背景技術(shù)：

1、已開發(fā)出客制化癌癥疫苗，在動(dòng)物研究及早期臨床試驗(yàn)中顯示出令人鼓舞的結(jié)果。然而，這些研究與試驗(yàn)顯示，在完全實(shí)現(xiàn)客制化疫苗潛力之前，需要解決幾個(gè)關(guān)鍵挑戰(zhàn)。例如，強(qiáng)力抗癌效果所需的針對多種抗癌肽目標(biāo)對t細(xì)胞的刺激是一項(xiàng)艱巨的任務(wù)，需要新的疫苗遞送技術(shù)。當(dāng)前的臨床試驗(yàn)方案包括多達(dá)10種加強(qiáng)免疫接種，以引發(fā)可觀察到的細(xì)胞免疫(參閱sahin等人，nature?547:222-226；keskin等人，nature?565:234-239；hilf等人，nature?565:240-245；以及ott等人，nature?547:217-221)，造成治療時(shí)間延長且治療效果受損。

2、已經(jīng)測試合成的納米載體作為肽抗原的遞送載劑。認(rèn)為此類納米載體在施用后將肽從惡劣的細(xì)胞外環(huán)境中屏蔽并促進(jìn)其被細(xì)胞攝取，進(jìn)而導(dǎo)致效力增強(qiáng)。此外，已經(jīng)將免疫佐劑摻入納米載體中以同步遞送免疫增強(qiáng)訊號與肽，為引發(fā)免疫反應(yīng)的理想選擇(參閱crouse,j.等人，nature?rev.immunol.15:231-42)。然而，這種方法需要復(fù)雜的化學(xué)反應(yīng)或使用非生物兼容性材料(參閱kuai，r.等人，nature?materials?16:489-496；li,a.w.等人，nature?materials?17:528-534；luo,m.等人，nature?nanotechnol.12:648-654；以及l(fā)iu,h.等人，nature?507:519-522)，引起后勤及安全性方面的考慮。

3、需要開發(fā)一種載體系統(tǒng)，其中具有各種物理化學(xué)特征的肽可容易地與納米載體結(jié)合而無需采用費(fèi)力的化學(xué)反應(yīng)。這種方法將有助于多肽的配制及遞送，進(jìn)而擴(kuò)大基于肽的療法的研究及臨床應(yīng)用。特別是，有效的多抗原疫苗開發(fā)需要一種在不損害其免疫原性的情況下遞送各種肽抗原的策略。載體系統(tǒng)技術(shù)對于有效的新抗原疫苗接種相當(dāng)重要，亦可用于傳染病管理及免疫耐受誘導(dǎo)領(lǐng)域。

技術(shù)實(shí)現(xiàn)思路

1、為了如上所述有效地遞送目標(biāo)肽，提供一種載體系統(tǒng)，包含納米載體以及與所述納米載體非共價(jià)結(jié)合的肽。所述肽由與所述目標(biāo)肽的n端融合的轉(zhuǎn)接子肽序列組成。所述納米載體具有可為疏水性或親水性的核心。所述納米載體還具有表面，所述表面可具有凈負(fù)電荷、凈正電荷或一個(gè)或多個(gè)官能基團(tuán)。所述轉(zhuǎn)接子肽序列被設(shè)計(jì)為與所述疏水性核心、所述親水性核心、所述具有凈負(fù)電荷的表面、所述具有凈正電荷的表面或所述帶有一個(gè)或多個(gè)官能基團(tuán)的表面非共價(jià)結(jié)合。

2、還提供一種改善肽抗原的免疫原性的方法。所述方法包括以下步驟：將所述肽抗原融合至轉(zhuǎn)接子肽序列以形成免疫肽，并使所述免疫肽與納米載體接觸，進(jìn)而使所述免疫肽穩(wěn)定地與所述納米載體非共價(jià)結(jié)合。所述目標(biāo)肽為第一類mhc限制性抗原決定位或第二類mhc限制性抗原決定位，所述納米載體具有親水性核心，以及所述轉(zhuǎn)接子肽序列包含二個(gè)或更多個(gè)選自d、e、r、k及h的親水性氨基酸。

3、還公開一種用于治療受試者的病癥的免疫方法。通過將目標(biāo)肽融合至轉(zhuǎn)接子肽序列上以形成免疫肽，使所述免疫肽與納米載體接觸，進(jìn)而使所述免疫肽與所述納米載體穩(wěn)定地非共價(jià)結(jié)合以形成載體系統(tǒng)，并將所述載體系統(tǒng)施用于所述受試者，進(jìn)而提高對所述目標(biāo)肽的免疫反應(yīng)。所述目標(biāo)肽為第一類mhc限制性抗原決定位或一第二類mhc限制性抗原決定位，且所述方法可用于治療患有癌癥、病毒感染、細(xì)菌感染、寄生蟲感染、自體免疫，或?qū)ι镏苿┚哂胁涣济庖叻磻?yīng)的受試者。

4、一個(gè)或多個(gè)實(shí)施例的細(xì)節(jié)于以下的描述及實(shí)施例中闡述。根據(jù)詳細(xì)描述、圖式，以及所附申請專利范圍，其他特征、目的，以及優(yōu)點(diǎn)將變得顯而易見。

技術(shù)特征：

1.一種載體系統(tǒng)，包含納米載體以及與所述納米載體非共價(jià)結(jié)合的肽，所述肽包含與目標(biāo)肽的n端融合的轉(zhuǎn)接子肽序列，所述納米載體具有核心以及表面，其中所述核心為疏水性的或親水性的，所述表面具有凈負(fù)電荷、具有凈正電荷或帶有一個(gè)或多個(gè)官能基團(tuán)，且所述轉(zhuǎn)接子肽序列有助于所述肽與所述納米載體核心或表面的非共價(jià)結(jié)合。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的載體系統(tǒng)，其中所述轉(zhuǎn)接子肽序列包含二個(gè)或更多個(gè)選自d、e、r、k及h的親水性氨基酸，或者所述轉(zhuǎn)接子肽序列包含二個(gè)或更多個(gè)選自a、v、i、l、p、f、w及m的疏水性氨基酸。

3.根據(jù)權(quán)利要求2所述的載體系統(tǒng)，其中所述核心為親水性的，且所述轉(zhuǎn)接子肽序列為dn、en、(de)n、(dx)n或(ex)n，其中n為2至20的整數(shù)，且x為任何氨基酸。

4.根據(jù)權(quán)利要求3所述的載體系統(tǒng)，進(jìn)一步包含融合在所述目標(biāo)肽以及所述轉(zhuǎn)接子肽序列之間的間隔區(qū)片段，其中所述間隔區(qū)包含二個(gè)或更多個(gè)選自g、a、s及p的氨基酸殘基。

5.根據(jù)權(quán)利要求4所述的載體系統(tǒng)，其中所述間隔區(qū)片段為gn，其中n為1至15的整數(shù)。

6.根據(jù)權(quán)利要求5所述的載體系統(tǒng)，其中所述轉(zhuǎn)接子肽序列為ddd(seq?id?no:8)或dddd(seq?id?no:9)，所述間隔區(qū)片段為ggg(seq?id?no:10)，且所述目標(biāo)肽融合至所述間隔區(qū)片段的c端。

7.根據(jù)權(quán)利要求6所述的載體系統(tǒng)，其中所述目標(biāo)肽為第一類mhc限制性抗原決定位或第二類mhc限制性抗原決定位。

8.如權(quán)利要求7所述的載體系統(tǒng)，進(jìn)一步包括免疫反應(yīng)刺激物，是選自干擾素基因(sting)激動(dòng)劑、cpg-odn、r848及poly(i:c)的刺激物。

9.根據(jù)權(quán)利要求7所述的載體系統(tǒng)，進(jìn)一步包含免疫反應(yīng)抑制劑，是選自雷帕霉素、阿司匹林、維生素d、類固醇及n-乙酰胱氨酸。

10.根據(jù)權(quán)利要求8所述的載體系統(tǒng)，其中所述納米載體為中空的聚合物納米顆粒。

11.根據(jù)權(quán)利要求9所述的載體系統(tǒng)，其中所述納米載體為中空的聚合物納米顆粒。

12.一種改善肽抗原的免疫原性的方法，所述方法包括將所述肽抗原融合至轉(zhuǎn)接子肽序列以形成免疫肽，并使所述免疫肽與納米載體接觸，使所述免疫肽穩(wěn)定地與所述納米載體非共價(jià)結(jié)合，其中所述目標(biāo)肽為第一類mhc限制性抗原決定位或第二類mhc限制性抗原決定位，所述納米載體具有親水性核心，以及所述轉(zhuǎn)接子肽序列包含二個(gè)或更多個(gè)選自d、e、r、k及h的親水性氨基酸。

13.根據(jù)權(quán)利要求12所述的方法，其中所述轉(zhuǎn)接子肽序列為dn、en、(de)n、(dx)n或(ex)n，其中n為2至20的整數(shù)，且x為任何氨基酸。

14.根據(jù)權(quán)利要求13所述的方法，進(jìn)一步包含在所述肽抗原以及所述轉(zhuǎn)接子肽序列之間融合間隔區(qū)片段，其中所述間隔區(qū)包含二個(gè)或更多個(gè)選自g、a、s及p的氨基酸殘基。

15.根據(jù)權(quán)利要求14所述的方法，其中所述間隔區(qū)片段為gn，其中n為1至15的整數(shù)。

16.根據(jù)權(quán)利要求15所述的方法，其中所述轉(zhuǎn)接子肽序列為ddd(seq?id?no:8)或dddd(seq?id?no:9)，所述間隔區(qū)片段為ggg(seq?id?no:10)，且所述肽抗原融合至所述間隔區(qū)片段的c端。

17.一種用于治療受試者的病癥的免疫方法，所述方法包括將目標(biāo)肽融合至轉(zhuǎn)接子肽序列上以形成免疫肽，使所述免疫肽與納米載體接觸，進(jìn)而使所述免疫肽與所述納米載體穩(wěn)定地非共價(jià)結(jié)合以形成載體系統(tǒng)，并將所述載體系統(tǒng)施用于所述受試者，進(jìn)而提高對所述目標(biāo)肽的免疫反應(yīng)，其中所述目標(biāo)肽為第一類mhc限制性抗原決定位或第二類mhc限制性抗原決定位，且所述病癥為癌癥、病毒感染、細(xì)菌感染、寄生蟲感染、自體免疫或?qū)ι镏苿┑牟涣济庖叻磻?yīng)。

18.根據(jù)權(quán)利要求17所述的方法，其中所述免疫肽進(jìn)一步包含間隔區(qū)片段，所述間隔區(qū)片段融合在所述轉(zhuǎn)接子肽序列的c端及所述目標(biāo)肽的n端之間。

19.根據(jù)權(quán)利要求18所述的方法，其中所述轉(zhuǎn)接子肽序列為ddd(seq?id?no:8)或dddd(seq?id?no:9)，所述間隔區(qū)片段為ggg(seq?id?no:10)。

20.根據(jù)權(quán)利要求17所述的方法，進(jìn)一步包括將所述納米載體并入選自干擾素基因(sting)激動(dòng)劑、cpg-odn、r848及poly(i:c)的刺激物的免疫反應(yīng)刺激物中，其中所述目標(biāo)肽為癌癥抗原、病毒抗原、細(xì)菌抗原，或寄生蟲抗原。

21.根據(jù)權(quán)利要求17所述的方法，進(jìn)一步包括將所述納米載體并入選自雷帕霉素、阿司匹林、維生素d、類固醇及n-乙酰胱氨酸的免疫反應(yīng)抑制劑，其中所述目標(biāo)肽為自體抗原，且施用所述載體系統(tǒng)誘導(dǎo)對所述自體抗原的耐受性。

22.根據(jù)權(quán)利要求20所述的方法，其中所述納米載體為中空的聚合物納米顆粒。

23.根據(jù)權(quán)利要求21所述的方法，其中所述納米載體為中空的聚合物納米顆粒。

技術(shù)總結(jié)
一載體系統(tǒng)，包括納米載體以及與所述納米載體非共價(jià)結(jié)合的肽。所述肽包含與目標(biāo)肽的N端融合的轉(zhuǎn)接子肽序列，所述轉(zhuǎn)接子肽序列被設(shè)計(jì)為促進(jìn)與所述納米載體的結(jié)合。還公開一種通過將肽抗原與轉(zhuǎn)接子肽序列融合以形成免疫肽并使所述免疫肽與相容的納米載體接觸，來改善所述肽抗原的免疫原性的方法。此外，提供一種通過以已經(jīng)與轉(zhuǎn)接子肽序列融合并因此與納米載體結(jié)合的目標(biāo)肽免疫來治療疾病的方法。所述方法誘導(dǎo)針對所述目標(biāo)肽的免疫反應(yīng)以治療癌癥、病毒感染、細(xì)菌感染、寄生蟲感染、自體免疫，或?qū)ι镏苿┑牟涣济庖叻磻?yīng)。

技術(shù)研發(fā)人員：胡哲銘,林建緯,林榮辰,白振學(xué)
受保護(hù)的技術(shù)使用者：周美吟
技術(shù)研發(fā)日：
技術(shù)公布日：2024/12/19