薏苡組織培養(yǎng)快繁方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明涉及薏苡組織培養(yǎng)快繁技術(shù)，屬于植物培育技術(shù)領(lǐng)域。
【背景技術(shù)】
[0002]薏苡為禾本科薏苡屬(coix.L.)作物，其籽實(shí)(俗稱薏米)營養(yǎng)豐富，可作食用和藥用，全屬共有10種，目前我國共報(bào)道該屬有I種I變種，S卩川谷和薏苡。當(dāng)前，薏苡產(chǎn)業(yè)的發(fā)展主要存在的問題有品種單一、病害嚴(yán)重、產(chǎn)量低等，嚴(yán)重制約其發(fā)展;解決以上存在問題一般在糧食作物中常用做法就是通過在它的農(nóng)藝性狀中導(dǎo)入優(yōu)良基因使其性狀得到有效改良，但遺傳轉(zhuǎn)化的成功需要高效再生體系的建立，而植物組織培養(yǎng)是遺傳轉(zhuǎn)化中一個(gè)基礎(chǔ)而重要的環(huán)節(jié)，因此，建立高效再生遺傳轉(zhuǎn)化體系需借助植物組織培養(yǎng)技術(shù)手段來完成。
[0003]植株組織培養(yǎng)技術(shù)指植株在無菌條件下，將其組織、細(xì)胞、胚胎、原生質(zhì)體等一系列為外植體在人工配制的培養(yǎng)基上進(jìn)行誘導(dǎo)培養(yǎng)，當(dāng)給予的培養(yǎng)條件適宜時(shí)，誘發(fā)愈傷組織、潛伏芽等產(chǎn)生，并形成完整的植株的過程。該技術(shù)起源于1902年，是由德國植物學(xué)家Haberlandt提出“植物細(xì)胞具有全能性”的理論作為基礎(chǔ)，該理論的提出為植物組織培養(yǎng)技術(shù)發(fā)展提供了廣闊的前景，其后被廣泛應(yīng)用在花卉、農(nóng)作物、果木、種質(zhì)資源保存等多領(lǐng)域。植物組織培養(yǎng)技術(shù)是目前植物快繁中的最有效的途徑之一，具有繁殖周期短、繁殖系數(shù)高，便于大規(guī)模生產(chǎn)，該過程具有低生產(chǎn)成本的優(yōu)勢(shì)，在重要糧食作物中也被成熟應(yīng)用，并培育出一大批新品種。組織培養(yǎng)及再生研究在玉米上的應(yīng)用就是為了能夠高頻率地將外植體誘導(dǎo)出愈傷組織，加速體細(xì)胞再生，促進(jìn)玉米外源基因轉(zhuǎn)化。因此將該項(xiàng)技術(shù)成功地應(yīng)用于薏苡種質(zhì)資源的保存、遺傳轉(zhuǎn)化體系建立以及脫毒組培苗生產(chǎn)等方面都應(yīng)該具有重要的意義。
[0004]近年來，薏苡組織培養(yǎng)技術(shù)主要是對(duì)愈傷組織誘導(dǎo)與再分化、花藥組培養(yǎng)方面的工作，對(duì)于薏苡組織培養(yǎng)技術(shù)中存在的愈傷誘導(dǎo)分化效率低、誘導(dǎo)成苗效果差等技術(shù)有待進(jìn)一步優(yōu)化。因此，優(yōu)化薏苡組織培養(yǎng)技術(shù)和建立成熟的薏苡遺傳轉(zhuǎn)化體系是薏苡研究中的重要一環(huán)，為薏苡基因組學(xué)和基因功能的研究奠定基礎(chǔ)。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0005]本發(fā)明的目的是為實(shí)現(xiàn)薏苡種質(zhì)資源的保存、建立遺傳轉(zhuǎn)化體系以及脫毒組培苗生產(chǎn)而提供一種薏苡組織培養(yǎng)快繁方法。
[0006]本發(fā)明的技術(shù)方案如下:
本發(fā)明的這種薏苡組織培養(yǎng)快繁方法包括如下步驟:首先選取薏苡外植體進(jìn)行消毒處理，將消毒處理過的薏苡外植體放入薏苡愈傷分化培養(yǎng)基中進(jìn)行培養(yǎng)分化;培養(yǎng)出薏苡愈傷組織后，再通過薏苡愈傷繼代培養(yǎng)基進(jìn)行加強(qiáng)薏苡愈傷繼代培養(yǎng);然后通過薏苡再分化培養(yǎng)基進(jìn)行薏苡再分化培養(yǎng);通過薏苡再分化使薏苡達(dá)到成苗的時(shí)候采用薏苡成苗培養(yǎng)基進(jìn)行培養(yǎng);薏苡成苗后通過薏苡生根培養(yǎng)基進(jìn)行薏苡生根培養(yǎng)。
[0007]其中，消毒處理采用的試劑為升汞、次氯酸鈉、酒精。以薏苡種子為外植體時(shí)，消毒處理方法為先將外植體用濃度為75%的酒精浸泡I min，無菌水沖洗2?3次，加入濃度為0.1%的升萊浸泡15 min或加入濃度為10%的次氯酸鈉浸泡20 min，再用無菌水沖洗3?5次即可。
[0008]其中，薏苡愈傷分化培養(yǎng)基為MS+2，4-D 3.0mg/L+6-BAl.0mg/L。薏苡愈傷繼代培養(yǎng)基為MS+2，4D 2.0mg/L+6-BA0.5mg/L。薏苡再分化培養(yǎng)基為MS+6-BA 4.0mg/L+2,4D
0.4mg/L。薏苡成苗培養(yǎng)基為MS+ZT 2.0mg/L+2，4D 0.4mg/L+KT 1.0mg/L。薏苡生根培養(yǎng)基為l/2MS+IBA0.5mg/L。
[0009]本發(fā)明的這種薏苡組織培養(yǎng)快繁方法愈傷誘導(dǎo)分化效率高、誘導(dǎo)成苗效果好，可以實(shí)現(xiàn)薏苡種質(zhì)資源的保存、建立遺傳轉(zhuǎn)化體系以及脫毒組培苗生產(chǎn)，值得推廣。
【具體實(shí)施方式】
[0010]下面結(jié)合實(shí)施例對(duì)本發(fā)明作進(jìn)一步的詳細(xì)說明。
[0011]實(shí)施例1:按以下步驟進(jìn)行:
1、選取薏苡種子為外植體并進(jìn)行消毒處理，消毒處理是用75%酒精浸泡I min，無菌水沖洗2次，加入0.1%升萊浸泡15 min，用無菌水沖洗3次。
[0012]2、用消毒處理過的薏苡外植體放入薏苡愈傷分化培養(yǎng)基進(jìn)行培養(yǎng)分化，該薏苡愈傷分化培養(yǎng)基為MS+2，4-D 3.0mg/L+6-BAl.0mg/L。
[0013]3、通過培養(yǎng)出薏苡愈傷，在同時(shí)加強(qiáng)薏苡愈傷繼代培養(yǎng)，采用的薏苡愈傷繼代培養(yǎng)基為MS+2，4D 2.0mg/L+6-BA 0.5mg/L。
[0014]4、通過薏苡愈傷繼代，進(jìn)行薏苡再分化最佳培養(yǎng)，采用的薏苡再分化培養(yǎng)基為MS+6-BA 4.0mg/L+2,4D 0.4mg/L。
[0015]5、通過薏苡再分化，薏苡就可達(dá)到成苗的時(shí)候，使用薏苡成苗培養(yǎng)基進(jìn)行培養(yǎng)，薏苡成苗培養(yǎng)基 MS+ZT 2.0mg/L+2,4D 0.4mg/L+KT 1.0mg/L ο
[0016]6、通過薏苡成苗后，就可以進(jìn)行薏苡生根培養(yǎng)了，薏苡生根培養(yǎng)基為1/2MS+IBA0.5mg/L0
[0017]實(shí)施例2:按以下步驟進(jìn)行:
1、選取薏苡種子為外植體并進(jìn)行消毒處理，消毒處理是用75%酒精浸泡I min，無菌水沖洗3次，加入10%次氯酸鈉浸泡20min，用無菌水沖洗5次。
[0018]2、用消毒處理過的薏苡外植體放入薏苡愈傷分化培養(yǎng)基進(jìn)行培養(yǎng)分化，該薏苡愈傷分化培養(yǎng)基為MS+2，4-D 3.0mg/L+6-BAl.0mg/L。
[0019]3、通過培養(yǎng)出薏苡愈傷，在同時(shí)加強(qiáng)薏苡愈傷繼代培養(yǎng)，采用的薏苡愈傷繼代培養(yǎng)基為MS+2，4D 2.0mg/L+6-BA 0.5mg/L。
[0020]4、通過薏苡愈傷繼代，進(jìn)行薏苡再分化培養(yǎng)，采用的薏苡再分化培養(yǎng)基為MS+6-BA4.0mg/L+2,4D 0.4mg/L0
[0021]5、通過薏苡再分化，薏苡就可達(dá)到成苗的時(shí)候，使用薏苡成苗培養(yǎng)基進(jìn)行培養(yǎng)，薏苡成苗培養(yǎng)基 MS+ZT 2.0mg/L+2,4D 0.4mg/L+KT 1.0mg/L ο
[0022]6、通過薏苡成苗后，就可以進(jìn)行薏苡生根培養(yǎng)了，薏苡生根培養(yǎng)基為1/2MS+IBA0.5mg/L0
[0023]當(dāng)然，以上只是本發(fā)明的具體應(yīng)用范例，本發(fā)明還有其他的實(shí)施方式，凡采用等同替換或等效變換形成的技術(shù)方案，均落在本發(fā)明所要求的保護(hù)范圍之內(nèi)。
【主權(quán)項(xiàng)】
1.一種薏苡組織培養(yǎng)快繁方法，其特征在于包括如下步驟:選取薏苡外植體進(jìn)行消毒處理，將消毒處理過的薏苡外植體放入薏苡愈傷分化培養(yǎng)基中進(jìn)行培養(yǎng)分化;培養(yǎng)出薏苡愈傷組織后，再通過薏苡愈傷繼代培養(yǎng)基進(jìn)行加強(qiáng)薏苡愈傷繼代培養(yǎng);然后通過薏苡再分化培養(yǎng)基進(jìn)行薏苡再分化培養(yǎng);通過薏苡再分化使薏苡達(dá)到成苗的時(shí)候采用薏苡成苗培養(yǎng)基進(jìn)行培養(yǎng);薏苡成苗后通過薏苡生根培養(yǎng)基進(jìn)行薏苡生根培養(yǎng)。2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的薏苡組織培養(yǎng)快繁方法，其特征在于:所述消毒處理采用的試劑為升汞或次氯酸鈉。3.根據(jù)權(quán)利要求2所述的薏苡組織培養(yǎng)快繁方法，其特征在于:以薏苡種子為外植體時(shí)，消毒處理方法為先將外植體用濃度為75%的酒精浸泡I min，無菌水沖洗2?3次，加入濃度為0.1%的升萊浸泡15 min或加入濃度為10%的次氯酸鈉浸泡20 min，再用無菌水沖洗3?5次即可。4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的薏苡組織培養(yǎng)快繁方法，其特征在于:所述薏苡愈傷分化培養(yǎng)基為MS+2，4-D 3.0mg/L+6-BA1.0mg/Lo5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的薏苡組織培養(yǎng)快繁方法，其特征在于:所述薏苡愈傷繼代培養(yǎng)基為MS+2，4D 2.0mg/L+6-BA0.5mg/Lo6.根據(jù)權(quán)利要求1所述的薏苡組織培養(yǎng)快繁方法，其特征在于:所述薏苡再分化培養(yǎng)基為MS+6-BA 4.0mg/L+2,4D 0.4mg/L。7.根據(jù)權(quán)利要求1所述的薏苡組織培養(yǎng)快繁方法，其特征在于:所述薏苡成苗培養(yǎng)基為MS+ZT 2.0mg/L+2，4D 0.4mg/L+KT 1.0mg/L。8.根據(jù)權(quán)利要求1所述的薏苡組織培養(yǎng)快繁方法，其特征在于:所述薏苡生根培養(yǎng)基為l/2MS+IBA0.5mg/Lo
【專利摘要】本發(fā)明公開了一種薏苡組織培養(yǎng)快繁方法，該方法包括如下步驟：選取薏苡外植體進(jìn)行消毒處理，將消毒處理過的薏苡外植體放入薏苡愈傷分化培養(yǎng)基中進(jìn)行培養(yǎng)分化；培養(yǎng)出薏苡愈傷組織后，再通過薏苡愈傷繼代培養(yǎng)基進(jìn)行加強(qiáng)薏苡愈傷繼代培養(yǎng)；然后通過薏苡再分化培養(yǎng)基進(jìn)行薏苡再分化培養(yǎng)；通過薏苡再分化使薏苡達(dá)到成苗的時(shí)候采用薏苡成苗培養(yǎng)基進(jìn)行培養(yǎng)；薏苡成苗后通過薏苡生根培養(yǎng)基進(jìn)行薏苡生根培養(yǎng)。本發(fā)明的這種薏苡組織培養(yǎng)快繁方法愈傷誘導(dǎo)分化效率高、誘導(dǎo)成苗效果好，可以實(shí)現(xiàn)薏苡種質(zhì)資源的保存、建立遺傳轉(zhuǎn)化體系以及脫毒組培苗生產(chǎn)，值得推廣。
【IPC分類】A01H4/00
【公開號(hào)】CN105613297
【申請(qǐng)?zhí)枴緾N201610048708
【發(fā)明人】王健, 羅凱, 楊成龍, 周明強(qiáng), 蒙秋伊, 韓樹全
【申請(qǐng)人】貴州省亞熱帶作物研究所
【公開日】2016年6月1日
【申請(qǐng)日】2016年1月26日