專利名稱：：用于治療增生性疾病的組合的制作方法用于治療增生性疾病的組合
背景技術(shù)：
：本發(fā)明涉及癌癥和其它增生性疾病的治療.癌癥是一種以異常細(xì)胞不受控制地生長為標(biāo)志的疾病.癌癥細(xì)胞克服了正常細(xì)胞中固有的壽命有限的陣礙，不確定地生長.當(dāng)癌癥細(xì)胞繼續(xù)生長時(shí)，持續(xù)發(fā)生遣傳改變，直到癌細(xì)胞已經(jīng)具備更具有使入性的生長表型.如果不進(jìn)行治療，癌癥細(xì)胞可能隨即發(fā)生轉(zhuǎn)移，通過淋巴系統(tǒng)或者血流擴(kuò)散到遠(yuǎn)處的機(jī)體部位，破壞健康組織.事實(shí)上，即使在一種類型癌癥中也存在顯著的異質(zhì)性，這妨礙了癌癥的治療.例如，某些癌癥能夠便入組織中，并且表現(xiàn)為以轉(zhuǎn)移為特征的侵略性生長過程.這種腫痏通常伴隨著極差的治療結(jié)果.最終，腫痏異質(zhì)性產(chǎn)生多重的藥物抗性的現(xiàn)象，即對大范閨的結(jié)構(gòu)不相關(guān)的細(xì)胞毒性抗癌化合物具有抗性，J.H.Gerlach等人，CancerSurveys,5:25-46,1986,如J.H.Goldie和AndrewJ*Coldman，CancerResearch,44:3643-3653，1984中所述，漸進(jìn)性的藥物抗性的根本原因可能是由于診斷時(shí)腫瘤中的少量耐藥性細(xì)胞群(例如，突變細(xì)胞)，用單一的藥物處理這種腫瘤能夠達(dá)到消除腫瘤的作用，其中由于絕大部分的藥物敏感細(xì)胞被殺死，因而腫痏收縮.然而，由于藥物敏感細(xì)胞被殺死，剩下的耐葯性細(xì)胞繼續(xù)增殖，并最終成為主要的腫瘤細(xì)胞群體.因此，轉(zhuǎn)移性癌癥對所有可用的治療方法產(chǎn)生抗性的原因以及如何克服的問趙是癌癥化學(xué)治療中最迫切需要解決的問題.需要抗痛治療方法，該方法對廣泛的各種腫瘤類型是可靠的，并且特別適合于侵入性腫瘤.重要的是，治療必須是有效的，具有最小限度的宿主毒性.盡管采用多種藥物組合來治療癌癥，特別是治療多重藥物抗性的癌癥具有較長的歷史，用組合治療方法所獲得的陽性結(jié)果仍然常常是不可預(yù)期的.發(fā)明概迷本發(fā)明的特征在于用于治療增生性疾病如癌癥的組合物、方法和試刑盒.笫一個(gè)方面，本發(fā)明的特征在于包括降低有絲分裂驅(qū)動蛋白的生物學(xué)活性的第一種試劑和降低蛋白質(zhì)酪氨酸褲酸酯酶的生物學(xué)活性的笫二種試刑的組合物.本發(fā)明的特征還在于用于治療患有增生性疾病的患者的方法，或者用于抑制增生性疾病在患者中發(fā)展的方法，通過給患者施用降低有絲分裂驅(qū)動蛋白的生物學(xué)活性的第一種試劑和降低蛋白質(zhì)酪氨酸褲酸酯蘇的生物學(xué)活性的笫二種試糸.期望地，以足以治療患者的含量，同時(shí)或者相互之間在14天內(nèi)、相互之間在7天內(nèi)、相互之間在l天內(nèi)施用這兩種試刑.本發(fā)明的特征還在于一種降低細(xì)胞增殖的方法，通過將細(xì)胞與降低有絲分裂驅(qū)動蛋白的生物學(xué)活性的笫一種試刑和降低蛋白質(zhì)酪氨酸褲酸醋酶的生物學(xué)活性的第二種試劑接觸.該方法和組合物還包括其它抗增生性試刑，例如抗癌試劑.在還有另一個(gè)方面，本發(fā)明的特征在于用于確定可用于治療增生性疾病的組合的方法.在這種方法中，將增生細(xì)胞(例如，癌癥細(xì)胞和癌癥細(xì)胞系)與(i)降低有絲分裂驅(qū)動蛋白的生物學(xué)活性的試刑以及(ii)一種候選化合物在體外接觸.采用任何可接受的分析，然后確定相對于與該試刑接觸而未與候選化合物接觸的細(xì)胞的增殖，該試刑與候選化合物的組合是否降低了細(xì)胞增殖.細(xì)胞增殖下降鑒定該組合是一種可用于治療增生性疾病的組合.另一個(gè)方面，本發(fā)明的特征在于用于確定可用于治療增生性疾病的組合的另一種方法.該方法包括下列步驟(a)鑒定一種降低蛋白質(zhì)酪氨酸褲酸酯酶的生物學(xué)活性的化合物；(b)將增生細(xì)胞與降低有絲分裂驅(qū)動蛋白的生物學(xué)活性的試刑以及在步驟(a)中鑒定的化合物在體外接觸；和(c)確定相對于與該試刑接觸而未與步驟(a)中筌定的化合物接觸或者與步脒(a)中鑒定的化合物接觸而未與該試劑接觸的細(xì)胞的增殖，該試劑與步稞(a)中鑒定的化合物的組合是否降低細(xì)胞增殖.細(xì)胞增殖下降鑒定該組合是一種可用于治療增生性疾病的組合.在前述方面的任何一個(gè)中，降低有絲分裂驅(qū)動蛋白的生物學(xué)活性的試刑可以是，例如，有絲分裂驅(qū)動蛋白的抑制刑、降低有絲分裂驅(qū)動蛋白的表達(dá)水平的反義化合物或者RNAi化合物、顯性陰性的(dominantnegative)有絲分裂驅(qū)動蛋白、編碼這種顯性陰性的有絲分12裂驅(qū)動蛋白的表達(dá)栽體、結(jié)合有絲分裂驅(qū)動蛋白并降低有絲分裂驅(qū)動蛋白的生物學(xué)活性的抗體或者極光(aurora)激蘇抑制刑.期望地，降低有絲分裂駔動蛋白的生物學(xué)活性的試刑降低了HsEg5/KSP的生物學(xué)活性.示例性的有絲分裂驅(qū)動蛋白的生物學(xué)活性是醉促活性、運(yùn)動活性和結(jié)合活性.在還有另一個(gè)方面，本發(fā)明的特征在于姿定可用于治療增生性疾病的化合物的另一種方法.這種方法包括下列步猓(a)提供被工程化以降低有絲分裂驅(qū)動蛋白的生物學(xué)活性的增生細(xì)胞；(b)將該細(xì)胞與候逸化合物接觸；和(c)確定相對于未與候選化合物接觸的細(xì)胞，候選化合物是否降低細(xì)胞增殖.細(xì)胞增殖下降簦定該化合物是一種可被用于增生性疾病治療的化合物.在另一個(gè)方面，本發(fā)明的特征還在于另一種方法，其用于鑒定可被用于治療增生性疾病的組合.該方法包括下列步猓(a)將增生細(xì)胞與降低蛋白質(zhì)酪氨酸碑酸薛睞生物學(xué)活性的試刑以及候選化合物在體外接觸；和(b)確定相對于與該試劑接觸而未與候選化合物接觸的細(xì)胞的增殖，該試刑與候選化合物的組合是否降低細(xì)胞增殖.細(xì)胞增殖下降鑒定該組合是一種可被用于增生性疾病治療的組合.在一個(gè)相關(guān)方面，本發(fā)明的特征在于用于鑒定可用于治療增生性疾病的組合的方法.該方法包括下列步稞(a)鑒定一種降低有絲分裂驅(qū)動蛋白的生物學(xué)活性的化合物；(b)將增生細(xì)胞與降低蛋白質(zhì)酪氨酸鱗酸醋醉生物學(xué)活性的試劑以及在步稞(a)中鑒定的化合物在體外接觸；和(c)確定相對于與該試刑接觸而未與在步驟(a)中姿定的化合物接觸或者與在步稞(a)中鑒定的化合物接觸而未與該試劑接觸的細(xì)胞的增殖，該試刑與在步稞(a)中筌定的化合物的組合是否降低細(xì)胞增殖.細(xì)胞增殖下降鑒定該組合是一種可被用于治療增生性疾病的組合.在前述方面的任何一個(gè)中，降低蛋白質(zhì)酪氨酸褲酸酯酶的生物學(xué)活性的試劑是一種蛋白質(zhì)酪氨酸褲酸酴蘇的抑制刑、降低蛋白質(zhì)酪氨酸褲酸癍醉的表達(dá)水平的反義化合物或者RNAi化合物、顯性陰性的蛋白質(zhì)酪氨酸褲酸酶酵、編碼所迷顯性陰性的蛋白質(zhì)酪氨酸褲酸酶蘇的表達(dá)栽體、結(jié)合蛋白質(zhì)酪氨酸褲酸酯醉并降低蛋白質(zhì)酪氨酸辨酸酴酶的生物學(xué)活性的抗體或者法尼基轉(zhuǎn)移酶的抑制刑.期望地，所述的試刑降低選自PTP1B、PRL-1、PRL-2、PRL"3、SHP-1、SHP-2、MKP-1、MKP-2、CDC14、CDC25A、CDC25B和CDC25C的蛋白質(zhì)酪氨酸褲酸酯酶的生物活性.另一個(gè)方面，本發(fā)明的特征在于用于鑒定可被用于治療增生性疾病的組合的另一種方法.該方法包括下列步稞(a)提供被工程化以降低蛋白質(zhì)酪氨酸褲酸癍醉的生物學(xué)活性的增生細(xì)胞；(b)將該細(xì)胞與候選化合物接觸；和(c)確定相對于未與候選化合物接觸的細(xì)胞，該候選化合物是否降低細(xì)胞增殖.細(xì)胞增殖下降鑒定該化合物是一種可被用于治療增生性疾病的化合物.在前述方面中的任何一種中，該細(xì)胞理想地是癌細(xì)胞或者來自癌細(xì)胞系的細(xì)胞."更有效的"是指方法、組合物或者試刑盒具有更大的功效、較低的毒性、更安全、更便捷、更容易耐受或者更低廉，或者產(chǎn)生比另一種被比較的方法、組合物或試劑盒更令人滿意的治療效果.功效可以由熟練的技術(shù)人員采用適合于特定指示(indication)的任何標(biāo)準(zhǔn)方法來測定."有絲分裂驅(qū)動蛋白的抑制劑"是指結(jié)合有絲分裂驅(qū)動蛋白和顯著地降低(例如降低至少10%、加％、30%或者更多)該有絲分裂驅(qū)動蛋白的生物學(xué)活性的試刑.有絲分裂驅(qū)動蛋白的生物學(xué)活性包括酶促活性(例如，ATP酶活性)、運(yùn)動活性(例如，力重產(chǎn)生)和結(jié)合活性(例如，運(yùn)動原結(jié)合到微管或其運(yùn)栽物(cargo)上)."顯性陰性的"是指蛋白質(zhì)含有至少一個(gè)滅活其生理學(xué)活性的突變，使得在存在正常的或野生型拷貝的蛋白質(zhì)時(shí)，這種突變體的表達(dá)導(dǎo)致正?？截惖幕钚员粶缁罨蚪档?因此，突變的活性"支配"正常拷貝的活性，使得即使存在正常的拷貝，生物學(xué)功能仍被降低.在一個(gè)例子中，需要兩個(gè)拷貝的該蛋白的二聚體，使得即使存在一個(gè)正?？截惡鸵粋€(gè)突變拷貝，也不具有活性；另一個(gè)例子是當(dāng)突變體結(jié)合或者"吸收"對于正常拷貝的功能關(guān)鍵的其它蛋白質(zhì)，使得對于正常拷貝的活性來說，不存在足夠的這種其它蛋白質(zhì)時(shí).物的酪氨酸殘基去褲酸的獰."蛋白質(zhì)酪氨酸褲酸酶睞的抑制刑"是結(jié)合蛋白質(zhì)酪氨酸磷酸醋或者"PTP酶"是指一種使蛋白質(zhì)底酶和抑制(例如，至少10%、20%、30%或者更多)蛋白質(zhì)酪氨酸砩酸薛蘇的生物學(xué)活性的試刑."雙特異性褲酸酯醉"是指一種蛋白質(zhì)褲酸糖醉，其能夠使同一蛋白質(zhì)底物的酪氨酸殘基或絲氨酸或蘇氨酸殘基去褲酸.雙特異性礴酸酯睞包括MKP-1、MKP-2和細(xì)胞分化周期褲酸酯醉家族(例如，CDC14、CDC25A、CDC25B和CDC25C)雙特異性褲酸酯酵被認(rèn)為是蛋白質(zhì)酪氨酸褲酸醋酶."抗增生性試刑"是指一種化合物，其單獨(dú)地抑制細(xì)胞增殖.本發(fā)明的抗增生性試劑包括烷基化劑、鉑試刑、抗代謝物、拓樸異構(gòu)酶抑制刑、抗腫痏抗生素、抗有絲分裂試劑、芳化酶抑制劑(aromatase抑制刑)、胸苷酸合成醉抑制刑、DNA拮抗刑、法尼基轉(zhuǎn)移醉抑制刑、泵抑制刑、組蛋白乙?；D(zhuǎn)移雎抑制刑、金屬蛋白酶抑制劑、核糖核苷還原醉抑制劑、TNFa激動劑和拮抗劑、內(nèi)皮素A受體拮抗劑、維甲酸受體激動劑、免疫調(diào)制刑、激素和抗激素試刑、光動力試刑和酪氨酸激醉抑制刑."抑制細(xì)胞增殖"是指在體外或體內(nèi)，可測量地減緩、終止或反轉(zhuǎn)細(xì)胞的生長率.期望地，當(dāng)采用用于確定細(xì)胞生長率的合適分析方法(例如本文描述的細(xì)胞生長分析方法)進(jìn)行確定時(shí)，生長率減援至少20%、30%、50%、60%、70%、80%或90%.典型地，通過起始或加快贅生性細(xì)胞中的細(xì)胞死亡的壞死或凋亡機(jī)制，實(shí)現(xiàn)生長率的反轉(zhuǎn)."足量"是指在本發(fā)明的組合中，用于抑制體內(nèi)的贊生物的細(xì)胞生長的化合物的含重.用于實(shí)施本發(fā)明來治療增生性疾病(即癌癥)的活性化合物的有效量隨著施用方式、患者的年齡、種族、性別、患病器官、體重和健康狀況而變化.最后，主治醫(yī)師或獸醫(yī)將會決定適當(dāng)?shù)暮亢蛣┝恐委煼桨?"低刑量"是指比特定化合物的最低標(biāo)準(zhǔn)推薦刑重低至少5%(例如，至少10%、20%、50%、80%、90%或者甚至95%),該化合物被配制用于特定施用路徑來治療任何的人的疾病或狀況(condition)."高刑重"是指比用于治療任何的人的疾病或癥狀的化合物的最高標(biāo)準(zhǔn)推薦刑量高至少5%(例如，至少10%、20%、50%、1080%、200%或者甚至300%).表述"藥學(xué)上可接受的"是指當(dāng)被施用給患者時(shí)，不產(chǎn)生不利的、過敏的或者其它不當(dāng)?shù)姆磻?yīng)的分子實(shí)體和組合物.如在此所用，"藥學(xué)上可接受的栽體"包括任何和所有溶刑、分散液、包被、抗菌刑和抗真菌刑、等滲的和延緩吸收的試劑等.這些溶液和試刑被用于藥學(xué)活性物質(zhì)在本領(lǐng)域是熟知的."患者"是指任何動物(例如，人).可以用本發(fā)明的方法、組合物和試刑盒處理的非人動物包括馬、狗、貓、豬、山羊、兔子、倉鼠、猴子、豚鼠、大鼠、小鼠、蜥蜴、蛇、綿羊、牛、魚和烏.用于本發(fā)明中的化合物包括任何藥學(xué)上可接受形式的本文描迷的那些化合物，包括異構(gòu)體，例如非對映異構(gòu)體和對映體、鹽、溶刑化物和多形體，以及本文描述的化合物的外消旋混合物.本發(fā)明的其它特征和優(yōu)點(diǎn)可以從如下詳細(xì)描述的說明書和權(quán)利要求書中明顯看出.詳細(xì)描述本發(fā)明的特征在于用于治療增生性疾病的組合物、方法和試刑盒.正常細(xì)胞具有以程序化的方式調(diào)控生長、有絲分裂、分化、細(xì)胞功能和細(xì)胞死亡的信號機(jī)制.調(diào)控這些功能的信號路徑中存在缺陷會導(dǎo)致不受控制的生長和增殖，這會表現(xiàn)為癌癥、增生、再狹窄、心臟肥大、免疫異常和炎癥異常.有絲分裂驅(qū)動蛋白是有絲分裂中必需的馬達(dá).它們控制紡錘體裝配和維持、染色體附著和正確定位到紡錘體上、建立雙極紡錘體并維持紡錘體中的力重以使得染色體朝相反的兩極運(yùn)動.有絲分裂驅(qū)動蛋白功能混亂會造成有絲分裂的紡錘體畸形或者功能棄亂，隨即引起細(xì)胞周期停止和細(xì)胞死亡.蛋白質(zhì)酪氨酸褲酸酯醉(PTPases)是細(xì)胞內(nèi)的信號分子，其使蛋白質(zhì)底物的酪氨酸殘基脫去褲酸，從而調(diào)節(jié)某些細(xì)胞功能.在正常細(xì)胞中，它們通常與蛋白質(zhì)酪氨酸激酶共同作用，通過蛋白質(zhì)酪氨酸殘基的褲酸化來調(diào)控信號級聯(lián).蛋白質(zhì)上的酪氨酸殘基的褲酸化和去罅酸化控制細(xì)胞的生長和增殖、細(xì)胞周期的行進(jìn)、細(xì)胞骨架的完整性、分化和代謝.在不同的轉(zhuǎn)移性細(xì)胞系和癌細(xì)胞系中，PTP1B和再生肝臟的褲酸醋睞家族(PRL-1、PRJU2和PRLO)被證明是過度表達(dá)的.例如，在轉(zhuǎn)移性結(jié)直腸癌中，PRLO(也被稱作為PTP4A3)以相對高的水平被表達(dá)(Saha等人，Science294:1343-1346，2001.)PRL1定位于有絲分裂紡錘體，是有絲分裂進(jìn)行和染色體分離所需的.PRL褲酸S8蘇促進(jìn)細(xì)胞的遷移、侵入和轉(zhuǎn)移，已經(jīng)證明，抑制這些PTP酶會對體外的癌細(xì)胞增殖和動物模型中的腫癩產(chǎn)生抑制作用.本發(fā)明人先前已經(jīng)證明了，氣丙嗪(chlorpromazine)和噴他脒(pentamidine)組合共同作用會降低細(xì)胞增殖(美國專利6,569，853).本發(fā)明人現(xiàn)證明氯丙喚作為一種有絲分裂驅(qū)動蛋白的抑制劑.而噴他脒已經(jīng)被證明是PRL鱗酸睇醉的抑制劑(Pa也ak等人，Mol.CancerTher.l:1255-1264,2002).基于前迷的觀察結(jié)果，本發(fā)明人認(rèn)為，降低有絲分裂駔動蛋白的生物學(xué)活性的試刑與降低蛋白質(zhì)酪氨酸褲酸fiS醉的活性的試刑的組合可用于降低細(xì)胞増殖，從而可用于治療增生性疾病.有絲分裂驅(qū)動蛋白有絲分裂驅(qū)動蛋白包括HsEg5/KSP、KIFC3、CH02、MKLP、MCAK、Kin2、Kif4、MPP1、CENP-E、NYREN62、LOC8464和KIF8.其它的有絲分裂驅(qū)動蛋白被描述在美國專利6，414，121、6，582，958、6，544，766、6,492,158、6,455,293、6,440,731、6,437,115、6,420,162、6,399,346、6，395，540、6,383,796、6,379,941和6,248,594中.代表性的有絲分裂驅(qū)動蛋白的GenBank登錄號被提供在表1中.<table>tableseeoriginaldocumentpage18</column></row><table>HsEgS/KSP已經(jīng)被克隆和表征(參見，例如Blangy等人，Cell,83:1159-69(1995);Galgio等人，J.CellBiol"135:399-414,1996;Whitehead等人，J.CellSci"111:2551-2561,1998;Kaiser等人,J.Biol.Chem.,274:18925-31，1999;GenBank登錄號X85137,NM004523).KSP的果錄(Heck等人，J.CellBiol.，123:665-79，1993)和爪塘(J^"fl/"^(LeGueHec等人，Mol.CellBiol"11:3395-8，1991)同系物已經(jīng)被報(bào)道.杲蠔KLP61F/KRP130據(jù)說以天然形式被純化(Cole,等人，J,Biol.Chem"269:22913-22916,1994),在大麻桿菌中表達(dá)(Barton,等人，Mol.Biol.Cell,6:1563-74，1995),并且被報(bào)道具有運(yùn)動性和ATP酶活性(Cole,等人，同上文；Barton,等人，同上文).爪禱Eg5/KSP在大麻桿菌中表達(dá)，并且被報(bào)道具有運(yùn)動活性(Sawin，等人，Nature,359:540-3,1992;Lockhart和Cross,Biochemistry,35:2365-73，1996;Crevel，等人，J.Mol.Biol.，273:160-170，1997)以及ATP躊活性(Lockhart和Cross,同上文；Crevel等人，同上文).除了KSP之外，BimC家族的其它成員包括BimC、CIN8、cut7、KIP1、KLP61F(Barton等人，Mol.Biol.Cell.6:1563-1574,1995;Cottingham和Hoyt，J.CellBiol.138:1041-1053，1997;DeZwaan等人，J.CellBiol.138:1023-1040,1997;Gaglio等人,J.CellBiol.135:399-414,1996;Geiser等人，Mol.Biol.Cell8:1035-1050,1997;Heck等人，J.CellBiol.123:665-679，1993;Hoyt等人，J.CellBiol.118:109-120，1992;Hoytetal"Genetics135:35-44,1993;Huyett等人，J.CellSci.Ill:295-301，1998;Miller等人，Mol.Biol.Cell9:2051-2068，1998;Roof等人，J.CellBiol.118:95-108，1992;Sanders等人，J.CellBiol.137:417-431，1997;Sanders等人，Mol.Biol.Cell8:1025-0133,1997;Sanders等人，J.CellBiol.128:617-624,1995;Sanders和Hoyt，Cell70:451-458，1992;Sharp等人，J.CellBiol.144:125-138，1999;Straight等人，J.CellBiol.143:687-694,1998;Whitehead和Rattner，J.CellSci,111:2551-2561,1998;Wilson等人，J.CellSci.110:451-464,1997).有絲分裂驅(qū)動蛋白的生物學(xué)活性包括其能夠作用于ATP水解；結(jié)合微管；滑移和聚合/解聚(作用于微管動力學(xué))；結(jié)合紡錘體的其它蛋白質(zhì)；結(jié)合與細(xì)胞周期控制相關(guān)的蛋白質(zhì)；作為其它蘇的底物，例如激蘇或蛋白酶；以及特定的驅(qū)動蛋白細(xì)胞活性例如紡錘體兩極分離.用于分析有絲分裂驅(qū)動蛋白的生物學(xué)活性的方法在本領(lǐng)域是熟知的.例如，進(jìn)行運(yùn)動性分析的方法被描述在，例如Hall,等人，1996，Biophys.J"71:3467-3476,Turner等人，1996,Anal.Biochem.242:20-25;Gittes等人，1996,Biophys.J.70:418-429;Shirakawa等人，1995，J.Exp.Biol.198:1809-1815;Winkelmann等人，1995，Biophys.J.68:2444-2453;以及Winkelmann等人，1995，Biophys.J.68:72S中.也可以采用本領(lǐng)域知曉的用于確定ATP醉水解活性的方法.1999年5月18日申請的美國專利申請09/314，斬4在此完全引入作為參考，其描述了這種分析方法.還可以采用其它方法.例如，量化從驅(qū)動蛋白上釋放的P"在一個(gè)具體的實(shí)施方案中，ATP水解活性分析使用0.3M高氯酸(PCA)和孔雀石綠試劑(8.27mM鉬酸鈉n、(Ui3mM孔雀石緣革酸鹽以及0.8mMTritonX-100)為了進(jìn)行該分析，在卯nl冰冷的0.3MPCA中淬滅10iLil反應(yīng)物.使用褲酸鹽標(biāo)準(zhǔn)物，將數(shù)據(jù)轉(zhuǎn)換為釋放的nM無機(jī)褲酸鹽.當(dāng)所有反應(yīng)物和標(biāo)準(zhǔn)物已經(jīng)在PCA中被淬滅時(shí)，將100nL孔雀石綠試劑添加到相應(yīng)的孔中，如在微量滴定平板中.讓混合物顯影10-15分鐘，在650nm的吸光率下讀數(shù).如果使用褲酸鹽標(biāo)準(zhǔn)物，將吸光率讀數(shù)轉(zhuǎn)換成nMPi，并按照時(shí)間變化繪制曲線.此外，本領(lǐng)域知曉的ATP酶分析包括熒光素酶分析.驅(qū)動蛋白運(yùn)動原結(jié)構(gòu)域的ATP酶活性也被用于監(jiān)控調(diào)節(jié)試刑的作用.在一個(gè)實(shí)施方案中，在不存在微管時(shí)進(jìn)行驅(qū)動蛋白的ATP蘇分析.在另一個(gè)實(shí)施方案中，在存在微管時(shí)進(jìn)行驅(qū)動蛋白的ATP蘇分析.在上述分析中檢測不同類型的調(diào)節(jié)試刑.在一個(gè)實(shí)施方案中，調(diào)節(jié)試刑的作用與微管和ATP的濃度無關(guān).在另一個(gè)實(shí)施方案中，試刑對驅(qū)動蛋白ATP醉的作用可通過增加ATP、微管或者兩者的濃度而被降低.然后可以在體外篩選降低有絲分裂驅(qū)動蛋白的生物學(xué)活性的試刑.用于體內(nèi)篩選的方法包括分析細(xì)胞周期分布、細(xì)胞存活力或者有絲分裂紡錘體的存在情況、形態(tài)、活性、分布或數(shù)量.通過流氏細(xì)胞儀監(jiān)控細(xì)胞群體的細(xì)胞周期分布的方法是本領(lǐng)域技術(shù)人員熟知的，用于確定細(xì)胞存活力的方法也是已知的(參見，例如美國專利6,617,115)有絲分裂驅(qū)動蛋白抑制刑有絲分裂驅(qū)動蛋白的抑制刑包括氣丙噢、monasterol、terpendoleE、HR22C16和SB71S外2.其它有絲分裂驅(qū)動蛋白的抑制刑是Hopkins等人，Biochemistry39:2805，2000，Hotha等人,AngewChem.Inst.Ed.42:2379，2003,PCT專利公開WO01/98278、W002/057244、W002/079169、W002/057244、W002/056880、W003/050122、W003/050064、W003/049679、W003/049678、W003/049527、W003/079973和W003/039460,以及美國專利申請公開2002/0165240,2003/0008888,2003/0127621和2002/0143026;以及美國專利6,437,115、6,545,004、6,562,831、6,569,853和6,630,479中描述的那些化合物.氯丙噢類似物被描述在美國專利申請10/617,424中(參見，如通式(I)).蛋白質(zhì)酪氨酸褲酸癍蘇蛋白質(zhì)酪氨酸褲酸SS睞包括PRL家族(PRL-l、PRL-2和PRL^3)、PTP1B、SHP-1、SHP-2、MKP-1、MKP-2、CDC14、CDC25A、CDC25B、CDC25C、PTPa和PTP-BL.蛋白質(zhì)酪氨酸辨酸癍躊生物學(xué)活性包括在底物上的酪氨酸殘基的去褲酸化.代表性的酪氨酸褲酸醋醉的GenBank登錄號被提供在表2中.表2人蛋白質(zhì)酪氨酸褲酸酶醉<table>tableseeoriginaldocumentpage21</column></row><table>蛋白質(zhì)酪氨酸褲酸酴酶的抑制劑蛋白質(zhì)酪氨酸磷酸酯醉的抑制刑包括噴他脒、左咪唑、斕廒唑(ketoconazole)、雙過氣機(jī)酸鈉(bisperoxovanadi咖)化合物(例如，在Scrivens等人，Mol.CancerTher.2:1053-1059,2003和美國專利6,642,221中描迷的那些化合物)、釩酸鹽和復(fù)合物(例如，原釩酸納)、dephosphatin、dnacinAl、dnacinA2、STI-S71、蘇拉明、硝酸鎵、葡酸娣鈉(sodiumstibogluconate)、偏梯酸甲葡胺(meglumineantimonate)、2-(2-巰基乙醉)-3-甲基-1，4-萘載、2,5-二(4-氨基苯基)呋喃-二-O-甲脒肟(me也ylamidoxime)，被稱作為DB289(Immtech)、US5，843，980中描迷的2，5-二(4-氨基苯基)呋喻(DB7S,Immtech),以及Pestell等人，Oncogene19:6607-6612，2000，Lyon等人，Nat.Rev.DrugDiscov.1:961-976,2002,Ducruet等人，Bioorg.Med.Chem.8:1451-1466，2000，美國專利申請公開2003/0114703、2003/0144338和2003/0161893,以及PCT專利申請公開W099/46237、W00:3/06788和W003/070158中描述的化合物.還有其它類似物是那些落入美國專利5，428，051;5,521,189;5,602,172;5,643,935;5,723,495;5,843,980;6,008,247;6,025,398;6,172,104;6,214,883和6,326,395和美閨專利申請>^開US2001/0044468和US2002/0019437的任何一篇提供的通式中的化合物，以及在美國專利申請10/617,424中描述的噴他瞇類似物(參見，例如通式(n)).其它蛋白質(zhì)酪氨酸褲酸癍酶抑制刑可以如用Lazo等人(Oncol.Res.13:347-352，2003)、PCT公開W097/40379、W003/003001和W003/035621以及美國專利5,443，962和5,958,719描述的方法來姿定.其它生物學(xué)活性抑制刑除了通過使用結(jié)合有絲分裂驅(qū)動蛋白或蛋白質(zhì)酪氨酸褲酸癍酶的化合物來降低生物學(xué)活性外，還可以使用有絲分裂驅(qū)動蛋白和蛋白質(zhì)酪氨酸褲酸酯醉的生物學(xué)活性的其它抑制刑.這種抑制刑包括降低目標(biāo)蛋白或RNA水平的化合物(例如，反義化合物、dsRNA、核蘇)，以及與內(nèi)源性有絲分裂驅(qū)動蛋白或者蛋白質(zhì)酪氨酸褲酸癍酶竟?fàn)幗Y(jié)合配體的化合物(例如，顯性陰性的蛋白或編碼其的多核苷酸).反義化合物可以通過使用定向于編碼目標(biāo)蛋白的RNA的反義化合物，來降低有絲分裂驅(qū)動蛋白和/或蛋白質(zhì)酪氨酸確酸酶醉的生物學(xué)活性.適合這種用途的有絲分裂驅(qū)動蛋白的反義化合物在本領(lǐng)域是已知的(參見，例如美國專利6,472,521、W003/030832和Maney等人，J.CellBiol"1998，142:787-801)，抗蛋白質(zhì)路氨酸褲酸酯酶的反義化合物也是已知的(參見，例如美國專利公開200:3/0083285和Weil等人，Biotechniques33:1244，2002).可以使用標(biāo)準(zhǔn)技術(shù)來鑒定減少有絲分裂驅(qū)動蛋白的其它反義化合物.例如，用RNA二級結(jié)構(gòu)折疊程序，例如MFOLD(M.Zuker，D.H.Mathews和D.H.Turner,AlgorithmsandThermodynamicsforRNASecondaryStructurePrediction:APracticalGuide.In:RNABiochemistryandBiotechnology,J.Barciszewski&B.F.C.Clark編輯，NATOASISeries,KluwerAcademicPublishers,(l999)),可以預(yù)測目標(biāo)有絲分裂驅(qū)動蛋白或蛋白質(zhì)酪氨酸褲酸酯醉的mRNA的可接近區(qū)域.采用200個(gè)堿基的窗口預(yù)測具有所預(yù)測的mRNA的最穩(wěn)定折疊的5%之內(nèi)的自由能值的次泉佳折疊，在該窗口中，一個(gè)堿基會找到一個(gè)適宜的(complimentary)堿基來形成械基配對鍵.未形成堿基配對的開放區(qū)域與各個(gè)次最佳折疊集中在一起，被預(yù)測為開放的區(qū)域被認(rèn)為是更容易結(jié)合反義核堿基低聚體.用于反義設(shè)計(jì)的其它方法被描述在，例如美國專利6,472,521、AntisenseNucleicAcidDrugDev.19977:439-444、NucleicAcidsResearch28:2597-2604，2000以及NucleicAcidsResearch31:4989-4994，2003中.RNA干擾可以通過使用RNA干擾(RNAi)，采用例如雙鏈RNA(dsRNA)或者定向于所討論的有絲分裂驅(qū)動蛋白或蛋白質(zhì)路氨酸辨酸醋酶的小干擾RNA(siRNA),來降低有絲分裂駔動蛋白和/或蛋白質(zhì)酪氨酸褲酸酯酶的生物學(xué)活性(參見，例如，Miyamoto等人，Prog.CellCycleRes.5:349-360，2003;美國專利申請公開2003/0157030).用于設(shè)計(jì)這種干擾RNA的方法在本領(lǐng)域是已知的.例如，用于設(shè)計(jì)干擾RNA的軟件可以從Oligoengine(西雅困，華盛頓州)購買得到.顯性陰性的蛋白質(zhì)本領(lǐng)域技術(shù)人員知曉如何制備顯性陰性的有絲分裂驅(qū)動蛋白和蛋白質(zhì)酪氨酸褲酸酯睞.這種顯性陰性的蛋白被描迷在，例如Gupta等人，J.Exp.Med.,186:473-478,1997;Maegawa等人，J.Biol.Chem.274:30236-30243，1999;Woodford-Thomas等人，J.CellBiol.117:401-414，1992中.極光激睞的抑制刑極光激醉已經(jīng)被證明是一種新家族的蛋白激醉，其調(diào)控有絲分裂紡錘體的結(jié)構(gòu)和功能.極光激醉的一個(gè)靶點(diǎn)包括有絲分裂驅(qū)動蛋白.因此，按照本發(fā)明的方法、組合物或者試刑盒，極光激蘇的抑制刑可被用于與降低蛋白質(zhì)酪氨酸褲酸薛醉生物學(xué)活性的化合物組合.有三類極光激醉極光-A、極光-B和極光-C.極光-A包括AIRKl、DmAurora、HsA訓(xùn)ra-2、HsAIK、HsSTK15、CeAIR-l、MmARKI、MmAYKl、MmIAKI和XIEg2.極光-B包括AIRK-2、DmIAHHsAurora-l、HsAIK2、HsAIM-l、HsSTK12、CeAIR-2、MmARK2和XAIRK2.極光-C包括HsAIK3(Adams，等人，TrendsCellBiol.il:49-54，2001).極光激酶的抑制劑包括VX-528和ZM447439;其它極光激蘇的抑制刑被描述在，例如美國專利申請公開2003/01050卯和美國專利6,610,677、6,593,357和6,528,509中法尼基轉(zhuǎn)移酶抑制劑法尼基轉(zhuǎn)移酶抑制刑改變PRL磷酸酯醉的生物學(xué)活性，從而可以在本發(fā)明的方法、組合物或者試劑盒中與降低有絲分裂駔動蛋白的活性的化合物組合.法尼基轉(zhuǎn)移醉抑制刑包括arglabin、lonafarnib、BAY-43-9006、tipifarnib、紫蘇醇(perillylalcohol)、FTI-277和BMS-214662,以及例如，在Kohl,Ann.NYAcad.Sci.886:91-102,1999,美國專利申請公開2003/0199S44、2003/0199542、2003/0087940、2002/0086884、2002/0049327和2002/0019527,美國專利6,586,461和6,500,841，以及W003/004489中描述的那些化合物.治療本發(fā)明的化合物可用于治療癌癥和其它以超級增生性(hyperproliferative)細(xì)胞為特征的異常.可以單獨(dú)進(jìn)行治療或者與另一種治療方法聯(lián)合(例如，外科手術(shù)、放射治療、化學(xué)治療、免疫治療、抗血管生成治療或者基因治療).此外，具有較高的產(chǎn)生腫瘤或者其它增生性疾病的風(fēng)險(xiǎn)的人(例如，具有遣傳傾向或者先前患有這種異常的個(gè)體)可以接受預(yù)防性治療來抑制或延援超級增生.組合治療的持續(xù)時(shí)間取決于所處理的疾病或異常的類型、患者的年齡和癥狀、患者疾病的階段和類型以及患者對治療的反應(yīng).以開和關(guān)循環(huán)進(jìn)行治療，包括休止期，使得患者機(jī)體有機(jī)會從任何無法預(yù)料的副作用中恢復(fù).期望地，本發(fā)明的方法、組合物和試刑盒比其它方法、組合物和試劑盒更加有效."更加有效的"是指方法、組合物或試刑盒具有更高的功效、較低的毒性、更安全、更便捷、更容易耐受或者更低廉，或者產(chǎn)生比另一種被比較的方法、組合物或試刑盒更令人滿意的治療效果.癌癥包括，但是不限于白血病(例如，急性白血病、急性淋巴細(xì)胞白血病、急性鍵細(xì)胞白血病、急性成號細(xì)胞白血病、急性前拔細(xì)胞白血病、急性骨徵單核細(xì)胞白血病、急性單核細(xì)胞白血病、急性紅白血病、慢性白血病、慢性徵細(xì)胞白血病、慢性淋巴細(xì)胞白血病)、紅細(xì)胞增多癥(polycythemiavera)、淋巴瘤(霍金森病、非霍金森病)、瓦爾登斯特倫巨球蛋白血癥、重鏈疾病，以及固體瘤，如肉瘤和癌(例如纖維肉瘸、粘液肉瘸、脂肪肉痏、軟骨肉癍、生骨肉痏、脊索病、血管肉癍、內(nèi)皮細(xì)胞肉裙(endotheliosarco邁a)、淋巴管肉病(lymphangiosarcoma)、淋巴管內(nèi)皮細(xì)胞肉癩、滑膜瘤(synovioma)、間皮痏、Ewing氏瘸、平滑肌肉瘤、橫紋肌肉痏、大腸癌、胰腺癌、乳腺癌、卵巢癌、前列腺痛、辟狀上皮細(xì)胞瘸、基細(xì)胞瘤、腺癌、汗腺癌、脂肪腺癌、乳頭癌、乳頭腺癌、囊腺痏(cystadenocarcinoma)、脊號癌、支氣管癌、腎細(xì)胞瘤、肝細(xì)胞痏、膽管癌、絨毛膜癌、精原細(xì)胞痏、胚性痏、Wilm氏瘸、宮頭癌、子宮癌、爭丸癌、肺癌、小細(xì)胞肺癌、膀胱癌、上皮細(xì)胞瘤、神經(jīng)膠質(zhì)瘤、星細(xì)胞瘸、成神經(jīng)管細(xì)胞瘤、顱咽管癍、室鼓膜瘤、松果體瘸、成血管細(xì)胞瘤、聽神經(jīng)瘤、少突膠質(zhì)細(xì)胞瘸、施萬細(xì)胞瘤(schwannoma)、腦膜瘤、黑素瘤、成神經(jīng)細(xì)胞癩和眼癌.可以用本發(fā)明的組合和方法治療的其它增生性疾病包括淋巴細(xì)胞增生性(lymphoproliferative)異常和牛皮癬."淋巴細(xì)胞増生性異常"是指其中具有淋巴系統(tǒng)的細(xì)胞(例如，T-細(xì)胞和B-細(xì)胞)反常增殖的異常.其它治療可包括在本發(fā)明的組合中使用其它抗增生試刑.例如，當(dāng)治療癌癥時(shí)，可以與一種抗癌試劑，例如下文表3中的試刑組合施用.表3<table>tableseeoriginaldocumentpage26</column></row><table><table>tableseeoriginaldocumentpage27</column></row><table><table>tableseeoriginaldocumentpage28</column></row><table><table>tableseeoriginaldocumentpage29</column></row><table><table>tableseeoriginaldocumentpage30</column></row><table><table>tableseeoriginaldocumentpage31</column></row><table><table>tableseeoriginaldocumentpage32</column></row><table><table>tableseeoriginaldocumentpage33</column></row><table>實(shí)施例如下實(shí)施例用于說明本發(fā)明.這些實(shí)施例不以任何方式對本發(fā)明構(gòu)成限制.氣丙嚷是一種有絲分裂驅(qū)動蛋白的抑制刑采用無細(xì)胞的運(yùn)動分析(motorassay),本發(fā)明人確定氯丙漆是一種有絲分裂驅(qū)動蛋白的抑制刑.該分析測定在徵管激活驅(qū)動蛋白運(yùn)動蛋白的ATP醉活性過程中產(chǎn)生的有機(jī)褲酸鹽(Pi).使用驅(qū)動蛋白ATP睞末端點(diǎn)生化試刑盒(Cytoskeleton,產(chǎn)品目錄號BK053)，按照生產(chǎn)商推薦的反應(yīng)緩沖液、ATP和徵管的含量，分析重組的HsEgS/KSP驅(qū)動蛋白運(yùn)動蛋白的活性.HsEgS/KSP驅(qū)動蛋白的含重被優(yōu)化為每個(gè)反應(yīng)0.8Mg，并且包括在所指定的范閨內(nèi).每個(gè)分析以30nl的總反應(yīng)體積，在潔凈的96孔1/2區(qū)平板(CorningInc.,Costar,產(chǎn)品目錄號為3697)中進(jìn)行，包括如下條件1.僅由反應(yīng)援沖液和ATP組成的反應(yīng)空白；2.陰性對照反應(yīng)物含有a.微管和ATP,無驅(qū)動蛋白或者b.驅(qū)動蛋白HsEgS/KSP和ATP,無徵管；和3.試驗(yàn)反應(yīng)物含有ATP、驅(qū)動蛋白和微管，含有或不含指定濃度的化合物.在加入ATP前，在室溫下預(yù)培養(yǎng)反應(yīng)物15分鐘.在加入ATP后，在加入70m1CytoPhosReagent終止反應(yīng)之前，將反應(yīng)物在室溫下繼續(xù)培養(yǎng)10分鐘.在室溫下最后培養(yǎng)10分鐘后，在分光光度計(jì)(BeckmanInstruments,Inc.,DU530型)中、在650nm下讀取吸光率，對反應(yīng)物進(jìn)行量化.通過減去空白的吸光率來修正原始的吸光率值.通過與標(biāo)準(zhǔn)Pi曲線比較，將吸光率轉(zhuǎn)換為Pi濃度.按照如下公式％抑制-(未處理-處理)/未處理x100，從Pi濃度計(jì)算抑制百分率.從試驗(yàn)重復(fù)的抑制百分率中獲得算術(shù)平均值.該結(jié)果顯示在表4中.表4驅(qū)動蛋白運(yùn)動活性的抑制百分率(n=4)<table>tableseeoriginaldocumentpage35</column></row><table>其它能夠降低有絲分裂驅(qū)動蛋白的生物學(xué)活性的吩瘙漆包括異丙喚、甲碟喊喚、三氣歧喚、羥哌氯丙漆、羥哌象丙噪、氦氮平(clozapine)和氣吡嗪.氯丙喚和噴他脒的組合在體外降低細(xì)胞的增殖噴他脒(蛋白質(zhì)酪氡酸褲酸SI醉抑制刑)和氟丙噢(有絲分裂驅(qū)動蛋白抑制劑)組合被確定能夠降低體外的細(xì)胞增殖.將人大腸腺癌細(xì)胞系HCT116(ATCC#CCL^247)生長在37±STC和5%C02下、在添加10%FBS、2mM谷氨酰胺、1%青審素和1%鏈莓素的DMEM中.在384孔平板上進(jìn)行抗增殖分析.將來自組合基質(zhì)的10X母液(6.6nL)添加到分析孔內(nèi)的40pL培養(yǎng)液中.用0.25%胰蛋白睞溶液將腫瘤細(xì)胞從培養(yǎng)燒瓶中釋放出來.在培養(yǎng)液中稀釋細(xì)胞，將20jiL培養(yǎng)液中的3000個(gè)細(xì)胞呈遂到各個(gè)分析孔中.在371C±0.5TC、5%C02下，培養(yǎng)平板72-80小時(shí).在培養(yǎng)期過后，將ZOmL加熟到37TC土o.STC的20%AlamarBlue加入到各個(gè)分析孔中.在加入后的3.5-5.0小時(shí)，通過熒光強(qiáng)度數(shù)量來量化AlamarBlue代謝.使用LJLAnalystAD讀數(shù)器(LJLBiosystems),采用高衰減、IOO毫秒的讀取時(shí)間、530nm下的激發(fā)濾光器和57Snm下的發(fā)射濾光器在孔的中央進(jìn)行量化.對于某些試驗(yàn)，使用WallacVictor2讀數(shù)器進(jìn)行量化.使用穗定的能量燈對照、IOO毫秒的讀取時(shí)間、530nm下的激發(fā)濾光器和590nm下的發(fā)射濾光器對孔的上部進(jìn)行量化.兩種平板讀數(shù)器之間未測童到顯著差異.使用如下公式計(jì)算各孔的抑制百分率(％I):%I-(未處理孔的平均值-處理孔)/(未處理孔的平均值)1x100平均的未處理孔的數(shù)值(未處理孔的平均值)是僅用溶液處理的同一平板的40個(gè)孔的算術(shù)平均值.負(fù)的抑制數(shù)值來自處理孔與未處理孔相比的局部變化.以抑制百分率表示的數(shù)據(jù)顯示在表5中.__表5<table>tableseeoriginaldocumentpage36</column></row><table>其它實(shí)施方案上述說明書提及的全部文獻(xiàn)和專利均在此引入作參考.在不背離本發(fā)明之范圍和精神下，所述本發(fā)明的方法和系統(tǒng)的多種修改和變化對于本領(lǐng)域內(nèi)的技術(shù)人員是顯而易見的.盡管已經(jīng)以特定的優(yōu)選實(shí)施方案描述了本發(fā)明，但是應(yīng)當(dāng)理解，要求保護(hù)的發(fā)明不應(yīng)當(dāng)不當(dāng)?shù)叵抻谶@些特定的實(shí)施方案.事實(shí)上，為腫瘤學(xué)或相關(guān)領(lǐng)域內(nèi)的技術(shù)人員所顯而易見的對實(shí)施本發(fā)明的所述模式進(jìn)行的各種修改均在本發(fā)明的保護(hù)范圍之內(nèi).權(quán)利要求1.一種組合物，包含降低有絲分裂驅(qū)動蛋白的生物學(xué)活性的第一種試劑和降低蛋白質(zhì)酪氨酸磷酸酯酶的生物學(xué)活性的第二種試劑，其中所述第一種和第二種試劑以當(dāng)被施用給患有增生性痰病的患者時(shí)足以治療所述痰病的量存在。2.權(quán)利要求l的組合物，其中所述笫一種試劑是有絲分裂驅(qū)動蛋白的抑制刑.3.權(quán)利要求l的組合物，其中所述笫一種試劑是降低所述有絲分裂驅(qū)動蛋白的表達(dá)水平的反義化合物或者RNAi化合物.4.權(quán)利要求l的組合物，其中所述笫一種試劑是顯性陰性的有絲分裂驅(qū)動蛋白或者編碼所述顯性的陰性有絲分裂驅(qū)動蛋白的表達(dá)栽體.5.權(quán)利要求l的組合物，其中所述笫一種試劑是結(jié)合所述有絲分裂驅(qū)動蛋白和降低有絲分裂驅(qū)動蛋白的生物學(xué)活性的抗體.6.權(quán)利要求1-5的任何一項(xiàng)的組合物，其中所述有絲分裂驅(qū)動蛋白是HsEg5/KSP,7.權(quán)利要求l的組合物，其中所述第一種試劑是一種極光激酶抑制刑.8.權(quán)利要求l的組合物，其中所述有絲分裂驅(qū)動蛋白的生物學(xué)活性是酶促活性、運(yùn)動活性或結(jié)合活性.9.權(quán)利要求l的組合物，其中所述笫二種試刑是蛋白質(zhì)酪氨酸罅酸酶醉抑制劑.10.權(quán)利要求l的組合物，其中所迷笫二種試刑是降低所述蛋白質(zhì)酪氨酸褲酸酯酶的表達(dá)水平的反義化合物或者RNAi化合物.11.權(quán)利要求l的組合物，其中所述笫二種試刑是顯性陰性的蛋白質(zhì)酪氨酸辨酸癍蘇或者編碼所述顯性陰性的蛋白質(zhì)酪氨酸褲酸酯蘇的表達(dá)栽體.12.權(quán)利要求l的組合物，其中所述的笫二種試刑是一種結(jié)合所迷蛋白質(zhì)路氨酸磷酸酯醉并降低蛋白質(zhì)酪氨酸磷酸醋醉的生物學(xué)活性的抗體.13.權(quán)利要求9-12的任何一項(xiàng)的組合物，其中所述蛋白質(zhì)賂氨酸褲酸翁酶是PTP1B、PH、PRL"2、PRLO、SHP-1、SHP-2、MKP-1、MKP-2、CDC"、CDC25A、CDC2SB或CDC25C.14.權(quán)利要求l的組合物，其中所述笫二種試劑是法尼基轉(zhuǎn)移醉抑制劑.15.權(quán)利要求1-14的任何一項(xiàng)的組合物，其中所述的笫一種或笫二種試刑以低劑量存在于所述組合物中.16.權(quán)利要求1一14的任何一項(xiàng)的組合物，其中所述的笫一種或第二種試刑以高刑量存在于所述組合物中.17.權(quán)利要求1-16的任何一項(xiàng)的組合物，其中所迷組合物被配制來用于局部施用.18.權(quán)利要求1-16的任何一項(xiàng)的組合物，其中所述組合物被配制來用于全身性施用.19.用于治療患有增生性疾病的患者的方法，所述方法包括給所述患者施用下列物質(zhì)的組合a)降低有絲分裂驅(qū)動蛋白的生物學(xué)活性的第一種試刑；和b)降低蛋白質(zhì)酪氨酸褲酸醋醉的生物學(xué)活性的笫二種試劑，其中笫一種和笫二種試刑以一起足以治療所述疾病的量被同時(shí)或者相互之間在28天內(nèi)施用.20.權(quán)利要求19的方法，其中所述笫一種試劑是有絲分裂驅(qū)動蛋白的抑制刑.21.權(quán)利要求19的方法，其中所述笫一種試刑是降低所述有絲分裂驅(qū)動蛋白的表達(dá)水平的反義化合物或者RNAi化合物.22.權(quán)利要求19的方法，其中所述笫一種試劑是顯性陰性的有絲分裂驅(qū)動蛋白或者編碼所述顯性陰性的有絲分裂驅(qū)動蛋白的表達(dá)栽體.23.權(quán)利要求19的方法，其中所述笫一種試刑是結(jié)合所述有絲分裂驅(qū)動蛋白和降低有絲分裂駔動蛋白的生物學(xué)活性的抗體.24.權(quán)利要求19-23的任何一項(xiàng)的方法，其中所述有絲分裂驅(qū)動蛋白是HsEgS/KSP.25.權(quán)利要求19的方法，其中所述笫一種試劑是極光激酶的抑制刑.26.權(quán)利要求19的方法，其中所述笫二種試劑是蛋白質(zhì)酪氨酸褲酸酯蘇的抑制刑.27.權(quán)利要求19的方法，其中所迷笫二種試刑是降低所述蛋白質(zhì)酪氨酸褲酸醸臻的表達(dá)水平的反義化合物或者RNAi化合物.28.權(quán)利要求19的方法，其中所迷笫二種試刑是顯性陰性的蛋白質(zhì)酪氨酸礴酸醋酶或者編碼所述顯性陰性的蛋白質(zhì)路氨酸辨酸酯醉的表達(dá)栽體.29.權(quán)利要求19的方法，其中所述笫二種試劑是一種結(jié)合所述蛋白質(zhì)酪氨酸褲酸酯蘇并降低蛋白質(zhì)路氨酸褲酸酯酶的生物學(xué)活性的抗體.30.權(quán)利要求21-25的方法，其中所述蛋白質(zhì)路氛酸褲酸醋醉是PTP1B、PRL"1、PRL"2、PRL-3、SHP-1、SHP-2、MKP-1、MKP陽2、CDC14、CDC25A、CDC26B或CDC25C.31.權(quán)利要求19的方法，其中所述笫二種試刑是法尼基轉(zhuǎn)移酵的抑制刑.32.權(quán)利要求19-31的任何一項(xiàng)的方法，其中所述笫一種和笫二種試刑相互之間在14天內(nèi)施用.33.權(quán)利要求32的方法，其中所述笫一種和笫二種試劑相互之間在7天內(nèi)施用.34.權(quán)利要求33的方法，其中所迷笫一種和笫二種試刑相互之間在1天內(nèi)施用.35.權(quán)利要求19-34的任何一項(xiàng)的方法，其中以低刑量施用所述第一種和笫二種試刑.36.權(quán)利要求19-34的任何一項(xiàng)的方法，其中以高刑量施用所述笫一種和笫二種試刑.37.權(quán)利要求19-36的任何一項(xiàng)的方法，其中所述第一種和第二種試刑被局部或者全身性施用.38.權(quán)利要求19-37的任何一項(xiàng)的方法，其中所述增生性疾病是癌癥.39.權(quán)利要求38的方法，其中所述癌癥選自急性白血病、急性淋巴細(xì)胞白血病、急性徵細(xì)胞白血病、急性成徵細(xì)胞白血病、急性前號細(xì)胞白血病、急性骨鏈單核細(xì)胞白血病、急性單核細(xì)胞白血病、急性紅白血病、慢性白血病、慢性號細(xì)胞白血病、慢性淋巴細(xì)胞白血病、紅細(xì)胞增多癥、霍金森病、非霍金森病、瓦爾登斯特倫巨球蛋白血癥、重鏈疾病，纖維肉瘸、粘液肉瘤、脂肪肉瘤、軟骨肉瘤、生骨肉瘤、脊索瘤、血管肉痏、內(nèi)皮肉瘤、淋巴管肉瘸、淋巴管內(nèi)皮肉瘸、滑膜瘸、間皮痏、尤因氏瘤、平滑肌肉瘤、橫紋肌肉痛、大腸癌、胰腺癌、乳腺癌、印巢癌、前列腺癌、鱗狀上皮細(xì)胞痏、基細(xì)胞瘤、腺癌、汗腺癌、脂肪腺癌、乳頭癌、乳頭腺癌、囊腺癌、脊號癌、支氣管癌、腎細(xì)胞瘤、肝細(xì)胞瘤、膽管癌、絨毛膜癌、精原細(xì)胞痏、胚性瘤、成腎細(xì)胞痏、宮頸癌、子宮癌、辛丸癌、肺癌、小細(xì)胞肺癌、膀胱癌、上皮細(xì)胞瘤、神經(jīng)膠質(zhì)瘤、星細(xì)胞瘤、成神經(jīng)管細(xì)胞痏、顱咽管瘤、室鼓膜瘸、松果體瘤、成血管細(xì)胞瘤、聽神經(jīng)瘸、少突膠質(zhì)細(xì)胞瘤、施萬細(xì)胞痏、腦膜癍、黑素瘸、成神經(jīng)細(xì)胞痛和眼癌.40.權(quán)利要求38的方法，還包括給所述患者施用表3中列舉的抗增生試刑.41.在細(xì)胞中誘導(dǎo)細(xì)胞周期休止的方法，包括將細(xì)胞與降低有絲分裂驅(qū)動蛋白的生物學(xué)活性的笫一種試刑以及降低蛋白質(zhì)酪氨酸磷酸酶酶的生物學(xué)活性的笫二種試刑接觸.42.用于筌定可用于治療增生性疾病的組合的方法，該方法包括下列步驟(a)將增生細(xì)胞與降低有絲分裂驅(qū)動蛋白生物學(xué)活性的試劑以及一種候選化合物在體外接觸；和(b)確定相對于與試刑接觸而未與候選化合物接觸的細(xì)胞的增殖，該試劑與候選化合物的組合是否降低細(xì)胞増殖，其中細(xì)胞增殖下降鑒定該組合是一種可被用于治療增生性疾病的組合.43.權(quán)利要求42的方法，其中所述的細(xì)胞是癌細(xì)胞或者來自癌細(xì)胞系的細(xì)胞.44.用于鑒定可用于治療增生性疾病的化合物的方法，該方法包括下列步騍(a)提供被工程化以降低有絲分裂驅(qū)動蛋白的生物學(xué)活性的增生細(xì)胞；(b)將該細(xì)胞與候選化合物接觸；和(c)確定相對于未與候選化合物接觸的細(xì)胞，該候選化合物是否降低細(xì)胞增殖，其中細(xì)胞增殖下降鑒定該化合物是一種可被用于治療增生性疾病的化合物.45.用于鑒定可被用于治療增生性疾病的組合的方法，該方法包括下列步碟(a)將增生細(xì)胞與降低蛋白質(zhì)路氨酸礴酸癍蘇生物學(xué)活性的試刑以及候選化合物在體外接觸；和(b)確定相對于與該試刑接觸而未與候選化合物接觸的細(xì)胞的增殖，該試刑與候選化合物的組合是否降低細(xì)胞增殖，其中細(xì)胞增殖下降鑒定該組合是一種可被用于治療增生性疾病的組合.46.權(quán)利要求45的方法，其中所迷的細(xì)胞是癌細(xì)胞或者來自癌細(xì)胞系的細(xì)胞.47.用于鑒定可被用于治療增生性疾病的化合物的方法，該方法包括下列步稞(a)提供被工程化以降低蛋白質(zhì)酪氨酸褲酸酶蘇的生物學(xué)活性的增生細(xì)胞；(b)將該細(xì)胞與候選化合物接觸；和(c)確定相對于未與候選化合物接觸的細(xì)胞，該候選化合物是否降低細(xì)胞增殖，其中細(xì)胞增殖下降鑒定該化合物是一種可被用于治療增生性疾病的化合物.48.用于鑒定可被用于治療增生性疾病的組合的方法，該方法包括下列步稞(a)鑒定一種降低有絲分裂驅(qū)動蛋白的生物學(xué)活性的化合物；(b)將增生細(xì)胞與降低蛋白質(zhì)酪氨酸磷酸酶醉的生物學(xué)活性的試刑以及在步猓(a)中鑒定的化合物在體外接觸；和(c)確定相對于與該試刑接觸而未與在步錄(a)中鑒定的化合物接觸或者與在步驟(a)中鑒定的化合物接觸而未與該試刑接觸的細(xì)胞的增殖，該試刑與在步稞(a)中鑒定的化合物的組合是否降低細(xì)胞增殖，其中細(xì)胞增殖下降姿定該組合是一種可被用于治療增生性疾病的組合.49.用于鑒定可被用于治療增生性疾病的組合的方法，該方法包括下列步驟(a)鑒定一種降低蛋白質(zhì)酪氨酸磷酸酯蘇的生物學(xué)活性的化合物；(b)將增生細(xì)胞與降低有絲分裂驅(qū)動蛋白的生物學(xué)活性的試刑以及在步稞(a)中筌定的化合物在體外接觸；和(c)確定相對于與該試刑接觸而未與在步錄(a)中鑒定的化合物接觸或者與在步碟(a)中鑒定的化合物接觸而未與該試刑接觸的細(xì)胞的增殖，該試劑與在步稞(a)中鑒定的化合物的組合是否降低細(xì)胞增殖，其中細(xì)胞增殖下降鑒定該組合是一種可被用于治療增生性疾病的組合.50.—種試劑盒，包含(i)包含降低有絲分裂驅(qū)動蛋白的生物學(xué)活性的第一種試劑和降低蛋白質(zhì)酪氨酸褲酸酴睞生物學(xué)活性的笫二種試劑的組合物；和(ii)將所述組合物施用給被診斷為患有增生性疾病的患者的說明書.51.—種試刑盒，包含(i)降低有絲分裂驅(qū)動蛋白的生物學(xué)活性的笫一種試刑；(ii)降低蛋白質(zhì)酪氨酸辨酸酯醉的生物學(xué)活性的笫二種試刑；和(m)將所迷第一種和笫二種試刑施用給被診斷為患有增生性疾病的患者的說明書.52.—種試刑盒，包含(i)降低有絲分裂驅(qū)動蛋白的生物學(xué)活性的第一種試刑以及(ii)將所述第一種試劑和降低蛋白質(zhì)酪氨酸罅酸酶醃的生物學(xué)活性的笫二種試刑施用給被診斷為患有增生性疾病的患者的說明書.53.—種試劑盒，包含(i)降低蛋白質(zhì)路氨酸褲酸酯醉的生物學(xué)活性的笫一種試刑以及(ii)將所述笫一種試劑和降低有絲分裂驅(qū)動蛋白的生物學(xué)活性的第二種試劑施用給被診斷為患有增生性疾病的患者的說明書.54.用于鑒定可被用于治療增生性疾病的組合的方法，該方法包括下列步稞(a)將增生細(xì)胞與降低有絲分裂驅(qū)動蛋白生物學(xué)活性的試刑以及候選化合物在體外接觸；和(b)確定相對于與該試刑接觸而未與候選化合物接觸的細(xì)胞的增殖，該試刑與候選化合物的組合是否降低細(xì)胞增殖，其中細(xì)胞增殖下降鑒定該組合是一種可被用于治療增生性疾病的組合.55.權(quán)利要求54的方法，其中所述降低有絲分裂驅(qū)動蛋白生物學(xué)活性的試刑是有絲分裂驅(qū)動蛋白的抑制劑.56.權(quán)利要求S4的方法，其中所述降低有絲分裂驅(qū)動蛋白的生物學(xué)活性的試劑是降低所述有絲分裂驅(qū)動蛋白的表達(dá)水平的反義化合物或者RNAi化合物.57.權(quán)利要求54的方法，其中所述降低有絲分裂驅(qū)動蛋白的生物學(xué)活性的試刑是顯性陰性的有絲分裂驅(qū)動蛋白或者編碼所述顯性陰性的有絲分裂驅(qū)動蛋白的表達(dá)栽體.58.權(quán)利要求54的方法，其中所述降低有絲分裂驅(qū)動蛋白的生物學(xué)活性的試刑是結(jié)合所述有絲分裂驅(qū)動蛋白和降低有絲分裂駔動蛋白的生物學(xué)活性的抗體.59.權(quán)利要求54的方法，其中所述有絲分裂驅(qū)動蛋白是HsEg5/KSP.60.權(quán)利要求54的方法，其中所述降低有絲分裂驅(qū)動蛋白的生物學(xué)活性的試刑是一種極光激蘇的抑制刑.61.權(quán)利要求54的方法，其中所述有絲分裂驅(qū)動蛋白的生物學(xué)活性是酶促活性、運(yùn)動活性或結(jié)合活性.62.權(quán)利要求54的方法，其中所迷細(xì)胞是癌細(xì)胞或者來自癌細(xì)胞系的細(xì)胞.63.用于鑒定可被用于治療增生性疾病的化合物的方法，該方法包括下列步稞(a)提供被工程化以降低有絲分裂驅(qū)動蛋白的生物學(xué)活性的增生細(xì)胞；(b)將該細(xì)胞與候選化合物接觸；和(c)確定相對于未與候選化合物接觸的細(xì)胞，該候選化合物是否降低細(xì)胞增殖，其中細(xì)胞增殖下降簦定該化合物是一種可被用于治療增生性疾病的化合物.64.權(quán)利要求63的方法，其中該細(xì)胞是癌細(xì)胞或者來自癌細(xì)胞系的細(xì)胞.65.用于鑒定可被用于治療增生性疾病的組合的方法，該方法包括下列步稞(a)將增生細(xì)胞與降低蛋白質(zhì)酪氨酸確酸薛醉的生物學(xué)活性的試刑以及候選化合物在體外接觸；和(b)確定相對于與該試劑接觸而未與候選化合物接觸的細(xì)胞的增殖，該試劑與候選化合物的組合是否降低細(xì)胞增殖，其中細(xì)胞增殖下降鑒定該組合是一種可被用于治療增生性疾病的組合.66.權(quán)利要求65的方法，其中所述降低蛋白質(zhì)酪氨酸褲酸癍睥的生物學(xué)活性的試刑是蛋白質(zhì)酪氨酸褲酸酯酶的抑制刑.67.權(quán)利要求65的方法，其中所迷降低蛋白質(zhì)酪氨酸褲酸癍酶的生物學(xué)活性的試刑是降低所迷蛋白質(zhì)酪氛酸礴酸癍醉的表達(dá)水平的反義化合物或者RNAi化合物.68.權(quán)利要求65的方法，其中所迷降低蛋白質(zhì)酪氨酸褲酸il酵的生物學(xué)活性的試刑是顯性陰性的蛋白質(zhì)酪氨酸褲酸醋醉或者編碼所述顯性陰性的蛋白質(zhì)酪氨酸碑酸醋酶的表達(dá)栽體.69.權(quán)利要求65的方法，其中所述降低蛋白質(zhì)酪氨酸褲酸酯蘇的生物學(xué)活性的試劑是一種結(jié)合所迷蛋白質(zhì)酪氣酸礴酸酯醉并降低蛋白質(zhì)酪氨酸褲酸酯睞的生物學(xué)活性的抗體.70.權(quán)利要求64的方法，其中所述蛋白質(zhì)酪氨酸磷酸醋醉是PTP1B、PRL"1、PRL-2、PRI^3、SHP醫(yī)1、SHP-2、MKP-1、MKP-2、CDC14、CDC25A、CDC2SB或CDC25C,71.權(quán)利要求65的方法，其中所迷笫二種試刑是法尼基轉(zhuǎn)移酶的抑制劑.72.權(quán)利要求6S的方法，其中該細(xì)胞是癌細(xì)胞或者來自癌細(xì)胞系的細(xì)胞.73.用于鑒定可被用于治療增生性疾病的化合物的方法，該方法包括下列步稞(a)提供被工程化以降低蛋白質(zhì)酪氨酸辨酸B&酶的生物學(xué)活性的增生細(xì)胞；(b)將該細(xì)胞與候選化合物接觸；和(c)確定相對于未與候選化合物接觸的細(xì)胞，該候選化合物是否降低細(xì)胞增殖，其中細(xì)胞增殖下降姿定該化合物是一種可被用于治療增生性疾病的化合物.74.用于鑒定可被用于治療增生性疾病的組合的方法，該方法包括下列步稞(a)鑒定一種降低有絲分裂駔動蛋白的生物學(xué)活性的化合物；(b)將增生細(xì)胞與降低蛋白質(zhì)酪氨酸褲酸癍蘇的生物學(xué)活性的試劑以及在步稞(a)中姿定的化合物在體外接觸；和(c)確定相對于與該試刑接觸而未與在步稞(a)中鑒定的化合物接觸或者與在步稞(a)中鑒定的化合物接觸而未與該試劑接觸的細(xì)胞的增殖，該試刑與在步稞(a)中鑒定的化合物的組合是否降低細(xì)胞增殖，其中細(xì)胞增殖下降鑒定該組合是一種可被用于治療增生性疾病的組合.75.用于鑒定可被用于治療增生性疾病的組合的方法，該方法包括下列步騍(a)鑒定一種降低蛋白質(zhì)酪氨酸磷酸酯睞的生物學(xué)活性的化合物；(b)將增生細(xì)胞與降低有絲分裂驅(qū)動蛋白的生物學(xué)活性的試劑以及在步稞(a)中鑒定的化合物在體外接觸；和(c)確定相對于與該試劑接觸而未與在步稞(a)中鑒定的化合物接觸或者與在步驟(a)中簦定的化合物接觸而未與該試刑接觸的細(xì)胞的增殖，該試刑與在步稞(a)中鑒定的化合物的組合是否降低細(xì)胞增殖，其中細(xì)胞增殖下降鑒定該組合是一種可被用于治療増生性疾病的組合.全文摘要本發(fā)明的特征在于用于治療增生性疾病(例如癌癥)的藥物組合。本發(fā)明的特征還在于用于鑒定治療癌癥和其它增生性疾病的新的組合治療的方法。文檔編號G01N33/50GK101420981SQ200480039985公開日2009年4月29日申請日期2004年11月9日優(yōu)先權(quán)日2003年11月12日發(fā)明者C·凱思,M·J·尼科爾斯,M·S·李,Y·張申請人:康賓納特克斯公司