超支化固定金屬親和色譜固定相及其制備方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明涉及一種超支化固定金屬離子親和色譜固定相及其制備方法。
【背景技術(shù)】
[0002] 蛋白質(zhì)作為生命的物質(zhì)基礎(chǔ)，對(duì)生命活動(dòng)有著重要的意義。隨著生物科技的發(fā)展， 對(duì)一些醫(yī)療產(chǎn)品如抗生素，疫苗，抗體，多肽，治療性蛋白質(zhì)等的分離與純化變得越來越重 要。然而蛋白質(zhì)等生物大分子一般以復(fù)雜混合物的形式存在，且具有特殊性質(zhì)，如對(duì)溫度， 酸堿度，有機(jī)溶劑敏感等問題，僅根據(jù)其理化性質(zhì)分離幾乎不能取得很好的效果。親和色譜 是一類在分離介質(zhì)上修飾合適的配基，與蛋白進(jìn)行特異性結(jié)合而實(shí)現(xiàn)蛋白純化的方法，特 異性高，應(yīng)用廣泛。作為親和色譜的一種，固定金屬親和色譜由于其選擇性好，重現(xiàn)性高，分 辨率高，廣泛用于含組氨酸標(biāo)簽蛋白分子的特異性識(shí)別與分離。當(dāng)以膜材料作為色譜固定 相時(shí)，由于其壓降小，軸向擴(kuò)散路徑短，容易擴(kuò)大生產(chǎn)等優(yōu)點(diǎn)，成為近幾年的研宄熱點(diǎn)。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0003] 本發(fā)明的目的之一在于提供一種超支化固定金屬離子親和色譜固定相。
[0004] 本發(fā)明另一目的是提供超支化固定金屬離子親和色譜固定相的制備方法，以表面 含有羥基的色譜固定相為基質(zhì)，利用超支化的方法對(duì)材料進(jìn)行表面改性，在膜表面引入大 量氨基后，再通過環(huán)氧基引入氨基羧酸配基，最后螯合金屬離子，成功制備超支化固定金屬 離子親和膜。
[0005] 本發(fā)明還進(jìn)一步提供了上述材料的應(yīng)用，將該制備的固定化金屬親和色譜固定相 用于純化蛋清中溶菌酶。
[0006] 本發(fā)明實(shí)現(xiàn)過程如下： 結(jié)構(gòu)式（I)所示的超支化固定金屬親和色譜固定相，
【主權(quán)項(xiàng)】
1. 結(jié)構(gòu)式（I)所示的超支化固定金屬親和色譜固定相，
2. 權(quán)利要求1所述超支化固定金屬親和色譜固定相的制備方法，其特征在于包括如下 步驟： (1) 色譜固定相預(yù)處理：將色譜固定相經(jīng)甲醇浸泡去除表面油脂及粘附雜質(zhì)，用甲醇 和水反復(fù)洗滌干燥，所述的色譜固定相為硅膠、殼聚糖或表面修飾有硅羥基的磁性納米材 料； (2) 色譜固定相表面氨基化：將色譜固定相先與環(huán)氧氯丙烷反應(yīng)，然后與三-(2-氨 基）乙基胺反應(yīng)得到氨基化色譜固定相；
(3) 將氨基化色譜固定相依次與丙烯酸甲酯和乙二胺通過邁克加成反應(yīng)和酰胺化反 應(yīng)在膜表面形成超支化結(jié)構(gòu)；
(4)最后引入IDA型配基：將步驟（3)制備的超支化色譜固定相與環(huán)氧氯丙烷反應(yīng)引入 環(huán)氧基，進(jìn)一步與氨基羧酸反應(yīng)使膜表面產(chǎn)生IDA型金屬螯合配基；

3. 螯合有金屬離子Co2+、Zn2+、Cu2+、Ni2+、Fe3+、Ga3+、Zr4+或Ti4+的超支化固定金屬親和 色譜固定相。
4. 權(quán)利要求1所述超支化固定金屬親和色譜固定相在蛋白分離與純化中的應(yīng)用。
5. 根據(jù)權(quán)利要求4所述應(yīng)用，其特征在于：超支化固定金屬親和色譜固定相螯合Co2+、 Zn2+、Cu2+或Ni2+時(shí)，用于His-tagged蛋白的分離與純化。
6. 螯合Fe3+、Ga3+、Zr4+或Ti4+的超支化固定金屬親和色譜固定相在富集磷酸化鈦中的 應(yīng)用。
【專利摘要】本發(fā)明公開了結(jié)構(gòu)通式（I）所示的超支化固定金屬親和色譜固定相，其在色譜固定相表面運(yùn)用超支化的方法對(duì)材料表面改性，提高了材料表面功能基團(tuán)密度，對(duì)蛋白有較高的吸附容量。本發(fā)明所制備的色譜固定相具有金屬螯合色譜分離性能，將其用于分離蛋清中的溶菌酶，可取得很好的分離效果和較高的蛋白回收率。
【IPC分類】C07K1-22, B01D15-38, C01B25-37, B01J20-30, B01J20-286
【公開號(hào)】CN104841404
【申請(qǐng)?zhí)枴緾N201510223120
【發(fā)明人】符瑞, 衛(wèi)引茂
【申請(qǐng)人】西北大學(xué)
【公開日】2015年8月19日
【申請(qǐng)日】2015年5月6日