用于全血樣品檢測的磁微?；瘜W(xué)發(fā)光雙層微流控芯片的制作方法
【專利摘要】本實用新型涉及一種用于全血樣品檢測的磁微?；瘜W(xué)發(fā)光雙層微流控芯片，其包括頂板(1)和底板(2)，其中頂板包含加樣口(4)、樣本填充區(qū)(12)、標(biāo)記配體存儲池(5)和樣本混合區(qū)(13)；底板包含過濾區(qū)(6)、磁顆粒包被區(qū)(7)、清洗區(qū)(14)、檢測區(qū)(8)、清洗液存儲池(9)、發(fā)光基底液存儲池(10)、液體釋放通道(16)；所述加樣口和標(biāo)記配體存儲池由樣本填充區(qū)連接，標(biāo)記配體存儲池與樣本混合區(qū)連接；所述底板的檢測區(qū)與清洗液存儲池和發(fā)光基底液存儲池通過液體釋放通道連接；所述過濾區(qū)、磁顆粒包被區(qū)、清洗區(qū)、檢測區(qū)依次連接；所述樣本混合區(qū)末端與過濾區(qū)連通，本實用新型芯片檢測靈敏度高、線性范圍寬，定量準(zhǔn)確。
【專利說明】
用于全血樣品檢測的磁微?；瘜W(xué)發(fā)光雙層微流控芯片
技術(shù)領(lǐng)域
[0001]本發(fā)明涉及一種利用磁微粒化學(xué)發(fā)光技術(shù)和微流控芯片技術(shù)實現(xiàn)分析物高靈敏定量檢測的芯片，特別公開了一種用于全血樣品檢測的磁微?；瘜W(xué)發(fā)光雙層微流控芯片， 可應(yīng)用于生物醫(yī)學(xué)研究、臨床診斷、生化檢測、司法鑒定，屬于微流控芯片化學(xué)發(fā)光免疫檢測技術(shù)領(lǐng)域?！颈尘凹夹g(shù)】
[0002]目前，體外診斷(IVD)主要有兩種發(fā)展趨勢:一種是自動化、一體集成化，即利用大型醫(yī)院配套的中心實驗室的全自動化、高靈敏的大型儀器設(shè)備，實現(xiàn)高精度的疾病分析診斷；另一種小型化、床旁化，即通過掌上小型簡易設(shè)備，實現(xiàn)現(xiàn)場快速分析診斷。小型醫(yī)院資金不足、樣本量少，并不適合購買價格昂貴的大型設(shè)備?，F(xiàn)階段小型快速檢測設(shè)備主要是試紙條及其配套設(shè)備，但試紙條只能實現(xiàn)定性或半定量檢測，檢測靈敏度低、特異性差、重復(fù)性差、受干擾明顯。由于中國人口眾多，老齡化加劇，發(fā)病率劇增，單純依靠大型醫(yī)院已不堪重負(fù)。因此研制操作簡便、靈敏度高、重復(fù)性好和定量準(zhǔn)確的快速檢測方法和設(shè)備變得極為迫切。
[0003]化學(xué)發(fā)光是指化學(xué)反應(yīng)過程中的反應(yīng)中間體、反應(yīng)產(chǎn)物或外加發(fā)光試劑將化學(xué)能轉(zhuǎn)變?yōu)楣饽艿默F(xiàn)象。與熒光和吸收光相比，化學(xué)發(fā)光沒有外來激發(fā)光源背景信號干擾，交叉干擾小，具有靈敏度高、線性范圍寬等優(yōu)點。由此建立的化學(xué)發(fā)光分析已廣泛應(yīng)用于臨床診斷等領(lǐng)域?；瘜W(xué)發(fā)光儀是IVD主要的大型分析檢測設(shè)備。
[0004]微流控芯片技術(shù)是把生物、化學(xué)、醫(yī)學(xué)分析過程的樣品制備、反應(yīng)、分離、檢測等基本操作單元集成到一塊微米尺度的芯片上，自動完成分析全過程。由于它在生物、化學(xué)、醫(yī)學(xué)等領(lǐng)域的巨大潛力，已經(jīng)發(fā)展成為一個生物、化學(xué)、醫(yī)學(xué)、流體、材料、機(jī)械等多學(xué)科交叉的研究領(lǐng)域，被應(yīng)用于生物醫(yī)學(xué)研究、生化檢測、司法鑒定等領(lǐng)域。如中國專利 201110006837.3描述了一種可定位的微流控芯片，該微流控芯片由圍欄陣列層、底片和蓋層組成，可用于體外受精、檢測神經(jīng)膠質(zhì)細(xì)胞對神經(jīng)元作用、構(gòu)建神經(jīng)網(wǎng)絡(luò)和檢測細(xì)胞生長狀態(tài)等。
[0005]但將化學(xué)發(fā)光和微流控芯片結(jié)合起來的資料及文獻(xiàn)并不多，實用及可產(chǎn)業(yè)化的更少，如中國專利200910114403.8描述了一種微流控芯片化學(xué)發(fā)光測定人單個血紅細(xì)胞內(nèi)物質(zhì)的方法，其需依賴顯微鏡平臺或透鏡和濾光片組成的復(fù)雜光路；中國專利 200910154432.7公開了毛細(xì)管電泳分離和化學(xué)發(fā)光檢測的微流控芯片，其流路結(jié)構(gòu)單一， 進(jìn)樣未經(jīng)充分混合從而導(dǎo)致反應(yīng)效率較低，無法達(dá)到最大發(fā)光強(qiáng)度。
[0006]故現(xiàn)有技術(shù)主要存在如下缺點:
[0007]1)現(xiàn)有快速診斷方法主要定性或半定量的試紙條，其靈敏度低、重復(fù)性差、受干擾明顯。
[0008]2)現(xiàn)有化學(xué)發(fā)光微流控芯片結(jié)構(gòu)設(shè)計簡單，檢測時操作復(fù)雜，檢測時間長，所需試劑多通過外部壓力注入芯片。
[0009]3)現(xiàn)有化學(xué)發(fā)光微流控芯片其檢測系統(tǒng)依賴大型設(shè)備，如顯微鏡平臺、生物芯片掃描儀等。
[0010]另外，基于微流控芯片實現(xiàn)的反應(yīng)和分析，其基本過程是在芯片內(nèi)預(yù)封裝或者從外部引入一種或多種反應(yīng)試劑，然后將液體樣本加入芯片，樣本按照預(yù)先設(shè)定的微通道流路與試劑接觸并進(jìn)行反應(yīng)，通過儀器或者肉眼對結(jié)果進(jìn)行讀取。目前微流控芯片主流的檢測手段包括激光誘導(dǎo)熒光、化學(xué)發(fā)光和紫外吸收等。要實現(xiàn)分析結(jié)果的準(zhǔn)確性，最重要的微通道內(nèi)多種液體要準(zhǔn)確定量的按照預(yù)先設(shè)定的通道在指定的時間內(nèi)到達(dá)指定位置。但是實際情況并不一定理想，由于芯片或者樣本的原因，微流控芯片內(nèi)的反應(yīng)可能并沒有按照設(shè)定的過程進(jìn)行，如產(chǎn)生氣泡導(dǎo)致芯片內(nèi)液體流動停止，或者芯片發(fā)生滲漏導(dǎo)致液體無法填充各預(yù)定通道等，這些都會使預(yù)定反應(yīng)的試劑或底物之間反應(yīng)不完全，使得分析結(jié)果產(chǎn)生錯誤。但是由于芯片內(nèi)的反應(yīng)是自動完成，實驗者或檢測者看到的只是最終結(jié)果，缺少對中間過程的監(jiān)控，這樣必然會導(dǎo)致對結(jié)果的錯誤分析，從而影響了分析的準(zhǔn)確性。
【發(fā)明內(nèi)容】

[0011]本發(fā)明要解決的技術(shù)問題為針對現(xiàn)有快速診斷方法靈敏度低、重復(fù)性差、受干擾明顯，以及現(xiàn)有化學(xué)發(fā)光微流控芯片配套儀器昂貴、檢測時間長的問題，提供一種微流控磁微?；瘜W(xué)發(fā)光免疫檢測的集成化芯片(把除測試樣本外所有組分均集成到芯片內(nèi))并配套小型便攜設(shè)備，從而實現(xiàn)現(xiàn)場樣本中分析物的快速、準(zhǔn)確、高靈敏定量檢測。
[0012]為解決上述技術(shù)問題，本發(fā)明提供的技術(shù)方案為:
[0013]—種用于全血樣本檢測的磁微粒化學(xué)發(fā)光雙層微流控芯片，其特征在于，所述微流控芯片包括頂板(1)和底板(2)，其中頂板包含加樣口(4)、樣本填充區(qū)(12)、標(biāo)記配體存儲池(5)和樣本混合區(qū)(13);底板包含過濾區(qū)(6)、磁顆粒包被區(qū)(7)、清洗區(qū)(14)、檢測區(qū) (8)、清洗液存儲池(9)、發(fā)光基底液存儲池(10)、液體釋放通道(16);
[0014]所述加樣口(4)和標(biāo)記配體存儲池(5)由樣本填充區(qū)(12)連接，標(biāo)記配體存儲池 (5)與樣本混合區(qū)(13)連接;所述底板的檢測區(qū)(8)與清洗液存儲池(9)和發(fā)光基底液存儲池(10)通過液體釋放通道(16)連接;所述過濾區(qū)(6)、磁顆粒包被區(qū)(7)、清洗區(qū)(14)、檢測區(qū)(8)依次連接;所述樣本混合區(qū)(13)末端與過濾區(qū)(6)連通；
[0015]所述標(biāo)記配體存儲池(5)、清洗液存儲池(9)、發(fā)光基底液存儲池(10)為液體密封池，可通過外力擠壓而局部破裂，釋放液體；
[0016]所述標(biāo)記配體存儲池(5)、清洗液存儲池(9)、發(fā)光基底液存儲池(10)和磁顆粒包被區(qū)(7)中存儲預(yù)封裝試劑;所述過濾區(qū)(6)包含濾血膜，其中濾血膜可通過物理孔徑或生物/化學(xué)試劑使液體與細(xì)胞分離，所述生物/化學(xué)試劑包含凝血劑等；
[0017]所述微流控芯片測試流程中，用磁鐵操控磁顆粒移動或聚集。
[0018]所述微流控芯片磁鐵操控磁顆粒移動或聚集分為頂部磁鐵操控磁顆粒移動或聚集和底部磁鐵操控磁顆粒移動或聚集兩種。
[0019]所述微流控芯片的測試流程包括:
[0020]步驟1)將全血樣本滴入加樣口(4)，樣本流入樣本填充區(qū)(12)，蓋上蓋子(11 )，微流控芯片放入配套儀器中，酶或發(fā)光劑標(biāo)配體從標(biāo)記配體存儲池(5)釋放后，樣本和酶或發(fā)光劑標(biāo)配體于樣本混合區(qū)(13)混合均勻，然后注入底板過濾區(qū)(6);
[0021]步驟2)樣本經(jīng)過濾區(qū)(6)后，到達(dá)磁顆粒包被區(qū)(7)，溶解磁標(biāo)配體，磁鐵加速樣本中分析物與磁標(biāo)配體反應(yīng)，然后磁鐵收集磁顆粒，清洗液存儲池(9)釋放清洗液，磁顆粒清洗后，磁鐵將磁顆粒移至檢測區(qū)(8)，發(fā)光基底液存儲池(9)釋放發(fā)光基底液，儀器檢測系統(tǒng)檢測發(fā)光信號強(qiáng)度，進(jìn)而實現(xiàn)分析物的定量檢測。[〇〇22] 所述微流控芯片的測試流程步驟1)所述樣本體積為10?500yl，優(yōu)選20?lOOiil。 作為優(yōu)選，在實施例中加樣體積為5〇yl。[〇〇23] 所述微流控芯片的測試流程步驟2)所述磁顆粒尺寸為0.1?10M1，優(yōu)選0.5?3mi。 其中磁顆粒尺寸和磁鐵的磁感應(yīng)強(qiáng)度對檢測結(jié)果有明顯的影響，為與磁顆粒相匹配，磁鐵磁感應(yīng)強(qiáng)度為500?30000高斯，優(yōu)選1000?8000高斯。作為優(yōu)選，其中一個實施例中使用2y m的磁顆粒，磁感應(yīng)強(qiáng)度為6000高斯。另一個實施例中使用0.5mi的磁顆粒，磁感應(yīng)強(qiáng)度為 2000高斯。[〇〇24]本發(fā)明所用磁顆粒超順磁性顆粒，包含鐵、鈷、鎳的化合物，主要包含但不限于三氧化二鐵和四氧化三鐵化合物。本發(fā)明實施例中所用磁顆粒為聚苯乙烯為殼，三氧化二鐵為核的顆粒。
[0025]所述微流控芯片的測試流程步驟1)所述配套儀器為小型便攜設(shè)備，包含擠壓氣栗和存儲池，磁鐵移動，發(fā)光檢測系統(tǒng)等功能，微流控芯片放入儀器后，點擊開始測試，儀器可自動完成所有操作；步驟1)所述氣栗包含微流控芯片自帶彈性膠帶(23)密封形成空氣空腔，以及配套儀器提供正負(fù)壓氣流兩種;步驟2)所述分析物與配體的反應(yīng)，包含分析物與酶標(biāo)抗體和磁顆粒標(biāo)記抗體形成三明治結(jié)構(gòu)，以及分析物與酶標(biāo)抗體競爭，減少磁顆粒與酶標(biāo)抗體的結(jié)合。
[0026]本發(fā)明微流控芯片的制備方法如下:
[0027]步驟1)發(fā)光劑標(biāo)記可與分析物結(jié)合或競爭的一種配體，獲得發(fā)光劑標(biāo)記配體，磁顆粒標(biāo)記可與分析物結(jié)合或競爭的另一種配體，獲得磁顆粒標(biāo)記配體，這兩種配體可相同或不同；
[0028]步驟2)將磁顆粒標(biāo)記抗體溶液放入包被區(qū)中，干燥，然后將發(fā)光劑標(biāo)記物溶液滴入包被區(qū)中，干燥，將清洗液和發(fā)光激發(fā)液分別注入清洗液存儲池和發(fā)光基底液存儲池中， 密封，組裝微流控芯片。
[0029]本發(fā)明微流控芯片制備方法張所述的步驟2)所述標(biāo)記配體溶液、磁顆粒標(biāo)記配體溶液和清洗液均包含緩沖液、蛋白質(zhì)、表面活性劑及防腐劑，且磁顆粒標(biāo)記抗體溶液還包含糖類;步驟2)所述發(fā)光基底液包含與酶對應(yīng)的底物及發(fā)光增強(qiáng)液;步驟2)所述發(fā)光基底液可拆分為底物液和發(fā)光增強(qiáng)液，分別注入發(fā)光基底液存儲池A(24)、發(fā)光基底液存儲池B (25 )，釋放后通過發(fā)光基底液預(yù)混合通道(26)混合均勻。
[0030]本發(fā)明微流控芯片制備方法張所述的步驟1)所述酶包含過氧化氫酶(HRP)和堿性磷酸酶(ALP);所述發(fā)光劑包含但不限于吖啶酯和吖啶磺酰胺，本發(fā)明的實施例采用吖啶酯。吖啶酯與發(fā)光激發(fā)液作用后，不需酶的催化作用，直接參與發(fā)光反應(yīng)。所述磁顆粒包含三氧化二鐵和四氧化三鐵化合物。
[0031]本發(fā)明提供的用于全血樣品檢測的磁微粒直接化學(xué)發(fā)光微流控芯片是一種以直接化學(xué)發(fā)光為基礎(chǔ)、在微流控芯片上實現(xiàn)分析物快速、準(zhǔn)確、高靈敏檢測的新型芯片。
[0032]這種芯片是將分析物的配體(如抗原、抗體等)修飾發(fā)光劑，分析物的另一配體修飾在磁顆粒上，利用配體作用，如雙抗體夾心法原理結(jié)合磁顆粒富集、化學(xué)發(fā)光檢測全血樣本中是否含有分析物。
[0033]本發(fā)明微流控芯片用于定量全血樣本中的分析物。分析物包括藥物、毒品、抗原、 抗體、激索、抗生素、細(xì)菌和病毒及其他生化標(biāo)志物。其中其他生化標(biāo)志物包括心血管標(biāo)志物、腫瘤標(biāo)志物和自身免疫性疾病標(biāo)志物。
[0034]本發(fā)明用于全血樣品檢測的磁微粒直接化學(xué)發(fā)光微流控芯片能夠解決現(xiàn)有化學(xué)發(fā)光技術(shù)中儀器昂貴、檢測時間長的不足和缺陷，可實現(xiàn)對微量樣本的檢測。由于化學(xué)發(fā)光靈敏度高，其靈敏度是熒光檢測方法的1〇〇倍以上。[〇〇35]本發(fā)明采用的標(biāo)記方法包含物理吸附、化學(xué)交聯(lián)或生物分子間特異性作用將分析物的配體連接到發(fā)光劑或磁顆粒表面，得到配體標(biāo)記的發(fā)光劑或配體標(biāo)記的磁顆粒，其中配體能與分析物特異性結(jié)合或競爭。[〇〇36]本發(fā)明中所述物理吸附主要為通過顆粒與配體的表面電荷差異，非特異性吸附到顆粒表面，形成配體與磁顆粒的復(fù)合物。
[0037]本發(fā)明中所述化學(xué)交聯(lián)為:當(dāng)磁顆?；虬l(fā)光劑表面有活性基團(tuán)，可與配體或質(zhì)控分子直接反應(yīng)時，不需用化學(xué)交聯(lián)劑，反之用化學(xué)交聯(lián)劑把配體修飾到磁顆粒表面或發(fā)光劑上。
[0038]在本發(fā)明的實施例中采用化學(xué)交聯(lián)法對磁顆粒進(jìn)行蛋白質(zhì)分子修飾的方法為:利用1-乙基-3-(3-二甲基胺丙基)碳化二亞胺(EDC)/N-羥基琥珀酰亞胺(NHS)、戊二醛等交聯(lián)劑將磁顆粒表面的官能團(tuán)(如羧基、氨基)與蛋白質(zhì)分子(如抗原、抗體等)表面的官能團(tuán)(如氨基、羧基、醛基等)連接。
[0039]在本發(fā)明的實施例中采用化學(xué)交聯(lián)法對發(fā)光劑進(jìn)行蛋白質(zhì)分子修飾的方法為:利用1-乙基-3-(3-二甲基胺丙基)碳化二亞胺(EDC)/N-羥基琥珀酰亞胺(NHS)、戊二醛等交聯(lián)劑將發(fā)光劑標(biāo)記到蛋白質(zhì)分子(如抗原、抗體等)上。
[0040]作為優(yōu)選，在本發(fā)明的一個實施例中，采用EDC/NHS交聯(lián)法對磁顆粒進(jìn)行修飾，一般步驟為:將磁顆粒溶液與EDC和NHS混合，然后加入一定量的蛋白質(zhì)，以緩沖液為反應(yīng)介質(zhì)，培育4h，加入L-甘氨酸封閉，以色譜、層析柱或超濾離心等方式純化，從而得到蛋白質(zhì)修飾的磁顆粒。
[0041]本發(fā)明中所述生物分子間特異性作用包括生物素-親和素系統(tǒng)和抗原-抗體系統(tǒng)。 作為優(yōu)選，在本發(fā)明的另一個實施例中，采用生物素-親和素系統(tǒng)結(jié)合方式對分析物配體進(jìn)行磁顆粒修飾，該結(jié)合方式具有放大信號的作用，具體為:以EDC將鏈霉親和素連接到磁顆粒表面，生物素連接到蛋白質(zhì)分子表面，通過親和素-生物素間的相互作用，把蛋白質(zhì)分子連接到磁顆粒表面。
[0042]本發(fā)明的分析物配體包含抗原、半抗原、單克隆抗體、多克隆抗體和激素受體。該配體可與分析物結(jié)合(如雙抗體夾心法)或者與分析物競爭(如競爭法)。其中發(fā)光劑標(biāo)記的抗體與磁顆粒標(biāo)記的抗體可以相同，也可以不同。
[0043]作為優(yōu)選，在本發(fā)明的一個實施例中，選擇兩種不同抗體，分別標(biāo)記發(fā)光劑和磁顆粒，以雙抗體夾心法檢測分析物。本發(fā)明的另一個實施例中，選擇一種抗原和一種抗體，分別標(biāo)記發(fā)光劑和磁顆粒，以競爭法檢測分析物。
[0044]本發(fā)明的標(biāo)記配體溶液包含緩沖液、蛋白質(zhì)、甘油、表面活性劑及防腐劑;磁顆粒標(biāo)記配體溶液包含緩沖液、蛋白質(zhì)、糖類、表面活性劑及防腐劑。作為優(yōu)選，在本發(fā)明的實施例中，吖啶酯標(biāo)記抗體溶液為包含牛血清白蛋白、甘油、曲拉通X-100、吐溫20和Proclin300 的pH7.4磷酸緩沖液；磁顆粒標(biāo)記抗體溶液為包含牛血清白蛋白、酪蛋白、吐溫20和 Proclin300的pH7.4磷酸緩沖液。在另一個實施例中，吖啶酯標(biāo)記抗體溶液為包含牛血清白蛋白、甘油、曲拉通X-100和Proclin300的pH7.4 Tris-HCl緩沖液;磁顆粒標(biāo)記抗原溶液為包含牛血清白蛋白、酪蛋白、吐溫20和Proclin300的pH7.4 Tris-HCl緩沖液。
[0045]本發(fā)明的微流控芯片如圖2所示，芯片由頂部膠帶、芯片基板和底部膠帶構(gòu)成。成型材料為聚合物，包含但不限于聚苯乙烯、聚氯乙烯、聚丙烯、環(huán)氧樹脂等。如圖1所示，芯片基板包含過濾區(qū)(2)、包被區(qū)(3)、清洗區(qū)(4)、檢測區(qū)(5)、清洗液存儲池(7)和發(fā)光基底液存儲池(8)和廢液池(11)組成，其中檢測區(qū)分別與清洗液存儲池和發(fā)光基底液存儲池通過液體釋放通道(9)連接。
[0046]本發(fā)明的存儲池為液體密封池，所用密封材料包含玻璃、塑料、橡膠、鋁箱和高阻隔薄膜，其中密封材料可為同種材料組成，也可為多種材料組合而成。在物理擠壓下，存儲池可局部破裂，從而把密封的液體釋放出來。其中酶標(biāo)配體存儲池、清洗液存儲池、發(fā)光基底液存儲池可采用相同或不同材料和方法制作。在本發(fā)明的一個實施例中，酶標(biāo)配體存儲池、清洗液存儲池、發(fā)光基底液存儲池均采用塑料和彈性橡膠密封而成。本發(fā)明的另一個實施例中，酶標(biāo)配體存儲池采用塑料和彈性橡膠密封而成，而清洗液存儲池、發(fā)光基底液存儲池采用高阻隔薄膜密封而成。[〇〇47]本發(fā)明的過濾區(qū)包含濾血膜，其中濾血膜可通過物理孔徑或生物/化學(xué)試劑使液體與細(xì)胞分離，實現(xiàn)血漿與紅細(xì)胞分離，血漿流到磁顆粒包被區(qū)，而紅細(xì)胞停留在濾血膜上，從而減少紅細(xì)胞對試驗結(jié)果的干擾。其中所述生物/化學(xué)試劑包含凝血劑等，可使紅細(xì)胞間連接，形成凝塊，增大尺寸，更容易被濾血膜的網(wǎng)狀結(jié)構(gòu)阻擋。
[0048]本發(fā)明的微流控芯片，可將磁顆粒標(biāo)記配體溶液和發(fā)光劑標(biāo)記配體溶液混合或先后加入芯片基板上的包被區(qū)(3)，干燥，如圖1所示；當(dāng)兩種溶液存在一定的干擾，或檢測效果不佳時，可分別加入磁顆粒包被區(qū)(14)和發(fā)光劑標(biāo)記配體包被區(qū)(15)。
[0049]本發(fā)明的微流控芯片，當(dāng)發(fā)光基底液由于不能混合并并長時間保存等原因，而需拆分為兩種溶液時，可分別注入發(fā)光基底液存儲池A(16)和發(fā)光基底液存儲池B(17)中，并在芯片上增加發(fā)光底物液和發(fā)光增強(qiáng)液預(yù)混合通道(18)，該預(yù)混合通道可由蛇形通道或上下結(jié)構(gòu)混合通道，如圖4所示。
[0050]本發(fā)明的清洗液，用于清洗磁顆粒，去除非特異性吸附的分析物、發(fā)光劑標(biāo)記物及其他影響檢測結(jié)果的物質(zhì)。清洗液主要包含緩沖體系、蛋白質(zhì)和表面活性劑，其中緩沖體系包含但不限于硼酸鹽、磷酸鹽、Tris-HCl和醋酸鹽等，清洗液pH 6.0?10.0。其中蛋白質(zhì)包含但不限于牛血清白蛋白、酪蛋白等。其中表面活性包含但不限于可包括吐溫20、吐溫80、 曲拉通X-100、聚乙二醇和聚乙烯基吡咯烷酮等。[0〇51 ]作為優(yōu)選，本發(fā)明實施例中，使用清洗液為包含牛血清白蛋白、吐溫2 0和 Proclin300的pH7 ? 0磷酸緩沖液。[〇〇52]在一個實施例中，磁顆粒包被區(qū)包被了磁顆粒標(biāo)記抗體，發(fā)光劑標(biāo)記物包被區(qū)包被了吖啶酯標(biāo)記抗體，以雙抗體夾心法檢測降鈣素原(PCT)。另一個實施例中，磁顆粒包被區(qū)包被了磁顆粒標(biāo)記抗體，發(fā)光劑標(biāo)記物包被區(qū)包被了吖啶酯標(biāo)記抗原，以競爭法檢測他克莫司。
[0053]本發(fā)明的微流控芯片為快速檢測，檢測時間應(yīng)小于30分鐘，作為優(yōu)選，實施例中采用15分鐘。
[0054]本發(fā)明的配體儀器包含擠壓存儲池，磁鐵移動，發(fā)光檢測系統(tǒng)等功能，應(yīng)可包含擠壓裝置、磁鐵及移動裝置、檢測系統(tǒng)、控制分析模塊和軟件系統(tǒng)。
[0055]本發(fā)明可廣泛應(yīng)用于病原體、重大疾病(如腫瘤、心血管疾病等)、違禁藥品、毒品檢測、食品安全等多種分析物的定量檢測。
[0056]本發(fā)明的核心是采用磁微?；瘜W(xué)發(fā)光免疫檢測技術(shù)在微流控芯片實現(xiàn)目標(biāo)物的快速、高靈敏度、準(zhǔn)確定量檢測。[〇〇57]微流控芯片技術(shù)是把生物、化學(xué)、醫(yī)學(xué)分析過程的樣品制備、反應(yīng)、分離、檢測等基本操作單元集成到一塊微米尺度的芯片上，自動完成分析全過程。[〇〇58]本發(fā)明的微流控芯片將檢測過程所需的所有試劑組分(酶標(biāo)配體、磁顆粒標(biāo)記配體、清洗液、發(fā)光基底液等)均集成、內(nèi)置到微流控芯片中，并通過巧妙溝道設(shè)計，在配套儀器的操作下，實現(xiàn)微流控芯片的一鍵式操作(只需按開始鍵就能實現(xiàn)檢測，無需復(fù)雜操作)， 實現(xiàn)全血分離、免疫反應(yīng)、清洗分離、化學(xué)發(fā)光檢測，從而避免了現(xiàn)有微流控芯片中結(jié)構(gòu)設(shè)計簡單、檢測時操作復(fù)雜等不足和缺陷。還克服了傳統(tǒng)化學(xué)發(fā)光儀只能進(jìn)行血清或血漿檢測，而不能對全血樣本進(jìn)行檢測的缺點。
[0059]由于磁顆粒易沉淀，傳統(tǒng)化學(xué)發(fā)光儀采用手工混合，并以持續(xù)振蕩維持磁顆粒的懸浮狀態(tài)，但微流控芯片內(nèi)磁顆粒混均操作難以在小型便攜儀器中實現(xiàn)。
[0060]本發(fā)明將磁顆粒包被、干燥于微流控芯片溝道中，并設(shè)計了磁鐵主動驅(qū)動磁顆粒 (而傳統(tǒng)微流控芯片一般采用流體驅(qū)動或電驅(qū)動)，從而使磁顆粒復(fù)溶，并在微流控芯片不同區(qū)域?qū)崿F(xiàn)免疫反應(yīng)、清洗、發(fā)光。此設(shè)計不僅解決了磁顆粒應(yīng)用于微流控芯片時易沉淀、 重復(fù)性差等問題，還實現(xiàn)了更可控的免疫反應(yīng)和物理清洗，提高了靈敏度和重復(fù)性。其中磁鐵磁性和磁顆粒尺寸對檢測效果了明顯影響，本發(fā)明選擇磁鐵磁感應(yīng)強(qiáng)度為500-30000高斯，優(yōu)選1000-8000高斯;磁顆粒尺寸為0.l-lOwn，優(yōu)選0.5-3M1。
[0061]本發(fā)明中微流控芯片配套儀器與微流控芯片無液體接觸，無需要清洗的部件，避免了傳統(tǒng)大型化學(xué)發(fā)光儀需要攪拌或加樣、清洗等操作而產(chǎn)生的交叉干擾及污染。
[0062]所以本發(fā)明并非簡單疊加磁微?；瘜W(xué)發(fā)光技術(shù)和微流控芯片技術(shù)，而是通過液體密封設(shè)計、溝道設(shè)計，把檢測所需所有化學(xué)組分集成、內(nèi)置到微流控芯片中，并以磁鐵主動驅(qū)動，實現(xiàn)一鍵式的磁微?；瘜W(xué)發(fā)光免疫檢測，從而在便攜配套儀器中實現(xiàn)全血中分析物的快速、高靈敏度、準(zhǔn)確定量檢測。[〇〇63]本發(fā)明的主要優(yōu)點如下:
[0064]1)本發(fā)明采用直接化學(xué)發(fā)光方法，具有背景低、靈敏度高、線性范圍寬的優(yōu)點。
[0065]2)本發(fā)明采用磁顆粒技術(shù)，具有磁富集功能，增強(qiáng)并放大信號;并能利用磁鐵把磁顆粒轉(zhuǎn)移區(qū)域(如由包被區(qū)_清洗區(qū)_檢測區(qū))，減少樣本基質(zhì)的影響。
[0066]3)本發(fā)明采用微流控芯片技術(shù)，把樣本混合、反應(yīng)、分離和檢測集成在芯片上，并把反應(yīng)所需的所有試劑組分集成到芯片上。
[0067]4)本發(fā)明操作簡便，檢測時，只需加入樣本，蓋上蓋子，把芯片放入小型便攜配套儀器中即可。
[0068]5)本發(fā)明配套儀器是小型便攜儀器，儀器只與芯片發(fā)生物理接觸，芯片內(nèi)液體不與儀器接觸，不會污染儀器而產(chǎn)生交叉干擾。【附圖說明】[〇〇69]圖1為頂部磁鐵操控的微流控芯片雙層結(jié)構(gòu)示意圖，其中1為頂板，2為底板，3為氣栗，4為加樣口，5為標(biāo)記配體存儲池，6為過濾區(qū)，7為磁顆粒包被區(qū)，8為檢測區(qū)，9為清洗液存儲池，10為發(fā)光基底液存儲池，11為蓋子，12為樣本填充區(qū)，13為樣本混合區(qū)，14為清洗區(qū)，15為廢液池，16為液體釋放通道，17為發(fā)光基底液和清洗液存儲池讓位孔(于頂板)，18 為磁鐵滑軌讓位孔。
[0070]圖2為頂部磁鐵操控的微流控芯片的完整微流控芯片的結(jié)構(gòu)示意圖，其中1為頂板，2為底板，19為雙面膠帶，20為單面膠帶，21為發(fā)光基底液和清洗液存儲池讓位孔(于雙面膠帶)，22為混合液流入過濾區(qū)時的讓位孔。[〇〇71]圖3為自帶氣栗的微流控芯片頂板結(jié)構(gòu)示意圖，其中23為密封膜。
[0072]圖4為雙發(fā)光基底液的微流控芯片底板結(jié)構(gòu)示意圖，其中24為發(fā)光基底液存儲池 A，25為發(fā)光基底液存儲池B，26為發(fā)光液預(yù)混合通道。[〇〇73]圖5為底部磁鐵操控的微流控芯片雙層結(jié)構(gòu)示意圖，其中1為頂板，2為底板，3為氣栗，4為加樣口，5為標(biāo)記配體存儲池，6為過濾區(qū)，7為磁顆粒包被區(qū)，8為檢測區(qū)，9為清洗液存儲池，10為發(fā)光基底液存儲池，11為蓋子，12為樣本填充區(qū)，13為樣本混合區(qū)，14為清洗區(qū)，15為廢液池，16為液體釋放通道，27為磁鐵滑軌槽。[〇〇74]圖6為底部磁鐵操控的微流控芯片的完整微流控芯片的結(jié)構(gòu)示意圖，其中1為頂板，2為底板，19為雙面膠帶，20為單面膠帶，22為混合液流入過濾區(qū)時的讓位孔，28為磁鐵滑軌讓位孔，29為發(fā)光基底液和清洗液存儲池讓位孔(于單面膠帶)。【具體實施方式】
[0075]本發(fā)明公開了一種磁微?；瘜W(xué)發(fā)光雙層微流控芯片，本領(lǐng)域技術(shù)人員可以借鑒本文內(nèi)容，適當(dāng)改進(jìn)工藝參數(shù)實現(xiàn)。特別需要指出的是，所有類似的替換和改動對本領(lǐng)域技術(shù)人員來說是顯而易見的，它們都被視為包括在本發(fā)明。本發(fā)明的方法及應(yīng)用已經(jīng)通過較佳實施例進(jìn)行了描述，相關(guān)人員明顯能在不脫離本
【發(fā)明內(nèi)容】
、精神和范圍內(nèi)對本文所述的方法和應(yīng)用進(jìn)行改動或適當(dāng)變更與組合，來實現(xiàn)和應(yīng)用本發(fā)明技術(shù)。
[0076]為了使本領(lǐng)域的技術(shù)人員更好地理解本發(fā)明的技術(shù)方案，下面結(jié)合具體實施例對本發(fā)明作進(jìn)一步的詳細(xì)說明。[〇〇77] 實施例1:雙抗體夾心測定超敏肌鈣蛋白I (cTnI)[〇〇78](一)抗體標(biāo)記[〇〇79] 取5yg HRP溶解于lmL蒸餾水中，再加入0.2mL0.1M新配NaI〇4溶液，室溫避光反應(yīng) 20min后，以ImM pH4.4醋酸鈉緩沖液透析純化溶液。再以0.2M pH9.5碳酸鹽緩沖液調(diào)節(jié)pH 至9.0，加入10yg抗cTnl單抗，室溫避光反應(yīng)2h。加0.lmL新配的4mg/mL NaBH4液，混勾，于4 °C反應(yīng)2h。將上述溶液裝入透析袋，以0.15M pH7.4 PBS透析，4°C過夜，得到HRP標(biāo)記cTnl抗體。
[0080] 向lml 10mM pH7.4磷酸緩沖液中加入lmg磁顆粒(尺寸為2ym)、10iig EDC和15ygNHS溶液和15yg抗cTnl單抗(與HRP標(biāo)記的抗體不同)溶液，混合均勾并于室溫下反應(yīng)4h，加入lmg甘氨酸封閉。以磁鐵富集，去除未反應(yīng)的抗cTnl單抗，得到磁顆粒標(biāo)記cTnl抗體。[〇〇811(二)微流控芯片組裝[〇〇82]冊？標(biāo)記(^111抗體溶液中含0.1%牛血清白蛋白、0.1%吐溫20和0.01%Proclin300的pH7.4磷酸緩沖液；磁顆粒標(biāo)記cTnl抗體溶液為包含0.5%牛血清白蛋白、 0 ? 1 %酪蛋白、0 ? 2 %吐溫20和0 ? 01 % Procl in300的pH7 ? 4磷酸緩沖液。
[0083] 清洗液為包含0.2%BSA、0.5%吐溫20和0.01 %Proclin300的pH7.4磷酸緩沖液。 發(fā)光基底液分A液和B液，A液為含魯米諾的酸性溶液，B液為含苯衍生物的堿性溶液。[〇〇84]將HRP標(biāo)記抗體溶液放入頂板酶標(biāo)配體存儲池(5)中，密封。將磁顆粒標(biāo)記抗體溶液放入底板包被區(qū)(7)中，室溫干燥。將清洗液注入清洗液存儲池(9)中，將發(fā)光基底液的A 液和B液分別注入發(fā)光基底液存儲池A (24)和發(fā)光基底液存儲池B (25 )，密封。按圖1所示，將濾血膜粘入底板過濾區(qū)中，將存儲池內(nèi)置入底板。然后按圖2所示，以單面膠帶和雙面膠帶， 將頂板和底板組裝成微流控芯片。裝入鋁箱袋中，密封4°保存。[〇〇85](三)樣本檢測[0〇86]用正常人血衆(zhòng)作稀釋液，將cTnl標(biāo)準(zhǔn)品稀釋成如下濃度:0pg/ml、5pg/ml、50pg/ ml、500pg/ml、lng/ml、10ng/ml和50ng/ml〇[〇〇87]將50yl樣本滴入加樣口后，蓋上蓋子。將微流控芯片放入配套儀器(磁鐵磁感應(yīng)強(qiáng)度為6000高斯)中，儀器擠出HRP標(biāo)記單抗，并使樣本和HRP標(biāo)記單抗混合均勻后注入底板過濾區(qū)。樣本過濾后，到達(dá)微通道，并溶解磁顆粒標(biāo)記單抗，磁鐵加速樣本反應(yīng)，形成HRP標(biāo)記單抗-cTnl抗原-磁顆粒標(biāo)記單抗的三明治結(jié)構(gòu)，然后磁鐵收集磁顆粒。存儲池釋放清洗液， 將磁顆粒清洗后，發(fā)光基底液釋放，儀器檢測系統(tǒng)檢測發(fā)光信號強(qiáng)度。總檢測時間15min。每個樣本分別用3個微流控芯片測定3次，取平均值，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。[0〇88]將50lil全血樣本滴入加樣口，15分鐘內(nèi)儀器檢測系統(tǒng)檢測發(fā)光信號強(qiáng)度，依據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線獲得樣本中cTnl濃度。[〇〇89] 檢測原理為:當(dāng)全血加入微流控芯片后，全血先與HRP標(biāo)記抗體混合，然后經(jīng)過濾區(qū)后，混合了 HRP標(biāo)記抗體的血漿到達(dá)微通道，血漿溶解磁標(biāo)記抗體。當(dāng)血樣中含有cTnl，則形成HRP標(biāo)記抗體-cTnl-磁顆粒標(biāo)記抗體的三明治結(jié)構(gòu)(雙抗體夾心法)。經(jīng)清洗后，再發(fā)光基底液作用下發(fā)光，儀器檢測系統(tǒng)測試發(fā)光信號。依據(jù)配套儀器獲取的標(biāo)準(zhǔn)曲線，進(jìn)而分析血樣中cTnl濃度。樣本中cTnl含量越高，則發(fā)光信號越強(qiáng)。[0〇9〇]結(jié)果表明，其最低檢測限為10pg/ml，最低定量限為50pg/ml，在定量檢測范圍內(nèi)， 相關(guān)系數(shù)R2 >〇.99，未出現(xiàn)HOOK效應(yīng)，且批內(nèi)與批間重復(fù)性均較好，可為心梗心衰疾病診斷提供參考。[0091 ]實施例2:競爭法測定他克莫司血藥濃度 [0〇92]( — )抗體/抗原標(biāo)記
[0093] 稱取ALP 0.lmg溶于0.1ml 12.5%戊二醛的pH6.8 0.1M PBS溶液中，室溫過夜。反應(yīng)后的酶溶液經(jīng)SephadexG-25層析柱，用生理鹽水洗脫，收集棕色液。攪拌下將22.5yg抗他克莫司抗體逐滴加入酶溶液中，反應(yīng)3h。加0.2M賴氨酸封閉，混勻后，置室溫2h。在攪拌下逐滴加入等體積飽和硫酸銨，置4°C lhJOOOrpm/min離心30min，棄上清。沉淀物用半飽和硫酸銨洗二次，最后沉淀物溶于0.15M pH7.4 PBS中。將上述溶液裝入透析袋中，對0.15M pH7.4PBS緩沖液透析，去除銨離子后，lOOOOrpm/min離心除沉淀，上清液即為ALP標(biāo)記抗他克莫司抗體。[〇〇94] 向lml 10mM pH7.4磷酸緩沖液中加入lmg磁顆粒(尺寸為0.5wn)、10yg EDC和15yg NHS溶液和20yg鏈霉親和素，混合均勻并于室溫下反應(yīng)4h，加入lmg甘氨酸封閉。以磁鐵吸附富集，去除未反應(yīng)的鏈霉親和素，得到磁顆粒標(biāo)記鏈霉親和素。
[0095]將lOyg他克莫司抗原加入5yL 0? 25mg/mL Sulfo-NHS-LC-b1tin溶液中，反應(yīng)lh。 以超濾離心管純化，去除未反應(yīng)的生物素。得到生物素化的抗原。
[0096]通過親和素-生物素間的相互作用，把抗原連接到磁顆粒表面。其中親和素標(biāo)記的磁顆粒和生物素化的抗體比例為1: 1〇4。[〇〇97](二)微流控芯片組裝[〇〇98] ALP標(biāo)記抗他克莫司抗體溶液中含0.1%牛血清白蛋白、吐溫20和?仰(:1111300的 pH7.4 Tris-HCl緩沖液；磁顆粒標(biāo)記配體溶液包含0.5 %牛血清白蛋白、0.2 %酪蛋白、 0 ? 1 % 吐溫20和0 ? 02%Proclin300的pH7 ? 4 Tris-HCl緩沖液。
[0099]清洗液為包含0.2%BSA、0.5%吐溫20、0.5% 曲拉通X-100和0.01%Proclin300的 pH7.4 Tri s-HCl緩沖液。發(fā)光基底液。發(fā)光基底液分A液和B液，A液為含金剛烷的酸性溶液， B液為堿性溶液。
[0100]將ALP標(biāo)記抗體溶液放入頂板酶標(biāo)配體存儲池(5)中，密封。將他克莫司標(biāo)記的磁顆粒溶液放入底板包被區(qū)(7)中，室溫干燥。將清洗液注入清洗液存儲池(9)中，將發(fā)光基底液的A液和B液分別注入發(fā)光基底液存儲池A( 24)和發(fā)光基底液存儲池B( 25 )，密封。按圖1所示，將濾血膜粘入底板過濾區(qū)中，將存儲池內(nèi)置入底板。然后按圖2所示，以單面膠帶和雙面膠帶，將頂板和底板組裝成微流控芯片。裝入鋁箱袋中，密封4°保存。
[0101](三)樣本檢測
[0102]用磷酸緩沖液作稀釋液，將他克莫司標(biāo)準(zhǔn)品配制系列濃度標(biāo)準(zhǔn)品溶液如下:0ng/ mL、0?Ing/mL、lng/mL、5ng/mL、10ng/mL、50ng/mL、100ng/mL〇[〇1〇3]將50yl樣本滴入加樣口后，蓋上蓋子。將微流控芯片放入配套儀器(磁鐵磁感應(yīng)強(qiáng)度為2000高斯)中，儀器擠出ALP標(biāo)記抗體，并使樣本和ALP標(biāo)記抗體混合均勻后注入底板過濾區(qū)中。樣本過濾后，到達(dá)微通道，并溶解他克莫司標(biāo)記的磁顆粒，磁鐵加速樣本反應(yīng)，他克莫司與他克莫司標(biāo)記的磁顆粒競爭結(jié)合ALP標(biāo)記抗體，然后磁鐵收集磁顆粒。存儲池釋放清洗液，將磁顆粒清洗后，發(fā)光基底液釋放，儀器檢測系統(tǒng)檢測發(fā)光信號強(qiáng)度?？倷z測時間 15min。每個樣本分別用3個微流控芯片測定3次，取平均值，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。
[0104]將50iU樣本滴入加樣口，15分鐘內(nèi)儀器檢測系統(tǒng)檢測發(fā)光信號強(qiáng)度，依據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線獲得樣本中他克莫司濃度。[〇1〇5]檢測原理為:當(dāng)樣本加入微流控芯片后，樣本與ALP標(biāo)記抗體混合均勻，經(jīng)過濾區(qū)后，混合物到達(dá)微通道，樣本溶解他克莫司標(biāo)記的磁顆粒。當(dāng)樣本中含有他克莫司，則他克莫司與他克莫司標(biāo)記的磁顆粒競爭結(jié)合ALP標(biāo)記抗體(競爭法)。經(jīng)清洗后，再發(fā)光基底液作用下發(fā)光，儀器檢測系統(tǒng)測試發(fā)光信號。依據(jù)配套儀器獲取的標(biāo)準(zhǔn)曲線，進(jìn)而分析樣本中他克莫司濃度。樣本中他克莫司含量越高，則發(fā)光信號越弱。[〇1〇6] 結(jié)果表明，他克莫司最低檢測限為0.05ng/mL，最低定量限為0.1ng/mL，檢測范圍內(nèi)的線性相關(guān)系數(shù)R2>〇.98;在定量檢測范圍內(nèi)，未出現(xiàn)H00K效應(yīng);且批內(nèi)與批間重復(fù)性均小于10%，可用于他克莫司血藥濃度檢測。
[0107]實施例3:磁微粒顆粒尺寸篩選
[0108]其他的實驗條件參見實施例1，磁顆粒尺寸和磁鐵磁感應(yīng)強(qiáng)度按照以下方案進(jìn)行。
[0109]顆粒尺寸為 0 ? 1_、0 ? 5m1、1 ? 0_、3.0iim、3 ? 4_、5_、10_。磁鐵磁感應(yīng)強(qiáng)度為 500 尚斯、1000尚斯、4000尚斯、8000尚斯、12000尚斯、30000尚斯。分別以這八種磁鐵分別驅(qū)動七種尺寸的磁顆粒。[〇11〇] 實驗結(jié)果顯示:0.lym磁顆粒和500高斯磁鐵組合時，其最低檢測限為500pg/ml，定量檢測范圍為0.5?50ng/ml，線性相關(guān)系數(shù)R2>0.95;批內(nèi)與批間重復(fù)性均小于20%。即:化學(xué)發(fā)光信號較弱，靈敏度不高，重復(fù)性較差。
[0111]10M1磁顆粒和30000高斯磁鐵組合時，其最低檢測限為300pg/ml，定量檢測范圍為 0.1?5ng/ml，線性相關(guān)系數(shù)R2>0.95;批內(nèi)與批間重復(fù)性均小于20%。即:陰性樣本信號較高(清洗不充分)，線性范圍不寬。
[0112]0.5?3wii的磁顆粒為和1000?8000高斯的磁鐵組合使用時，其最低檢測限均小于 150pg/ml，定量檢測范圍可達(dá)到0.15?50ng/ml，線性相關(guān)系數(shù)R2>0.97;批內(nèi)與批間重復(fù)性均小于12%。滿足為臨床心梗心衰疾病診斷提供參考的需要。
[0113]根據(jù)以上結(jié)果，磁顆粒尺寸優(yōu)選0.5?3wii，磁鐵磁感應(yīng)強(qiáng)度優(yōu)選1000?8000高斯。 可根據(jù)磁顆粒所用尺寸，進(jìn)一步確定磁鐵磁感應(yīng)強(qiáng)度。
[0114]以上所述僅是本發(fā)明的優(yōu)選實施方式，應(yīng)當(dāng)指出，對于本技術(shù)領(lǐng)域的普通技術(shù)人員來說，在不脫離本發(fā)明原理的前提下，還可以做出若干改進(jìn)和潤飾，這些改進(jìn)和潤飾也應(yīng)視為本發(fā)明的保護(hù)范圍。
【主權(quán)項】
1.一種用于全血樣品檢測的磁微?；瘜W(xué)發(fā)光雙層微流控芯片，其特征在于，所述微流 控芯片包括頂板(1)和底板(2)，其中頂板包含加樣口(4)、樣本填充區(qū)(12)、標(biāo)記配體存儲 池(5)和樣本混合區(qū)(13);底板包含過濾區(qū)(6)、磁顆粒包被區(qū)(7)、清洗區(qū)(14)、檢測區(qū)(8)、 清洗液存儲池(9)、發(fā)光基底液存儲池(10)、液體釋放通道(16);所述加樣口(4)和標(biāo)記配體存儲池(5)由樣本填充區(qū)(12)連接，標(biāo)記配體存儲池(5)與 樣本混合區(qū)(13)連接;所述底板的檢測區(qū)(8)與清洗液存儲池(9)和發(fā)光基底液存儲池(10) 通過液體釋放通道(16)連接;所述過濾區(qū)(6)、磁顆粒包被區(qū)(7)、清洗區(qū)(14)、檢測區(qū)(8)依 次連接;所述樣本混合區(qū)(13)末端與過濾區(qū)(6)連通；所述標(biāo)記配體存儲池(5)、清洗液存儲池(9)、發(fā)光基底液存儲池(10)為液體密封池，可 通過外力擠壓而局部破裂，釋放液體；所述標(biāo)記配體存儲池(5)、清洗液存儲池(9)、發(fā)光基底液存儲池(10)和磁顆粒包被區(qū) (7)中存儲預(yù)封裝試劑;所述過濾區(qū)(6)包含濾血膜，其中濾血膜可通過物理孔徑或生物/化 學(xué)試劑使液體與細(xì)胞分離，所述生物/化學(xué)試劑包含凝血劑。2.如權(quán)利要求1所述的微流控芯片，其特征在于，所述樣本體積為10?500iU。3.如權(quán)利要求1所述的微流控芯片，其特征在于，所述磁顆粒尺寸為0.1?10M1，用以驅(qū) 動所述磁顆粒的磁鐵的磁感應(yīng)強(qiáng)度為500-3000高斯。4.如權(quán)利要求1所述的微流控芯片，其特征在于，所述磁顆粒尺寸為0.5?3wii，用以驅(qū) 動所述磁顆粒的磁鐵的磁感應(yīng)強(qiáng)度為1000-8000高斯。5.如權(quán)利要求1-4任一項所述的微流控芯片，其特征在于，所述芯片還包含配套儀器， 所述配套儀器為小型便攜設(shè)備，包含擠壓氣栗、存儲池、磁鐵和發(fā)光檢測系統(tǒng)。6.如權(quán)利要求1所述的微流控芯片，其特征在于，所述芯片還包括膠帶(19和20)，所述 膠帶(19和20)密封頂板和底板。
【文檔編號】B01L3/00GK205650212SQ201520828570
【公開日】2016年10月19日
【申請日】2015年10月26日 公開號201520828570.X, CN 201520828570, CN 205650212 U, CN 205650212U, CN-U-205650212, CN201520828570, CN201520828570.X, CN205650212 U, CN205650212U
【發(fā)明人】王東, 李泉
【申請人】深圳華邁興微醫(yī)療科技有限公司