一種分離藤黃酸差向異構體的方法
【專利摘要】本發(fā)明涉及一種分離藤黃酸差向異構體的方法。采用的技術方案是：將藤黃酸溶于乙腈中，然后將藤黃酸的乙腈溶液注入高效液相色譜儀中，使用C8硅膠色譜柱，以有機溶劑和水的混合溶液為流動相，控制流速0.8～1.0ml/min，柱溫25～35℃下進行分離。所述的有機溶劑是甲醇或乙腈。本發(fā)明使用普通的C8色譜柱，通過對流動相及其配比的篩選，可快速分離藤黃酸C?2位的差向異構體，僅需17.290min，即可快速分離藤黃酸的R、S構型，兩者的分離度可達4.00左右，且純度達98％以上。
【專利說明】
一種分離藤黃酸差向異構體的方法
技術領域
[0001] 本發(fā)明涉及一種分離藤黃酸差向異構體的方法，具體涉及用C8硅膠色譜柱分離藤 黃酸C-2位R構型及S構型的方法。
[0002] 背景要求
[0003] 藤黃酸(gambogic acicUGA)是藤黃的主要活性成分，是一種從藤黃科植物提取出 來的橙黃色到棕褐色的樹脂。其可以選擇性地誘導腫瘤細胞凋亡，在體內外都展現(xiàn)出了廣 泛的較強的抗腫瘤作用，而對正常的造血系統(tǒng)和免疫功能無明顯抑制效果。
[0004] 藤黃酸的C-2位存在一對差向異構體，即R構型（結構式如A)和S構型(結構式如B)。 化合物空間構型對其生物活性的影響是藥物的重要研究領域，在藥物研究中手性藥物異構 體的質量控制至關重要。差向異構體可能存在多種理化性質及作用效果的不同，如甘草酸 的C-18位存在一對差向異構體，分別為α-甘草酸和β-甘草酸，兩者除理化性質的差異外，藥 理作用、不良反應和臨床療效也存在相當?shù)牟町愋浴９士紤]藤黃酸的R、S構型可能存在不同 的藥效或者優(yōu)于藤黃酸的藥效，所以快速分離檢測藤黃酸的差向異構體，具有重要的意義， 可便于對其進行進一步的藥理和臨床研究，為開發(fā)療效好且毒副作用小的新型抗腫瘤藥物 創(chuàng)造條件。
[0005]
[0006] 目前，有文獻報道，可通過高效逆流色譜來分離藤黃酸C-2位的差向異構體，耗時 長，僅第一次循環(huán)就需要150min，兩物質分開時需要800min，純度分別為97.2%、97.5 %，且 需要使用高速逆流色譜儀，設備要求高。張俊艷等通過高效液相，采用價格較貴Sun Fire (Waters) C8 (2 · Imm X 150mm，3 · 5μηι)，鑒定藤黃酸C-2位的差向異構體。此方法出峰時間在 36min左右，耗時較長。故尋找一種快速分離藤黃酸R、S構型的方法迫在眉睫。

【發(fā)明內容】

[0007] 本發(fā)明的目的是克服已有的分離藤黃酸R、S構型方法，成本高、耗時長等缺點，提 供一種使用普通C8硅膠色譜柱的快速分離藤黃酸R、S構型的方法，且得到目標物的純度高 達98%以上。
[0008] 本發(fā)明采用的技術方案是:一種分離藤黃酸差向異構體的方法，方法如下:將藤黃 酸溶于乙腈中，然后將藤黃酸的乙腈溶液注入高效液相色譜儀中，使用C8硅膠色譜柱，以有 機溶劑和水的混合溶液為流動相，控制流速〇. 8~1.0 ml/min，柱溫25~35°C下進行分離。
[0009] 上述的一種分離藤黃酸差向異構體的方法，所述的有機溶劑是甲醇或乙腈。優(yōu)選 的，所述的有機溶劑是乙腈。
[0010] 上述的一種分離藤黃酸差向異構體的方法，所述的流動相中，按體積比，有機溶 劑:水=83-78:17-22。優(yōu)選的，按體積比，有機溶劑:水=83:17。
[0011] 本發(fā)明的有益效果是:本發(fā)明使用普通的C8硅膠色譜柱，通過對流動相及其配比 的篩選，可快速分離藤黃酸C-2位的差向異構體，僅需17.290min即可快速分離藤黃酸的R、S 構型，兩者的分離度可達4.00左右，且純度達98%以上。
【附圖說明】
[0012]圖1是實施例2中乙腈和水的配比為83:17時，對藤黃酸差向異構體的分離。
[0013]圖2是實施例2中乙腈和水的配比為82:18時，對藤黃酸差向異構體的分離。
[0014]圖3是實施例2中乙腈和水的配比為81:19時，對藤黃酸差向異構體的分離。
[0015]圖4是實施例2中乙腈和水的配比為75:25時，對藤黃酸差向異構體的分離。
【具體實施方式】
[0016] 實施例1有機溶劑對分離藤黃酸差向異構體的影響
[0017] 儀器與條件：安捷倫高效液相色譜儀1200，色譜柱:C8硅膠色譜柱（250mm*4.6mm， 5um);檢測波長：360nm。
[0018] 方法:將藤黃酸溶解于乙腈中，然后將藤黃酸的乙腈溶液注入高效液相色譜儀中， 流動相如表1所示，控制流速I .〇ml/min，柱溫35°C下進行分離，結果如表1。
[0019] 表1
[0021]由表1可見，以甲醇和水的混合溶液為流動相，R構型的出峰時間為35.236min，而 以乙腈和水的混合溶液為流動相，R構型的出峰時間為23.702min，可見，以乙腈為流動相中 的有機溶劑，分離速度快，因此本發(fā)明優(yōu)選有機溶劑為乙腈。
[0022]實施例2乙腈和水的配比對分離藤黃酸差向異構體的影響
[0023]儀器與條件：安捷倫高效液相色譜儀1200，色譜柱:C8硅膠色譜柱（250mm*4.6mm， 5um);檢測波長：360nm。
[0024] 方法:將藤黃酸溶解于乙腈中，然后將藤黃酸的乙腈溶液注入高效液相色譜儀中， 流動相如表2所示，控制流速I .Oml/min，柱溫35°C下進行分離，結果如表2和圖1-圖4。
[0025] 表 2
[0027] 由表2和圖1-4可見，固定柱溫及流速不變時，改變流動相中乙腈與水的比例，藤黃 酸R、S構型的出峰時間及分離度呈現(xiàn)一定的規(guī)律性。若是增大水的比例，R、S構型的出峰時 間變長;若是增大乙腈的比例，R、S構型的出峰時間變短但兩者不能分離開。在比例為83:17 時，R、S構型的出峰時間最短且能達到完全分離(分離度> 1.5)。所以，優(yōu)選乙腈:水=83:17。
[0028] 實施例3流速對分離藤黃酸差向異構體的影響
[0029]儀器與條件：安捷倫高效液相色譜儀1200，色譜柱:C8硅膠色譜柱（250mm*4.6mm， 5um);檢測波長：360nm。
[0030] 方法:將藤黃酸溶解于乙腈中，然后將藤黃酸的乙腈溶液注入高效液相色譜儀中， 流動相為按體積比，乙腈:水=83 :17，如表3控制流速，柱溫35°C下進行分離，結果如表3所 不。
[0031] 表3
[0033]由表3可見，固定柱溫及流動相中乙腈與水的比例，改變流速，藤黃酸的R、S構型呈 現(xiàn)一定的規(guī)律。高效液相的流速一般不超過1.0 ml/min，隨著流速的減小，出峰時間變長，所 以優(yōu)選流速為I .Oml/min。
[0034]實施例4柱溫對分離藤黃酸差向異構體的影響
[0035]儀器與條件：安捷倫高效液相色譜儀1200，色譜柱:C8硅膠色譜柱（250mm*4.6mm， 5um);檢測波長：360nm。
[0036] 方法:將藤黃酸溶解于乙腈中，然后將藤黃酸的乙腈溶液注入高效液相色譜儀中， 流動相為按體積比，乙腈:水= 83:17,控制流速I .Oml/min，如表4控制柱溫進行分離，結果 如表4所示。
[0037] 衷 4
[0039]由表4可見，固定流速及流動相中乙腈與水的比例不變時，改變柱溫，藤黃酸R、S構 型的出峰時間及分離度呈現(xiàn)一定的規(guī)律性。若是降低柱溫，R、S構型的出峰時間變長，分離 度R>1.5。若是增大柱溫，R、S構型的出峰時間變短且分離度>1.5,但是色譜柱的最大耐受溫 度為40°C，故選擇柱溫為35°C。
【主權項】
1. 一種分離藤黃酸差向異構體的方法，其特征在于:方法如下：將藤黃酸溶于乙腈中， 然后將藤黃酸的乙腈溶液注入高效液相色譜儀中，使用C8硅膠色譜柱，以有機溶劑和水的 混合溶液為流動相，控制流速0.8~1.0ml/min，柱溫25~35 °C下進行分離。2. 根據(jù)權利要求1所述的一種分離藤黃酸差向異構體的方法，其特征在于:所述的有機 溶劑是甲醇或乙臆。3. 根據(jù)權利要求2所述的一種分離藤黃酸差向異構體的方法，其特征在于:所述的有機 溶劑是乙臆。4. 根據(jù)權利要求1、2或3所述的一種分離藤黃酸差向異構體的方法，其特征在于:所述 的流動相中，按體積比，有機溶劑:水=83-78:17-22。5. 根據(jù)權利要求4所述的一種分離藤黃酸差向異構體的方法，其特征在于:所述的流動 相中，按體積比，有機溶劑:水=83:17。6. 根據(jù)權利要求1、2或3所述的一種分離藤黃酸差向異構體的方法，其特征在于:所述 的藤黃酸差向異構體為，藤黃酸C-2位的一對差向異構體，R構型和S構型。
【文檔編號】B01D15/38GK106039766SQ201610327514
【公開日】2016年10月26日
【申請日】2016年5月17日
【發(fā)明人】陳立江, 劉宇, 王芳, 梁嘯, 王欣, 王朝勃, 張金鳳
【申請人】遼寧大學