專利名稱：中藥紅外指紋圖譜鑒別技術(shù)的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及天然植物或以天然植物原料為主的中藥材、中成藥、保健品、飲料、調(diào)料、各種提取物和添加劑的品種鑒定和真?zhèn)舞b別技術(shù)。
背景技術(shù)：
中藥紅外指紋圖譜鑒別技術(shù)屬于儀器分析方法中的紅外光譜法。對(duì)于其它光譜法，如紫外、熒光、原子吸收、核磁共振以及色譜—光譜聯(lián)用法，也都有人用來進(jìn)行中藥質(zhì)量評(píng)價(jià)的研究。各種方法性能不同其鑒別效果也各具特色。色譜—光譜聯(lián)用法可對(duì)中藥中的有效成分進(jìn)行準(zhǔn)確的定性定量分析，然而，由于目前人們還不知道每種單味藥材所獨(dú)有的特征性成分是什么，因此，其對(duì)單味藥材和中成藥的鑒別效果大打折扣。例如黃連和黃柏都含小檗堿，用色譜—光譜聯(lián)用儀可準(zhǔn)確測(cè)出某中藥材檢品含有小檗堿，但不能確定該檢品是黃連還是黃柏。每種圖譜鑒別技術(shù)都有其局限性和最佳的使用范圍。不同方法的難易程度、解決問題的角度、測(cè)試成本以及其鑒別效果等均有所不同。對(duì)于中藥中某個(gè)成分的定性定量分析而言，應(yīng)首選色譜-光譜聯(lián)用法。然而，對(duì)于單味藥材或中成藥全處方的品種和真?zhèn)舞b別來說，特別是當(dāng)沒有形態(tài)鑒別特征時(shí)，快捷、方便、經(jīng)濟(jì)、準(zhǔn)確、可靠的鑒別方法尚未見報(bào)道。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明針對(duì)已有技術(shù)的上述問題，提供一種快捷、方便、經(jīng)濟(jì)、準(zhǔn)確、可靠的中藥紅外指紋圖譜鑒別技術(shù)。
本發(fā)明包括將樣品用正己烷、和/或乙醚、和/或丁酮提取，分別測(cè)試提取物的紅外光譜，與相應(yīng)對(duì)照品的紅外光譜進(jìn)行比較，即可獲得鑒別結(jié)果。
本發(fā)明的特點(diǎn)在于，每克或每毫升樣品分步加入正己烷、和/或乙醚、和/或丁酮1-30毫升，提取1-30分鐘，離心，蒸干上清液得到的分別是正己烷、和/或乙醚、和/或丁酮提取物。
對(duì)可粉碎成粉末的固體樣品，如中藥材或以生藥為主的中成藥的散劑、片劑、錠劑、水丸劑和膠囊劑，具體制備步驟如下將樣品粉碎，每克樣品加正己烷5-20ml，提取1-30分鐘，離心，蒸干上清液得到正己烷提取物；待樣品揮干后，再加乙醚5-20ml，提取1-30分鐘，離心，蒸干上清液得到乙醚提取物；待樣品揮干后，再加95％乙醇5-20ml，提取1-30分鐘，離心，蒸干上清液，向提取物中加2-10ml蒸餾水，使溶，將混懸液離心，向上清液中加丁酮5-20ml，振搖，離心，蒸干上清液得到丁酮提取物。
對(duì)粘性固體樣品，如，中成藥蜜丸劑，具體制備步驟如下將樣品切碎，每克樣品加蒸餾水5-20ml，研成混懸物，振搖，離心，向上清液中加5-20ml正己烷，振搖，離心，蒸干上清液，得到正己烷提取物；向下層溶液再加5-20ml乙醚，振搖，離心，蒸干上清液，得到乙醚提取物；再向下層溶液加5-20ml丁酮，振搖，離心，蒸干上清液，得到丁酮提取物。
對(duì)不含脂溶物的固體樣品，如，中成藥沖劑和顆粒劑，具體制備步驟如下每克樣品加蒸餾水5-30ml，使溶，加5-30ml乙醚，振搖，離心，蒸干上清液，得到乙醚提取物；向下層溶液再加5-30ml丁酮，振搖，離心，蒸干上清液，得到丁酮提取物。
對(duì)僅含水溶物的固體樣品，例如單味中藥濃縮顆粒，具體制備步驟如下每克樣品加蒸餾水5-30ml使溶，加5-30ml丁酮，振搖，離心，蒸干上清液，得到丁酮提取物。
對(duì)粘性液體樣品，例如中成藥合劑、酒劑、洗劑、浸膏劑及保健品口服液，具體制備步驟如下每毫升樣品加丁酮1-10ml，振搖，離心，蒸干上清液，向丁酮提取物中加蒸餾水1-10ml使溶，向混懸液中加1-10ml正己烷，振搖，離心，蒸干上清液，得到正己烷提取物；向下層溶液加1-10ml乙醚，振搖，離心，蒸干上清液，得到乙醚提取物；向下層溶液加1-10ml丁酮，振搖，離心，蒸干上清液，得到丁酮提取物。
對(duì)僅含水溶物的液體樣品，例如中成藥注射劑，具體制備步驟如下每毫升樣品加丁酮1-10ml，振搖，離心，蒸干上清液，得到丁酮提取物。
本發(fā)明通過測(cè)定檢品的三種極性提取物(正己烷、乙醚、丁酮提取物)的紅外光譜，然后將其光譜與其對(duì)照品的紅外光譜或與已建立的中藥材和中成藥標(biāo)準(zhǔn)紅外光譜圖集及其計(jì)算機(jī)檢索光譜庫(kù)比較，后者可借助計(jì)算機(jī)進(jìn)行判斷，確定該檢品的歸屬。通常，同種植物的藥用部位與非藥用部位的光譜是不同的。假如檢品是來自非藥用部位，那么根據(jù)其光譜特征就可以確定其真?zhèn)?。需要特別強(qiáng)調(diào)的是，有不少學(xué)者都在探索用紅外光譜法鑒別中藥材的問題，由于各家的研究方法不同，因此其鑒別效果也各不相同。若要比較其鑒別效果的優(yōu)劣可以用測(cè)試甘草(烏拉、脹果和光果)的光譜來評(píng)定，看誰的信息量大，誰鑒別得既快又準(zhǔn)。本發(fā)明方法真正達(dá)到了簡(jiǎn)便、快速、準(zhǔn)確、經(jīng)濟(jì)、重復(fù)性高、信息量大、適用面廣、鑒別效果極佳并且可使用計(jì)算機(jī)檢索的水平。
使用本發(fā)明可以使天然植物或以天然植物原料為主的中藥材、中成藥、保健品、飲料、調(diào)料、各種提取物或添加劑獲得1-3張獨(dú)特的紅外指紋圖譜。該圖譜可用于上述樣品的品種和真?zhèn)舞b別以及對(duì)產(chǎn)品質(zhì)量的穩(wěn)定性考查。本技術(shù)的鑒別能力和水平對(duì)單味植物藥一般可準(zhǔn)確鑒別其種及其各種復(fù)雜情況，對(duì)不同產(chǎn)地、不同采集期和不同加工方法等情況只要其成分有明顯的變化均可提供鑒別信息；對(duì)中成藥可準(zhǔn)確鑒別其處方的真實(shí)性和完整性，通常，其鑒別的靈敏度可反映一味藥的變化，缺少或更換一味藥均可測(cè)出差異。例如黃連和黃柏都含小檗堿，用色譜—光譜聯(lián)用儀可準(zhǔn)確測(cè)出某中藥材檢品含有小檗堿，但不能確定該檢品是黃連還是黃柏。使用本發(fā)明無論對(duì)于黃連還是黃柏，都可以獲得三張具有獨(dú)特特征的紅外譜圖。每一張光譜都是含多種成分的混合物的光譜。該光譜類似于人類的指紋，使用它可以準(zhǔn)確無誤地鑒別黃連和黃柏。該光譜的特征性來源于物種所含化學(xué)成分千差萬別的特征性。每種藥材紅外光譜的輪廓特征是相對(duì)固定的，因此可以把它看作是一個(gè)穩(wěn)定的曲線圖形。這樣，我們就可以不解釋光譜中每個(gè)峰的化學(xué)含義，光譜鑒別就成為類似藥材外形鑒別的特殊圖形的形態(tài)鑒別方法。
使用本發(fā)明可對(duì)生產(chǎn)原料和最終產(chǎn)品進(jìn)行強(qiáng)有力地質(zhì)量控制，可大幅度地提高產(chǎn)品的質(zhì)量和信譽(yù)。條形碼和激光防偽標(biāo)記等技術(shù)不可能從根本上做到防偽，而本技術(shù)則是從實(shí)測(cè)內(nèi)在成分入手，只要光譜吻合，產(chǎn)品的身份即正宗無疑。我國(guó)中藥生產(chǎn)廠家正在積極推行GMP管理，本發(fā)明有助于推動(dòng)我國(guó)中藥現(xiàn)代化、促進(jìn)中醫(yī)藥產(chǎn)品與國(guó)際接軌并讓世界更好更多地接受中醫(yī)藥產(chǎn)品。
下面結(jié)合附圖和實(shí)施例對(duì)本發(fā)明作進(jìn)一步說明。


圖1是四種甘草正己烷提取物的紅外光譜。圖2是四種甘草乙醚提取物的紅外光譜。圖3是四。種甘草丁酮提取物的紅外光譜。其中，橫坐標(biāo)是波數(shù)/cm-1，縱坐標(biāo)是透過率/T％，從上到下樣品分別是內(nèi)蒙古野生烏拉甘草、新疆人工栽培脹果甘草、新疆野生光果甘草和山東人工栽培刺果甘草。
正品甘草有三個(gè)種，烏拉、脹果和光果，刺果甘草是作為其它藥用品種。對(duì)于這四種甘草的粉末或全成分提取物，用現(xiàn)行其它方法很難在短時(shí)間內(nèi)鑒別清楚。從圖1-3可以看出，不管使用哪一種提取物的光譜，都能把這四種甘草分得一清二楚。
圖4是同仁堂大活絡(luò)丹的對(duì)照或標(biāo)準(zhǔn)紅外光譜，其中，橫坐標(biāo)是波數(shù)/cm-1，縱坐標(biāo)是透過率/T％，從上到下分別是正己烷、乙醚、丁酮提取物的光譜。同仁大活絡(luò)丹含有51味藥材，該光譜是采用本發(fā)明的方法對(duì)25個(gè)批號(hào)的同仁大活絡(luò)丹樣品正己烷、乙醚、丁酮提取物的光譜經(jīng)計(jì)算機(jī)對(duì)其光譜特征進(jìn)行了平均和歸納，因此，可以被看作是同仁大活絡(luò)丹的對(duì)照或標(biāo)準(zhǔn)紅外光譜。
圖5是同仁堂牛黃清心丸的標(biāo)準(zhǔn)紅外光譜，其中，橫坐標(biāo)是波數(shù)/cm-1，縱坐標(biāo)是透過率/T％，從上到下分別是正己烷、乙醚、丁酮提取物的光譜。牛黃清心丸含有29味藥材。圖5中的正己烷提取物的光譜在1107、1070、1054、1031、1020和1007cm-1附近的一組吸收峰正是冰片的特征峰(已經(jīng)與冰片的紅外光譜比較并證實(shí))。根據(jù)這組吸收峰的有無，就可以對(duì)牛黃清心丸中是否加入冰片做出準(zhǔn)確的鑒定。
圖6是制首烏濃縮顆粒的紅外光譜。圖7是防風(fēng)濃縮顆粒的紅外光譜。其中，橫坐標(biāo)是波數(shù)/cm-1，縱坐標(biāo)是透過率T％，上圖均為未經(jīng)提取直接用KBr壓片法測(cè)定的光譜；下圖為丁酮提取物的光譜。這兩個(gè)濃縮顆粒樣品都是江蘇省江陰天江藥業(yè)有限公司生產(chǎn)的。制首烏和防風(fēng)不同科不同屬，但其水煎劑的光譜卻極為相似，看起來有點(diǎn)不可思議。用本發(fā)明方法提取后，二者的光譜差異一下子變得非常明顯，光譜鑒別變得非常容易。
圖8～圖l0分別是9403-102批號(hào)的同仁大活絡(luò)丹的正己烷、乙醚、丁酮提取物的光譜(上圖)與其標(biāo)準(zhǔn)紅外光譜(下圖)的計(jì)算機(jī)檢索結(jié)果。其中，橫坐標(biāo)是波數(shù)/cm-1，縱坐標(biāo)是透過率/T％。劑型大蜜丸劑，來源均來自北京同仁堂制藥廠，制樣溴化鉀涂片法。從圖中可以看出兩光譜吻合得很好，吻合率為94～97％，以此可作出是真品的結(jié)論。
圖11是偽大活絡(luò)丹正己烷提取物的光譜(上圖)與正品大活絡(luò)丹標(biāo)準(zhǔn)紅外光譜(下圖)的對(duì)照結(jié)果。其中，橫坐標(biāo)是波數(shù)/cm-1，縱坐標(biāo)是透過率/T％。劑型大蜜丸劑，來源正品來自北京同仁堂制藥廠，偽品由北京同仁堂制藥廠收集并提供，制樣溴化鉀涂片法。從圖中可以看出兩光譜明顯吻合得不好，吻合率不足40％，以此可作出上圖是偽品的結(jié)論。
圖12是山東省淄博市淄川區(qū)第二制藥廠生產(chǎn)的板藍(lán)根沖劑(批號(hào)20000104)的紅外光譜。其中，橫坐標(biāo)是波數(shù)/cm-1，縱坐標(biāo)是透過率/T％，上圖是乙醚提取物的光譜；下圖是丁酮提取物的光譜。由于此類樣品一般不含脂溶物，因此只能得到兩種提取物的光譜，鑒別時(shí)，需要將其光譜與板藍(lán)根沖劑的對(duì)照或標(biāo)準(zhǔn)光譜進(jìn)行比較并根據(jù)其相似程度判斷其真?zhèn)巍?br> 圖13是山東北方制藥廠的復(fù)方大青葉合劑(批號(hào)960411)的紅外光譜。其中，橫坐標(biāo)是波數(shù)/cm-1，縱坐標(biāo)是透過率/T％，從上到下分別是正己烷、乙醚、丁酮提取物的光譜。此類粘性液體樣品一般都能得到三種提取物的光譜。鑒別時(shí)，需要將其光譜逐一與復(fù)方大青葉合劑的對(duì)照或標(biāo)準(zhǔn)光譜進(jìn)行比較并根據(jù)其相似程度判斷其真?zhèn)巍?br> 圖14是金陵藥業(yè)股份有限公司南京金陵制藥廠生產(chǎn)的脈絡(luò)寧注射液(批號(hào)200010073)的紅外光譜。其中，橫坐標(biāo)是波數(shù)/cm-1，縱坐標(biāo)是透過率T％，下圖是丁酮提取物的光譜；上圖是經(jīng)丁酮提取后下層溶液所含物質(zhì)的光譜。鑒別時(shí)，需要將其光譜逐一與脈絡(luò)寧注射液的對(duì)照或標(biāo)準(zhǔn)光譜進(jìn)行比較并根據(jù)其相似程度判斷其真?zhèn)巍?br> (五)具體實(shí)施例實(shí)施例1.對(duì)可粉碎成粉末的固體樣品烏拉甘草的鑒別將樣品粉碎，過50目篩，稱取樣品2g，加正己烷30ml，提取20分鐘，離心，取上清液蒸干即得正己烷提取物；待樣品揮干后，加乙醚30ml，提取20分鐘，離心，取上清液蒸干即得乙醚提取物；待樣品揮干后，加95％乙醇30ml，提取20分鐘，離心，將上清液蒸干，向上清液提取物中加20ml蒸餾水，使溶，將混懸液離心，向上清液中加30ml丁酮，振搖，離心，取上清液蒸干即得丁酮提取物。分別測(cè)試上述三種提取物的紅外光譜(見圖1-3中的上數(shù)第一張光譜)。然后將其光譜與烏拉甘草對(duì)照藥材(中國(guó)藥品生物制品檢定所可提供近400種對(duì)照藥材)的光譜比較并根據(jù)其相似程度判斷其真?zhèn)巍?br> 實(shí)施例2.對(duì)粘性固體樣品蜜丸劑大活絡(luò)丹的鑒別稱取3g樣品，切碎，加蒸餾水30ml，研磨使之成為均勻的混懸物，振搖，離心，向上清液中加30ml正己烷，振搖，離心，取上清液蒸干，得到正己烷提取物；向下層溶液加30ml乙醚，振搖，離心，取上清液蒸干，得到乙醚提取物；向下層溶液加30ml丁酮，振搖，離心，將上清液蒸干，得到丁酮提取物。分別測(cè)試上述三種提取物的紅外光譜(見圖4)。然后將其光譜與大活絡(luò)丹的對(duì)照或標(biāo)準(zhǔn)光譜比較并根據(jù)其相似程度判斷其真?zhèn)巍?br> 實(shí)施例3.對(duì)不含脂溶物的固體樣品板籃根沖劑的鑒別取樣品1g，加蒸餾水20ml，使溶，加20ml乙醚，振搖，離心，將上清液蒸干，得到乙醚提取物。向下層溶液加20ml丁酮，振搖，離心，將上清液蒸干，得到丁酮提取物。分別測(cè)試上述兩種提取物的紅外光譜(見圖12)。然后將其光譜與板籃根沖劑的對(duì)照或標(biāo)準(zhǔn)光譜比較并根據(jù)其相似程度判斷其真?zhèn)巍?br> 實(shí)施例4.對(duì)僅含水溶物的固體樣品單味中藥濃縮顆粒制首烏的鑒別取樣品1g，加蒸餾水20ml，使溶，加20ml丁酮，振搖，離心，將上清液蒸干，得到丁酮提取物。測(cè)試丁酮提取物的紅外光譜(見圖6的下邊一張光譜)。然后將其光譜與單味中藥濃縮顆粒制首烏的對(duì)照或標(biāo)準(zhǔn)光譜比較并根據(jù)其相似程度判斷其真?zhèn)巍?br> 實(shí)施例5.對(duì)粘性液體樣品復(fù)方大青葉合劑的鑒別取樣品10ml，加丁酮20ml，振搖，離心，將上清液蒸干，向丁酮提取物中加20ml蒸餾水研磨，得到混懸液，向混懸液中加20ml正己烷，振搖，離心，將上清液蒸干，得到正己烷提取物；向下層溶液加20ml乙醚，振搖，離心，將上清液蒸干，得到乙醚提取物；向下層溶液加20ml丁酮，振搖，離心，將上清液蒸干，得到丁酮提取物。分別測(cè)試上述三種提取物的紅外光譜(見圖13)。然后將其光譜與復(fù)方大青葉合劑的對(duì)照或標(biāo)準(zhǔn)光譜比較并根據(jù)其相似程度判斷其真?zhèn)巍?br> 實(shí)施例6.對(duì)僅含水溶物的液體樣品脈絡(luò)寧注射劑的鑒別取樣品10ml，加20ml丁酮，振搖，離心，將上清液蒸干，得到丁酮提取物。測(cè)試上述丁酮提取物的紅外光譜(見圖14)。然后將其光譜與脈絡(luò)寧注射劑的對(duì)照或標(biāo)準(zhǔn)光譜比較并根據(jù)其相似程度判斷其真?zhèn)巍?br> 權(quán)利要求
1.一種中藥紅外指紋圖譜鑒別技術(shù)，包括將樣品用溶劑提取，分別測(cè)試提取物的紅外光譜，與相應(yīng)對(duì)照品的紅外光譜進(jìn)行比較，其特征在于，所用溶劑是正己烷、和/或乙醚、和/或丁酮。
2.如權(quán)利要求1所述的中藥紅外指紋圖譜鑒別技術(shù)，其特征在于，每克或每毫升樣品分步加入正己烷、和/或乙醚、和/或丁酮1-30毫升，提取1-30分鐘，離心，蒸干上清液分別得到正己烷、和/或乙醚、和/或丁酮提取物。
3.如權(quán)利要求1或2所述的中藥紅外指紋圖譜鑒別技術(shù)，其特征在于，對(duì)可粉碎固體樣品，具體的溶劑提取步驟如下將樣品粉碎，每克樣品加正己烷5-20ml，提取1-30分鐘，離心，蒸干上清液得到正己烷提取物；待樣品揮干后，再加乙醚5-20ml，提取1-30分鐘，離心，蒸干上清液得到乙醚提取物；待樣品揮干后，再加95％乙醇5-20ml，提取1-30分鐘，離心，蒸干上清液，向提取物中加2-10ml蒸餾水，使溶，將混懸液離心，向上清液中加丁酮5-20ml，振搖，離心，蒸干上清液得到丁酮提取物。
4.如權(quán)利要求1或2所述的中藥紅外指紋圖譜鑒別技術(shù)，其特征在于，對(duì)粘性固體樣品，具體的溶劑提取步驟如下將樣品切碎，每克樣品加蒸餾水5-20ml，研成混懸物，振搖，離心，向上清液中加5-20ml正己烷，振搖，離心，蒸干上清液，得到正己烷提取物；向下層溶液再加5-20ml乙醚，振搖，離心，蒸干上清液，得到乙醚提取物；再向下層溶液加5-20ml丁酮，振搖，離心，蒸干上清液，得到丁酮提取物。
5.如權(quán)利要求1或2所述的中藥紅外指紋圖譜鑒別技術(shù)，其特征在于，對(duì)不含脂溶物的固體樣品，具體的溶劑提取步驟如下每克樣品加蒸餾水5-30ml，使溶，加5-30ml乙醚，振搖，離心，蒸干上清液，得到乙醚提取物；向下層溶液再加5-30ml丁酮，振搖，離心，蒸干上清液，得到丁酮提取物。
6.如權(quán)利要求1或2所述的中藥紅外指紋圖譜鑒別技術(shù)，其特征在于，對(duì)僅含水溶物的固體樣品，具體的溶劑提取步驟如下每克樣品加蒸餾水5-30ml使溶，加5-30ml丁酮，振搖，離心，蒸干上清液，得到丁酮提取物。
7.如權(quán)利要求1或2所述的中藥紅外指紋圖譜鑒別技術(shù)，其特征在于，對(duì)粘性液體樣品，具體的溶劑提取步驟如下每毫升樣品加丁酮1-10ml，振搖，離心，蒸干上清液，向丁酮提取物中加蒸餾水1-10ml使溶，向混懸液中加1-10ml正己烷，振搖，離心，蒸干上清液，得到正己烷提取物；向下層溶液加1-10ml乙醚，振搖，離心，蒸干上清液，得到乙醚提取物；向下層溶液加1-10ml丁酮，振搖，離心，蒸干上清液，得到丁酮提取物。
8.如權(quán)利要求1或2所述的中藥紅外指紋圖譜鑒別技術(shù)，其特征在于，對(duì)僅含水溶物的液體樣品，具體的溶劑提取步驟如下每毫升樣品加丁酮1-10ml，振搖，離心，蒸干上清液，得到丁酮提取物。
全文摘要
中藥紅外指紋圖譜鑒別技術(shù),涉及天然植物或以天然植物原料為主的中藥材、中成藥、保健品、飲料、調(diào)料、各種提取物和添加劑的品種鑒定和真?zhèn)舞b別。包括將樣品用溶劑提取,分別測(cè)試提取物的紅外光譜,與相應(yīng)對(duì)照品的紅外光譜進(jìn)行比較,所用溶劑是正己烷、和/或乙醚、和/或丁酮,每克或每毫升樣品分步加溶劑1－30毫升,提取1－30分鐘,離心,蒸干上清液分別得到正己烷、和/或乙醚、和/或丁酮提取物。本發(fā)明的鑒別效果,對(duì)單味植物藥可準(zhǔn)確鑒別其種,對(duì)不同產(chǎn)地、不同采集期和不同加工方法等只要其成分有明顯的變化均可提供鑒別信息;對(duì)中成藥可準(zhǔn)確鑒別其處方的真實(shí)性和完整性。
文檔編號(hào)G01N21/35GK1327154SQ0111516
公開日2001年12月19日 申請(qǐng)日期2001年7月23日 優(yōu)先權(quán)日2001年7月23日
發(fā)明者田進(jìn)國(guó) 申請(qǐng)人:山東大學(xué)