專利名稱：用生化酶標多功能分析儀測試濁度超微量檢測技術的方法
技術領域：
本發(fā)明屬醫(yī)學檢驗領域。具體說是一種用生化酶標多功能分析儀測試濁度項目的超微量快速檢測技術的方法。
濁度檢驗是醫(yī)學檢驗的重要組成部分之一。濁度分析朝著微量、快速、準確、方便的方向發(fā)展是當前國內外醫(yī)學檢驗的必然趨勢。
在濁度檢驗項目中，以血液為材料，病人都少不了靜脈抽血，為了避免它就必須要求每項測定的樣品盡可能少，但又不影響結果的準確性是當前國內外濁度檢驗存在的難點。
目前檢驗濁度的方法，實驗室最常用的是與人工的標準濁度管目測對比比較，或透光率比濁法，用比色計以及濁度計測吸光度，再以濃度為橫座標，各濃度吸光度為縱座標制備標準曲線查得含量。這些方法穩(wěn)定性好，但需繪制標準曲線或計算，需單個標本比色操作，工作效率不高。而用激光免疫比濁儀比色，能立即顯示所測定的項目含量，即方便，又快速，但也存在著必須單個樣品比色測定，而檢測下一樣品時，又必須重新混勻后再測試的不便。若能實現(xiàn)采用微量、快速比色分析，樣品一次混勻后能測試90份標本的設備和技術方法，則具有更大的技術上的優(yōu)越性和應用上的實際意義。
本發(fā)明的目的在于避免上述現(xiàn)有技術中存在的不足之處而采用現(xiàn)有的微孔板代替比色杯，應用末梢微量采血，用不同濃度的標準溶液測定出吸光度后再根據樣本的定量值，采用線性回歸得到單位含量數(shù)，使之達到提高檢測速度的一種用生化酶標多功能分析儀測試濁度超微量檢測技術的方法。
本發(fā)明的目的可以通過以下措施來達到一種用生化酶標多功能分析儀測試濁度檢測技術的方法，其特征在于a．按末梢血常規(guī)采集方法將微量采血塑料管上端口接觸血滴，下端放低，邊輕擠邊進血至需要量后燒熔下端，用鑷子捏緊封固或不封口，將微量采血塑料管折成“V”型插入一次性注射器的針頭塑料套內，在針頭塑料套管或采血塑料管上貼上不干膠序號，離心分離血清備用；b．取潔凈8×12標準96微孔板一塊；c．采用微量定量加樣器，取標準品和被測樣品，定量加入微孔板各孔內；d．用微量移液器，按所需試劑用量，定量加入上述標準孔和被測樣品各孔內；e．將微孔板置生化酶標多功能分析儀測量室內，在90s內時打印出1～90份結果報告。
一種用生化酶標多功能分析儀測試濁度檢測技術的方法，其特征在于
a．按末梢血常規(guī)采集方法將微量采血塑料管上端口接觸血滴，下端放低，邊輕擠邊進血至需要量后燒熔下端，用鑷子捏緊封固或不封口，將微量采血塑料管折成“V”型插入一次性注射器的針頭塑料套內，在針頭塑料套管或采血塑料管上貼上不干膠序號，離心分離血清備用；b．取潔凈8×12標準96微孔板一塊；c．采用微量定量加樣器，取被測樣品，定量加入微孔板各孔內；d．用微量移液器，按所需試劑用量，定量加入上述被測樣品各孔內；e．配制四種濃度的標準溶液；f．用可調移液器定量吸取標準溶液分別加入微孔板各兩孔內；g．用四種標準溶液測定出的吸光度后再根據樣本的定量值，采用線性回歸得到單位含量數(shù)；h．將微孔板置生化酶標多功能分析儀測量室內，設置單位含量數(shù)，在90s內同時打印出1～90份結果報告。
本發(fā)明的目的還可以通過以下措施來達到本發(fā)明采用1μl.2μl.3μl.5μl.10μl、20μl.25μl微量定量加樣器，取標準品和被測樣品，定量加入微孔板各孔內。
本發(fā)明采用5、10、15、20單位濃度的標準溶液。
本發(fā)明采用100-50μl微量可調移液器分別定量吸取標準溶液300μl加入微孔板各兩孔內。
本發(fā)明采用100-500μl微量可調移液器定量吸取300μl所需試劑加入微孔板各孔內。
本發(fā)明采用內徑2-3mm的聚乙烯塑料管制成5-7cm規(guī)格的微量采血塑料管。
本發(fā)明相比現(xiàn)有技術方法具有如下優(yōu)點1．在濁度檢驗項目中，多以血液為材料，病人都少不了靜脈抽血，而本發(fā)明采用的一種用生化酶標多功能分析儀測試濁度項目的超微量檢測技術的方法，避免了病人靜脈抽血。
2．有些檢測項目，如麝香草酚濁度、血清鉀等，在全自動、半自動生化分析儀中不能檢測，而本發(fā)明采用的一種用生化酶標多功能分析儀測試濁度項目的超微量檢測技術的方法，彌補了上述的不足。
3．目前我國多數(shù)實驗室對濁度試驗，最常用的是與人工的標準濁度管目測對比比較，或用比色計、濁度計測吸光度，再以濃度為橫座標，各濃度吸光度為縱座標制備標準曲線查得含量。檢測速度慢、工作效率不高。而本發(fā)明采用的一種用生化酶標多功能分析儀測試濁度項目的超微量檢測技術的方法，實現(xiàn)了無需繪制標準曲線，無需人工比色和計算，在大批量標本檢測中，分析速度快，90份樣品僅用90s即可測試打印出結果報告。
4．本發(fā)明采用的一種用生化酶標多功能分析儀測試濁度項目的超微量檢測技術的方法，只需利用不同濃度的標準液測定出吸光度后，再根據樣本的定量值，用線性回歸得出單位含量數(shù)，以后在此項目檢測中只用此單位含量數(shù)在同批試劑中代替了標準品、標準曲線和標準管，簡化了檢測操作步驟，提高了工作效率和節(jié)省試劑。
5．結果準確，重復性好。本發(fā)明采用的一種用生化酶標多功能分析儀測試濁度項目的超微量檢測技術的方法，其精密度、線性、相關系數(shù)、標準差、變異系數(shù)等都優(yōu)于其它比色儀。
實施例1麝香草酚濁度試驗(TTT)1．原理肝臟有實質性病變時，血清蛋白質的質與量都發(fā)生變化。當血清與麝香草酚飽和的巴比妥緩沖液作用時，麝香草酚可減低血清類脂質的分散力；在起穩(wěn)定作用的蛋白(如白蛋白)減低或質量變化的情況下，球蛋白在低離子強度緩沖液中溶解度減低而發(fā)生沉淀。沉淀物為球蛋白、類脂質及麝香草酚的復合體。其濁度與人工標準濁度管相比較，得出麝香草酚濁度單位。
2．試劑麝香草酚-巴比妥緩沖液稱取巴比妥鈉2.06g，巴比妥2.76g，加蒸餾水1L，加溫至沸。冷至37℃左右，加入100g/L麝香草酚酒精溶液10ml，用力振搖，放置室溫(20-25℃)過夜。其中麝香草酚濃度為1g/L。
3．標準比濁管的制備氯化鋇溶液(0.0481mol/L)精確稱取氯化鋇(BaCI22H2O)1.175g，或無水氯化鋇1g，置于100ml容量瓶內，加蒸餾水溶解并稀釋到100ml，混勻后存于密塞瓶中，可永久保存。
硫酸鋇標準原液于100ml容量瓶中，加入0.1mol/L硫酸70ml，緩緩滴加0.0481mol/L氯化鋇溶液3ml，隨加隨搖，最后加0.1mol/L硫酸至刻度。此混懸液相當于22.2麥氏單位。
麝香草酚標準濁度管的配制步驟
充分混勻，按如下操作4．麝香草酚標準濁度測定(1)取潔凈8×12標準96微孔板一塊。
(2)用100-500μl微量可調移液器定量吸取上述5、10、15、20不同濃度單位的標準溶液300μl分別加入微孔板各兩孔內。
(3)將微孔板置生化酶標多功能分析儀測量室內，用630nm，單波長，設空白孔和各標準孔位，啟動測量濁皮含量及同時打印出結果和吸光度報告。
(4)結果
麝香草酚標準濁度測定 比濁法試劑 按試劑配制方法配制批號 002022標準液(品) 應用前自配5、10、15、20麥氏單位波長方式 單波長測量波長 630nm報告方式 1．標準濃度測試結果2．吸光度測試結果標準溶液設置 1=0000、2=0005、3=0010、4=0015、5=0020兩種報告方式、測量結果如下1、標準濃度測試結果A行01、02孔為空白孔，03、04孔為“0”點孔，05、06孔為標準濁度5單位，07、08孔為標準濁度10單位，09、10孔為標準濁度15單位，11、12孔為標準濁度20單位測試結果。2、吸光度測試結果 與標準濁度測定結果相對應的各孔吸光度值。
5．操作(1)末梢血采集a．采血部位成人以左手無名指為宜，半歲以下嬰幼兒通常以拇指或足跟采血。
b．輕輕按摩采血部位，使其自然充血，用75％乙醇棉球消毒局部皮膚、待干。
c．緊捏刺血部位，用無菌采血針穿刺取血。動作應迅速，深度約2-3mm，以稍加擠壓血液能流出為宜。將微量采血塑料管上端口接觸血滴，下端放低，邊輕擠邊進血至需要量后燒熔下端，用鑷子捏緊封固或不封口，將微量采血塑料管折成“V”型插入一次性注射器的針頭塑料套內，在針頭塑料套管或采血塑料管上貼上不干膠序號，離心分離血清備用；(2)取潔凈8×12標準96微孔板一塊；(3)用微量定量加樣器取被測血清5l加入上述微孔板孔內；(4)用100-500l可調移液器定量吸取試劑300l加入微孔板各孔內；(5)用上述四種標準溶液測定出的吸光度后再根據樣本的定量值，采用線性回歸得到單位含量數(shù)為046.2。
(6)將試驗酶標孔板置生化酶標多功能分析儀測量室內，用630nm，單波長，設空白孔位，確認Au*C公式，設置單位含量數(shù)，C=046.2，在90s內同時測量打印出1～95份濁度測試結果報告。
(7)結果麝香草酚試驗 比濁法試劑 按試劑配制方法配制批號 002022波長方式 單波長測量波長 630nm報告方式 濁度測試結果單位含量數(shù)設置 C=046.2測量結果如下濁度測試結果 A行01、02孔為原空白孔，03、04孔為原“0”點孔，05、06孔為原標準濁度5單位，07、08孔為原標準濁度10單位，09、10孔為原標準濁度15單位，11、12孔為原標準濁度20單位測試結果。經測試與原標準濃度測定結果無誤差。其余孔為被測樣品結果。
實施例2血清鉀測定－新四苯硼化鈉直接比濁法本法不同于被淘汰的四苯硼化鈉比濁法。本試劑是加入NaOH提高pH值增加了靈敏度和使結果穩(wěn)定，并加入EDTA-Na2消除干擾基礎上研制的。本法與鉀鈉分析儀對比測定r=0.96，CV=3.98％，回收率95～103％。
1．原理血清中鉀離子與四苯硼化鈉作用，由于試劑pH在12以上，提高了試驗的靈敏度形成不溶于水的四苯硼化鉀沉淀，產生的濁度在一定范圍內與鉀離子的濃度成正比。根據濁度可測得血清中鉀的含量。
2．試劑a、四苯硼化鈉試劑于100ml容量瓶中加生理鹽水約70ml，1mol/L NaOH 1ml，EDTA-Na2 75mg，四苯硼化鈉2.5g，溶解后加生理鹽水至100ml。
b、鉀標準液5mmol/L。
3．標本采集按末梢血常規(guī)采集方法，將微量采血塑料管上端口接觸血滴，下端放低，邊輕擠邊進血至需要量后燒熔下端，用鑷子捏緊封固或不封口，將微量采血型料管折成“V”型插入一次性注射器的針頭塑料套內，在針頭塑料套管或采血塑料管上貼上不干膠序號，離心分離血清備用；4．加樣取潔凈96微孔板一塊按下表加樣
混勻，置室溫5分鐘后，再混勻。
5．測試將微孔板置生化酶標多功能分析儀測量室內，用630nm單波長、設空白孔和標準孔位，確認Au/As*C公式，設置標準品單位含量C=005.0進行比色測量各孔血清鉀含量。
6．結果血鉀測定 新四苯硼鈉比濁法試劑按試劑配制方法自配批號 000808波長方式單波長測量波長 630nm標準液(品)5mmol/L 使用公式 Au/As*C標準品單位含量設置C=005.0 1、血鉀測定結果A行01、02孔為空白調“0”孔，03、04孔為標準品測定結果，其余為標本測定孔結果。
2、吸光度測試結果 與血鉀測定結果相對應的各孔吸光度值。
權利要求
1．一種用生化酶標多功能分析儀測試濁度檢測技術的方法，其特征在于a．按末梢血常規(guī)采集方法將微量采血塑料管上端口接觸血滴，下端放低，邊輕擠邊進血至需要量后燒熔下端，用鑷子捏緊封固或不封口，將微量采血塑料管折成“V”型插入一次性注射器的針頭塑料套內，在針頭塑料套管或采血塑料管上貼上不干膠序號，離心分離血清備用；b．取潔凈8×12標準96微孔板一塊；c．采用微量定量加樣器，取標準品和被測樣品，定量加入微孔板各孔內；d．用微量移液器，按所需試劑用量，定量加入上述標準孔和被測樣品各孔內；e．將微孔板置生化酶標多功能分析儀測量室內，在90s內同時打印出1～90份結果報告。
2．一種用生化酶標多功能分析儀測試濁度檢測技術的方法，其特征在于a．按末梢血常規(guī)采集方法將微量采血塑料管上端口接觸血滴，下端放低，邊輕擠邊進血至需要量后燒熔下端，用鑷子捏緊封固或不封口，將微量采血塑料管折成“V”型插入一次性注射器的針頭塑料套內，在針頭塑料套管或采血塑料管上貼上不干膠序號，離心分離血清備用；b．取潔凈8×12標準96微孔板一塊；c．采用微量定量加樣器，取被測樣品，定量加入微孔板各孔內；d．用微量移液器，按所需試劑用量，定量加入上述被測樣品各孔內；e．配制四種濃度的標準溶液；f．用可調移液器定量吸取標準溶液分別加入微孔板各兩孔內；g．用四種標準溶液測定出的吸光度后再根據樣本的定量值，采用線性回歸得到單位含量數(shù)；h．將微孔板置生化酶標多功能分析儀測量室內，設置單位含量數(shù)，在90s內同時打印出1～90份結果報告。
3．根據權利要求1或2所述的用生化酶標多功能分析儀測試濁度檢測技術的方法，其特征在于采用1μl.2μl.3μl.5μl.10μl、20μl.25μl微量定量加樣器，取標準品和被測樣品，定量加入微孔板各孔內。
4．根據權利要求2所述的用生化酶標多功能分析儀測試濁度檢測技術的方法，其特征在于采用5、10、15、20單位濃度的標準溶液。
5．根據權利要求1或2所述的用生化酶標多功能分析儀測試濁度檢測技術的方法，其特征在于采用100-500μl微量可調移液器分別定量吸取標準溶液300μl加入微孔板各兩孔內。
6．根據權利要求1或2所述的用生化酶標多功能分析儀測試濁度檢測技術的方法，其特征在于采用100-500μl微量可調移液器定量吸取300μl所需試劑加入微孔板各孔內。
7．根據權利要求1或2所述的用生化酶標多功能分析儀測試濁度檢測技術的方法，其特征在于采用內徑2-3mm的聚乙烯塑料管制成5-7cm規(guī)格的微量采血塑料管。
全文摘要
本發(fā)明提供了一種利用現(xiàn)有的微孔板代替96只比色杯,在孔內直接進行濁度試驗。并用微量采血塑料管及定量加樣、移液器,達到無需靜脈抽血。用標準品測被測樣品,以及采用標準溶液測定出吸光度后再根據樣本的定量值,采用線性回歸得到單位含量數(shù),代替標準曲線和標準管,使之在濁度檢測項目中,大大提高了檢測速度,再結合相應配套的生化酶標多功能分析儀測試,完善了濁度的快速檢測系統(tǒng)。
文檔編號G01N33/52GK1299971SQ0013439
公開日2001年6月20日 申請日期2000年12月12日 優(yōu)先權日2000年12月12日
發(fā)明者吳斌, 張紅寧, 梁立森, 韓明倫 申請人:吳斌