專利名稱：同步快速測(cè)定多項(xiàng)免疫指標(biāo)技術(shù)的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明系免疫分析技術(shù)的一種，它應(yīng)用酶聯(lián)免疫分析的原理，采用新的材料和方法，能同步快速地測(cè)定多項(xiàng)目的免疫指標(biāo)，利用該項(xiàng)技術(shù)制成的不同試劑盒適用于各種免疫分析領(lǐng)域。
免疫分析技術(shù)，目前應(yīng)用最為廣泛的是放射免疫法(RIA，1956，yalow)和酶聯(lián)免疫吸附法(ELISA，1971，Engvall)，后者無放射性污染且成本較低，目前應(yīng)用最為廣泛。過去ELISA法采用“二步測(cè)定法”，方法靈敏，結(jié)果準(zhǔn)確可靠，但檢測(cè)時(shí)間較長(zhǎng)及步驟較繁，往往患者當(dāng)日不能得到檢驗(yàn)結(jié)果。近年來，改用“一步測(cè)定法”以簡(jiǎn)化操作步驟和縮短檢驗(yàn)時(shí)間，雖已取得一定成效，但據(jù)權(quán)威人士評(píng)價(jià)，此法對(duì)濃度過高或過低的被測(cè)物質(zhì)不易檢出，同時(shí)易造成假陰性(中華醫(yī)學(xué)檢驗(yàn)雜志，1993，16351；標(biāo)記免疫分析與臨床雜志，1994，1117)。加之ELISA法所用的抗體或抗原的包被板(常稱酶標(biāo)板)系惰性高分子材料，抗體或抗原包被時(shí)僅靠物理吸附，其結(jié)合牢固程度差，放置時(shí)間超過6個(gè)月或受外界條件影響，抗體(或抗原)即自動(dòng)解吸，該板在啟封后1個(gè)月內(nèi)必須使用完畢，否則失效。此外，ELISA法的包被板為分散型，即單項(xiàng)目多人份測(cè)定，最后綜合報(bào)告患者的各項(xiàng)檢驗(yàn)結(jié)果，無法多指標(biāo)同步測(cè)定，按人自動(dòng)處理結(jié)果，也無法讓患者進(jìn)行自查。
本發(fā)明旨在應(yīng)用酶聯(lián)免疫分析原理，使用蠶絲綢作為生物活性物質(zhì)的載體材料，應(yīng)用微波輻射(MW)加速免疫反應(yīng)與顯色反應(yīng)，利用反射式光纖傳導(dǎo)技術(shù)，使原來數(shù)十分鐘單項(xiàng)完成的免疫檢測(cè)，能在數(shù)分鐘之內(nèi)多項(xiàng)指標(biāo)同步完成。
本發(fā)明的技術(shù)方案如下1．抗體或抗原膜的制備及組裝(可批量生產(chǎn))采用具有化學(xué)活性基團(tuán)(-OH，-NH2)的蠶絲綢膜，以溴化氰活化，然后再與具有-NH2基的抗體、抗原、受體、及其它蛋白等偶聯(lián)，形成抗體或抗原膜，將不同的抗體或抗原膜組裝在同一測(cè)試片上(參見實(shí)施例示意圖)，存放于試劑盒內(nèi)以進(jìn)行檢測(cè)(見技術(shù)方案2、3、4、5)。
其原理如下 2．免疫復(fù)合物膜的形成(檢測(cè)第一步)原理如下 3．免疫夾心膜的形成(檢測(cè)第二步)原理如下 4．顯色夾心膜上的標(biāo)記酶E*將催化下列反應(yīng)顯色劑A+顯色劑蘭色互變復(fù)合物(吸附于載體絲膜上)
5．結(jié)果測(cè)定①儀器測(cè)定用反射式光纖免疫測(cè)量?jī)x②目測(cè)與標(biāo)準(zhǔn)色列比較本發(fā)明與常規(guī)的酶聯(lián)免疫吸附法(ELISA)比較其優(yōu)點(diǎn)如下(1)反應(yīng)時(shí)間短反應(yīng)時(shí)間僅為市售ELISA一步法試劑盒反應(yīng)時(shí)間的1/8，因本法應(yīng)用微波輻射代替ELISA法恒溫孵育。
(2)能批量處理樣本，可單項(xiàng)目多人份測(cè)定，亦可1人份多項(xiàng)目同步測(cè)定，這樣不僅避免了不同患者血清的相互干擾，且可用儀器自動(dòng)按人檢測(cè)、記錄、打印結(jié)果，以縮短檢測(cè)周期，避免人為抄錄報(bào)告的差錯(cuò)。
(3)抗體(或抗原)膜用化學(xué)修飾方法制備(以溴化氰活化法修飾抗體或抗原于絲膜上)，它與ELISA采用的物理吸附法(包被)比較，其抗體(或抗原)結(jié)合率高2～3倍，且穩(wěn)定性好，活性保存期長(zhǎng)達(dá)數(shù)年。
(4)抗體(或抗原)膜可工業(yè)化批量生產(chǎn)，成本低廉。
(5)固態(tài)膜上顯色結(jié)果可直接用反射式光纖免疫測(cè)量?jī)x同步測(cè)定，由于光纖傳導(dǎo)抗F擾力強(qiáng)，故該儀器較ELISA檢測(cè)所用的酶標(biāo)光度儀靈敏度高。
(6)固態(tài)膜上顯示的測(cè)定結(jié)果，可直接作為實(shí)物資料長(zhǎng)期保存。
(7)制成試劑盒附帶的試劑品種比ELISA法現(xiàn)行試劑盒大大減少。
(8)本法可直接測(cè)定全血樣本，對(duì)于普查更為方便。
本發(fā)明的技術(shù)特點(diǎn)是①首次使用蠶絲綢膜作為生物活性物質(zhì)載體膜(ELISA法使用的是聚苯乙烯板)；②檢測(cè)中首次應(yīng)用微波幅射加速免疫反應(yīng)及酶促顯色反應(yīng)(ELISA法用恒溫孵育)；③首次應(yīng)用自行設(shè)計(jì)與研制的反射式光纖免疫測(cè)量?jī)x測(cè)定結(jié)果(ELISA法用酶標(biāo)光度儀)；④利用上述三項(xiàng)技術(shù)能快速、同步測(cè)定多項(xiàng)免疫指標(biāo)。
本發(fā)明的技術(shù)特點(diǎn)目前尚未見國(guó)內(nèi)外文獻(xiàn)報(bào)道本發(fā)明同步快速測(cè)定多項(xiàng)免疫指標(biāo)技術(shù)及其利用該技術(shù)制成的試劑盒能同步測(cè)定多項(xiàng)免疫指標(biāo)，并縮短檢測(cè)時(shí)間；同時(shí)避免假陰性結(jié)果出現(xiàn)；使用方便，并能應(yīng)用微機(jī)全自動(dòng)處理檢測(cè)結(jié)果。它不僅適用于醫(yī)藥、衛(wèi)生、食品、環(huán)保等單位分析檢測(cè)使用，同時(shí)亦適于患者個(gè)人及家庭自查使用。
實(shí)施例應(yīng)用于乙型肝炎病毒五項(xiàng)(HBsAg、抗-HBs、HBeAg、抗-HBe，抗-HBc)免疫指標(biāo)的同步測(cè)定。
1、用化學(xué)修飾法制備抗體(或抗原)膜，將不同的抗體或抗原膜組裝在同一測(cè)試片上(見示意圖)，存放于試劑盒中。2、將被檢血清滴加于已用化學(xué)修飾法制備備用的抗體(或抗原)膜上，微波輻射3min，形成Ag-Ab復(fù)合膜，然后純水沖洗1次，吸干備用。3、將預(yù)先制備的酶標(biāo)抗體(或抗原)膜復(fù)蓋于上述復(fù)合膜上，再次微波輻射3min，使形成抗體一抗原夾心膜(或雙抗結(jié)合膜)，經(jīng)純水3次洗滌，吸干備用。4、將顯色劑滴加于夾心膜上，再度微波輻射3min，最后經(jīng)純水沖洗1次以終止反應(yīng)。5、應(yīng)用反射式光纖免疫測(cè)量?jī)x測(cè)定，結(jié)果仍以S/N＞2.1(樣品/空白的比值)表示陽性結(jié)果，亦可用肉眼觀察并與標(biāo)準(zhǔn)色板比較判定結(jié)果。
乙肝病毒五項(xiàng)免疫指標(biāo)同步測(cè)試片示意圖 ①修飾抗--HBs 檢測(cè)HBsAg②修飾抗--HBsAg檢測(cè)抗--HBs③修飾抗--HBe 檢測(cè)HBeAg④修飾抗--HBe 檢測(cè)抗--HBe(配以中和試劑)⑤修飾抗--HBcAg檢測(cè)抗--HBc以上操作時(shí)間僅為三個(gè)3分鐘，故簡(jiǎn)稱“三三”法。
權(quán)利要求
1．一種同步快速測(cè)定多項(xiàng)免疫指標(biāo)技術(shù)，其特征是應(yīng)用蠶絲綢膜作為生物活性物質(zhì)載體膜；采用微波輻射及反射式光纖傳導(dǎo)技術(shù)，能同步快速完成多項(xiàng)免疫指標(biāo)檢測(cè)，本發(fā)明測(cè)定免疫指標(biāo)的步驟如下(1)抗體或抗原膜的制備及組裝應(yīng)用蠶絲綢膜作為生物活性物質(zhì)載體膜，利用溴化氰活化修飾抗體或抗原于該膜上，將不同的抗體或抗原膜組裝于測(cè)試片上；(2)免疫復(fù)合物膜的形成采用微波輻射加速免疫反應(yīng)；(3)免疫夾心膜的形成采用微波輻射加速免疫反應(yīng)；(4)顯色采用微波輻射加速酶促顯色反應(yīng)；(5)結(jié)果測(cè)定采用反射式光纖免疫測(cè)量?jī)x測(cè)定或目測(cè)。
2．據(jù)權(quán)利要求1所述的同步快速測(cè)定多項(xiàng)免疫指標(biāo)技術(shù)，其特征是在檢測(cè)中采用微波輻射的時(shí)間為3～5分鐘。
3．據(jù)權(quán)利要求1.2所述的同步快速測(cè)定多項(xiàng)免疫指標(biāo)技術(shù)，其特征是利用該技術(shù)可制成適于同步免疫分析體系的試劑盒應(yīng)用。
全文摘要
本發(fā)明提供一種同步快速測(cè)定多項(xiàng)免疫指標(biāo)技術(shù),它應(yīng)用酶聯(lián)免疫分析原理,經(jīng)抗體或擴(kuò)原膜的制備及組裝;免疫復(fù)合物膜及夾心膜的形成;顯色及結(jié)果測(cè)定等步驟,完成多項(xiàng)免疫指標(biāo)測(cè)定。本發(fā)明特點(diǎn)是應(yīng)用蠶絲綢膜作為生物活性物質(zhì)載體膜;采用微波輻射加速免疫與顯色反應(yīng);采用反射式光纖免疫測(cè)量?jī)x測(cè)定結(jié)果。應(yīng)用該技術(shù)制成適于同步快速免疫分析體系的試劑盒,適用于醫(yī)藥、衛(wèi)生、食品、環(huán)境等單位分析檢測(cè),亦適用于家庭及患者個(gè)人自測(cè)。
文檔編號(hào)G01N33/53GK1283794SQ0010991
公開日2001年2月14日 申請(qǐng)日期2000年7月12日 優(yōu)先權(quán)日2000年7月12日
發(fā)明者李毓琦, 李明遠(yuǎn), 何俊, 龔其美 申請(qǐng)人:華西醫(yī)科大學(xué)