一種IgG1吸附劑及其制備方法和應(yīng)用
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明涉及一種屬于醫(yī)學(xué)領(lǐng)域，具體涉及一種可用于血液灌流的IgGl吸附劑及 其制備方法和應(yīng)用。
【背景技術(shù)】
[0002] 腎移植受者體內(nèi)群體反應(yīng)性抗體（PRA)的存在及該抗體的致敏程度對于移植 術(shù)后發(fā)生急性排斥反應(yīng)關(guān)系甚為密切，對移植器官的存活率也有顯著影響。免疫高敏 (PRA>80% )即PRA水平較高患者的腎移植效果較差，患者易產(chǎn)生超急性、加速性、急性排斥 反應(yīng)，直接導(dǎo)致移植物失功或縮短移植術(shù)后腎存活時間。有研宄發(fā)現(xiàn)只有IgG類抗HLA抗 體才是真正影響器官移植物存活的抗體。
[0003] 目前，對高PRA水平患者進行預(yù)處理以使其可接受腎移植手術(shù)是全球性難題。臨 床常用的手段及其限制如下：（1)良好的HLA配型，可杜絕或減少急性排斥的發(fā)生率，但等 待合適配型會導(dǎo)致手術(shù)時間延后。（2)靜脈注射小劑量免疫球蛋白（IvIG)或聯(lián)合血漿置換 (PP)進行脫敏治療也經(jīng)常采用，但術(shù)后急性排斥反應(yīng)（AHR)發(fā)生率較高。（3)血漿置換能 夠清除部分PRA抗體，但有益物質(zhì)的丟失尤其此法本身就是一種容易引起人體致敏反應(yīng)的 方式，使用受到限制。（4)使用新型免疫抑制劑如Neoral、MMF、FK506等，其抗排斥反應(yīng)功 能得到公認，但是除了藥物價格昂貴且需長期服用外，對人體的毒副性作用也不容忽視。
[0004] 目前臨床應(yīng)用較多、效果較好的方式是免疫吸附（IA)，最具有代表性的是1986年 首次應(yīng)用于抗移植排斥反應(yīng)蛋白A免疫吸附劑。蛋白A吸附材料對多種免疫性疾病的治療 有效性已經(jīng)得到證實，并獲得美國FDA批準。但是，蛋白A吸附材料也存在一些缺陷，從而 限制了它的推廣。首先，蛋白A價格高昂，給普通患者帶來了沉重的經(jīng)濟負擔(dān)；其次，蛋白A 作為一種蛋白質(zhì)配基而容易變性，吸附材料的生產(chǎn)、運輸、保存和使用帶來不便；其三，蛋白 A是一種生物源性大分子，如果脫落容易給患者帶來風(fēng)險。
[0005] 另外，蛋白A吸附柱等免疫吸附劑采用的載體活化方法一般采用環(huán)氧氯丙烷法， 手臂分子只有四個原子，鏈節(jié)較短，對于IgG類大分子的吸附存在空間位置上的需求難以 匹配。如果想延長手臂分子，最通常的方法是先將多糖類載體的羥基用環(huán)氧氯丙烷接上二 胺類間隔臂，再經(jīng)醛化（如戊二醛）后與配基偶聯(lián)生成希夫堿，最后還原希夫堿雙鍵得到吸 附材料。該制備方法中，活化步驟繁瑣，且經(jīng)過多步反應(yīng)后，載體上用于固載配基的活性官 能團不斷減少。因此，增加了免疫吸附劑的制備成本，并影響了其吸附性能。
[0006] 因此，如何克服蛋白A吸附材料的這些缺陷，設(shè)計和構(gòu)建既具有相當(dāng)?shù)腎gG吸附能 力的免疫吸附效率，又具有穩(wěn)定的物理化學(xué)性質(zhì)，且具有相對低廉的成本的新型免疫吸附 劑，具有重要的研宄價值和現(xiàn)實意義。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0007] 本發(fā)明的第一目的在于克服吸附材料的缺陷，提供一種安全、有效、成本低廉，性 能穩(wěn)定可靠的IgGl吸附劑。本發(fā)明的第二目的是提供上述IgGl吸附劑的制備方法。本 發(fā)明第三個目的在于提供上述IgGl吸附劑的應(yīng)用，在血液中IgGl的吸附和臨床上清除與 IgGl相關(guān)的器官移植領(lǐng)域的群體性反應(yīng)抗體（PRA)的應(yīng)用。
[0008] 本發(fā)明的第一個方面是提供一種IgGl吸附劑，采用酸酐交聯(lián)后的瓊脂糖微球或 纖維素微球作為載體，所述酸酐為乙二胺四乙酸酐、1，4-二苯二胺四乙酸酐或1，4-二芐二 胺四乙酸酐，所述配基為酪氨酸或色氨酸；
[0009] 所述酸酐交聯(lián)后的瓊脂糖微球或纖維素微球的化學(xué)結(jié)構(gòu)式如下所示：
[0010]
【主權(quán)項】
1. 一種IgGl吸附劑，其特征在于，采用酸酐交聯(lián)后的瓊脂糖微球或纖維素微球作為載 體，所述酸酐為乙二胺四乙酸酐、1，4-二苯二胺四乙酸酐或1，4-二芐二胺四乙酸酐，所述 配基為酪氨酸或色氨酸； 所述酸酐交聯(lián)后的瓊脂糖微球或纖維素微球的化學(xué)結(jié)構(gòu)式如下所示：
所述IgGl吸附劑的化學(xué)結(jié)構(gòu)式如下所示： -
7 其中， W為瓊脂糖微球或纖維素微球， X為酸酐交聯(lián)后的瓊脂糖微球或纖維素微球， Y為亞乙基、對亞苯基或?qū)喍妆交? R為對羥基苯基或β-吲哚基。
2. -種權(quán)利要求1所述的IgGl吸附劑的制備方法，其特征在于，活化載體的酸酐的有 效量為110-180 μ mol/ml，載體固載配基的量為70-130 μ mol/ml。
3. -種權(quán)利要求1所述的IgGl吸附劑的制備方法，其特征在于，包括以下步驟： (a) 瓊脂糖微球或纖維素微球的交聯(lián)：將瓊脂糖微球或纖維素微球、酸酐和液態(tài)有機 堿在30-40°C下反應(yīng)4-10h，過濾，產(chǎn)物用水洗，其中，瓊脂糖微球或纖維素微球、酸酐和液 態(tài)有機堿的體積比為1 : (0.01-0.2) : (20-50); (b) 載體的活化：將交聯(lián)后得到的載體與酸酐和液態(tài)有機堿在20-30 °C下反應(yīng) 4-12h，過濾，產(chǎn)物用水洗，其中，交聯(lián)后得到的載體、酸酐和液態(tài)有機堿的體積比為 1 ： (0.01-0. 2) ： (20-50)； (c) 配基的固載：將活化后的載體與配基和液態(tài)有機堿在0-40 °C下反 應(yīng)4-10h，產(chǎn)物用水洗，其中，活化后的載體、配基和液態(tài)有機堿的用量比為 ImL ： (0. 05-0. 2g) ： (4〇-60mL) 〇
4. 根據(jù)權(quán)利要求3所述的制備方法，其特征在于，步驟a中，瓊脂糖微球或纖維素微球、 酸酐和液態(tài)有機堿的體積比為I : (0.05-0. 1) : 30;步驟b中，交聯(lián)后得到的載體、酸酐 和液態(tài)有機堿的體積比為I : (0.05-0. 1) : 30;步驟c中，活化后的載體、配基和液態(tài)有 機堿的用量比為ImL : 0. Ig : 50mL。
5. 根據(jù)權(quán)利要求3所述的制備方法，其特征在于，所述液態(tài)有機堿選自吡啶、三乙胺、 三甲胺、三乙醇胺、二乙醇胺、N，N-二異丙基乙胺、二異丙基胺和喹啉中的一種或多種。
6. 根據(jù)權(quán)利要求3所述的制備方法，其特征在于，所述瓊脂糖微球采用反相懸浮包埋 法或膜乳化法制備而成；所述纖維素微球采用乳化-固化法、噴霧干燥法或凝聚法制備而 成。
7. 根據(jù)權(quán)利要求6所述的制備方法，其特征在于，所述瓊脂糖微球具體按照下述步驟 制備而成： 將瓊脂糖粉溶于水中配成質(zhì)量百分濃度為4-15 %的瓊脂糖溶液；將溶解好的瓊脂糖 溶液加入到含分散劑的油相中，45-65°C下攪拌分散約0. 5-1. 5h使瓊脂成球，冷卻，停止攪 拌并出料、洗滌即得瓊脂糖微球； 其中，所述油相為色拉油、200#溶劑油和正己烷中的一種或多種；所述分散劑為司盤 85、司盤80、吐溫80和吐溫20中的一種或多種，所述分散劑在油相中的質(zhì)量百分濃度為 0. 5-5. 0% ;所述瓊脂糖溶液與油相體積比為1 : (1-5)。
8. 根據(jù)權(quán)利要求6所述的制備方法，其特征在于，所述纖維素微球具體按照下述步驟 制備而成： 將纖維素樹脂溶解在有機溶劑中配成質(zhì)量百分濃度為6-20%的纖維素溶液，然后加入 致孔劑，攪拌均勻后，加入到含分散劑的水相中，25-35°C下攪拌4-10小時，停止攪拌并出 料、洗滌，然后進行皂化處理，即得纖維素微球； 其中，纖維素溶液與致孔劑的體積比為（100-200) : (120-250);纖維素溶液與致孔劑 的總體積與水相的體積比為（1-5) : (1-5)。
9. 根據(jù)權(quán)利要求8所述的制備方法，其特征在于，所述致孔劑由體積比為 (50-85) : (15-35) : (70-120)的十二醇、乙醇和鄰苯二甲酸二甲酯組成；所述分散劑為 明膠和聚乙烯醇的混合物，二者的質(zhì)量比為（7-11) : 1。
10. 根據(jù)權(quán)利要求3或8所述的制備方法，其特征在于，制備所述纖維素微球的纖維素 樹脂為二醋酸纖維素。
【專利摘要】本吸附劑通過乙二胺四乙酸酐、1,4-二苯二胺四乙酸酐或1,4-二芐二胺四乙酸酐交聯(lián)、活化瓊脂糖或纖維素，然后與酪氨酸或色氨酸溶液反應(yīng)而制得。本發(fā)明的載體具有良好的血液相容性和機械性能，所用交聯(lián)活化成步驟簡單、制備安全，交聯(lián)活化試劑兼有間隔手臂和吸附功能基團的雙重用途；吸附劑通過空間選擇、電荷作用及疏水作用實現(xiàn)對免疫球蛋白IgG1的相對特異性吸附，而對IgM和IgA吸附率較低，吸附率IgG1/IgM(IgA)＝2-4，此吸附劑可用于對血液中IgG1的吸附和臨床上與IgG1相關(guān)的器官移植領(lǐng)域的群體性反應(yīng)抗體(PRA)的清除。
【IPC分類】B01J20-30, B01D15-00, B01J20-28, B01J20-26
【公開號】CN104525150
【申請?zhí)枴緾N201410698607
【發(fā)明人】董凡, 郭延河
【申請人】珠海健帆生物科技股份有限公司
【公開日】2015年4月22日
【申請日】2014年11月26日