu)件使之相互分離，并將第一和第三可對折構(gòu)件相互對折疊合，使吸收體與第一傳導(dǎo)體接觸，和使第二點(diǎn)樣器與第二傳導(dǎo)體接觸。這樣，就使吸收體從色譜介質(zhì)的第一端抽吸液體，從而使第二點(diǎn)樣器將含有已溶解的加標(biāo)記的特異性結(jié)合體的液體施加到色譜介質(zhì)的第二端。更好的是，然后將第二可對折構(gòu)件折疊在第一和第三可對折構(gòu)件上面，以保證有足夠液體從第二點(diǎn)樣器中擠出而被吸收體吸收，由此使流動更有效地反向。通過將第二可對折構(gòu)件折疊回來而加在色譜介質(zhì)上的壓力來促進(jìn)流動的反向。
然后使加標(biāo)記的已溶解的特異性結(jié)合體移動通過至少一部分色譜介質(zhì)，這部分色譜介質(zhì)與試樣和第一特異性結(jié)合體通過的色譜介質(zhì)部分相重疊，并包含含有固定分析物或免疫學(xué)模擬物的分散區(qū)域。如果分析物存在于試樣中，那么加標(biāo)記的特異性結(jié)合體就結(jié)合在分散區(qū)域中并被檢測。如果可檢測的標(biāo)記物是一種肉眼可檢測的標(biāo)記，則在分散區(qū)域中可以看見一條線。
這種測定可以作為定性測定來實(shí)施，亦即一種“開/關(guān)”測定。在這種測定中，第一特異性結(jié)合體存在于一種濃度下，使之結(jié)合分散區(qū)中的實(shí)際上所有的固定分析物或其免疫學(xué)模擬物。分散區(qū)中結(jié)合到第一特異性結(jié)合體上的結(jié)合點(diǎn)被阻礙而不能進(jìn)一步結(jié)合。如果分析物存在于試樣中，則分析物結(jié)合第一特異性結(jié)合體，防止第一特異性結(jié)合體與分散區(qū)中的固定分析物或分析物的模擬物結(jié)合。這樣，第二加標(biāo)記的特異性結(jié)合體可以結(jié)合到分散區(qū)中的分析物或其免疫學(xué)模擬物上，給出一個可檢測的信號。
一種定量測定方案可以在一個殼中采用兩個或多個色譜介質(zhì)，其中至少一個色譜介質(zhì)作為一個控制標(biāo)準(zhǔn)來設(shè)計，作為一個參照物使用。
一種適用于競爭法測定的這種實(shí)施例的裝置示于圖23中。色譜測定裝置740有一第一、一第二和一第三可對折構(gòu)件742，744和746。第二可對折構(gòu)件744由一第一鉸鏈748鉸接在第一可對折構(gòu)件742的一側(cè)邊上，第三可對折構(gòu)件746由一第二鉸鏈750鉸接在第一可對折構(gòu)件742的另一側(cè)邊上。第一可對折構(gòu)件742有一個具有一第一端754和一第二端756的色譜介質(zhì)752，一第一傳導(dǎo)體758與色譜介質(zhì)752的第一端754有作用性接觸，一個第二傳導(dǎo)體760與色譜介質(zhì)752的第二端756有作用性接觸。色譜介質(zhì)752也有如前面所述的一個分散區(qū)域762，其上固定有分析物或它的免疫學(xué)模擬物，作為信號讀出。
第二可對折構(gòu)件744有一第二點(diǎn)樣器764，它含有用于分析物的以可溶解形式的一第一特異性結(jié)合體，試樣最好施加到該結(jié)合體上。
第三可對折構(gòu)件746有一第二點(diǎn)樣器766，它含有用于分析物的、標(biāo)記有一種可檢測標(biāo)記物的、并以通過向第二點(diǎn)樣器766加入一第二含水液體以能夠被溶解的形式存在的第二特異性結(jié)合體。第三可對折構(gòu)件746有一個與第二點(diǎn)樣器766分離開的吸收體768，第三可對折構(gòu)件746也有一個用于觀察至少一部分色譜介質(zhì)752，包含分散區(qū)域762的開孔770，或者將一個開孔772設(shè)置在第一可對折構(gòu)件742中的色譜介質(zhì)75 2的分散區(qū)域762之后面，以便在裝置740閉合后從裝置740的后側(cè)進(jìn)行觀察。第二和第三可對折構(gòu)件744和746有接合件769和773，裝置740有保持試劑用的一個密封墊774。
當(dāng)將第一和第二可對折構(gòu)件742和744相互對折疊合后，則使第一點(diǎn)樣器764與第一傳導(dǎo)體758有作用性接觸，以使第一點(diǎn)樣器764的內(nèi)含物施加到第一傳導(dǎo)體758，然后施加到色譜介質(zhì)752的第一端754。當(dāng)將第三和第一可對折構(gòu)件746和742相互對折疊合后，則吸收體768與相鄰于色譜介質(zhì)752的第一端754的第一傳導(dǎo)體758有作用性接觸，而第二點(diǎn)樣器766與相鄰于色譜介質(zhì)752的第二端756的第二傳導(dǎo)體760有作用性接觸，由此使色譜介質(zhì)752中的液體流動反向。
B.帶蓋子的兩構(gòu)件雙向流動裝置本發(fā)明的用于競爭法測定的色譜測定裝置的一個第二實(shí)施例是一種帶蓋子的兩構(gòu)件雙向流動裝置。在這個實(shí)施例中，要測試的試樣沒有用抗體預(yù)先培養(yǎng)，而是直接施加到一介與色譜介質(zhì)直接接觸的傳導(dǎo)體上。
用于競爭法免疫測定的色譜測定裝置的這個第二實(shí)施例可以包括一第一可對折構(gòu)件和一第二可對折構(gòu)件。第一可對折構(gòu)件有一個具有一第一和一第二端的色譜介質(zhì)。色譜介質(zhì)上固定有(1)一個用于分析物的第一特異性結(jié)合體，和(2)一個能夠結(jié)合對分析物缺乏親合力的一對特異性結(jié)合體的次特異性結(jié)合體。這些組分放置在色譜介質(zhì)上單獨(dú)分散的且不重疊的區(qū)域中。次特異性結(jié)合體比用于分析物的第一特異性結(jié)合體更靠近色譜介質(zhì)的第一端。更好的是，第一特異性結(jié)合體距離色譜介質(zhì)中的次特異性結(jié)合體約0.25英寸(6.35毫米)，以提高效率。
典型地，用于分析物的第一特異性結(jié)合體，如前所述的那樣，是一種用于分析物的抗體或者一個抗體片段典型地，次特異性結(jié)合體是一種這樣的抗體，它能夠基于一個種類特異的決定體而不是基于要結(jié)合的免疫球蛋白的抗體特異性(如果有的話)而結(jié)合另一個免疫球蛋白。例如，次特異性結(jié)合體可以是山羊抗家兔IgG抗體，該抗體結(jié)合所有家兔免疫球蛋白G分子，而與它們的免疫學(xué)特異性無關(guān)。
第一可對折構(gòu)件也包含一個與色譜介質(zhì)的第一端有作用性接觸的第一傳導(dǎo)體，和一個與色譜介質(zhì)的第二端有作用性接觸的第二傳導(dǎo)體。更好的是，第一可對折構(gòu)件有一條限制線來標(biāo)記，該線表示在雙向色譜過程中出現(xiàn)流動反向的位置。
第二可對折構(gòu)件包含(1)一個含有分析物的模擬物的點(diǎn)樣器，模擬物以通過向點(diǎn)樣器加入一種重新構(gòu)成液體能夠被溶解的形式；和(2)一個與點(diǎn)樣器分隔開的吸收體。
分析物的模擬物是共價地連接到能夠與次特異性結(jié)合體結(jié)合的一對特異性結(jié)合體的一個組分上的分析物。在分析物的模擬物中的特異性結(jié)合體對的這個組分標(biāo)記有一個可檢測的標(biāo)記物，更好的是該可檢測的標(biāo)記物是一種肉眼可檢測的標(biāo)記物，該可肉眼檢測標(biāo)記物最好是一種金屬膠如金、銀或銅膠。
例如，當(dāng)次特異性結(jié)合體是山羊抗家兔IgG時，與分析物結(jié)合的特異性結(jié)合體對的組分是通常的對分析物沒有抗體活性的家兔IgG。
當(dāng)青霉素是分析物時，適用于這種測定方案的一種分析物的模擬物的例子，是共價地連接到家兔IgG上的7-氨基頭孢烷酸(7-amincephelosporanic acid)，其中家兔IgG用膠態(tài)金標(biāo)記。
當(dāng)將第一和第二可對折構(gòu)件相互對折疊合后，則使一第二傳導(dǎo)體與點(diǎn)樣器有作用性接觸，從而將點(diǎn)樣器的內(nèi)含物施加到第二傳導(dǎo)體上，并通過至少一部分色譜介質(zhì)抽吸。同時也使吸收體與第一傳導(dǎo)體有作用性接觸，而從色譜介質(zhì)的第一端抽吸液體，使色譜介質(zhì)中的流動反向。
在向下流動的第一階段期間，存在于一個陽性標(biāo)本中的分析物無阻礙地通過色譜介質(zhì)上的次特異性結(jié)合體的區(qū)域，然后結(jié)合在用于分析物的第一特異性結(jié)合體的區(qū)域上。對于一個陽性試樣，在向上流動的第二階段期間，加標(biāo)記的分析物的模擬物被阻礙，不能結(jié)合到用于分析物的第一特異性結(jié)合體上，然后則結(jié)合到次特異性結(jié)合體上。如果試樣沒有分析物。那么在向下流動階段期間就沒有分析物結(jié)合到第一特異性結(jié)合體上，而在向上流動的第二階段期間分析物的模擬物被結(jié)合到第一特異性結(jié)合體上，而不會到達(dá)次特異性結(jié)合體，從而在第二特異性結(jié)合體處沒有顯現(xiàn)出信號。
更好的是，裝置進(jìn)一步包括一個鉸接在第一可對折構(gòu)件上的蓋子，從而當(dāng)?shù)谝缓偷诙蓪φ蹣?gòu)件相互對折疊合后，蓋子可以折疊在它們上面。在蓋子上可以開一個開孔，以便能在第一和第二相互對折疊合之后觀察其中的至少一部分色譜介質(zhì)?；蛘邔⒁粋€開孔設(shè)置在色譜介質(zhì)后面，并從閉合的裝置的背側(cè)進(jìn)行觀察。
該裝置也可以在一個殼體中設(shè)置兩個或多個色譜介質(zhì)，至少一個色譜介質(zhì)設(shè)計成一種用于參照物的控制標(biāo)準(zhǔn)，以便半定量地或定量地指示存在于試樣中的分析物的濃度。
在這個實(shí)施例的另一種變型中，次特異性結(jié)合體可以沿多重譜帶固定在檢測區(qū)中，從而用于結(jié)合到次特異性結(jié)合體上所存在的加標(biāo)記的分析物的模擬物被滴定。測定每一個譜帶中的次特異性結(jié)合體的數(shù)量，從而通過分析物的模擬物所結(jié)合的譜帶數(shù)目指示出結(jié)合到檢測區(qū)上的分析物的模擬物的數(shù)量，因此指示出試樣中分析物的濃度。這種方法給出了分析物濃度的一種半定量估計估。典型地，在這種方案中，相對于分析物的第一特異性結(jié)合體，次特異性結(jié)合體在色譜介質(zhì)上最近的譜帶具有最低濃度的次特異性結(jié)合體，隨后每個相繼譜帶具有大于在最低譜帶中的濃度的次特異性結(jié)合體的濃度。
如果分析物的濃度足夠高，使足夠多的未結(jié)合的加標(biāo)記的分析物的模擬物滲透到次特異性結(jié)合體的第一譜帶，那么一些加標(biāo)記的分析物的模擬物就會結(jié)合到次特異性結(jié)合體的第二譜帶上。這樣，在色譜介質(zhì)的檢測區(qū)處就會看見兩條線。由此通過在檢測區(qū)中出現(xiàn)一條、兩條或三條線就相應(yīng)地指示出分析物濃度的范圍。
要測定的分析物的預(yù)計濃度范圍決定著在檢測區(qū)中出現(xiàn)一條或多條線的濃度，例如，采用尼古丁代射物可鐵寧(Cotinine)時，在一種體液中有10ppb的濃度表示是很嚴(yán)重的被動吸煙，500ppb的濃度表示是一個主動吸煙者，而10,000ppb濃度則表示是一個煙癮極大的吸煙者?？梢赃@樣布置測定裝置，使得在檢測區(qū)中，當(dāng)可鐵寧為10ppb時出現(xiàn)一條線，為500ppb時出現(xiàn)兩條線，為10,000ppb時出現(xiàn)三條線。
在操作中，如前所述，將重新構(gòu)成液體施加到點(diǎn)樣器上，以溶解分析物的模擬物。然后將試樣施加到第一傳導(dǎo)體，并使之遷移到限制線。典型地，沿第一方向的色譜過程大約為5～25秒的時間，更典型的情況是大約為10秒。然后將第二可對折構(gòu)件折疊在第一可對折構(gòu)件上面，使它們相互疊合起來，再將蓋子折疊在第一和第二可對折構(gòu)件上面。在約為30秒～10分鐘(典型地約為2分鐘)的培養(yǎng)期之后，如果試樣中存在分析物，則會在次特異性結(jié)合體處看到一條可見的線。試樣和重新構(gòu)成液體的優(yōu)選體積在前面針對競爭法免疫測定裝置的第一實(shí)施例中已經(jīng)描述。
一個適用于這種實(shí)施例的競爭法免疫測定裝置示于圖24中。色譜測定裝置780有一第一可對折構(gòu)件782，一第二可對折構(gòu)件784，和一個蓋子786。第二可對折構(gòu)件784由一第一鉸鏈788鉸接在第一可對折構(gòu)件782的一側(cè)邊上，蓋子786由一第二鉸鏈790鉸接在第一可對折構(gòu)件782的另一側(cè)邊上。第一可對折構(gòu)件782有一個具有一第一端794和一第二端796的色譜介質(zhì)792。色譜介質(zhì)792有一個其上固定有用于分析物的一第一特異性結(jié)合體的區(qū)域798，和一個其上固定有次特異性結(jié)合體的非重疊區(qū)域800。第一可對折構(gòu)件782也包含一個與色譜介質(zhì)792的第一端794有作用性接觸的第一傳導(dǎo)體802，和一個與色譜介質(zhì)792的第二端796有作用性接觸的第二傳導(dǎo)體804。第一可對折構(gòu)件782也包含一條限制線806，以指示在進(jìn)行測定期間要使第一和第二可對折構(gòu)件782和784相互對折疊合的點(diǎn)，以使液體流動反向。
第二可對折構(gòu)件784包含一個點(diǎn)樣器808，它具有以通過加入重新構(gòu)成液體能夠被溶解的形式的分析物的模擬物。第二可對折構(gòu)件784也包含一個與點(diǎn)樣器808分隔開的吸收體810和一個開孔814。當(dāng)?shù)谝缓偷诙蓪φ蹣?gòu)件782和784相互對折疊合后，點(diǎn)樣器808則與第二傳導(dǎo)體804有作用性接觸，而吸收體810與第一傳導(dǎo)體802有作用性接觸，以使液體流動反向。蓋子786在其上開有一個開孔812，用以觀察一部分色譜介質(zhì)792。更好的情況是，由開孔812可以觀察次特異性結(jié)合體區(qū)域800，而不是觀察針對分析物的第一特異性結(jié)合體的區(qū)域798。第二可對折構(gòu)件784和蓋子786也包含接合件811和813。裝置用一個密封墊815圍住。
C.帶吸收體的三構(gòu)件單向流動裝置適用于競爭法免疫測定的這種實(shí)施例的又一種裝置示于圖25中。該裝置有一第三構(gòu)件，該第三構(gòu)件含有從色譜介質(zhì)和兩個傳導(dǎo)體上抽吸液體的吸收體或吸紙。當(dāng)吸收體與色譜介質(zhì)有作用性接觸時，吸收體在色譜介質(zhì)的一個較大部分上延伸。色譜測定裝置820有一第一、一第二和一第三可對折構(gòu)件822、824和826。第一可對折構(gòu)件824由一第一鉸鏈828鉸接在第一可對折構(gòu)件822的一側(cè)上，第三可對折構(gòu)件826由一第二鉸鏈830鉸接在第一可對折構(gòu)件822的另一側(cè)邊上。第一可對折構(gòu)件822有一個具有一第一端834和一第二端836的色譜介質(zhì)832。色譜介質(zhì)有一個用于固定其上的分析物840的一第一特異性結(jié)合體的區(qū)域以及一個在其上固定一第二特異性結(jié)合體的非重疊區(qū)域。第一可對折構(gòu)件822也有一個用作一點(diǎn)樣器的、與色譜介質(zhì)832的第一端有作用性接觸的第一傳導(dǎo)體842，和一個與色譜介質(zhì)832的第二端836有作用性接觸的第二傳導(dǎo)體844。第一可對折構(gòu)件822也有一條限制線，用于指示要使第一和第二可對折構(gòu)件822和824相互對折疊合的點(diǎn)。
第二可對折構(gòu)件824包含一個含有分析物的模擬物的第二點(diǎn)樣器850。典型地，將一種含水液體加到第二點(diǎn)樣器850上，以溶解第二點(diǎn)樣器850上的分析物的模擬物。第二可對折構(gòu)件824也包含一個與第二點(diǎn)樣器850分隔開的第一吸收體848。當(dāng)?shù)谝缓偷诙蓪φ蹣?gòu)件822和824相互對折疊合后，第二點(diǎn)樣器850與第一傳導(dǎo)體842有作用性接觸，而第一吸收體848與第二傳導(dǎo)體844有作用性接觸，以抽吸液體。一個開孔852設(shè)置在色譜介質(zhì)之后，用以從背后觀察一部分色譜介質(zhì)。第二和第三可對折構(gòu)件824和826包含接合件849和853。裝置820也有一個密封墊858。
第三可對折構(gòu)件826包含一第二吸收體854，當(dāng)?shù)谌偷谝豢蓪φ蹣?gòu)件826和822相互對折疊合后，第二吸收體854處于能與色譜介質(zhì)832的相當(dāng)大的區(qū)域有作用性接觸。這樣將除去色譜介質(zhì)832、第一傳導(dǎo)體842和第二傳導(dǎo)體844中的過多的液體。
在使用時，將試樣施加到第一傳導(dǎo)體或點(diǎn)樣器842上，使之在色譜介質(zhì)832中移動。將第三可對折構(gòu)件826與第一可對折構(gòu)件822相互對折疊合，以使第二吸收體854與第一傳導(dǎo)體或點(diǎn)樣器842和色譜介質(zhì)832直接接觸，而將過多的液體抽吸到第二吸收體854中。然后將第二和第一可對折構(gòu)件824和822相互對折疊合，以使含有已溶解的加標(biāo)記的分析物的模擬物的第二點(diǎn)樣器850在色譜介質(zhì)832的第一端834處接觸傳導(dǎo)體或點(diǎn)樣器842。此外也使第一吸收體848在色譜介質(zhì)832的第二端處與第二傳導(dǎo)體844接觸。然后將第三可對折構(gòu)件826作為一蓋子閉合在第二可對折構(gòu)件824上。從位于色譜介質(zhì)832后面的開孔856可看見一部分色譜介質(zhì)。
對分析物的檢測和/或測定按照前面在II(B)節(jié)中對雙向流動裝置所討論的同樣方式進(jìn)行。
D.利用生物素(biotin)的特異性的三構(gòu)件雙向流動裝置本發(fā)明的色譜裝置的又一個實(shí)施例是一種利用生物素-抗生物素蛋白鍵的三構(gòu)件雙向流動裝置。
第一可對折構(gòu)件有一個具有一第一端和一第二端的色譜介質(zhì)，如上所述。色譜介質(zhì)上固定有(1)一種能與生物素特異性結(jié)合的物質(zhì)，它是從由抗生物素蛋白、抗生蛋白鏈菌素、抗生物素抗體和其衍生物構(gòu)成的組中選擇出來的；(2)一種次特異性結(jié)合體。次特異性結(jié)合體能夠特異性地結(jié)合一種三元復(fù)合物，該三元復(fù)合物包括(a)分析物，(b)對共價結(jié)合到分析物上的分析物缺乏特異性結(jié)合親合力的一種特異性結(jié)合體對中的一個組分；和(c)一個結(jié)合到特異性結(jié)合體的那個組分上的可檢測標(biāo)記物。這種三元復(fù)合物設(shè)置在一第三可對折構(gòu)件上，如下面所述。
這些結(jié)合組分都固定在色譜介質(zhì)上的一些單獨(dú)的分散并且不重疊的區(qū)域中，每個區(qū)域都大大地小于色譜介質(zhì)的面積。次特異性結(jié)合體固定在第一分散區(qū)域并處于比能夠結(jié)合生物素的物質(zhì)更靠近色譜介質(zhì)的第一端的地方，(能結(jié)合生物素的物質(zhì)此處一般地稱為“抗生物素蛋白”)，該物質(zhì)固定在第二分散區(qū)域中。
第一可對折構(gòu)件也包含一個與色譜介質(zhì)的第一端有作用性接觸的第一傳導(dǎo)體和一個與色譜介質(zhì)的第二端有作用性接觸的第二傳導(dǎo)體。
第二可對折構(gòu)件包含一第一點(diǎn)樣器，它有一個針對分析物的、以通過向點(diǎn)樣器加入含水液體能夠被溶解的形式的第一特異性結(jié)合體。如前所述，含水液體可以只是試樣較好，或者可以是一種第一重新構(gòu)成液體，隨后加入該試樣。第一特異性結(jié)合體不能被次特異性結(jié)合體結(jié)合。第一特異性結(jié)合體結(jié)合到生物素上。
使生物素鍵接到球蛋白，包含抗體上的方法在本領(lǐng)域中是公知的，并有描述，例如參見P.Tijssen的“supra”雜志，第25-31頁，此處引作參考。生物素可以作為一種反應(yīng)脂直接地結(jié)合到蛋白質(zhì)上，或者通過引入一種間格隔基(spacer)如ε-氨基己酸(ε-aminoca)而結(jié)合到蛋白質(zhì)上。典型的反應(yīng)脂是生物素-P-硝基苯脂(biotinyl-p-nitrophenyl ester)，生物素-N-羥基丁二酰胺脂(biotinyl-N-hydroxysuccinimide ester)，和已?；０被锼?N-羥基丁二酰胺脂(caproylamidobiotinyl-N-hydroxysawinimide ester)，其中最后一個反應(yīng)脂在生物素等分和蛋白質(zhì)之間提供一個間隔基。生物素也可以用其它組族來激活。
第三可對折構(gòu)件包含(1)一個含有三元復(fù)合物的第二點(diǎn)樣器，如上所述，三元復(fù)合物包括分析物，對分析物缺乏親合力的特異性結(jié)合體對中的一個組分，和可檢測標(biāo)記物，(2)一個與第一點(diǎn)樣器分隔開的吸收體。
在該裝置中，將第一和第二可對折構(gòu)件相互對折疊合，使第一傳導(dǎo)體與第一點(diǎn)樣器有作用性接觸，從而將第一點(diǎn)樣器的內(nèi)含物施加到第一傳導(dǎo)體上并進(jìn)入色譜介質(zhì)的第一端。這樣，第一點(diǎn)樣器的內(nèi)含物通過至少一部分色譜介質(zhì)遷移。將第一和第三可對折構(gòu)件相互對折疊合，則使第二點(diǎn)樣器與第二傳導(dǎo)體有作用性接觸，以使第二點(diǎn)樣器的內(nèi)含物施加到色譜介質(zhì)的第二端，此外也使吸收體與第一傳導(dǎo)體有作用性接觸，而從色譜介質(zhì)第一端抽吸液體，并使流動反向。
在色譜測定裝置的這個實(shí)施例中應(yīng)用的一種合適的抗體組合物的例子是(以茶堿作為分析物)在三元復(fù)合物中，生物素基化的鼠色(murine)單克隆抗茶堿IgG抗體作為生物素基化的第一特異性結(jié)合體，山羊抗家兔IgG抗體作為固定的次特異性結(jié)合體，和缺乏抗茶堿活性的家兔IgG作為特異性結(jié)合體對的組分。
可以用按照這個實(shí)施例的一個裝置測定的分析物的另一個例子是青霉素，采用青霉素結(jié)合蛋白(PBP)作為特異性結(jié)合體，和一種包括共價地鍵合到家兔IgG上的7-氨基頭孢烷酸的三元復(fù)合物，家兔IgG上用膠態(tài)金標(biāo)記。其它-內(nèi)酰胺抗生素可以類似地測定。
在操作時，第一點(diǎn)樣器上的生物素基化的第一特異性結(jié)合體最好通過只加入試樣來溶解，或者通過加入一第一重新構(gòu)成液體后再加入試樣來溶解，如前所討論的那樣。第二點(diǎn)樣器上的三元復(fù)合物由一第二重新構(gòu)成液體溶解，如前面II(A)節(jié)中所述。在經(jīng)過一段足以使試樣中的任何分析物結(jié)合到第一特異性結(jié)合體上的培養(yǎng)期之后，將第一和第二可對折構(gòu)件相互對折疊合，以使試樣和正溶解的第一特異性結(jié)合體施加到第一傳導(dǎo)體上，然后施加到色譜介質(zhì)的第一端上。試樣和第一特異性結(jié)合體通過色譜介質(zhì)遷移，且通過色譜介質(zhì)中的固定試劑的兩個分散的不重疊的區(qū)域。第一生物素基化的特異性結(jié)合體結(jié)合能在第二分散區(qū)域中結(jié)合生物素的組分。如分析物存在于試樣中，那么經(jīng)過生物素-抗生物素蛋白鍵而結(jié)合到固相載體上的生物素基化的特異性結(jié)合體本身結(jié)合到分析物上。如果試樣中不存在分析物，則分析物不會結(jié)合到被結(jié)合的生物素基化的特異性結(jié)合體上。在試樣和溶解的第一特異性結(jié)合體通過第二分散區(qū)域之后，將第一和第二可對折構(gòu)件相互分離開，并將第一和第三可對折構(gòu)件相互對折疊合，以使流動反向，并將三元復(fù)合物施加到第二傳導(dǎo)體上。然后三元復(fù)合物在色譜介質(zhì)中從第二端處開始向第一端方向遷移。如果分析物存在于試樣中，那么結(jié)合到第二分散區(qū)域中的抗生物素蛋白上的生物素基化的特異性結(jié)合體就不能結(jié)合三元復(fù)合物中的分析物，從而三元復(fù)合物到達(dá)次特異性結(jié)合體。然后次特異性結(jié)合體結(jié)合三元復(fù)合物中的特異性結(jié)合體對中的組分，由此對它檢測。典型的情況是，裝置的第三可對折構(gòu)件上有一個開孔，使得在將第三可對折構(gòu)件與第一可對折構(gòu)件相互對折疊合后，只能看見色譜介質(zhì)上的次特異性結(jié)合體的第一分散區(qū)域，而看不見抗生物素蛋白的第二分散區(qū)域。但是，當(dāng)試樣中設(shè)有分析物時，三元復(fù)合物被第一特異性結(jié)合體結(jié)合，后者被抗生物素蛋白所結(jié)合，抗生物素蛋白的抗原結(jié)合點(diǎn)未被占據(jù)。三元復(fù)合物則不會到達(dá)含有用于檢測的次特異性結(jié)合體的第一分散區(qū)。
適合實(shí)施競爭法免疫測定的這種方案的一種色譜測定裝置示于圖26中。色譜測定裝置860具有一第一、一第二和一第三可對折構(gòu)件862、864和866。第二可對折構(gòu)件864由第一鉸鏈868鉸接于第一可對折構(gòu)件862的一側(cè)邊上，而第三可對折構(gòu)件866由第二鉸鏈870鉸接于第一可對折構(gòu)件862的另一側(cè)邊上。第一可對折構(gòu)件862有一個具有一第一端874和一第二端876的色譜介質(zhì)872，一第一傳導(dǎo)體878與色譜介質(zhì)872的第一端874有作用性接觸，而第二傳導(dǎo)體880與色譜介質(zhì)872的第二端876有作用性接觸。色譜介質(zhì)872有一個用于一種次特異性結(jié)合體的第一分散區(qū)882和一個用于抗生物素蛋白的第二分散區(qū)884。第一和第二分散區(qū)882和884是不重疊的，第一分散區(qū)882更靠近色譜介質(zhì)872的第一端874設(shè)置。第二可對折構(gòu)件864有一個含有用于分析物的可溶解第一特異性結(jié)合體的第一點(diǎn)樣器886。第三可對折構(gòu)件866有一個含有可溶解的三元復(fù)合物的第二點(diǎn)樣器888和一個與第二點(diǎn)樣器888分隔開的吸收體890。第二和第三可對折構(gòu)件864和866中也有用于觀察一部分色譜介質(zhì)872的開孔892和894，開孔892和894可以觀察含有次特異性結(jié)合體的第一分散區(qū)882，但不能觀察含有抗生物素蛋白的第二分散區(qū)884。第二和第三可對折構(gòu)件864和866也包含接合件891和895。裝置860也有一個密封墊896。
將第一和第二可對折構(gòu)件862和864相互對折疊合，則使第一點(diǎn)樣器886與第一傳導(dǎo)體878有作用性接觸，開始通過色譜介質(zhì)872的流動。之后，再將第一和第三可對折構(gòu)件862和864相互對折疊合，則第二點(diǎn)樣器888與第二傳導(dǎo)體880有作用性接觸和吸收體890與第一傳導(dǎo)體878有作用性接觸，從而使通過色譜介質(zhì)872中的流動反向。
在裝置的這個實(shí)施例的一個變型中，檢測區(qū)可以包含兩個或多個次特異性結(jié)合體譜帶，如前面在II(B)節(jié)中所述的那樣。這樣可以滴定可用于結(jié)合的加標(biāo)記的三元復(fù)合物的數(shù)量，以便利用檢測區(qū)中可看見的譜帶數(shù)目指示出試樣中存在的分析物的數(shù)量。
E.用于競爭法抑制免疫測定的兩構(gòu)件裝置本發(fā)明的色譜介質(zhì)裝置的又一個實(shí)施例適用于實(shí)施競爭法免疫測定。當(dāng)試樣中存在有分析物時，這個裝置通過提供一個可檢測的信號給出分析物濃度的一個陽性指示。
這個實(shí)施例是一種兩構(gòu)件裝置，且流動在整個裝置中是單向的。第一可對折構(gòu)件包含一個有一第一端和一第二端的色譜介質(zhì)。色譜介質(zhì)上固定有(1)一種能夠結(jié)合一種用于分析物的第一特異性結(jié)合體的分析物的模擬物；(2)能與第一特異性結(jié)合體對中的一個組分結(jié)合的一種次特異性結(jié)合體，該組分對于分析物沒有親合力，次特異性結(jié)合體本身對分析物缺乏親合力。這些組分都放置在色譜介質(zhì)上的分開的且不重疊的分散區(qū)中。分析物的模擬物比次特異性結(jié)合體更靠近色譜介質(zhì)的第一端。
分析物的模擬物是共價地連接到一個蛋白質(zhì)分子上的分析物，例如一種非特異性的免疫球蛋白，它能被結(jié)合到色譜介質(zhì)上。該蛋白質(zhì)分子不應(yīng)對分析物或?qū)Ψ治鑫锏囊环N特異性結(jié)合體有結(jié)合親合力。
次特異性結(jié)合體在一種種類特異性的確定物的基礎(chǔ)上與一種用于分析物特異性結(jié)合體特異性地結(jié)合，如前面所述的那樣。次特異性結(jié)合體和用于分析物的特異性結(jié)合體之間的相互作用不涉及用于分析物的特異性結(jié)合體的抗原結(jié)合點(diǎn)。
第一可對折構(gòu)件也包含一個與色譜介質(zhì)的第一端有作用性接觸的傳導(dǎo)體，更好的是，第一可對折構(gòu)件包含一個與色譜介質(zhì)的第二端有作用性接觸的吸收體。
第二可對折構(gòu)件包含一個點(diǎn)樣器，點(diǎn)樣器上包含有用于標(biāo)記有一種可檢測的標(biāo)記物的分析物的特異性結(jié)合體。更好的是，可檢測標(biāo)記物是一種肉眼可檢測的標(biāo)記物，如一種金屬膠。如果第一可對折構(gòu)件上沒有吸收體的話，另一種方式是，第二可對折構(gòu)件可以進(jìn)一步包含一個與點(diǎn)樣器分隔開的吸收體。更好的是，第二可對折構(gòu)件也有一個能夠觀察一部分色譜介質(zhì)的開孔。更好的情況是，由該開孔可以觀察到次特異性結(jié)合體的區(qū)域而不是分析物之模擬物的區(qū)域。
在使用中，要測試的試樣被施加到點(diǎn)樣器上，以溶解加標(biāo)記的特異性結(jié)合體。典型的情況是，試樣和特異性結(jié)合體一起培養(yǎng)大約1～3分鐘，盡管如果希望更高的敏感性時可以增加該時間長度。
然后使第一和第二可對折構(gòu)件相互對折疊合，使點(diǎn)樣器的內(nèi)含物施加到傳導(dǎo)體，然后施加到色譜介質(zhì)的第一端。在一個陽性試樣中存在的分析物占據(jù)在加標(biāo)記的特異性結(jié)合體上的分析物結(jié)合點(diǎn)，從而加標(biāo)記的特異性結(jié)合體不會結(jié)合到色譜介質(zhì)上的分析物的模擬物上面。相反，加標(biāo)記的特異性結(jié)合體繼續(xù)行進(jìn)到次特異性結(jié)合體的區(qū)域，而在此處結(jié)合，形成一條可檢測的線，該線給出分析物存在的一個陽性指示。
當(dāng)試樣中不存在分析物，所有加標(biāo)記的用于分析物的特異性結(jié)合體都被分析物的模擬物所結(jié)合，而不會到達(dá)次特異性結(jié)合體。所用的試劑的數(shù)量可以滴定，從而需要給出一個陽性反應(yīng)的分析物的濃度可以進(jìn)行調(diào)節(jié)，以適應(yīng)臨床分析要求或藥理學(xué)要求。
適用于競爭法免疫測定的這個實(shí)施例的一個裝置示于圖27中。裝置900包括由一個鉸鏈906鉸接的第一和第二可對折構(gòu)件902和904。第一可對折構(gòu)件902有一個具有一第一端910和一第二端912的色譜介質(zhì)908。色譜介質(zhì)908有一個其上固定分析物的模擬物914的區(qū)域，和一個其上固定一種次特異性結(jié)合體916的非重疊的區(qū)域。第一可對折構(gòu)件902也包含一個與色譜介質(zhì)908的第一端910有作用性接觸的傳導(dǎo)體918和一個與色譜介質(zhì)908的第二端912有作用性接觸的吸收體920。
第二可對折構(gòu)件904有一個點(diǎn)樣器922，它含有以通過加入試樣能被溶解的形式用于分析物的加標(biāo)記的特異性結(jié)合體。第二可對折構(gòu)件904也有一個用以觀察至少一部分色譜介質(zhì)908的開孔924，更好的是由該開孔924可以觀察到次特異性結(jié)合體916的區(qū)域，而不是分析物的模擬物914的區(qū)域。第一和第二可對折構(gòu)件也包含如前面對兩構(gòu)件裝置所述的接合件923和925，和一個密封墊926。
在裝置的這個實(shí)施例的另一個方案中，檢測區(qū)可以包含兩個或更多的次特異性結(jié)合體的譜帶，以給出試樣中分析物濃度的一個半定量的指示，如上面在II(B)節(jié)中所述的那樣。由此滴定可用于結(jié)合的加標(biāo)記的特異性結(jié)合體的數(shù)量，以便利用檢測區(qū)可看見的譜帶數(shù)目，給出試樣中分析物存在的數(shù)量的一個指示。
III.在測定裝置上使用的分析物和抗體適合于用本發(fā)明的測定裝置檢測的分析物包括抗原，半抗原和抗體?？梢杂醚b置檢測的抗原包括血紅蛋白、鏈球菌(streptococcus)A和B抗原，對原生動物寄生蟲(protozoanparasite)賈第鞭毛蟲有特異性的抗原和病毒抗原，包含對人類免疫缺陷病毒(HIV)有特異性的抗體和對肝炎有特異性的澳大利亞抗原。可以測定的抗體包括細(xì)菌抗體，如幽門螺桿菌(helicobacter pylori)，和病毒抗體，包含人類免疫缺陷病毒抗體?？蓹z測的半抗原包括在前面第III節(jié)中同前(supra)所列舉的半抗原，以及能夠?qū)ζ渲苽渚哂凶銐蛱禺愋缘目贵w的其它半抗原。
如果分析物是一種抗原或一種半抗原，并采用夾心法，那么第一和第二特異性結(jié)合則最好是抗體。在許多應(yīng)用中，較好的是，第一和第二特異性結(jié)合體是分析物上的不同表位的抗體，但這不是所要求的?？贵w可以是多克隆或單克隆的，并可以是IgG，IgM或IgA。在許多應(yīng)用中，優(yōu)選的是多克隆抗體，因?yàn)樗鼈児逃械目勺冃栽诖嬖诨蚩赡艽嬖诳乖嘈托缘南到y(tǒng)中能進(jìn)行更加精確的檢測。
當(dāng)分析物是一種半抗原并采用夾心測定法時，第一和第二特異性結(jié)合體最好是不同表位的抗體，否則可以產(chǎn)生不希望有的競爭反應(yīng)，而可能干擾加標(biāo)記的特異性結(jié)合體和分析物的復(fù)合物結(jié)合到固定的第二特異性結(jié)合體上。人們認(rèn)識到，不是所有的半抗原都是大到足以容納一個以上的表位；但是某些半抗原雖然在由其本身注射后不會大到足以引起抗原的形成，但也大到足夠包含一個以上的表位。在不能獲得針對一個半抗原的一個以上的表位的抗體時的情況下，一般是優(yōu)選競爭測定法。
當(dāng)分析物是一種抗體，并采用夾心測定法時，第一特異性結(jié)合體典型地是一種基于種類、等級或次等級(見圖表)特異性而結(jié)合到分析物上的加標(biāo)記的抗體。最好是針對一種抗體分析物的第一特異性結(jié)合體結(jié)合到抗體分析物的恒定區(qū)域上，以防止干擾。當(dāng)分析物是抗體時，較好的是，第二特異性結(jié)合體是對抗體分析物特異的一種抗原或半抗原。
在某些應(yīng)用中，希望采用直接標(biāo)記。例如，在檢測賈第鞭毛蟲抗原時，可以采用IgM抗體，這種抗體可能難以直接標(biāo)記。在這種情況下，可以對針對移動的第一特異性結(jié)合體的一種次特異性結(jié)合體進(jìn)行標(biāo)記。典型地，被標(biāo)記的次特異性結(jié)合體在種類、等級或次等級特異性基礎(chǔ)上結(jié)合到是第一特異性結(jié)合體的抗體上。
作為采用一種次特異性結(jié)合體的替換方法，可以使第一特異性結(jié)合體結(jié)合到生物素上，并可采用一種抗生物素蛋白結(jié)合的標(biāo)記物。
用于夾心法免疫測定的分析物，特異性結(jié)合體和標(biāo)記物之間的這些關(guān)系概括在下面的表I中。
表I用于夾心法免疫測定的結(jié)合方案
Ag＝抗原H＝半抗原Ab＝抗體Ab1＝第一抗體Ab2＝第二抗體Abc，Abc1，Abc2＝對另一個抗體具有特異性的抗體Bi＝生物素Av＝抗生物素蛋白L＝標(biāo)記物*表示加標(biāo)記物的組分
(1)Ab2和Ab1*優(yōu)選結(jié)合到不同的表位上；不是所有半抗原都具有這種不同的表位。
在競爭法免疫測定的反應(yīng)方案中的分析物，特異性結(jié)合體，標(biāo)記物和其它參與物之間的關(guān)系示于下面的表II中。
表II用于競爭法測定的結(jié)合方案
表II(續(xù))H半抗原Ab1，Ab2對半抗原特異的第一和第二抗體Ig缺乏特異性結(jié)合活性的免疫球蛋白Abs結(jié)合Ab1或Ab2的次抗體Bi生物素Av抗生物素蛋白L標(biāo)記物-非共價鍵＝共價鍵IV.試驗(yàn)箱(Test Kits)本發(fā)明的另一個方案是能夠用于檢測特定分析物的試驗(yàn)箱。一種試驗(yàn)箱包括(在單獨(dú)的容器中)(1)一個按照本發(fā)明的色譜測定裝置；(2)任何為處理或提取試樣所必要的試劑；(3)如果測定裝置沒有針對分析物的、以能夠溶解形式的加標(biāo)記的特異性結(jié)合體，則有選擇地包含所要求的特異性結(jié)合體。
在(2)和(3)點(diǎn)中所要求的組分是單獨(dú)包裝的，且它們可以是液體或固體形式的(冷凍干燥的，結(jié)晶體的，沉淀的或者凝結(jié)的)。如果是固體形式的，則使用者要將其溶解，典型的是用含有生理鹽水的蒸餾水或純化水，或一種緩沖液。
在某些情況下，試驗(yàn)箱也可以包含一種重新構(gòu)成液體，用于存在于裝置上的以可溶解形式的一種試劑，它或者是一種特異性結(jié)合體，或者是一種分析物的模擬物。上面公開了一些具體的例子，并公開每種類型的裝置的操作。
本發(fā)明的試驗(yàn)裝置的另一些變型也是可能的，例如，所述的任何兩構(gòu)件裝置都可以有一個鉸接在其中一個可對折構(gòu)件上的蓋子。這個蓋子上可以有一個開孔，以便能觀察至少一部分色譜介質(zhì)。
本發(fā)明由以下的例子加以說明。這些例子只起說明作用，而不是以任何方式限定本發(fā)明的范圍。
例1用于檢測鏈球菌抗原的裝置的結(jié)構(gòu)構(gòu)成一種利用針對鏈球菌A抗原的加標(biāo)記的抗體檢測鏈球菌A抗原的裝置，其結(jié)構(gòu)基本上如圖28所示。
圖28表示出按照本發(fā)明的一種色譜測定裝置940，其包括一第一可對折構(gòu)件942，一個鉸接到第一可對折構(gòu)件942上的第二可對折構(gòu)件944，和一個鉸接到第二可對折構(gòu)件944上蓋子946。第一可對折構(gòu)件942包含一個色譜介質(zhì)948。第二可對折構(gòu)件944包含一個帶子952，它張緊在第二可對折構(gòu)件944的橫向上，利用其張力保持住一個滴狀接收器950。滴狀接收器950在被帶子952的張力固定到位后形成一個槽池。第一可對折構(gòu)件942有一第一窗口942，蓋子946有一第二窗口956。
這些可對折構(gòu)件是用一種硬的不透水的塑料(如聚碳酸脂)制成的。第一和第二可對折構(gòu)件，以及蓋子都大約為3英寸長；第一可對折構(gòu)件大約2.25英寸寬，而第二可對折構(gòu)件和蓋子都大約為2.375英寸寬。第二可對折構(gòu)件內(nèi)襯有一個泡沫橡膠材料的接受件，接受件中開有一個滴狀槽池，以便容納一個簽片或其它取樣部件。該簽片由一個在槽池橫向上分別地插入到第二可對折構(gòu)件中的帶子保持在位置上。
色譜介質(zhì)是一個孔徑8微米，長0.5英寸的硝化纖維帶條(MSI生產(chǎn)，Westborough，Mass.)，用雙面膠帶(3M公司制造，Minneapolis，Minnesota)固定在塑料背襯上。傳導(dǎo)體和吸收體是纖維素條(Ahlstrom Filtration，Holly Springs，Pennsylvania)，吸收體的長度為17/32英寸，Ahlstrom等級939，傳導(dǎo)體的長度為0.25英寸，Ahlstrom等級1281。檢測器點(diǎn)樣墊也是Ahlstrom等級1281，并且寬為0.375英寸。檢測器點(diǎn)樣墊與傳導(dǎo)體稍有重疊，傳導(dǎo)體又與色譜介質(zhì)的第一端稍有重疊。色譜介質(zhì)的第二端則與吸收體稍有重疊。
所要求的試劑被包含在色譜介質(zhì)和檢測器點(diǎn)樣墊中，之后用雙面膠帶組裝裝置，以將這些組分保持在背襯上。
檢測區(qū)包括家兔抗鏈球菌A抗體，它在pH值為7.2的0.001莫爾/升磷酸鹽緩沖鹽液中的濃度為2毫克/毫升?？刂茀^(qū)包括山羊抗家兔IgG，在相同緩沖液中為類似的濃度?？贵w溶液被施加到色譜介質(zhì)的適當(dāng)區(qū)域中并在100°F溫度下一個低濕度環(huán)境中干燥。色譜介質(zhì)在過剩阻斷溶液(用于ELISA的阻斷試劑，德國，曼海姆的Boehringer Mannhein生產(chǎn)，用含有0.2％Tween 20的蒸餾水按1∶10釋稀)中滲濕，在100°F下干燥。
檢測器點(diǎn)樣墊包含家兔抗鏈球菌抗體，它用40-nm的膠態(tài)金顆粒標(biāo)記。將加標(biāo)記的抗體施加到檢測器點(diǎn)樣墊上，用DBN(1.5莫爾/升Tris-HCl，pH7.4，1％(v/v)Tween 20，0.4％(v/v)Brij 35，0.02％(w/v)疊氮化鈉(Sodium azide)，3毫克/毫升家兔IgG)按1∶1.5釋稀加標(biāo)記的抗體。每次試驗(yàn)將15微升的稀釋后的加標(biāo)記的抗體加入檢測的點(diǎn)樣墊上。檢測器點(diǎn)樣墊在100°F下干燥處理30分鐘。
例2.
利用例1的裝置檢測鏈球菌抗原例1的裝置用于檢測鏈球菌A抗原。將一個其已加有不同數(shù)量的鏈球菌A型細(xì)菌的織物滌綸簽片插入到試樣槽池中。將三滴提取試劑A(0.25％的醋酸，5％的非離子活性劑(Tween)20)和三滴提取試劑B(2莫爾/升的亞硝鈉，5％的非離子活性劑)加入到簽片中，輕輕地轉(zhuǎn)動簽片使之混合，并培養(yǎng)一分鐘。然后閉合裝置，使第一和第二可對折構(gòu)件接觸，然后將蓋子折疊在第一可對折構(gòu)件上面。在2～5分鐘的培養(yǎng)期之后讀出結(jié)果。在色譜介質(zhì)的檢測區(qū)中顯示的一條粉紅色譜帶指示出對鏈球菌A抗原的檢測結(jié)果。
例1的裝置在一次2分鐘的培養(yǎng)期之后可以檢測出1×105個鏈球菌A生物體，而在一次5分鐘的培養(yǎng)期之后可以檢測出5×104個鏈球菌A生物體。作為一種比較，Hybritech的Concise的免疫測定(the Coneise immunoassay of Hybritech)(La Jolla，加利福尼亞)在一次5分鐘的培養(yǎng)期之后只能檢測1×105個鏈球菌A生物體，但即使其在一次20分鐘的培養(yǎng)期之后也不能檢測出5×104個鏈球菌A生物體。類似地，New Horizons的Smart免疫測定在一次7分鐘培養(yǎng)期之后只能檢測1×105鏈球菌A生物體，并在一次7分鐘的培養(yǎng)期之后給出一個帶有5×104鏈球菌A生物體的不可靠的結(jié)果。
例3.
用于檢測糞便隱血中的血紅蛋白的裝置(預(yù)見性的例子)一種用于檢測糞便隱血中的血紅蛋白的測定裝置按照圖1A和1B進(jìn)行設(shè)計制造，并包含在色譜介質(zhì)的第一端處的任選傳導(dǎo)體。一種加標(biāo)記的特異性結(jié)合體以可溶解的形式施加到試樣點(diǎn)樣墊上。加標(biāo)記的特異性結(jié)合體是用膠態(tài)金標(biāo)記的山羊抗人類抗體。60毫升(μl)的糞便試樣被施加到試樣點(diǎn)樣墊上并使之與結(jié)合物混合。將裝置閉合，使糞便試樣和重新構(gòu)成的抗體的組合體接觸傳導(dǎo)體并在色譜介質(zhì)中移動。讓色譜過程進(jìn)行大約1～5分鐘的一段時間。色譜介質(zhì)包含一個固定抗人類Hb抗體的檢測區(qū)和一個固定家兔抗山羊IgG抗體的控制區(qū)。在檢測區(qū)和控制區(qū)都顯現(xiàn)顏色指示出一個陽性結(jié)果，亦即糞便試樣中存在隱血。在控制區(qū)顯現(xiàn)顏色而檢測區(qū)不顯現(xiàn)顏色則指示出不存在隱血并且正確實(shí)施了該試驗(yàn)。
這種裝置能夠在約0.2毫升/100克糞便至約17毫升血/100克糞便的濃度范圍內(nèi)檢測糞便隱血中的血紅蛋白。這種裝置不受由過氧化物酶和食物(非人類的)血紅蛋白所引起的干擾。
例4.
用三構(gòu)件測定裝置對茶堿進(jìn)行競爭法免疫測定設(shè)計構(gòu)造了一種用于檢測支氣管擴(kuò)張劑(bronchodilator)茶堿的競爭法免疫測定裝置。一個由Schleier和Schuell(Keene，New Hampshire)制造的12微米厚的硝基纖維素膜固定在一塊2.5英寸×11/16英寸的雙面膠上。一種能夠疏水地結(jié)合到硝基纖維素上的茶堿模擬物通過將茶堿共價地連接到正常的家兔免疫球蛋白G上面由以下方式制備出來即一種在2毫升四氫呋喃(tetrahydrofuran)和1毫升N，N-二甲基甲酰胺(dimethylformamide)中加入8-(3-羧基丙基(carboxypropyl)-1，3-二甲基黃嘌呤(dimethylxanthine)(18克，0.068毫克分子)構(gòu)成的溶液用N-羥基丁二酰胺(hydroxysuccinimide)(17毫克，0.15毫克分子)和二環(huán)已基碳二亞胺(dicyclohexylcarbodiimide)(27毫克，0.13毫克分子)進(jìn)行處理。在將其在室溫下放置一晝夜后，將反應(yīng)混合物冷凍兩個小時，然后通過玻璃纖維過濾。反應(yīng)混合物中的晶體用四氫呋喃沖洗，兩種溶液被組合起來。在真空下除去溶劑，用3～4毫升二乙基醚(diethyl ether)沖洗剩余物，除去過量的碳化二亞胺(carbodiimide)。被沖洗的剩余物在1毫升N，N-二甲基甲酰胺中沖洗。正常的家兔IgG(濃度為13.7毫克/毫升的溶液3.75毫升)然后用水稀釋到10毫升。將活性N-羥基丁二酰胺酯(hydroxysucciminide ester)慢慢地加入免疫球蛋白G溶液中，接著加入10μl的三乙胺(triethylamine)。這樣，反應(yīng)混合物含有每莫爾蛋白質(zhì)大約190個活性脂的等同物。
將10μl由茶堿-家兔IgG結(jié)合物構(gòu)成的溶液(在0.05克分子的磷酸鹽緩沖劑中，結(jié)合物的濃度為1毫克/毫升)經(jīng)一個Hamilton注射器均勻地施加到2.5英寸長的膜的上部區(qū)域中。將該膜在一個烘干機(jī)中干燥15分鐘，然后浸入一種蛋白質(zhì)阻斷溶液中(0.2％無脂肪干牛奶，0.2％非離子活性劑Tween 20)并再干燥15分鐘。茶堿-家兔免疫球蛋白G的線指示劑為膜的頂部。一個1/4英寸長的Ahlstrom cgtosep 799-13(Ahlstrom Filtration)條帶被粘到膜的頂部，作為一個傳導(dǎo)區(qū)域。Ahlstrom 992膜的一第二傳導(dǎo)帶被固定在膜的下部區(qū)域上。然后該膜塊被切割成1/4英寸長的條，并儲藏起來干燥。
試劑墊是一些切割成Lipore的1/4英寸×1/4英寸的方塊(等級9254玻璃纖維過濾器，New Hampshire，Rochester，Lydall技術(shù)紙張公司)。第一試劑墊上施加有40μl的濃度為180μg/ml的干燥/穩(wěn)定緩沖劑(0.5克分子Tris-HCl，pH值7.2，0.1％非離子活性劑Tween 20，0.1％Brij-35，1.0％牛血清清蛋白(bovine serum albumin))的抗茶堿抗體(鼠色單克隆O.E.M.Concepts，Toms River，Now Jersey)，并干燥2個小時。第二試劑墊上施加了20μl的利用單克隆茶堿抗體的抗茶堿金結(jié)合物(E-Y實(shí)驗(yàn)室)的一種工作稀釋液，并且第二試劑墊也干燥2個小時。
將膜條固定在一個低板殼中，并且通過殼中的窗口可以看見茶堿-家兔IgG線，如圖23所示。含有抗茶堿抗體的第一試劑墊被放置在殼的左三部分上部區(qū)域中，以便閉合后，它將接觸膜上的上部傳導(dǎo)區(qū)域，象圖23中的點(diǎn)樣器764那樣。含有抗茶堿-金結(jié)合物的第二試劑墊放置在殼的右三部分下部區(qū)域中，使之能與膜的下部傳導(dǎo)區(qū)域接觸，如圖23中的點(diǎn)樣器768那樣。一個2厘米×2厘米的Ahlstrom 270方塊用作吸收劑墊。并且被放置在殼的右三部分的上部區(qū)域，從而當(dāng)右三部分被閉合在中心上面時，它與上部傳導(dǎo)區(qū)域接觸。
例5.
使用例4的競爭法測定裝置實(shí)施茶堿測定(預(yù)見性例子)在一次測定過程中，將40μl的重新構(gòu)成緩沖液加入第一試劑墊中(重新構(gòu)成緩沖液的內(nèi)含物為1個體積單位的磷酸鹽緩沖的鹽溶液，0.1M，pH7.2，含有0.8％Tween-20，和1個體積單位的HEPES，2.5mM緩沖劑；pH7.5，含有0.005％ Triton x-100，0.003％依地酸四納(tetrasodim EDEA)和0.05％疊氮化鈉)。將相同體積(40μl)的重新構(gòu)成緩沖液加入第二試劑墊。要測試的試樣(10μl)被加入第一試劑墊中并在室溫下培養(yǎng)15分鐘。將殼的左三部分閉合在中心上面，從而使第一試劑墊上的內(nèi)含物(包含試樣和抗茶堿抗體)施加到色譜介質(zhì)上。通過窗口很快可以看到一個液體前沿。該前沿在膜上移動到一半路程時(大約在10～20秒鐘內(nèi))，打開殼體，而將測定裝置的右三部分(包含第二試劑墊和吸收劑墊)閉合在色譜介質(zhì)上。裝置的右三部分(包含第一試劑墊)也閉合在裝置的右三部分和中心上面。如果茶堿存在于濃度為1.25μg/ml血清或更高濃度的試樣中，則在1分鐘內(nèi)有一條肉眼可識別的線出現(xiàn)在茶堿-家兔免疫球蛋白G的線處。
例6阿特拉津(Atrazine)與家兔及山羊免疫球蛋白G的結(jié)合物。
為了展示半抗原與免疫球蛋白G結(jié)合的可行性，制備有阿特拉津(Atrazine)與家兔及山羊免疫球蛋白G的結(jié)合物。對于與家兔免疫球蛋白G的結(jié)合物而言，用12毫克的硫羥乙?；晁狒?thiolacetylsuccinic anhydride)和20微升的三乙胺(triethylamine)(大約為每莫爾蛋白質(zhì)有酐(anhydride)的130個克當(dāng)量)處理家兔IgG(5毫升磷酸鹽緩沖的鹽溶液中有3.41毫克)。將該溶液置于冰箱中一晝液，然后用2升的水滲析一次，并用2升的磷酸鹽緩沖的鹽溶液滲析四次。制備出濃度為63毫克/毫升的羥胺氫氯化物(hydroxylamine hydrochloride)溶液。將52微升羥胺(hydroxylamine)溶液(3.3毫克，大約為200克當(dāng)量)加到8克PBS中的上述制備的家兔IgG中。將溶液在室溫下放置45分鐘。
一種阿特拉津衍生物(見下面公式I)在濃度為19.7毫克/毫升下溶解到乙腈中，氮分子上的取代基的端甲基(methylgroup)在阿特拉津衍生物中被激活。將這種溶液的一部分(200克當(dāng)量，16.6毫克，844微升)加入到家兔IgG巰基溶液中，并將其在室溫下放置一晝夜。
<I>
采用一種相似的方法將阿特拉津連接到山羊免疫球蛋白G上。用8毫克硫羥乙?；晁狒?thiolacetylsuccinic anhydride)和10微升三乙胺(triethylamine)處理山羊IgG(在1.5毫升PBS中有7.8毫克)。將溶液置于冰箱中過一夜，然后象對家兔IgG那樣進(jìn)行滲析處理。滲析后的山羊IgG溶液用10微升羥胺(hydroxylamine)溶液(0.75毫克，約200克當(dāng)量)處理。該溶液置于室溫下保持45分鐘。將一第二部分的阿特拉津衍生物(200克當(dāng)量，3.8毫克，190微升)加入到山羊IgG巰基溶液中并反應(yīng)一晝夜。在ELISA中，山羊IgG-阿特拉津結(jié)合物被固定在聚苯乙烯微型滴定板上，由ELISA表明反應(yīng)是成功的。
例7采用加標(biāo)記的三組分結(jié)合體的競爭法免疫測定裝置按照本發(fā)明設(shè)計構(gòu)造了一種采用加標(biāo)記的三構(gòu)件結(jié)合體檢測茶堿的競爭法免疫測定裝置。該裝置是一種類似于圖24中所示裝置的帶有一個蓋子的兩構(gòu)件裝置，這里所描述的定位是相對于橫向定位的裝置而言的，如圖中所示的那樣。
硝基纖維素膜(12微米的孔徑)(由Schleicher和Schuell公司制作)固定在2.5英寸×11/16英寸塊形雙面膠(3M公司制作)上。膠的背側(cè)上已經(jīng)設(shè)置了一塊透明塑料。將磷酸鹽緩沖鹽溶液中的單克隆抗茶堿抗體(10微升)(見例4)用Hamilton注射器均勻地施加到硝基纖維素膜的2.5英寸長度的上部區(qū)域橫向上，距離指定的頂部5/16英寸處。山羊抗家兔IgG從Pel-FreezBiologicals(Rogers，Arkansas)中獲取。純的IgG從血清中經(jīng)用辛酸和硫酸銨沉淀而獲得。10微升純化的山羊抗家兔IgG(3.5毫克/毫升，在磷酸鹽緩沖鹽溶液中)施加到抗茶堿抗體的第一條線之上方，距頂部1/8英寸處。將膜在循環(huán)烘干機(jī)中干燥10分鐘，然后滲入阻斷溶液(見例4)中，再干燥15分鐘。將一條1/4英寸長的Ahlstrom 1281帶(Ahlstrom Filtration)粘到膜的頂部上，作為一個傳導(dǎo)區(qū)域。一第二傳導(dǎo)帶，Ahlstrom 992，則固定到下部區(qū)域上。然后將膜塊切割成1/4英寸的帶條。
試劑墊是切割成1/4×1/4英寸的Ahlstrom 1281方塊。預(yù)先稀釋的茶堿-家兔IgG-金(E.Y.實(shí)驗(yàn)室)被施加到每一方塊上，使這些方塊干燥2小時。膜條帶固定在殼體中，并且通過窗口只能看見頂部的山羊抗家兔IgG線。將試劑墊放置在殼體的左三部分的下部區(qū)域，以便當(dāng)它閉合在中心板上后，將接觸膜上的下部傳導(dǎo)區(qū)域。一塊2厘米×2厘米的Ahlstrom 270方塊放置在殼的左三部分的上部區(qū)域中，正好在窗口的上方，可以用作一個吸收劑墊。設(shè)置的位置使之在閉合時能與膜的上部傳導(dǎo)區(qū)域接觸。
例8用例7的測定裝置檢測茶堿(預(yù)見性例子)在用例7的測定裝置進(jìn)行茶堿測定時，將40微升的重新構(gòu)成緩中液(見例5)加到試劑墊上。將15微升的試樣，例如人類血清中的一個茶堿標(biāo)準(zhǔn)量施加到膜條上的上部傳導(dǎo)區(qū)域中。讓液體前沿移動到大約為色譜介質(zhì)長度的3/4路程的一條標(biāo)線處，這大約需10秒鐘的時間。將殼的左三部分閉合在中心上，接著將右三部分閉合在左三部分上，使液體流動反向。如果茶堿存在于一條界限濃度下，那么2分鐘之內(nèi)就出現(xiàn)一條可見的線。
例9用于競爭法限制免疫測定的兩構(gòu)件裝置設(shè)計構(gòu)造了一種前述利用硝化纖維膜帶、膠粘劑和例4中的試劑墊的兩構(gòu)件裝置。該裝置類似于前述圖27中所示的裝置。此處所述的定向相對于橫向定向的裝置，如圖所示。在硝化纖維素色譜介質(zhì)上固定了兩條線。第一條線包含10微升在干燥緩沖液(0.01克分子磷酸鹽，3％的蔗糖，0.5％的牛血清清蛋白(bovineserum albumin)，0.5％的非離子活性劑Tween 20，0.05％的疊氮化鈉(pH7.4)中稀釋的親合力純化的山羊抗小鼠IgG(O.E.M.Concepts)。第二條線包含10微升處于濃度為1微克/毫升的0.05克分子磷酸鹽緩沖液中的例4的茶堿-家兔IgG結(jié)合物。將膜置于烘干機(jī)中干燥，并滲入蛋白質(zhì)阻斷溶液(0.1克分子Tris-HCl，0.1％BSA，pH7.4)中，然后再干燥。第二可對折構(gòu)件上的點(diǎn)樣器上施加上了20微升在干燥緩沖劑中的一種結(jié)合有膠態(tài)金(E-Y實(shí)驗(yàn)室)的鼠色單克隆抗茶堿抗體(O.E.M.Concepts)的工作稀釋液，并被干燥2小時。
為了進(jìn)行測定，將茶堿(Aldrich Chemical，Milwankee，Wisconsin)溶解在甲醇中，形成一種原料溶液，接著在PBS中或血清中稀釋。將試樣(30微升)加到第二可對折構(gòu)件上的點(diǎn)樣器上，以溶解抗茶堿-金結(jié)合物。培養(yǎng)1分鐘之后，將兩個可對折構(gòu)件相互對折疊合，從而點(diǎn)樣器與試驗(yàn)條上的下部傳導(dǎo)體接觸。在2～5分鐘之內(nèi)，一條肉眼可檢測的線出現(xiàn)在山羊抗小鼠IgG抗體的區(qū)域中，這是通過殼中的窗口能看見的唯一一條線?？梢詸z測到低到1ppb的茶堿濃度。
例10用于競爭法免疫測定并產(chǎn)生半定量的結(jié)果的兩構(gòu)件裝置設(shè)計構(gòu)造了一種按照例9的用于競爭法免疫測定的兩構(gòu)件裝置，其不同之處是，除了一條阿特拉津(atrazine)-山羊IgG結(jié)合物(例6)線外，檢測區(qū)含有三條親合力-純化的山羊抗小鼠IgG(GAM)(O.E.M.Concepts)線。在色譜介質(zhì)上最靠近小山羊IgG-阿特拉津結(jié)合物的哪條線含有濃度最稀的抗體，濃度為O.5mg/ml；其余兩條線會有濃度較大的抗體，其濃度都為1.0mg/ml。鼠色單克隆抗阿特拉津抗體從Agri-Diagnostics公司(位于Cinnaminson，N.J.)購買的。用于抗阿特拉津-金結(jié)合物的干燥/穩(wěn)定作用的緩沖液施加到第二可對折構(gòu)件上，該緩沖劑是4％的蔗糖，10毫克分子的磷酸鹽，0.5％的牛血清清蛋白，0.25％的非離子活性劑Tween 20，0.05％的疊氮化鈉，pH7.4。
為了進(jìn)行測定，將阿特拉當(dāng)(Supelco公司產(chǎn)，該公司位于Bellefonte Pennsylyania)作為一個標(biāo)準(zhǔn)溶解在甲醇中，并接著在除去離子的水中制備用作工作標(biāo)準(zhǔn)的一些稀釋液。將30μl的試樣加到第二可對折構(gòu)件的點(diǎn)樣器上。培養(yǎng)1分鐘之后，將兩個可對折構(gòu)件相互對折疊合，以便將試樣和已溶解的抗阿特拉津-金(結(jié)合物)加到色譜介質(zhì)上。在三分鐘之內(nèi)，試樣中的阿特拉當(dāng)濃度為1～10ppb時在色譜介質(zhì)上顯現(xiàn)出一條線；濃度為11～100ppb顯現(xiàn)出兩條線，而濃度為101～1000ppb則顯現(xiàn)出三條線。
本發(fā)明的優(yōu)點(diǎn)本發(fā)明的色譜測定裝置的一個優(yōu)點(diǎn)在于它由可對折構(gòu)件的構(gòu)造。采用可對折構(gòu)件具有很大的多用性，因?yàn)樗軌蛟谝恍┎煌捻樞蛳聦?shí)施反應(yīng)。這是因?yàn)椴捎眠@種可對折構(gòu)件能夠?qū)⒃噭┹斔偷揭粋€試驗(yàn)條或其它反應(yīng)組分的精確確定的區(qū)域中。另外，采用可對折構(gòu)件可以將試劑隔離在裝置的一些靜區(qū)(deadvolume)中，保證不浪費(fèi)試劑，從而以最少的試劑消耗量提供最佳的性能。最后，采用可對折構(gòu)件時，可以最佳地保持可能被污染的血樣，如含有人類免疫缺陷病毒或肝炎病毒的血樣。
本發(fā)明的測定裝置的另一個優(yōu)點(diǎn)在于，這些裝置能夠用壓力將液體從一個可對折構(gòu)件傳送到另一個可對折構(gòu)件并使之通過色譜介質(zhì)，還能夠控制施加的壓力，使之最佳地適應(yīng)于要實(shí)施的每個測定。這加速了測定過程，并能夠在測定裝置內(nèi)實(shí)施諸如提取試樣的操作。而且它也減少了留在構(gòu)件中的試劑的靜區(qū)，從而能夠采用較小的試樣和較小數(shù)量的花費(fèi)或難以純化的試劑，如加標(biāo)記的抗體。
此外，本發(fā)明的色譜測定裝置能夠迅速并且精確地檢測在診斷上重要的分析物，如鏈球菌A和B抗原，用于確定糞便隱血的血紅蛋白，和幽門螺桿菌(Helicobacter pylori)抗體，以及診斷上重要的一些半抗原。裝置所具有的結(jié)構(gòu)能使試樣更加均勻地施加到色譜介質(zhì)上，并減少了在其它情況會由顆粒試樣或帶色試樣所引起的干擾。采用以可溶解形式的膠態(tài)金屬標(biāo)記物使標(biāo)記過程具有極高的速度，并且能夠在試樣施加到色譜介質(zhì)上之前基本上完全形成二元分析物-標(biāo)記物復(fù)合物。這有助于分離污染物，改善測定的實(shí)施。此外，裝置的外殼的結(jié)構(gòu)和布置保證能抽回過量的含有過量免疫球蛋白的試樣，有助于測定的實(shí)施，否則會產(chǎn)生干擾。
生物試樣如血液、痰或糞便的提取可以直接在裝置中進(jìn)行，減少了必須處理掉的被污染材料的數(shù)量，并減少了醫(yī)生，技術(shù)人員或公眾被這種污染材料偶然感染的可能性。此外，這種裝置能夠?qū)嵤╇p向色譜分析，進(jìn)一步提高了精確性，減少了干擾。采用本發(fā)明裝置的試樣方法具有一個很寬的動態(tài)范圍，并且基本上沒有假陰性結(jié)果，這種情況在分析物濃度高時可能會在用其它試樣方式時產(chǎn)生。
盡管本發(fā)明已經(jīng)針對一些優(yōu)選方案做了相當(dāng)詳細(xì)的描述，但是其它的方案和實(shí)施例也是可能的。這些方案包括兩構(gòu)件或三構(gòu)件裝置的其它布置，這些裝置是按照這里所描述的基本原理工作的并且采用以下方法中的任何部分(a)現(xiàn)場提取試樣；(b)溶解一種加標(biāo)記的特異性結(jié)合體并迅速結(jié)合到分析物上；和(c)布置色譜介質(zhì)和吸收體，以除去過量的試樣，否則可能會產(chǎn)生干擾。這些方案包含適用于夾心法免疫測定也適用于競爭法免疫測定的不同布置的測定裝置。特別地，本發(fā)明的裝置可以利用通過色譜介質(zhì)的徑向流動或周向流動，而不是線性流動。本發(fā)明進(jìn)一步包括一些變型，其中，兩構(gòu)件或三構(gòu)件裝置不是保持在一種永久性固定的布置下，而是可以分離和組合在一起，以進(jìn)行測定，例如利用電力或磁力，或利用一種可分離的緊固件如一種鉤與眼織物，例如Velcro牌商品。因此，本發(fā)明的范圍由下面的權(quán)利要求書來確定。
權(quán)利要求
1.一種用于檢測和/或測定試樣中的一種分析物的色譜測定裝置，其包括(a)一第一可對折構(gòu)件；它包含(i)一個具有一第一端和一第二端的色譜介質(zhì)；(ii)一個與色譜介質(zhì)的第一端有作用性接觸的檢測器點(diǎn)樣墊，檢測器點(diǎn)樣墊包含有至少一種用于檢測分析物的試劑；(iii)一個傳導(dǎo)體，它用于與檢測器點(diǎn)樣墊有作用性接觸并與色譜介質(zhì)的第一端間接接觸而使液體通過；(iv)一個用于與色譜介質(zhì)的第二端有作用性接觸而吸收液體的吸收體；以及(b)一第二可對折構(gòu)件，它包含一個用于接收要測試的試樣的試樣制備區(qū)，第二可對折構(gòu)件可以連接到第一可對折構(gòu)件上，從而將第一和第二可對折構(gòu)件相互對折疊合，使液體從第二可對折構(gòu)件傳輸?shù)降谝豢蓪φ蹣?gòu)件；其中，第一和第二可對折構(gòu)件的結(jié)構(gòu)是這樣設(shè)計的，即當(dāng)?shù)谝缓偷诙蓪φ蹣?gòu)件未對折疊合時，可以將一種試樣施加到第二可對折構(gòu)件上的試樣制備區(qū)上，而當(dāng)將第一和第二可對折構(gòu)件相互對折疊合后，則使試樣制備區(qū)與傳導(dǎo)體接觸，而將要測試的試樣施加到傳導(dǎo)體上，使之流過傳導(dǎo)體，然后通過檢測器點(diǎn)樣墊流到色譜介質(zhì)的第一端，以將檢測分析物的試劑加到試樣上，其中通過吸收體吸收液體而幫助液體通過檢測器點(diǎn)樣墊從傳導(dǎo)體流動到色譜介質(zhì)的第一端。
2.按照權(quán)利要求1所述的色譜測定裝置，其中，第二可對折構(gòu)件的試樣制備區(qū)包含至少一種用于處理試樣的試劑。
3.按照權(quán)利要求1所述的色譜測定裝置，其中，第一可對折構(gòu)件上的檢測器點(diǎn)樣墊包含一個針對分析物的、其形式為通過將一種含水液體加到檢測器點(diǎn)樣墊中而能被溶解的第一特異性結(jié)合體，該第一特異性結(jié)合體用一種可檢測的標(biāo)記物來標(biāo)記，而色譜介質(zhì)進(jìn)一步包含一個其面積大大小于色譜介質(zhì)的面積的檢測區(qū)，該檢測區(qū)包括其上固定有一種針對分析物的特異性結(jié)合體，這樣，如果試樣中存在分析物，則在檢測區(qū)中形成一個包括第一特異性結(jié)合體、分析物和第二特異性結(jié)合體的三元復(fù)合物。
4.按照權(quán)利要求1所述的色譜測定裝置，其中，第一和第二可對折構(gòu)件由一個不能透過含水液體的鉸鏈連接。
5.一種用于檢測和/或測定試樣中的一種分析物的試驗(yàn)箱，它在分開的容器中包括(a)權(quán)利要求1中所述的色譜測定裝置；和(b)一種針對分析物的、用一種可檢測的標(biāo)記物來標(biāo)記的、要被施加到檢測器點(diǎn)樣墊上的特異性結(jié)合體。
6.一種用于檢測和/或測定試樣中的一種分析物的試驗(yàn)箱，它在分開的容器中包括(a)權(quán)利要求3中所述的色譜測定裝置；和(b)一種含水液體，用于溶解針對分析物的、用一種可檢測的標(biāo)記物來標(biāo)記的、要被施加到第一可對折構(gòu)件上的檢測器點(diǎn)樣墊上的特異性結(jié)合體；
7.一種用于檢測和/或測定在一種含水試樣中的一種分析物的方法，它包括以下步驟(a)在權(quán)利要求3中所述的色譜測定裝置的第一和第二可對折構(gòu)件未對折疊合時，將含水試樣施加到第二可對折構(gòu)件的試樣制備區(qū)上；(b)在施加試樣之后，將色譜測定裝置的第一和第二可對折構(gòu)件相互對折疊合，這樣，含有含水液體的試樣溶解第一可對折構(gòu)件上的檢測器點(diǎn)樣墊中的特異性結(jié)合體，并且該試樣和被溶解的加標(biāo)記的特異性結(jié)合體被施加到第一可對折構(gòu)件上的傳導(dǎo)體上；(c)然后，使試樣和加標(biāo)記的特異性結(jié)合體從檢測器點(diǎn)樣墊移動并至少通過一部分色譜介質(zhì)，以使得加標(biāo)記的特異性結(jié)合體通過與色譜介質(zhì)結(jié)合而給出試樣中存在分析物和/或分析物的數(shù)量的一種可檢測的指示，并通過吸收體吸收液體而幫助通過色譜介質(zhì)的流動；及(d)然后觀測和/或測定已結(jié)合到至少一部分色譜介質(zhì)上的加標(biāo)記的特異性結(jié)合體，以便檢測和/或測定分析物。
8.一種用于檢測和/或測定試樣中的一種分析物的色譜測定裝置，其包括(a)一第一可對折構(gòu)件，它包含(i)一個具有一第一端和一第二端的色譜介質(zhì)；(ii)一個與色譜介質(zhì)的第一端有作用性接觸的第一檢測器點(diǎn)樣墊，第一檢測器點(diǎn)樣墊含有一個針對分析物的、其形式為通過將一種含水液體加到第一檢測器點(diǎn)樣墊中而能被溶解的第一特異性結(jié)合體，該第一特異性結(jié)合體用一種可檢測的標(biāo)記物來標(biāo)記；(iii)一個傳導(dǎo)體，它用于與第一檢測器點(diǎn)樣墊作用性接觸而使液體通過，從而第一檢測器點(diǎn)樣墊將傳導(dǎo)體和色譜介質(zhì)的第一端進(jìn)行連接，使液體從傳導(dǎo)體通過第一檢測器點(diǎn)樣墊流動到色譜介質(zhì)的第一端；和(iv)一個用于與色譜介質(zhì)的第二端有作用性接觸而吸收液體的吸收體；(b)一第二可對折構(gòu)件，其可以連接到第一可對折構(gòu)件上，從而將第一和第二可對折檢測相互對折疊合，而使液體從第二可對折構(gòu)件傳輸?shù)降谝豢蓪φ蹣?gòu)件，第二可對折構(gòu)件包含(i)一個用于接收要測定的試樣的試樣制備區(qū)；(ii)一個與試樣制備區(qū)有作用性接觸的第二檢測器點(diǎn)樣墊，第二檢測器點(diǎn)樣墊含有一個針對分析物的、其形式為通過將一種試樣加到試樣制備區(qū)中而能被溶解的第二特異性結(jié)合體，該第二特異性結(jié)合體用一種可檢測的標(biāo)記物來標(biāo)記，第二檢測器點(diǎn)樣墊靠近第二可對折構(gòu)件上的試樣制備區(qū)設(shè)置，使得將試樣施加到試樣制備區(qū)來溶解第二特異性結(jié)合體，從而試樣制備區(qū)含有一種由試樣和第二特異性結(jié)合體構(gòu)成的混合物；以及其中，第一和第二可對折構(gòu)件的結(jié)構(gòu)是這樣設(shè)計的，即當(dāng)?shù)谝缓偷诙蓪φ蹣?gòu)件未對折疊合時，可以將一種試樣施加到第二可對折構(gòu)件的試樣制備區(qū)上，而當(dāng)將第一和第二可對折構(gòu)件相互對折疊合后，則使第二可對折構(gòu)件上的試樣制備區(qū)與第一可對折構(gòu)件上的傳導(dǎo)體接觸。以將要測試的試樣和第二特異性結(jié)合體施加到傳導(dǎo)體上，使之流過傳導(dǎo)體，然后將第一檢測器點(diǎn)樣墊流到色譜介質(zhì)的第一端，將第一特異性結(jié)合體加到試樣和第二特異性結(jié)合體上，通過吸收體吸收液體而幫助通過第一檢測器點(diǎn)樣墊從傳導(dǎo)體到色譜介質(zhì)的第一端的流動。
9.按照權(quán)利要求8所述的色譜測定裝置，其中，第二可對折構(gòu)件上的試樣制備區(qū)包含至少一種用于在將試樣施加到試樣制備區(qū)上之前處理試樣的試劑。
10.按照權(quán)利要求8所述的色譜測定裝置，其中，在第一和第二檢測器點(diǎn)樣墊中的、針對分析物的第一和第二特異性結(jié)合體是相同的，而用于標(biāo)記第一和第二特異性結(jié)合體的可檢測的標(biāo)記物是相同的。
11.按照權(quán)利要求10所述的色譜測定裝置，其中，相同的可檢測的標(biāo)記物是可以肉眼檢測的標(biāo)記物。
12.按照權(quán)利要求8所述的色譜測定裝置，其中，第一可對折構(gòu)件上的色譜介質(zhì)進(jìn)一步包含一個其面積大大小于色譜介質(zhì)的面積的檢測區(qū)，該檢測區(qū)包括其上固定有一個針對分析物的第三特異性結(jié)合體，這樣，如果試樣中存在分析物，則在檢測區(qū)中形成一個包括(1)第一和第二特異性結(jié)合體中的其中一個。(2)分析物，和(3)固定的第三特異性結(jié)合體的三元復(fù)合物。
13.一種用于檢測和/或測定試樣中的一種分析物的試驗(yàn)箱，它在分開的容器中包括(a)權(quán)利要求8中所述的色譜測定裝置；和(b)一種含水液體，用于溶解至少針對分析物的第一和第二特異性結(jié)合體中的其中一個，含水液體將被施加到在第一可對折構(gòu)件上的第一檢測器點(diǎn)樣墊和第二可對折構(gòu)件上的第二檢測器點(diǎn)樣墊中的至少其中一個上。
14.一種用于檢測和/或測定在一種含水試樣中的一種分析物的方法，它包括以下步驟(a)在權(quán)利要求8中所述的色譜測定裝置的第一和第二可對折構(gòu)件未對折疊合時，將含水試樣施加到在第二可對折構(gòu)件的試樣制備區(qū)上；(b)在施加了試樣之后，將色譜測定裝置的第一和第二可對折構(gòu)件相互對折疊合；這樣(i)第二可對折構(gòu)件上的試樣制備區(qū)將試樣和第二特異性結(jié)合體的混合物施加到第一可對折構(gòu)件上的傳導(dǎo)體上；(ii)試樣和第二特異性結(jié)合體的混合物流過傳導(dǎo)體，從而到達(dá)第一可對折構(gòu)件上的第一檢測器點(diǎn)樣墊；(iii)將試樣和第二特異性結(jié)合體的混合物施加到第一檢測器點(diǎn)樣墊，以溶解第一特異性結(jié)合體，進(jìn)而形成一種由試樣、第一特異性結(jié)合體、和第二特異性結(jié)合體構(gòu)成的混合物；(c)然后，使試樣、加標(biāo)記的第一特異性結(jié)合體和加標(biāo)記的第二特異性結(jié)合體從第一檢測器點(diǎn)樣墊移動并至少通過一部分色譜介質(zhì)，使得至少加標(biāo)記的第一和第二特異性結(jié)合體中的其中一個通過與色譜介質(zhì)結(jié)合而給出試樣中存在分析物和/或分析物的數(shù)量的一種可檢測的指示，并通過吸收體吸收液體而幫助通過色譜介質(zhì)的流動；以及(d)然后觀測和/或測定已結(jié)合到至少一部分色譜介質(zhì)上的至少加標(biāo)記的第一和第二特異性結(jié)合體中的其中一個特異性結(jié)合體，以便檢測和/或測定分析物。
15.一種用于檢測和/或測定試樣中的一種分析物的色譜測定裝置，其包括(a)一第一可對折構(gòu)件；它包含(i)一個具有一第一端和一第二端的色譜介質(zhì)；(ii)一個與色譜介質(zhì)的第一端有作用性接觸而能使液體通過的傳導(dǎo)體；(b)一第二可對折構(gòu)件，它可以連接到第一可對折構(gòu)件上，從而將第一和第二可對折構(gòu)件相互對折疊合，并使液體從第二可對折構(gòu)件傳輸?shù)降谝豢蓪φ蹣?gòu)件；第二可對折構(gòu)件含有(i)一個用于接收要測定的試樣的試樣制備區(qū)；和(ii)一個與在第二可對折構(gòu)件上的試樣制備區(qū)隔離開的、用于吸收液體的吸收體；其中，第一和第二可對折構(gòu)件的結(jié)構(gòu)是這樣設(shè)計的，即當(dāng)?shù)谝缓偷诙蓪φ蹣?gòu)件未對折疊合時，可以將一種試樣施加到在第二可對折構(gòu)件上的試樣制備區(qū)上，而當(dāng)將第一和第二可對折構(gòu)件相互對折疊合后，則使在第二可對折構(gòu)件上的試樣制備區(qū)與在第一可對折構(gòu)件上的傳導(dǎo)體接觸，而將要測試的試樣施加到傳導(dǎo)體上，使之流過傳導(dǎo)體，然后流到色譜介質(zhì)的第一端，同時使吸收體與色譜介質(zhì)的第二端有作用性接觸，而通過從色譜介質(zhì)的第二端抽取液體，以幫助液體通過色譜介質(zhì)從其第一端流動到第二端。
16.一種用于檢測和/或測定試樣中的一種分析物的色譜測定裝置，其包括(a)一第一可對折構(gòu)件；它包含(i)一個用于接收要測定的試樣的試樣制備區(qū)；(ii)一個具有一第一端和一第二端的色譜介質(zhì)；(iii)一個與試樣制備區(qū)和色譜介質(zhì)的第一端有作用性接觸而能使液體通過的傳導(dǎo)體，從而傳導(dǎo)體將試樣制備區(qū)和色譜介質(zhì)進(jìn)行橋接，以使液體從試樣制備區(qū)流過傳導(dǎo)體而流動到色譜介質(zhì)的第一端；(b)一第二可對折構(gòu)件，它可以連接到第一可對折構(gòu)件上，從而使第一和第二可對折構(gòu)件相互對折疊合，并使液體從第二可對折構(gòu)件傳輸?shù)降谝豢蓪φ蹣?gòu)件；第二可對折構(gòu)件含有(i)一個點(diǎn)樣器，用于在第一和第二可對折構(gòu)件相互對折疊合后將液體施加在第一可對折構(gòu)件上的試樣制備區(qū)，且它含有一種針對一種分析物的、標(biāo)記有一種可檢測標(biāo)記物的、其形式為通過向點(diǎn)樣器中加入一種含水液體能被溶解的特異性結(jié)合體；和(ii)一個與點(diǎn)樣器隔離開的吸收體，用于在第一和第二可對折構(gòu)件未對折疊合時吸收其中的液體；及其中，第一和第二可對折構(gòu)件的結(jié)構(gòu)是這樣設(shè)計的，即當(dāng)?shù)谝缓偷诙蓪φ蹣?gòu)件未對折疊合時，可以將一種試樣施加到第一可對折構(gòu)件的試樣制備區(qū)上，而當(dāng)將第一和第二可對折構(gòu)件相互對折疊合后，則使在第二可對折構(gòu)件上的點(diǎn)樣器與在第一可對折構(gòu)件上的試樣制備區(qū)有作用性接觸，從而當(dāng)已經(jīng)將一種試樣加到試樣制備區(qū)時，則用于分析物的加標(biāo)記的特異性結(jié)合體就被溶解，并導(dǎo)致在第二可對折構(gòu)件上的吸收體與第一可對折構(gòu)件上的色譜介質(zhì)的第二端有作用性接觸，從而從色譜介質(zhì)中抽取液體，以幫助液體從點(diǎn)樣器和試樣制備區(qū)通過色譜介質(zhì)的流動。
17.一種用于檢測和/或測定試樣中一種分析物的色譜測定裝置，其包括(a)一第一可對折構(gòu)件；它包含(i)一個具有一第一端和一第二端的色譜介質(zhì)；(ii)一個與色譜介質(zhì)的第一端有作用性接觸的傳導(dǎo)體，它能使液體通過；(b)一第二可對折構(gòu)件，它可以連接到第一可對折構(gòu)件上，從而將第一和第二可對折構(gòu)件相互對折疊合，使液體從第二可對折構(gòu)件傳輸?shù)降谝豢蓪φ蹣?gòu)件；第二可對折構(gòu)件含有(i)一第一點(diǎn)樣器，用于在第一和第二可對折構(gòu)件相互對折疊合后將液體施加到第一可對折構(gòu)件上的傳導(dǎo)體，(ii)一第二點(diǎn)樣器，其在第二可對折構(gòu)件上與第一點(diǎn)樣器分隔開，用于在第一和第二可對折構(gòu)件相互對折疊合后將液體施加到第一可對折構(gòu)件上的傳導(dǎo)體；和(iii)一個在第二可對折構(gòu)件上與第一和第二點(diǎn)樣器隔離開的用于吸收其中的液體的吸收體，第一和第二點(diǎn)樣器這樣地設(shè)置在第二可對折構(gòu)件上，使得當(dāng)?shù)谝缓偷诙蓪φ蹣?gòu)件未對折疊合時，它們相互間不處于有作用性接觸，吸收體這樣地設(shè)置在第二可對折構(gòu)件上，使得當(dāng)?shù)谝缓偷诙蓪φ蹣?gòu)件相互對折疊合后，它與色譜介質(zhì)的第二端有作用性接觸；其中，第一和第二可對折構(gòu)件的結(jié)構(gòu)是這樣設(shè)計的，即當(dāng)將第一和第二可對折構(gòu)件相互對折疊合后，則導(dǎo)致第一可對折構(gòu)件上的傳導(dǎo)體與第二可對折構(gòu)件上的第二點(diǎn)樣器有作用性接觸，并導(dǎo)致傳導(dǎo)體與第一可對折構(gòu)件上的第二點(diǎn)樣器有作用性接觸，由此導(dǎo)致第一和第二點(diǎn)樣器相互間間接地有作用性接觸，從而第一和第二點(diǎn)樣器的內(nèi)含物流過傳導(dǎo)體和色譜介質(zhì)，通過吸收體抽取液體來幫助液體通過傳導(dǎo)體和色譜介質(zhì)的流動。
18.按照權(quán)利要求17所述的色譜測定裝置，其中，第二可對折構(gòu)件上的第一點(diǎn)樣器包含一個試樣點(diǎn)樣墊，用于當(dāng)?shù)谝缓偷诙蓪φ蹣?gòu)件未對折疊合時接收試樣，而第二可對折構(gòu)件上的第二點(diǎn)樣器包含一個檢測器點(diǎn)樣墊，其上至少能施加一種用于檢測分析物的檢測試劑，由此，當(dāng)將第一和第二可對折構(gòu)件相互對折疊合后，試樣點(diǎn)樣墊和檢測器點(diǎn)樣墊的內(nèi)含物則被施加到第一可對折構(gòu)件上的傳導(dǎo)體上。
19.按照權(quán)利要求18所述的色譜測定裝置，其中，第二可對折構(gòu)件上的檢測器點(diǎn)樣墊含有一種針對分析物的、其形式為通過向檢測器點(diǎn)樣墊中加入一種含水液體能被溶解的第一特異性結(jié)合體，第一特異性結(jié)合體標(biāo)記有一種可檢測的標(biāo)記物，而第一可對折構(gòu)件上的色譜介質(zhì)進(jìn)一步包含一個其面積大大小于色譜介質(zhì)的面積的檢測區(qū)，該檢測區(qū)包含其上固定有一個針對分析物的第二特異性結(jié)合體，這樣，如果試樣中存在分析物，則在檢測區(qū)中形成一個包括第一特異性結(jié)合體、分析物和第二特異性結(jié)合體的三元復(fù)合物。
20.一種用于檢測和/或測定試樣中的一種分析物的試驗(yàn)箱，它在分開的容器中包括(a)權(quán)利要求17中所述的色譜測定裝置；和(b)一種針對分析物的、標(biāo)記有一種可檢測的標(biāo)記物的特異性結(jié)合體，它將被施加到第二可對折構(gòu)件上的第二點(diǎn)樣器上。
21.一種用于檢測和/或測定試樣中的一種分析物的試驗(yàn)箱，它在分開的容器中包括(a)權(quán)利要求19中所述的色譜測定裝置；和(b)一種含水液體，用于溶解針對分析物的標(biāo)記有一種可檢測的標(biāo)記物的特異性結(jié)合體，它將被施加到第二可對折構(gòu)件上的檢測器點(diǎn)樣墊上。
22.一種用于檢測和/或測定在一種含水試樣中的一種分析物的方法，它包括以下步驟(a)在權(quán)利要求19中所述的色譜測定裝置的第一和第二可對折構(gòu)件未對折疊合時，將試樣施加到第二可對折構(gòu)件上的試樣點(diǎn)樣墊上；(b)在施加了試樣之后，將色譜測定裝置的第一和第二可對折構(gòu)件相互對折疊合；這樣，(i)含有含水液體的試樣溶解在第二可對折構(gòu)件上的檢測器點(diǎn)樣墊中的特異性結(jié)合體；(ii)由于試樣點(diǎn)樣墊和在第一可對折構(gòu)件上的傳導(dǎo)體之間的接觸以及檢測器點(diǎn)樣墊和傳導(dǎo)體之間的接觸，該試樣和被溶解的加標(biāo)記的特異性結(jié)合體被施加的色譜介質(zhì)的第一端上；(iii)將第二可對折構(gòu)件上的吸收體置于與在第一可對折構(gòu)件上的色譜介質(zhì)的第二端有作用性接觸，以幫助液體從試樣點(diǎn)樣墊和檢測器點(diǎn)樣墊流過色譜介質(zhì)，(c)然后，使試樣和加標(biāo)記的特異性結(jié)合體移動并至少通過一部分色譜介質(zhì)，從而使得加標(biāo)記的特異性結(jié)合體通過與色譜介質(zhì)結(jié)合而給出試樣中存在分析物和/或分析物的數(shù)量的一種可檢測的指示；(d)然后觀測和/或測定已結(jié)合到至少一部分色譜介質(zhì)上的加標(biāo)記的特異性結(jié)合體，以便檢測和/或測定分析物。
23.一種用于檢測和/或測定試樣中的一種分析物的色譜測定裝置，其包括(a)一第一可對折構(gòu)件，它包含(i)一個具有一第一端和一第二端的色譜介質(zhì)；(ii)一個傳導(dǎo)體，它能使與色譜介質(zhì)的第一端有作用性接觸的液體通過；(iii)一個檢測器點(diǎn)樣墊，它包含至少一種用于檢測分析物的與傳導(dǎo)體直接接觸的試劑，并這樣設(shè)置在第一可對折構(gòu)件上，使之與色譜介質(zhì)的第一端間接接觸；和(b)一第二可對折構(gòu)件，它可以連接到第一可對折構(gòu)件上，從而將第一和第二可對折構(gòu)件相互對折疊合，使液體從第二可對折構(gòu)件傳輸?shù)降谝豢蓪φ蹣?gòu)件，第二可對折構(gòu)件含有(i)一個用于在其上施加一種試樣的試樣點(diǎn)樣墊；和(ii)一個與在第二可對折構(gòu)件上的試樣點(diǎn)樣墊隔離開的、用于吸收液體的吸收體；其中，第一和第二可對折構(gòu)件的結(jié)構(gòu)是這樣設(shè)計的，即當(dāng)?shù)谝缓偷诙蓪φ蹣?gòu)件未對折疊合時，可以將一種試樣施加到第二可對折構(gòu)件上的試樣點(diǎn)樣墊上，而當(dāng)?shù)谝缓偷诙蓪φ蹣?gòu)件相互對折疊合時則導(dǎo)致(1)第二可對折構(gòu)件上的試樣點(diǎn)樣墊將試樣施加到第一可對折構(gòu)件上的檢測器點(diǎn)樣墊，由此通過與檢測器點(diǎn)樣墊直接接觸的第一可對折構(gòu)件上的傳導(dǎo)體施加到色譜介質(zhì)的第一端；及(2)第二可對折構(gòu)件上的吸收體與第一可對折構(gòu)件上的色譜介質(zhì)的第二端有作用性接觸，從而吸收體抽取液體，幫助通過傳導(dǎo)體和色譜介質(zhì)的流動。
24.按照權(quán)利要求23所述的色譜測定裝置，其中，第一可對折構(gòu)件上的檢測器點(diǎn)樣墊含有一種針對分析物的、其形式為通過向檢測器點(diǎn)樣墊中加入一種含水液體能被溶解的第一特異性結(jié)合體，第一特異性結(jié)合體標(biāo)記有一種可檢測的標(biāo)記物，而第一可對折構(gòu)件上的色譜介質(zhì)進(jìn)一步包含一個其面積大大小于色譜介質(zhì)的面積的檢測區(qū)，該檢測區(qū)包括在其上固定有一針對分析物的第二特異性結(jié)合體，這樣，如果試樣中存在分析物，則在檢測區(qū)中形成一個包括第一特異性結(jié)合體、分析物和第二特異性結(jié)合體的三元復(fù)合物。
25.按照權(quán)利要求24所述的色譜測定裝置，其中，在將一種試樣施加到第二可對折構(gòu)件上的試樣點(diǎn)樣墊上之后，該試樣點(diǎn)樣墊的內(nèi)含物則包括一種含水液體，而施加到第一可對折構(gòu)件上的檢測器點(diǎn)樣墊上的含水液體包括試樣點(diǎn)樣墊的內(nèi)含物。
26.一種用于檢測和/或測定試樣中的一種分析物的試驗(yàn)箱，它在分開的容器中包括(a)權(quán)利要求24中所述的色譜測定裝置；和(b)一種針對分析物的、標(biāo)記有一種可檢測的標(biāo)記物的特異性結(jié)合體，它將被施加到第一可對折構(gòu)件上的檢測器點(diǎn)樣墊上。
27.一種用于檢測和/或測定在一種含水試樣中的一種分析物的方法，它包括以下步驟(a)在權(quán)利要求24中的色譜測定裝置的第一和第二可對折構(gòu)件未對折疊合時，將試樣施加到第二可對折構(gòu)件的試樣點(diǎn)樣墊上；(b)在施加了試樣之后，將色譜測定裝置的第一和第二可對折構(gòu)件相互對折疊合；這樣，(i)含有含水液體的試樣溶解第一可對折構(gòu)件上的檢測器點(diǎn)樣墊中的特異性結(jié)合體；(ii)由于試樣點(diǎn)樣墊和檢測器點(diǎn)樣墊之間的接觸通過在傳導(dǎo)體中的流動將該試樣和被溶解的加標(biāo)記的特異性結(jié)合體施加到色譜介質(zhì)的第一端上；(iii)將第二可對折構(gòu)件上的吸收體置于與第一可對折構(gòu)件上的色譜介質(zhì)的第二端有作用性接觸，以幫助液體從試樣點(diǎn)樣墊和檢測器點(diǎn)樣墊流過色譜介質(zhì)；(c)然后，使試樣和加標(biāo)記的特異性結(jié)合體移動并至少通過一部分色譜介質(zhì)，使得加標(biāo)記的特異性結(jié)合體通過與色譜介質(zhì)結(jié)合而給出試樣中存在分析物和/或分析物的數(shù)量的一種可檢測的指示；及(d)然后觀測和/或測定已結(jié)合到至少一部分色譜介質(zhì)上的加標(biāo)記的特異性結(jié)合體，以便檢測和/或測定分析物。
28.一種用于檢測和/或測定試樣中的一種分析物的色譜測定裝置，其包括(a)一第一可對折構(gòu)件；它包含(i)一個具有一第一端和一第二端的色譜介質(zhì)；(ii)一個檢測器點(diǎn)樣墊，它包含至少一種用于檢測分析物的與色譜介質(zhì)的第一端直接接觸的試劑；(b)一第二可對折構(gòu)件，它可以連接到第一可對折構(gòu)件上，從而將第一和第二可對折構(gòu)件相互對折疊合，而使液體從第二可對折構(gòu)件傳輸?shù)降谝豢蓪φ蹣?gòu)件；第二可對折構(gòu)件含有(i)一個用于接收一種要測定的試樣的試樣點(diǎn)樣墊；和(ii)一個與在第二可對折構(gòu)件上的試樣點(diǎn)樣墊隔離開的用于吸收液體的吸收體；其中，第一和第二可對折構(gòu)件的結(jié)構(gòu)是這樣設(shè)計的，即當(dāng)?shù)谝缓偷诙蓪φ蹣?gòu)件未對折疊合時，可以將一種試樣施加到第二可對折構(gòu)件上的試樣點(diǎn)樣墊上，而當(dāng)?shù)谝缓偷诙蓪φ蹣?gòu)件相互對折疊合時則除了檢測器點(diǎn)樣墊直接與色譜介質(zhì)的第一端相鄰的區(qū)域外，將使第一可對折構(gòu)件上的檢測器點(diǎn)樣墊與第二可對折構(gòu)件上的試樣點(diǎn)樣墊相接觸，以使液體從試樣點(diǎn)樣墊傳輸?shù)綑z測器點(diǎn)樣墊，同時使從試樣點(diǎn)樣墊直接傳輸?shù)缴V介質(zhì)的液體最少；和其中，將第一和第二可對折構(gòu)件相互對折疊合后導(dǎo)致(1)要測試的試樣被施加到第一可對折構(gòu)件上的檢測器點(diǎn)樣墊，然后施加到色譜介質(zhì)的第一端；及(2)第二可對折構(gòu)件上的吸收體和色譜介質(zhì)的第二端有作用性接觸，從而通過吸收體抽取液體而幫助通過檢測器點(diǎn)樣墊和色譜介質(zhì)的流動。
29.按照權(quán)利要求28所述的色譜測定裝置，其中，第一可對折構(gòu)件上的檢測器點(diǎn)樣墊含有一種針對分析物的、其形式為通過向檢測器點(diǎn)樣墊中加入一種含水液體能被溶解的第一特異性結(jié)合體，第一特異性結(jié)合體標(biāo)記有一種可檢測的標(biāo)記物，第一可對折構(gòu)件上的色譜介質(zhì)進(jìn)一步包含一個其面積大大小于色譜介質(zhì)的面積的檢測區(qū)，該檢測包括在其上固定有一個針對分析物的第二特異性結(jié)合體，這樣，如果試樣中存在分析物，則在檢測區(qū)中形成一個包括第一特異性結(jié)合體、分析物和第二特異性結(jié)合體的三元復(fù)合物。
30.如權(quán)利要求28所述的色譜測定裝置，其中，在將一種試樣施加到第二可對折構(gòu)件上的試樣點(diǎn)樣墊上之后，該試樣點(diǎn)樣摯內(nèi)含物則包括一種含水液體，而施加到第一可對折構(gòu)件上的檢測器點(diǎn)樣墊上的含水液體包括試樣點(diǎn)樣墊的傳輸?shù)綑z測器點(diǎn)樣墊上的內(nèi)含物。
31.一種用于檢測和/或測定試樣中的一種分析物的試驗(yàn)箱，它在分開的容器中包括(a)權(quán)利要求28中所述的色譜測定裝置；和(b)一種針對分析物的、標(biāo)記有一種可檢測的標(biāo)記物的特異性結(jié)合體，它將被施加到第一可對折構(gòu)件上的檢測器點(diǎn)樣墊上。
32.一種用于檢測和/或測定在一種含水測試試樣中的一種分析物的方法，它包括以下步驟(a)在權(quán)利要求30中所述的色譜測定裝置的第一和第二可對折構(gòu)件未對折疊合時，將試樣施加到第二可對折構(gòu)件的試樣點(diǎn)樣墊上；(b)在施加了試樣之后，將色譜測定裝置的第一和第二可對折構(gòu)件相互對折疊合；這樣，(i)含有含水液體的試樣溶解在第一可對折構(gòu)件上的檢測器點(diǎn)樣墊中的特異性結(jié)合體；(ii)由于第二可對折構(gòu)件上的試樣點(diǎn)樣墊和第一可對折構(gòu)件上的檢測器點(diǎn)樣墊之間的接觸，將該試樣和被溶解的加標(biāo)記的特異性結(jié)合體施加到色譜介質(zhì)的第一端上；(iii)將第二可對折構(gòu)件上的吸收體置于與第一可對折構(gòu)件上的色譜介質(zhì)的第二端有作用性接觸，以幫助液體從試樣點(diǎn)樣墊和檢測器點(diǎn)樣墊流過色譜介質(zhì)，(c)然后，使試樣和加標(biāo)記的特異性結(jié)合體移動并至少通過一部分色譜介質(zhì)，使得加標(biāo)記的特異性結(jié)合體通過與色譜介質(zhì)結(jié)合而給出試樣中存在分析物和/或分析物的數(shù)據(jù)的一種可檢測的指示；以及(d)然后觀測和/或測定已結(jié)合到至少一部分色譜介質(zhì)上的加標(biāo)記的特異性結(jié)合體，以便檢測和/或測定分析物。
33.一種檢測和/或測定試樣中的一種分析物的色譜測定裝置，其包括(a)一第一可對折構(gòu)件；它包含(i)一個具有一第一端和一第二端的色譜介質(zhì)；(ii)一個設(shè)在第一可對折構(gòu)件上的能讓液體通過的傳導(dǎo)體，當(dāng)?shù)谝缓偷诙蓪φ蹣?gòu)件未對折疊合時，它不與色譜介質(zhì)的第一端有作用性接觸；(b)一第二可對折構(gòu)件，它可以連接到第一可對折構(gòu)件上，從而可以將第一和第二可對折構(gòu)件相互對折疊合，而將液體從第二可對折構(gòu)件傳輸?shù)降谝豢蓪φ蹣?gòu)件上；第二可對折構(gòu)件包含(i)一第一點(diǎn)樣器，用于在第一和第二可對折構(gòu)件相互對折疊合時，將液體施加到第一可對折構(gòu)件上的傳導(dǎo)體上；(ii)一個在第二可對折構(gòu)件上與第一點(diǎn)樣器分隔開的第二點(diǎn)樣器，用于在第一和第二可對折構(gòu)件相互對折疊合時，將液體施加到第一可對折構(gòu)件上的傳導(dǎo)體上；(iii)一個吸收體，用于吸收與處在第二可對折構(gòu)件上的第一和第二點(diǎn)樣器隔離開的液體，第一和第二點(diǎn)樣器則是設(shè)置在第二可對折構(gòu)件上，這樣當(dāng)?shù)谝缓偷诙蓪φ蹣?gòu)件未對折疊合時，它們之間不處于有作用性接觸，其中，第一和第二可對折構(gòu)件的結(jié)構(gòu)是這樣設(shè)計的，即當(dāng)將第一和第二可對折構(gòu)件相互對折疊合時，則(1)導(dǎo)致第一可對折構(gòu)件上的傳導(dǎo)體與第二可對折構(gòu)件上的第一點(diǎn)樣器有作用性接觸，傳導(dǎo)體與第二可對折構(gòu)件上的第二點(diǎn)樣器有作用性接觸，以及第二點(diǎn)樣器與色譜介質(zhì)的第一端有作用性接觸，由此使第一和第二點(diǎn)樣器相互間處于間接的有作用性接觸，從而使第一和第二點(diǎn)樣器的內(nèi)含物被施加到色譜介質(zhì)，進(jìn)而第一和第二點(diǎn)樣器的內(nèi)含物流過色譜介質(zhì)，(2)導(dǎo)致第二可對折構(gòu)件上的吸收體與色譜介質(zhì)的第二端有作用性接觸，從而通過吸收體抽取液體，來幫助液體從第一和第二點(diǎn)樣器流過傳導(dǎo)體和色譜介質(zhì)。
34.按照權(quán)利要求33所述的色譜測定裝置，其中，第二可對折構(gòu)件上的第一點(diǎn)樣器包含一個試樣點(diǎn)樣墊，用于當(dāng)?shù)谝缓偷诙蓪φ蹣?gòu)件未對折疊合時在其上施加一個試樣，而第二可對折構(gòu)件上的第二點(diǎn)樣器包含一個檢測器點(diǎn)樣墊，其上至少能施加一種檢測試劑，由此在將第一和第二可對折構(gòu)件相互對折疊合后，試樣點(diǎn)樣墊和檢測器點(diǎn)樣墊的內(nèi)含物通過傳導(dǎo)體施加到色譜介質(zhì)上。
35.按照權(quán)利要求34所述的色譜測定裝置，其中，第一可對折構(gòu)件上的檢測器點(diǎn)樣墊包含一個針對分析物的、其形式為通過將一種含水液體加到檢測器點(diǎn)樣墊中而能被溶解的第一特異性結(jié)合體，該第一特異性結(jié)合體用一種可檢測的標(biāo)記物來標(biāo)記，而第一可對折構(gòu)件上的色譜介質(zhì)進(jìn)一步包含一個其面積大大小于色譜介質(zhì)的面積的檢測區(qū)，該檢測區(qū)包括在其上固定有一種針對分析物的特異性結(jié)合體，這樣，如果試樣中存在分析物，則在檢測區(qū)中形成一個包括第一特異性結(jié)合體、分析物和第二特異性結(jié)合體的三元復(fù)合物。
36.一種用于檢測和/或測定試樣中的一種分析物的試驗(yàn)箱，它在分開的容器中包括(a)權(quán)利要求33中所述的色譜測定裝置；和(b)一種針對分析物的、標(biāo)記有一種可檢測的標(biāo)記物的特異性結(jié)合體，它將被施加到第二可對折構(gòu)件上的第二點(diǎn)樣器上。
37.一種用于檢測和/或測定在一種含水測試試樣中的一種分析物的方法，它包括以下步驟(a)在權(quán)利要求34中所述的色譜測定裝置的第一和第二可對折構(gòu)件未對折疊合時，將試樣施加到第二可對折構(gòu)件的第一點(diǎn)樣器上；(b)在施加了試樣之后，將色譜測定裝置的第一和第二可對折構(gòu)件相互對折疊合；這樣(i)含有含水液體的試樣溶解在第二可對折構(gòu)件上的檢測器點(diǎn)樣墊中的加標(biāo)記的特異性結(jié)合體；(ii)通過第一可對折構(gòu)件上的傳導(dǎo)體將該試樣和被溶解的加標(biāo)記的特異性結(jié)合體施加到色譜介質(zhì)的第一端上(iii)將第二可對折構(gòu)件上的吸收體置于與色譜介質(zhì)的第二端有作用性接觸，以幫助液體從試樣墊和檢測器點(diǎn)樣墊流過傳導(dǎo)體和色譜介質(zhì)；(c)然后，使試樣和加標(biāo)記的特異性結(jié)合體移動并至少通過一部分色譜介質(zhì)，從而使得加標(biāo)記的特異性結(jié)合體通過與色譜介質(zhì)結(jié)合而給出存在分析物和/或分析物的數(shù)量的一種可檢測的指示；及(d)然后觀測和/或測定已結(jié)合到至少一部分色譜介質(zhì)上的加標(biāo)記的特異性結(jié)合體，以便檢測和/或測定分析物。
38.一種檢測和/或測定試樣中的一種分析物的色譜測定裝置，其包括(a)一第一可對折構(gòu)件；它包含(i)一個具有一第一端和一第二端的色譜介質(zhì)；(ii)一個與色譜介質(zhì)的第一端有作用性接觸的能讓液體通過的傳導(dǎo)體；(iii)一個用于吸取與色譜介質(zhì)的第一端有作用性接觸的液體的吸收體；(b)一第二可對折構(gòu)件，它可以連接到第一可對折構(gòu)件上，從而將第一和第二可對折構(gòu)件相互對折疊合，并使液體從第二可對折構(gòu)件傳輸?shù)降谝豢蓪φ蹣?gòu)件，第二可對折構(gòu)件含有一個點(diǎn)樣器，用于在第一和第二可對折構(gòu)件相互對折疊合時，將液體施加到第一可對折構(gòu)件上的傳導(dǎo)體上，點(diǎn)樣器被分成兩個扇區(qū)(i)一第一扇區(qū)，其含有一個針對分析物的、其形式為在第一和第二可對折構(gòu)件未對折疊合時通過將一種含水液體加到點(diǎn)樣器中而能被溶解的第一特異性結(jié)合體，該特異性結(jié)合體用一種可檢測的標(biāo)記物來標(biāo)記；和(ii)一個不合有針對分析物的特異性結(jié)合體的第二扇區(qū)；及其中，第一和第二可對折構(gòu)件的結(jié)構(gòu)是這樣設(shè)計的，即當(dāng)將第一和第二可對折構(gòu)件相互對折疊合時則使第二可對折構(gòu)件上的點(diǎn)樣器的第一扇區(qū)，而不是第二扇區(qū)與第一可對折構(gòu)件上的傳導(dǎo)體直接接觸，點(diǎn)樣器的第二扇區(qū)通過第一扇區(qū)與傳導(dǎo)體間接接觸，將點(diǎn)樣器的第一扇區(qū)的內(nèi)含物施加到色譜介質(zhì)上，接著將點(diǎn)樣器的第二扇區(qū)的內(nèi)含物施加到色譜介質(zhì)上，吸收體從色譜介質(zhì)抽取液體，以幫助液體從點(diǎn)樣器流過傳導(dǎo)體和色譜介質(zhì)。
39.按照權(quán)利要求38所述的色譜測定裝置，其中，第一可對折構(gòu)件上的色譜介質(zhì)進(jìn)一步包含一個其面積大大小于色譜介質(zhì)的面積的檢測區(qū)，該檢測區(qū)包括在其上固定有一種針對分析物的第二特異性結(jié)合體，這樣，如果試樣中存在分析物，則在檢測區(qū)中形成一個包括第一特異性結(jié)合體、分析物和第二特異性結(jié)合體的三元復(fù)合物。
40.一種用于檢測和/或測定在一種含水測試試樣中的一種分析物的方法，它包括以下步驟(a)在權(quán)利要求38中所述的色譜測定裝置的第一和第二可對折構(gòu)件未對折疊合時，將試樣施加到第二可對折構(gòu)件的點(diǎn)樣器上，從而將試樣施加到點(diǎn)樣器的第一扇區(qū)和第二扇區(qū)上；(b)在點(diǎn)樣器上施加了試樣之后，將色譜測定裝置的第一和第二可對折構(gòu)件相互對折疊合，這樣，(i)施加到第二可對折構(gòu)件的點(diǎn)樣器的第一扇區(qū)上的試樣含有溶解點(diǎn)樣器的第一扇區(qū)中的加標(biāo)記的特異性結(jié)合體的含水液體；(ii)通過在第一可對折構(gòu)件上的傳導(dǎo)體存在于點(diǎn)樣器的第一扇區(qū)中的該試樣和被溶解的加標(biāo)記的特異性結(jié)合體施加到色譜介質(zhì)的第一端上；(iii)在從點(diǎn)樣器的第一扇區(qū)將該試樣和被溶解的加標(biāo)記的特異性結(jié)合體施加到色譜介質(zhì)的第一端上之后，通過傳導(dǎo)體將存在于點(diǎn)樣器的第二扇區(qū)中的試樣施加到色譜介質(zhì)的第一端；(c)然后，使來自點(diǎn)樣器的第一扇區(qū)的試樣和加標(biāo)記的特異性結(jié)合體和后面跟隨的來自點(diǎn)樣器的第二扇區(qū)的試樣移動并至少通過一部分色譜介質(zhì)，使得加標(biāo)記的特異性結(jié)合體的標(biāo)記物通過與色譜介質(zhì)結(jié)合而給出存在分析物和/或分析物的數(shù)量的一種可檢測的指示，并使得來自點(diǎn)樣器的第二扇區(qū)試樣從至少一部分色譜介質(zhì)上沖洗掉至少某種未與分析物結(jié)合的加標(biāo)記特異性結(jié)合體，通過吸收體從色譜介質(zhì)抽取液體以幫助液體流過色譜介質(zhì)；以及(d)然后觀測和/或測定已結(jié)合到至少一部分色譜介質(zhì)上的標(biāo)記物，以便檢測和/或測定分析物。
41.一種檢測和/或測定試樣中的一種分析物的色譜測定裝置，其包括(a)一第一可對折構(gòu)件；它包含(i)一個具有一第一端和一第二端的色譜介質(zhì)，和它在上面的一個大大小于其面積的分散區(qū)域中固定有分析物或它的一個免疫學(xué)模擬物；(ii)一個與色譜介質(zhì)的第一端有作用性接觸的能讓液體通過的第一傳導(dǎo)體；和(iii)一個與色譜介質(zhì)的第二端有作用性接觸的能讓液體通過的第二傳導(dǎo)體；(b)一第二可對折構(gòu)件，它可以連接到第一可對折構(gòu)件上，從而將第一和第二可對折構(gòu)件相互對折疊合，而使液體從第二可對折構(gòu)件傳輸?shù)降谝豢蓪φ蹣?gòu)件，第二可對折構(gòu)件含有一第一點(diǎn)樣器，用于在第一和第二可對折構(gòu)件相互對折疊合時，將液體施加到第一可對折構(gòu)件上的第一傳導(dǎo)體上，第一點(diǎn)樣器含有一個針對分析物的、其形式為通過將一種第一含水液體加到第一點(diǎn)樣器中而能被溶解的第一特異性結(jié)合體；(c)一第三可對折構(gòu)件，它可以連接到第一可對折構(gòu)件上，從而將第一和第三可對折構(gòu)件相互對折疊合，而使液體從第三可對折構(gòu)件傳輸?shù)降谝豢蓪φ蹣?gòu)件，第三可對折構(gòu)件含有(i)一第二點(diǎn)樣器，用于在第一和第三可對折構(gòu)件相互對折疊合時，將液體施加到第一可對折構(gòu)件上的第二傳導(dǎo)體上，第二點(diǎn)樣器含有一個針對分析物的、其形式為通過將一種第二含水液體加到第二點(diǎn)樣器中而能被溶解的第二特異性結(jié)合體，第二特異性結(jié)合體用一種可檢測的標(biāo)記物來標(biāo)記；(ii)一個與在第三可對折構(gòu)件上的第二點(diǎn)樣器隔離開用于吸收液體的吸收體；其中，第一和第二可對折構(gòu)件的結(jié)構(gòu)是這樣設(shè)計的，即當(dāng)將第一和第二可對折構(gòu)件相互對折疊合時，則使第一可對折構(gòu)件上的第一傳導(dǎo)體與第二可對折構(gòu)件上的第一點(diǎn)樣器有作用性接觸，從而通過第一傳導(dǎo)體使第一點(diǎn)樣器的內(nèi)含物被施加到色譜介質(zhì)上，并至少流過一部分色譜介質(zhì)；及其中，第一和第三可對折構(gòu)件的結(jié)構(gòu)是這樣設(shè)計的，即當(dāng)將第一和第三可對折構(gòu)件相互對折疊合時則使第三可對折構(gòu)件上的吸收體與第一可對折構(gòu)件上的第一傳導(dǎo)體有作用性接觸，從而通過第一傳導(dǎo)體從色譜介質(zhì)中抽取液體并使第三可對折構(gòu)件上的第二點(diǎn)樣器與第一可對折構(gòu)件上的第二傳導(dǎo)體有作用性接觸，從而第二點(diǎn)樣器的內(nèi)含物被施加到色譜介質(zhì)，并至少流過一部分色譜介質(zhì)，這部分色譜介質(zhì)與第一和第二可對折構(gòu)件接觸色譜介質(zhì)時抽吸施加到色譜介質(zhì)上的第一點(diǎn)樣器的內(nèi)含物所通過的部分是重疊的。
42.按照權(quán)利要求41所述的色譜測定裝置，其中，第一和第二特異性結(jié)合體每一個都是對分析物具有特異性的抗體。
43.按照權(quán)利要求41所述的色譜測定裝置，其中，固定的分析物或它的模擬物包括共價地連接到一種缺乏對分析物的特異性結(jié)合活性的蛋白質(zhì)上的分析物。
44.一種用于檢測和/或測定試樣中的一種分析物的試驗(yàn)箱，它在分開的容器中包括(a)權(quán)利要求41中所述的色譜測定裝置；和(b)一第二含水液體，用于溶解在第三可對折構(gòu)件上的第二點(diǎn)樣器中所含的針對分析物的第二特異性結(jié)合體。
45.一種用于檢測和/或測定在一種含水試樣中的一種免疫學(xué)上單價的分析物的方法，它包括以下步驟(a)在權(quán)利要求41中所述的色譜測定裝置的第一可對折構(gòu)件與第二可對折構(gòu)件或第三可對折構(gòu)件未對折疊合時，將試樣施加到第二可對折構(gòu)件的第一點(diǎn)樣器上，該試樣包含第一含水液體；(b)當(dāng)?shù)谝缓偷谌蓪φ蹣?gòu)件未對折疊合時，將一種重新構(gòu)成液體施加到第三可對折構(gòu)件上的第二點(diǎn)樣器上，重新構(gòu)成液體包含第二含水液體；(c)在施加了試樣之后，將色譜測定裝置的第一和第二可對折構(gòu)件相互對折疊合，由于第一點(diǎn)樣器和第一傳導(dǎo)體之間接觸從而該試樣和針對分析物的被溶解特異性結(jié)合體被施加到第一傳導(dǎo)體上，然后被施加到色譜介質(zhì)的第一端上。(d)然后，使試樣和被溶解的第一特異性結(jié)合體移動并至少通過一部分色譜介質(zhì)；(e)然后，將第一和第二可對折構(gòu)件分離開，使之不再疊合到一起；(f)然后，將第一和第三可對折構(gòu)件相互對折疊合，通過第二點(diǎn)樣器和第二吸收體之間接觸，從而被溶解的加標(biāo)記的第二特異性結(jié)合體被施加到第一可對折構(gòu)件上的第二傳導(dǎo)體上，然后被施加到色譜介質(zhì)的第二端上，同時使第三可對折構(gòu)件上的吸收體與第一傳導(dǎo)體有作用性接觸，以幫助液體從第二點(diǎn)樣器流過色譜介質(zhì)；(g)然后讓被溶解的加標(biāo)記的第二特異性結(jié)合體移動并至少流過一部分色譜介質(zhì)，這部分色譜介質(zhì)與試樣和被溶解的第一特異性結(jié)合體被抽吸所通過的色譜介質(zhì)部分是重疊的，從而當(dāng)測試試樣中存在分析物時，加標(biāo)記的第二特異性結(jié)合體就結(jié)合到固定在分散區(qū)域中的分析物或它的免疫學(xué)模擬物上；和(h)然后觀測和/或測定已結(jié)合到分散區(qū)域上的第二特異性結(jié)合體，以便檢測和/或測定分析物。
46.按照權(quán)利要求45所述的方法，進(jìn)一步包括以下步驟在將試樣施加到第二可對折構(gòu)件上的第一點(diǎn)樣器上后，對色譜測定裝置進(jìn)行培養(yǎng)，以便促進(jìn)分析物和第一特異性結(jié)合體之間的反應(yīng)。
47.一種用于檢測和/或測定在一種含水試樣中的一種免疫學(xué)上單價的分析物的方法，它包括以下步驟(a)在權(quán)利要求41中所述的色譜測定裝置的第一可對折構(gòu)件與第二可對折構(gòu)件或第三可對折構(gòu)件未對折疊合時，將一第一重新構(gòu)成液體施加到第二可對折構(gòu)件上的第一點(diǎn)樣器上；(b)當(dāng)?shù)谝豢蓪φ蹣?gòu)件與第二可對折構(gòu)件或第三可對折構(gòu)件未對折疊合時，將試樣施加到在權(quán)利要求41中所述的色譜測定裝置的第一點(diǎn)樣器上，第一重新構(gòu)成液體和試樣的組合物包括第一含水液體，(c)當(dāng)?shù)谝豢蓪φ蹣?gòu)件與第三可對折構(gòu)件未對折疊合時，將一第二重新構(gòu)成液體施加到第三可對折構(gòu)件上的第二點(diǎn)樣器上，第二重新構(gòu)成液體包含第二含水液體；(d)在施加了試樣之后，將色譜測定裝置的第一和第二可對折構(gòu)件相互對折疊合，由于第一點(diǎn)樣器和第一傳導(dǎo)體之間接觸從而該試樣和針對分析物的被溶解的第一特異性結(jié)合體被施加到第一傳導(dǎo)體上，然后被施加到色譜介質(zhì)的第一端上；(e)然后，使試樣和被溶解的第一特異性結(jié)合體移動并至少通過一部分色譜介質(zhì)；(f)然后，將第一和第二可對折構(gòu)件分離開，使之不再疊合到一起；(g)然后，將第一和第三可對折構(gòu)件相互對折疊合，通過第二點(diǎn)樣器和第二吸收體之間接觸，使被溶解的加標(biāo)記的第二特異性結(jié)合體被施加到第一可對折構(gòu)件上的第二傳導(dǎo)體，然后被施加到色譜介質(zhì)的第二端上，同時使第三可對折構(gòu)件上的吸收體與第一傳導(dǎo)體有作用性接觸，以幫助液體從第二點(diǎn)樣器流過色譜介質(zhì)；及(h)然后讓被溶解的加標(biāo)記的第二特異性結(jié)合體移動并至少流過一部分色譜介質(zhì)，這部分色譜介質(zhì)與試樣和被溶解的第一特異性結(jié)合體被抽吸所通過的色譜介質(zhì)部分是重疊的，從而當(dāng)試樣中存在在分析物時，加標(biāo)記的第二特異性結(jié)合體就結(jié)合到固定在分散區(qū)域中的分析物或它的免疫學(xué)模擬物上；和(i)然后觀測和/或測定已結(jié)合到分散區(qū)域上的第二特異性結(jié)合體，以便檢測和/測定分析物。
48.按照權(quán)利要求47所述的方法，其進(jìn)一步包括以下步驟在將試樣施加到第二可對折構(gòu)件上的第一點(diǎn)樣器上后，對色譜測定裝置進(jìn)行培養(yǎng)，以便促進(jìn)分析物和第一特異性結(jié)合體之間的反應(yīng)。
49.一種由一種競爭免疫測定法檢測和/或測定試樣中的一種免疫學(xué)上單價的分析物的色譜測定裝置，其包括(a)一第一可對折構(gòu)件；它包含(i)一個具有一第一端和一第二端的色譜介質(zhì)，且在它上面的一些其面積都大大小于色譜介質(zhì)的分散區(qū)域和非重疊區(qū)域中固定有(A)用于分析物的一種特異性結(jié)合體；和(B)一種次特異性結(jié)合體，該次特異性結(jié)合體能夠與一個對分析物缺乏親合力的特異性結(jié)合體對中的一個組分相結(jié)合，該次特異性結(jié)合體設(shè)置得比第一特異性結(jié)合體更靠近色譜介質(zhì)的第一端；(ii)一個能讓與色譜介質(zhì)的第一端有作用性接觸的液體通過的第一傳導(dǎo)體；和(iii)一個能讓色譜介質(zhì)的第二端有作用性接觸的液體通過的第二傳導(dǎo)體；(b)一第二可對折構(gòu)件，它可以連接到第一可對折構(gòu)件上，從而將第一和第二可對折構(gòu)件相互對折疊合，而使液體從第二可對折構(gòu)件傳輸?shù)降谝豢蓪φ蹣?gòu)件，第二可對折構(gòu)件含有(i)一個點(diǎn)樣器，用于在第一和第二可對折構(gòu)件相互對折疊合時，將液體施加到第二傳導(dǎo)體上，并含有一種分析物的模擬物，該分析物的模擬物包括與一個對分析物缺乏親合力的特異性結(jié)合體對中的一個組分共價地相結(jié)合的、并能被次特異性結(jié)合體結(jié)合的分析物，特異性結(jié)合體對中的那個組分標(biāo)記有一種可檢測的標(biāo)記物，分析物的模擬物的形式為通過將一種含水液體加到點(diǎn)樣器中而能被溶解；(ii)一個在與第二可對折構(gòu)件上的點(diǎn)樣器隔離開的用于吸收液體的吸收體；其中，第一和第二可對折構(gòu)件的結(jié)構(gòu)是這樣設(shè)計的，即當(dāng)將第一和第二可對折構(gòu)件對折疊合時則使第二傳導(dǎo)體與點(diǎn)樣器有作用性接觸，從而將點(diǎn)樣的內(nèi)含物施加到色譜介質(zhì)，并至少流過一部分色譜介質(zhì)，同時使吸收體與第一傳導(dǎo)體有作用性接觸，以從色譜介質(zhì)中抽取液體。
50.按照權(quán)利要求49所述的色譜測定裝置，其進(jìn)一步包括一個鉸接在第一可對折構(gòu)件上的蓋子，從而當(dāng)將第一和第二可對折構(gòu)件相互對折疊合時，蓋子可以折疊在第一和第二可對折構(gòu)件上面，蓋子上開有孔口，用以在將第一和第二可對折構(gòu)件相互對折疊合并且將蓋子折疊在第一和第二可對折構(gòu)件上面后觀察至少一部分色譜介質(zhì)。
51.按照權(quán)利要求49所述的色譜測定裝置，其中，第一特異性結(jié)合體是一個對分析物具有特異性的抗體，而次特異性結(jié)合體是一個能夠結(jié)合對分析物缺乏特異性的一種抗體的第二抗體。
52.按照權(quán)利要求49所述的色譜測定裝置，其中，分析物的模擬物包括共價地連接到一種免疫球蛋白上的分析物。
53.按照權(quán)利要求49所述的色譜測定裝置，其中，固定在色譜介質(zhì)上的次特異性結(jié)合體的面積被分成至少兩個分散的且不重疊的帶區(qū)，每個帶區(qū)中的次特異性結(jié)合體的數(shù)量是確定的，從而由分析物的模擬物所結(jié)合的帶區(qū)數(shù)目指示出結(jié)合到檢測區(qū)中的分析物的模擬物的數(shù)量，因而指示出試樣中的分析物的濃度。
54.一種用于檢測和/或測定試樣中的一種免疫學(xué)上單價的分析物的試驗(yàn)箱，它在分開的容器中包括(a)權(quán)利要求49中所述的色譜測定裝置；和(b)一種含水液體，用于溶解將被施加到第二可對折構(gòu)件的點(diǎn)樣器上的分析物的模擬物。
55.一種用于檢測和/或測定在一種含水試樣中的一種免疫學(xué)上單價的分析物的方法，它包括以下步驟(a)在權(quán)利要求49中所述的色譜測定裝置的第一可對折構(gòu)件與第二可對折構(gòu)件未對折疊合時，將一種重新構(gòu)成液體施加到第二可對折構(gòu)件上的點(diǎn)樣器上，重新構(gòu)成液體包括用于重新構(gòu)成第二特異性結(jié)合體的含水液體；(b)當(dāng)?shù)谝豢蓪φ蹣?gòu)件和第二可對折構(gòu)件未對折疊合時，將試樣施加到色譜測定裝置的第一可對折構(gòu)件的第一傳導(dǎo)體上；(c)然后，使試樣移動而至少通過一部分色譜介質(zhì)，包括固定在色譜介質(zhì)的一個分散區(qū)域中的針對分析物的第一特異性結(jié)合體；(d)然后，將第一和第二可對折構(gòu)件相互對折疊合，由于點(diǎn)樣器和第二傳導(dǎo)體之間接觸，使被溶解的加標(biāo)記的第二特異性結(jié)合體施加到第二傳導(dǎo)體上，然后被施加到色譜介質(zhì)的第二端上；(e)然后讓被溶解的加標(biāo)記的分析物的模擬物移動并至少通過一部分色譜介質(zhì)，這部分色譜介質(zhì)與試樣被抽吸所通過的色譜介質(zhì)部分是重疊的，包括固定有試劑的兩個分散區(qū)域，從而當(dāng)試樣中存在分析物時，加標(biāo)記的分析物的模擬物就結(jié)合到次特異性結(jié)合體上；和(f)然后觀測和/或測定已結(jié)合到含有固定的次特異性結(jié)合體的分散區(qū)域上的加標(biāo)記的分析物的模擬物，以便檢測和/或測定分析物。
56.一種用于檢測和/或測定在一種含水試樣中的一種免疫學(xué)上單價的分析物的方法，它包括以下步驟(a)在權(quán)利要求53中所述的色譜測定裝置的第一可對折構(gòu)件與第二可對折構(gòu)件未對折疊合時，將一種重新構(gòu)成液體施加到第二可對折構(gòu)件上的點(diǎn)樣器上，重新構(gòu)成液體包括用于重新構(gòu)成第二特異性結(jié)合體的含水液體；(b)當(dāng)?shù)谝豢蓪φ蹣?gòu)件與第二可對折構(gòu)件未對折疊合時，將試樣施加到色譜測定裝置的第一可對折構(gòu)件的第一傳導(dǎo)體上；(c)然后，使試樣移動而至少通過一部分色譜介質(zhì)，包括固定在色譜介質(zhì)的一個分散區(qū)域中的針對分析物的第一特異性結(jié)合體，(d)然后，將第一和第二可對折構(gòu)件相互對折疊合，由于點(diǎn)樣器和第二傳導(dǎo)體之間接觸，使被溶解的加標(biāo)記的第二特異性結(jié)合體施加到第二傳導(dǎo)體上，然后被施加到色譜介質(zhì)的第二端上；(e)然后讓被溶解的加標(biāo)記的分析物的模擬物移動并至少通過一部分色譜介質(zhì)，這部分色譜介質(zhì)與試樣被抽吸所通過的色譜介質(zhì)部分是重疊的，包括固定有試劑的兩個分散區(qū)域，從而當(dāng)試樣中存在分析物時，加標(biāo)記的分析物的模擬物就結(jié)合到次特異性結(jié)合體上；和(f)然后觀測和/或測定在含有固定的次特異性結(jié)合體的分析區(qū)域內(nèi)的兩個或多個帶區(qū)中的加標(biāo)記的分析物的模擬物，以便檢測和/或測定分析物，加標(biāo)記的分析物的模擬物所結(jié)合的帶區(qū)的數(shù)目隨著分析物的濃度的增加而增加。
57.一種由一種競爭免疫測定法檢測和/或測定試樣中的一種免疫學(xué)上單價的分析物的色譜測定裝置，其包括(a)一第一可對折構(gòu)件；它包含(i)一個具有一第一端和一第二端的色譜介質(zhì)，且在它上面的一些其面積都大大小于色譜介質(zhì)的分散區(qū)域和非重疊區(qū)域中固定有(A)對于分析物的一種特異性結(jié)合體；和(B)一種次特異性結(jié)合體，該次特異性結(jié)合體能夠與一個對分析物缺乏親合力的特異性結(jié)合體對中的一個組分相結(jié)合，該次特異性結(jié)合體設(shè)置得比第一特異性結(jié)合體更靠近色譜介質(zhì)的第一端；(ii)一個與色譜介質(zhì)的第一端有作用性接觸的能讓液體通過的第一傳導(dǎo)體，第一傳導(dǎo)體能起著一第一點(diǎn)樣器的功能；和(iii)一個與色譜介質(zhì)的第二端有作用性接觸的能讓液體通過的第二傳導(dǎo)體；(b)一第二可對折構(gòu)件，它可以連接到第一可對折構(gòu)件上，從而將第一和第二可對折構(gòu)件相互對折疊合，而使液體從第二可對折構(gòu)件傳輸?shù)降谝豢蓪φ蹣?gòu)件，第二可對折構(gòu)件含有(i)一第二點(diǎn)樣器，用于在第一和第二可對折構(gòu)件相互對折疊合時，將液體施加到第二傳導(dǎo)體上，并含有一種分析物的模擬物，該分析物的模擬物包括與一個對分析物缺乏親合力的特異性結(jié)合體對中的一個組分相結(jié)合的、并能被次特異性結(jié)合體結(jié)合的分析物，特異性結(jié)合體對中的那個組分上標(biāo)記有一種可檢測的標(biāo)記物，分析物的模擬物的形式為通過將一種含水液體加到第二點(diǎn)樣器中而能被溶解；和(ii)一個與第二可對折構(gòu)件上的第二點(diǎn)樣器隔離開的、用于吸收液體的第一吸收體；(c)一個有吸收液體的第二吸收體的第三可對折構(gòu)件；其中，第一和第二可對折構(gòu)件的結(jié)構(gòu)是這樣設(shè)計的，即當(dāng)將第一和第二可對折構(gòu)件相互對折疊合時則使第二點(diǎn)樣器與第一傳導(dǎo)體有作用性接觸，以及使第一吸收體與第二傳導(dǎo)體有作用性接觸，從而通過第二傳導(dǎo)體從色譜介質(zhì)中抽取液體；以及其中，第一和第三可對折構(gòu)件的結(jié)構(gòu)是這樣設(shè)計的，即當(dāng)將第一和第三可對折構(gòu)件相互對折疊合時則使第二吸收體與第一傳導(dǎo)體和色譜介質(zhì)有作用性接觸，從而通過第一傳導(dǎo)體從色譜介質(zhì)中柚取液體。
58.一種用于檢測和/或測定在一種含水試樣中的一種免疫學(xué)上單價的分析物的方法，它包括以下步驟(a)在權(quán)利要求57中所述的色譜測定裝置的第一可對折構(gòu)件與第二可對折構(gòu)件未對折疊合時，將試樣施加到第一可對折構(gòu)件的第一傳導(dǎo)體上；(b)將一種重新構(gòu)成液體施加到色譜測定裝置的第二可對折構(gòu)件上的第二點(diǎn)樣器上，以溶解第二點(diǎn)樣器中的加標(biāo)記的分析物的模擬物；(c)使試樣移動而至少通過一部分色譜介質(zhì)，包括固定在色譜介質(zhì)上的針對分析物的特異性結(jié)合體和次特異性結(jié)合體，(d)然后，將第三和第一可對折構(gòu)件相互對折疊合，由于點(diǎn)樣器和第一傳導(dǎo)體之間以及點(diǎn)樣器和色譜介質(zhì)之間的接觸使第三可對折構(gòu)件上的第二吸收體與第一可對折構(gòu)件上的第一傳導(dǎo)體和色譜介質(zhì)直接接觸，而從色譜介質(zhì)中抽取液體；(e)然后，將第二和第一可對折構(gòu)件相互對折疊合，使第二可對折構(gòu)件上的第二點(diǎn)樣器與第一可對折構(gòu)件上的第一傳導(dǎo)體有作用性接觸，和使第二可對折構(gòu)件上的第一吸收體與第一可對折構(gòu)件上的第二傳導(dǎo)體有作用性接觸，由于第二點(diǎn)樣器和第一傳導(dǎo)體之間以及第一吸收體和第二傳導(dǎo)體之間的接觸，從而將被溶解的加標(biāo)記的分析物的模擬物施加到第一傳導(dǎo)體上，然后施加到色譜介質(zhì)的第一端上；(f)然后讓溶解的加標(biāo)記的分析物的模擬物移動至少通過含有對分析物的特異性結(jié)合體和次特異性結(jié)合體的那部分色譜介質(zhì)；和(g)然后觀測和/或測定結(jié)合到次特異性結(jié)合體上的加標(biāo)記的分析物的模擬物，以便檢測和/或測定分析物。
59.一種由一種競爭免疫測定法檢測和/或測定試樣中的一種免疫學(xué)上單價的分析物的色譜測定裝置，其包括(a)一第一可對折構(gòu)件；它包含(i)一個具有一第一端和一第二端的色譜介質(zhì)，且在它上面的一些其面積都大大小于色譜介質(zhì)的分散區(qū)域和非重疊區(qū)域中固定有(A)一種能夠與生物素特異性結(jié)合的物質(zhì)，該生物素選自由抗生物素蛋白(avidin)、抗生物蛋白鏈菌素(streptavidin)，抗-生物素(anti-biotin)抗體，和它們的衍生物組成的組；和(B)一種次特異性結(jié)合體，該次特異性結(jié)合體能夠與一個三元的復(fù)合物特異性的相結(jié)合，該三元的復(fù)合物包括(1)分析物，(2)一個對分析物缺乏親合力的特異性結(jié)合體對中的一個組分，該組分共價地結(jié)合到分析物上，和(3)一個結(jié)合到特異性結(jié)合體對中的這個組分上的可檢測的標(biāo)記物；(ii)一個與色譜介質(zhì)的第一端有作用性接觸的能讓液體通過的第一傳導(dǎo)體；和(iii)一個與色譜介質(zhì)的第二端有作用性接觸的能讓液體通過的第二傳導(dǎo)體；(b)一第二可對折構(gòu)件，它可以連接到第一可對折構(gòu)件上，從而將第一和第二可對折構(gòu)件相互對折疊合，而使液體從第二可對折構(gòu)件傳輸?shù)降谝豢蓪φ蹣?gòu)件，第二可對折構(gòu)件含有一第一點(diǎn)樣器，用于將液體施加到第一傳導(dǎo)體上，第一點(diǎn)樣器含有一種針對分析物的、形成為通過一種含水試樣加到第一點(diǎn)樣器中而能被溶解的第一特異性結(jié)合體，第一特異性結(jié)合體共價地結(jié)合到生物素上，第一特異性結(jié)合體不能被次特異性結(jié)合體結(jié)合；(c)一第三可對折構(gòu)件，它可以連接到第一可對折構(gòu)件上，從而將第一和第三可對折構(gòu)件相互對折疊合，而使液體從第三可對折構(gòu)什傳輸?shù)降谝豢蓪φ蹣?gòu)件，第三可對折構(gòu)件含有(i)一個含有三元復(fù)合物的用于將液體加到第二傳導(dǎo)體上的第二點(diǎn)樣器，三元復(fù)合物的形式為通過將一種第二含水液體加到第二點(diǎn)樣器中而能被溶解；(ii)一個與在第三可對折構(gòu)件上的第二點(diǎn)樣器隔離開的、用于吸收液體的吸收體；及其中，第一和第二可對折構(gòu)件的結(jié)構(gòu)是這樣設(shè)計的，即當(dāng)將第一和第二可對折構(gòu)件相互對折疊合時，則使第一傳導(dǎo)體與第一點(diǎn)樣器有作用性接觸，從而將第一點(diǎn)樣器的內(nèi)含物施加到色譜介質(zhì)，并至少被抽吸通過一部分色譜介質(zhì)，其中，第一和第三可對折構(gòu)件的結(jié)構(gòu)是這樣設(shè)計的，即當(dāng)將第一和第三可對折構(gòu)件相互對折疊合時，則使吸收體與第一傳導(dǎo)體接觸，從而從色譜介質(zhì)中抽取液體，并使第二點(diǎn)樣器與第二傳導(dǎo)體有作用性接觸，從而將第二傳導(dǎo)體的內(nèi)含物施加到色譜介質(zhì)上，并至少被抽吸通過與第一點(diǎn)樣器的內(nèi)含物被抽吸通過的那部分色譜介質(zhì)相重疊的一部分色譜介質(zhì)。
60.按照權(quán)利要求59所述的色譜測定裝置，其中，第一特異性結(jié)合體是一種抗分析物的抗體。
61.按照權(quán)利要求60所述的色譜測定裝置，其中，在三元復(fù)合物中的特異性結(jié)合體對的那個組分是家兔免疫球蛋白G，而第二特異性結(jié)合體是山羊抗家兔IgG。
62.按照權(quán)利要求59所述的色譜測定裝置，其中，能夠特異性地結(jié)合生物素的基底是抗生物蛋白鏈菌素。
63.按照權(quán)利要求59所述的色譜測定裝置，其中，固定在色譜介質(zhì)上的次特異性結(jié)合體的區(qū)域分成至少兩個分散的且不重疊的帶區(qū)，每個帶區(qū)中的次特異性結(jié)合體的數(shù)量是確定的，從而由三元復(fù)合物結(jié)合的帶區(qū)的數(shù)目指示出結(jié)合到檢測區(qū)上的三元復(fù)合物的數(shù)量，由此指示出試樣中原始分析物的濃度。
64.一種用于檢測和/或測定試樣中的一種免疫學(xué)上單價的分析物的試驗(yàn)箱，它在分開的容器中包括(a)權(quán)利要求59中所述的色譜測定裝置，和(b)一種用于溶解三元復(fù)合物的第二含水液體，它將被施加到第三可對折構(gòu)件上的第二點(diǎn)樣器上。
65.一種用于檢測和/或測定在一種含水試樣中的一種免疫學(xué)上單價的分析物的方法，它包括以下步驟(a)在權(quán)利要求59中所述的色譜測定裝置的第一可對折構(gòu)件與第二可對折構(gòu)件未對折疊合時，將包含一種第一含水液體的試樣施加到色譜測定裝置的第一點(diǎn)樣器上；(b)在第一可對折構(gòu)件與第三可對折構(gòu)件未對折疊合時，將一種包含一種第二含水液體的重新構(gòu)成液體施加到第二點(diǎn)樣器上；(c)在施加了試樣之后，將色譜測定裝置的第一和第二可對折構(gòu)件相互對折疊合，從而通過第一傳導(dǎo)體將試樣和被溶解的針對分析物的第一特異性結(jié)合體施加到色譜介質(zhì)的第一端；(d)然后，使試樣和被溶解的第一特異性結(jié)合體移動而至少通過一部分色譜介質(zhì)；(e)然后，將第一和第二可對折構(gòu)件分離開，使之不再疊合到一起；(f)然后，將第一和第三可對折構(gòu)件相互對折疊合，使被溶解的三元復(fù)合物通過第二傳導(dǎo)體施加到色譜介質(zhì)的第二端；(g)然后讓被溶解的三元復(fù)合物移動并至少通過一部分色譜介質(zhì)，這部分色譜介質(zhì)與試樣和被溶解的第一特異性結(jié)合體被抽吸所通過的色譜介質(zhì)部分是重疊的，從而當(dāng)測試試樣與分析物存在時，三元復(fù)合物就結(jié)合到固定在第二分散區(qū)域中的第二特異性結(jié)合體上；和(h)然后觀測和/或測定結(jié)合到第二分散區(qū)域中的加標(biāo)記特異性結(jié)合體，以便檢測和/或測定分析物。
66.按照權(quán)利要求65所述的方法，其進(jìn)一步包括以下步驟在試樣施加到第一點(diǎn)樣器上后，對色譜測定裝置進(jìn)行培養(yǎng)，以便促進(jìn)分析物和第一特異性結(jié)合體之間的反應(yīng)。
67.一種用于檢測和/或測定在一種含水試樣中的一種免疫學(xué)上單價的分析物的方法，它包括以下步驟(a)在權(quán)利要求59中所述的色譜測定裝置的第一可對折構(gòu)件和第二可對折構(gòu)件未對折疊合時，將一種第一重新構(gòu)成液體施加到色譜測定裝置的第一點(diǎn)樣器上；(b)在第一可對折構(gòu)件和第二可對折構(gòu)件未對折疊合時，將試樣施加到權(quán)利要求66中所述的色譜測定裝置的第一點(diǎn)樣器上，試樣和第一重新構(gòu)成液體的組合物包括第一含水液體，(c)在第一可對折構(gòu)件和第三可對折構(gòu)件未對折疊合時，將一種第二重新構(gòu)成液體施加到第二點(diǎn)樣器上，第二重新構(gòu)成液體包括第二含水液體；(d)在施加了試樣之后，將色譜測定裝置的第一和第二可對折構(gòu)件相互對折疊合，從而通過第一傳導(dǎo)體將試樣和被溶解的針對分析物的第一特異性結(jié)合體施加到色譜介質(zhì)的第一端；(e)然后，使試樣和被溶解的第一特異性結(jié)合體移動而至少通過一部分色譜介質(zhì)；(f)然后，將第一和第二可對折構(gòu)件分離開，使之不再疊合在一起；(g)然后，將第一和第三可對折構(gòu)件相互對折疊合，使被溶解的三元復(fù)合物通過第二傳導(dǎo)體施加到色譜介質(zhì)的第二端；(h)然后讓被溶解的三元復(fù)合物移動并至少通過一部分色譜介質(zhì)，這部分色譜介質(zhì)與試樣和被溶解的第一特異性結(jié)合體被抽吸所通過的色譜介質(zhì)部分是重疊的，從而當(dāng)測試試樣與分析物存在時，三元復(fù)合物就結(jié)合到固定在第二分散區(qū)域中的第二特異性結(jié)合體上；和(i)然后觀測和/或測定結(jié)合到第二分散區(qū)域中的加標(biāo)記的特異性結(jié)合體，以便檢測和/或測定分析物。
68.按照權(quán)利要求67所述的方法，其進(jìn)一步包括以下步驟在將試樣施加到第一點(diǎn)樣器上后，對色譜測定裝置進(jìn)行培養(yǎng)，以便促進(jìn)分析物和第一特異性結(jié)合體之間的反應(yīng)。
69.一種用于檢測和/或測定在一種測試試樣中的一種免疫學(xué)上單價的分析物的方法，它包括以下步驟(a)在第一可對折構(gòu)件與第二可對折構(gòu)件未對折疊合時，將包括一種第一含水液體的試樣施加到權(quán)利要求63中所述的色譜測定裝置的第一點(diǎn)樣器上；(b)在第一可對折構(gòu)件與第三可對折構(gòu)件未對折疊合時，將一種包括一種第二含水液體的重新構(gòu)成液體施加到第二點(diǎn)樣器上；(c)在施加了試樣之后，將色譜測定裝置的第一和第二可對折構(gòu)件相互對折疊合，從而通過第一傳導(dǎo)體將試樣和被溶解的針對分析物的第一特異性結(jié)合體施加到色譜介質(zhì)的第一端；(d)然后，使試樣和被溶解的第一特異性結(jié)合體移動而至少通過一部分色譜介質(zhì)；(e)然后，將第一和第二可對折構(gòu)件分離開，使之不再疊合到一起；(f)然后，將第一和第三可對折構(gòu)件相互對折疊合，使被溶解的三元復(fù)合物通過第二傳導(dǎo)體施加到色譜介質(zhì)的第二端；(g)然后讓被溶解的三元復(fù)合物移動并至少通過一部分色譜介質(zhì)，這部分色譜介質(zhì)與試樣和被溶解的第一特異性結(jié)合體被抽吸所通過的色譜介質(zhì)部分是重疊的，從而當(dāng)測試試樣與分析物存在時，三元復(fù)合物就結(jié)合到固定在第二分散區(qū)域中的第二特異性結(jié)合體上；和(h)然后觀測和/或測定結(jié)合到含有固定的次特異性結(jié)合體的分散區(qū)域內(nèi)的兩個或多個帶區(qū)上的加標(biāo)記的分析物的模擬物，以便檢測和/或測定分析物，加標(biāo)記的分析物的模擬物所結(jié)合的帶區(qū)的數(shù)目隨著分析物的濃度的增加而增加。
70.一種由一種競爭免疫測定法檢測和/或測定試樣中的一種免疫學(xué)上單價的分析物的色譜測定裝置，其包括(a)一第一可對折構(gòu)件；它包含(i)一個具有一第一端和一第二端的色譜介質(zhì)，且在它上面的一些其面積都大大小于色譜介質(zhì)的分散區(qū)域和非重疊區(qū)域中固定有(A)一種能夠結(jié)合針對分析物的特異性結(jié)合體分析物的模擬物；和(B)一種次特異性結(jié)合體，該次特異性結(jié)合體能夠與一個對分析物具有親合力的特異性結(jié)合體對中的一個組分相結(jié)合，次特異性結(jié)合體本身缺乏對分析物的親合力；(ii)一個能讓與色譜介質(zhì)的第一端有作用性接觸的液體通過的傳導(dǎo)體；(b)一第二可對折構(gòu)件，它可以連接到第一可對折構(gòu)件上，從而將第一和第二可對折構(gòu)件相互對折疊合，而使液體從第二可對折構(gòu)件傳輸?shù)降谝豢蓪φ蹣?gòu)件，第二可對折構(gòu)件有一個點(diǎn)樣器，點(diǎn)樣器含有一種針對分析物的、形式為通過將一種含水液體加到點(diǎn)樣器中而能被溶解的特異性結(jié)合體；和其中，第一和第二可對折構(gòu)件的結(jié)構(gòu)是這樣設(shè)計的，即當(dāng)將第一和第二可對折構(gòu)件相互對折疊合時，則使傳導(dǎo)體與點(diǎn)樣器有作用性接觸，從而將點(diǎn)樣器的內(nèi)含物施加到色譜介質(zhì)上并使之至少通過一部分色譜介質(zhì)。
71.按照權(quán)利要求70所述的色譜測定裝置，其中，第一特異性結(jié)合體是對分析物有特異性的抗體。
72.按照權(quán)利要求70所述的色譜測定裝置，其中，分析物的模擬物包括共價地連接到一種蛋白上的分析物，該蛋白對分析物或分析物的特異性結(jié)合體缺乏特異性結(jié)合活性。
73.按照權(quán)利要求71所述的色譜測定裝置，其中，在不涉及分析物的抗體的抗原結(jié)合點(diǎn)是品種-特異性相互作用的基礎(chǔ)上，次特異性結(jié)合體與對分析物有特異性的抗體相結(jié)合。
74.按照權(quán)利要求70所述的色譜測定裝置，其中，第一可對折構(gòu)件進(jìn)一步包含一個用于吸收與色譜介質(zhì)的第二端有作用性接觸的液體的吸收體，以幫助液體通過色譜介質(zhì)的流動。
75.按照權(quán)利要求70所述的色譜測定裝置，其中，第二可對折構(gòu)件進(jìn)一步包含一個用于吸收從點(diǎn)樣器分離出的液體的吸收體，該吸收體是這樣設(shè)置在第二可對折構(gòu)件上，使得當(dāng)?shù)谝缓偷诙蓪φ蹣?gòu)件相互對折疊合后，吸收體則與色譜介質(zhì)的第二端有作用性接觸，以幫助液體通過色譜介質(zhì)的流動。
76.按照權(quán)利要求70所述的色譜測定裝置，其中，固定在色譜介質(zhì)上的次特異性結(jié)合體的區(qū)域分成至少兩個分散的且不重疊的帶區(qū)，每個帶區(qū)的次特異性結(jié)合體的數(shù)量是確定的，從而由針對分析物的加標(biāo)記的特異性結(jié)合體結(jié)合的帶區(qū)的數(shù)目指示出結(jié)合到檢測區(qū)上的針對分析物的加標(biāo)記的特異性結(jié)合體的數(shù)量，由此指示出試樣中分析物的數(shù)量。
77.一種用于檢測和/或測定在一種含水試樣中的一種免疫學(xué)上單價的分析物的方法，它包括以下步驟(a)在第一可對折構(gòu)件與第二可對折構(gòu)件未對折疊合時，將包括含水液體的試樣施加到權(quán)利要求70所述的色譜測定裝置的點(diǎn)樣器上；(b)在施加了試樣之后，將色譜測定裝置的第一和第二可對折構(gòu)相互對折疊合，從而通過傳導(dǎo)體將試樣和被溶解的針對分析物的加標(biāo)記的特異性結(jié)合體施加到色譜介質(zhì)的第一端；(c)然后，使試樣和被溶解的加標(biāo)記的特異性結(jié)合體移動而至少通過一部分色譜介質(zhì)，該部分至少包含分析物的模擬物和次特異性結(jié)合體的那些分散的和不重疊的區(qū)域；和(d)然后觀測和/或測定結(jié)合到特異性結(jié)合體的分散區(qū)域中的加標(biāo)記的特異性結(jié)合體，以便檢測和/或測定分析物。
78.一種用于檢測和/或測定在一種含水試樣中的一種免疫學(xué)上單價的分析物的方法，它包括以下步驟(a)在第一可對折構(gòu)件與第二可對折構(gòu)件未對折疊合時，將包含含水液體的試樣施加到權(quán)利要求76中所述的色譜測定裝置的點(diǎn)樣器上；(b)在施加了試樣之后，將色譜測定裝置的第一和第二可對折構(gòu)件相互對折疊合，從而通過傳導(dǎo)體將試樣和被溶解的針對分析物的加標(biāo)記的特異性結(jié)合體施加到色譜介質(zhì)的第一端；(c)然后，使試樣和被溶解的加標(biāo)記的特異性結(jié)合體移動而至少通過一部分色譜介質(zhì)，該部分至少包含分析物的模擬物和次特異性結(jié)合體的那些分散的和不重疊的區(qū)域；和(d)觀測和/或測定結(jié)合到含有固定的次特異性結(jié)合體的分散區(qū)域內(nèi)的兩個或多個帶區(qū)上的加標(biāo)記的特異性結(jié)合體，以便檢測和/或測定分析物，加標(biāo)記的分析物的模擬物所結(jié)合的帶區(qū)的數(shù)目隨著分析物的濃度的增加而增加。
79.按照權(quán)利要求4，19，35，39，41，49，57，59或70所述的色譜測定裝置，其中，可檢測的標(biāo)記物是一種可肉眼檢測的標(biāo)記物。
80.一種檢測和/或測定試樣中的一種分析物的色譜測定裝置，其包括(a)至少兩個基本上平面的可對折構(gòu)件，其中的一個基本上平面的可對折構(gòu)件在其表面上有一個色譜介質(zhì)；和(b)用于將可對折構(gòu)件相互對折疊合并在其上施加壓力的部件，該壓力大到足以能沿著一個大致垂直于可對折構(gòu)件的方向?qū)⒁后w從一個可對折構(gòu)件傳輸?shù)搅硪粋€可對折構(gòu)件，從而將一種試樣施加到色譜介質(zhì)上，以檢測和/或測定其上的分析物，用于將可對折構(gòu)件相互對折疊合的部件使可對折構(gòu)件有作用性接觸用以傳輸液體，從而可以在可對折構(gòu)件未對折疊合時將一種試樣施加到其中的一個可對折構(gòu)件上，然后在可對折構(gòu)件相互對折疊合后使試樣從其中的一個可對折構(gòu)件傳輸?shù)搅硪粋€可對折構(gòu)件。
81.按照權(quán)利要求80所述的色譜測定裝置，其中，至少基本上平面的可對折構(gòu)件中的一個可對折構(gòu)件上面有一個試樣制備區(qū)，用于在可對折構(gòu)件未對折疊合時接收要測試的一種試樣。
82.按照權(quán)利要求80所述的色譜測定裝置，其中，(i)至少其中的一個構(gòu)件的上面含有一種針對分析物的、加標(biāo)記的、其形式為通過加入一種含水液體能被溶解的第一特異性結(jié)合體，含水液體可以是一種試樣，第一加標(biāo)記的特異性結(jié)合體設(shè)置在構(gòu)件上能與試樣中的分析物起反應(yīng)的地方；和(ii)色譜介質(zhì)上面含有一個其上固定一種針對分析物的、未加標(biāo)記的、第二特異性結(jié)合體的檢測區(qū)，檢測區(qū)的面積大大小于色譜介質(zhì)的面積，從而如果在試樣中存在分析物時，則在檢測區(qū)中形成一個包括(1)第一加標(biāo)記的特異性結(jié)合體；(2)分析物；和(3)固定在第二特異性結(jié)合體的三元復(fù)合物，由此實(shí)施一種夾心法免疫測定。
83.按照權(quán)利要求80所述的色譜測定裝置，其中，在色譜介質(zhì)上面的一個大大小于色譜介質(zhì)面積的區(qū)域中含有一個特異性結(jié)合體對的一個組分，該特異性結(jié)合體對選自由一種分析物或其模擬物和一種針對分析物的特異性結(jié)合體構(gòu)成的組，從而測定裝置能夠?qū)υ嚇又械姆治鑫飳?shí)施一種競爭法免疫測定。
84.按照權(quán)利要求80所述的色譜測定裝置，其中，基本上平面的可對折構(gòu)件中的一個可對折構(gòu)件上面具有至少兩個分開的且不接觸的色譜介質(zhì)，從而能夠在其上面對分析物至少同時實(shí)施兩個檢測和/或測定。
85.按照權(quán)利要求80所述的色譜測定裝置，其中，在將試樣施加到色譜介質(zhì)上后，利用一種可肉眼檢測的加標(biāo)記的組分檢測和/或測定分析物，該可肉眼檢測的加標(biāo)記的組分選自于由一種連接到一種可肉眼檢測的標(biāo)記物上的分析物或其模擬物和一種連接到一種可肉眼檢測的標(biāo)記物上的針對分析物的特異性結(jié)合體構(gòu)成的組。
86.一種檢測和/或測定試樣中的一種分析物的色譜測定裝置，其包括(a)至少三個基本上平面的可對折構(gòu)件，其中的一個基本上平面的可對折構(gòu)件在其表面上有一個色譜介質(zhì)，該色譜介質(zhì)具有一第一端和一第二端；和(b)用于以至少兩種不同的組合中成對地將可對折構(gòu)件相互對折疊合并在其上施加壓力的部件，該壓力大到足以能沿著一個大致垂直于可對折構(gòu)件的方向?qū)⒁后w從一個可對折構(gòu)件傳輸?shù)搅硪粋€可對折構(gòu)件上，從而將一種試樣施加到色譜介質(zhì)上并通過色譜介質(zhì)從第一端流動到第二端，以檢測和/或測定色譜介質(zhì)上的分析物，用于將可對折構(gòu)件相互對折疊合的部件使可對折構(gòu)件以成對的組合方式有作用性接觸而傳輸液體，從而可以在可對折構(gòu)件未對折疊合時將一種試樣施加到其中的一個可對折構(gòu)件上，然后在將可對折構(gòu)件相互對折疊合后使試樣從其中的一個可對折構(gòu)件傳輸?shù)搅硪粋€可對折構(gòu)件；和(c)至少一個用于將液體施加到色譜介質(zhì)上的點(diǎn)樣器和一個用于吸收液體的吸收體，它們位于其中的一個可對折構(gòu)件上并這樣地設(shè)置，即當(dāng)由使可對折構(gòu)件相互對折疊合的部件將其上設(shè)有點(diǎn)樣器和吸收體的可對折構(gòu)件與其上設(shè)有色譜介質(zhì)的可對折構(gòu)件相互對折疊合后，則將一第二液體施加到色譜介質(zhì)上并通過色譜介質(zhì)從第二端流動到第一端，這種從第二端到第一端的流動由吸收體吸收液體來幫助完成，由此使通過色譜介質(zhì)的流動反向，在接著通過色譜介質(zhì)的流動的反向后對分析物作出檢測和/或測定。
87.按照權(quán)利要求86所述的色譜測定裝置，其中，至少其中的一個基本上平面的可對折構(gòu)件的上面有一個試樣制備區(qū)。
88.按照權(quán)利要求86所述的色譜測定裝置，其中(i)至少其中的一個構(gòu)件的上面含有一種針對分析物的、加標(biāo)記的、其形式為通過加入一種含水液體能被溶解的第一特異性結(jié)合體，含水液體可以是一種試樣，第一加標(biāo)記的特異性結(jié)合體設(shè)置在構(gòu)件上能與試樣中的分析物有反應(yīng)的位置；和(ii)色譜介質(zhì)上面含有一個檢測區(qū)，其上固定一種針對分析物的、未加標(biāo)記的、第二特異性結(jié)合體，檢測區(qū)的面積大大小于色譜介質(zhì)的面積，從而如果在試樣中存在分析物時，則在檢測區(qū)中形成一個包括(1)第一加標(biāo)記的特異性結(jié)合體；(2)分析物；和(3)固定的第二特異性結(jié)合體的三元復(fù)合物，由此實(shí)施一種夾心法免疫測定。
89.按照權(quán)利要求86所述的色譜測定裝置，其中，在色譜介質(zhì)上面的一個大大小于色譜介質(zhì)面積的區(qū)域中含有一個特異性結(jié)合體對的一個組分，該特異性結(jié)合體對選自于由一種分析物或其模擬物和一種針對分析物的特異性結(jié)合體構(gòu)成的組，從而測定裝置能夠?qū)υ嚇又械姆治鑫飳?shí)施一種競爭法免疫測定。
90.按照權(quán)利要求86所述的色譜測定裝置，其中，基本上平面的可對折構(gòu)件中的一個可對折構(gòu)件上面具有至少兩個分開的不接觸的色譜介質(zhì)，每個色譜介質(zhì)都有一第一端和一第二端，從而能夠在其上面對分析物至少同時實(shí)施兩次檢測和/或測定。
91.按照權(quán)利要求86所述的色譜測定裝置，其中，在將試樣施加色譜介質(zhì)上后，利用一種可肉眼檢測的加標(biāo)記的組分檢測和/或測定分析物，該可肉眼檢測的加標(biāo)記的組分選自于由一種連接到一種可肉眼檢測的標(biāo)記物上的分析物或其模擬物和一種連接到一種可肉眼檢測的標(biāo)記物上的針對分析物的特異性結(jié)合體構(gòu)成的組。
全文摘要
一種與免疫測定一起使用的色譜測定裝置。該裝置包括(1)一第一可對折構(gòu)件(11)，它有一個能夠接收要測定的試樣的試樣制備區(qū)，和(2)一第二可對折構(gòu)件，它有一色譜介質(zhì)(14)；第一和第二可對折構(gòu)件可疊合起來，使試樣制備區(qū)(13)將要測試的試樣施加到色譜介質(zhì)上。用一種肉眼可檢測的標(biāo)記物檢測分析物。這種裝置可以組裝在試驗(yàn)箱，同時也公開了應(yīng)用這種裝置的測定方法，既包括夾心法也包括競爭法。
文檔編號B01L3/00GK1124524SQ94192256
公開日1996年6月12日 申請日期1994年3月31日 優(yōu)先權(quán)日1993年3月31日
發(fā)明者H·M·錢德勒, R·N·皮亞索, K·普勞蒂 申請人:史密絲克萊恩診斷公司