專利名稱：色譜餅的徑向裝柱法的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種生物工程下游色譜餅的裝填工藝技術(shù)，特別是一種用于生物大分子分離或生物大分子同時復(fù)性及純化色譜餅的徑向裝柱法。
目前對于制備和生產(chǎn)型的色譜柱，用軸向加壓和徑向加壓技術(shù)裝填色譜填料，可獲得滿意的柱效。但這兩種方法僅適用于直徑大于20μm顆粒填料的裝填，對于裝填直徑1-10μm顆粒范圍的色譜填料和柱長/徑比小于或等于1的色譜餅，到目前為止，還沒有較理想的裝填這種色譜餅的方法。如果采用傳統(tǒng)工藝裝填這種色譜餅，往往存在許多不足裝填色譜柱的傳統(tǒng)工藝是從軸向進(jìn)出，一般僅適用于柱長/徑比＞10的色譜柱。這種工藝，對裝柱技術(shù)要求很高，稍有不慎很容易出現(xiàn)出口緊密進(jìn)口疏松等裝填不均勻的情況，裝柱重現(xiàn)性較差。此外，裝完柱以后一般要放置過夜使其柱中的“緊松”程度趨于穩(wěn)定才能使用；這種傳統(tǒng)的裝柱技術(shù)根本不適用于柱長/徑比小于等于1的色譜餅。否則非常容易出現(xiàn)柱中心裝填緊密而柱壁裝填疏松的情況；通常裝完柱(例如φ4.6mm色譜柱)后，容易用刀片將填料進(jìn)口端，也是流動相的進(jìn)口端表面填料刮平。而對φ20-1000mm的“色譜餅”而言，這樣做是不可能的，也無簡單有效的方法使這么大填料表面平整而又光滑；通常色譜柱在承受相當(dāng)長時間的高壓后才需重新裝柱。而在重新裝柱以前，修補(bǔ)凹陷的色譜柱進(jìn)口端可以延長其使用壽命，通常修補(bǔ)凹陷的色譜柱進(jìn)口端時，必須拆卸柱頭，拿下篩板才能實施。對于小直徑的柱子，因柱篩板面積較小，較容易取下。而“色譜餅” 篩板的面積一般是通常色譜柱的1～100倍，而且分布器與篩板嵌合緊密，并壓入柱體的凹槽很死，很難取下。如果強(qiáng)行取下，常常會破壞分布器；當(dāng)采用高壓勻漿法將小顆粒介質(zhì)軸向裝入色譜餅時，由于色譜餅的直徑較大，密封比較困難，必須先試漏，再裝柱。裝好色譜填料后，仍然存在漏液的問題，給裝柱工作帶來極大的困難；對于更大的色譜餅需要更大的勻漿罐和輔助設(shè)備，增大生產(chǎn)成本。
本發(fā)明的目的是提供一種用于生物大分子分離或同時復(fù)性及純化的色譜餅的徑向裝柱法，能在中常壓力下充分利用小顆粒填料柱效高、容量大、重現(xiàn)性好的優(yōu)點，克服大顆粒色譜填料柱效低等現(xiàn)有技術(shù)的不足，能快速方便地裝填色譜餅，使其柱效達(dá)到最高，并降低裝柱成本。
本發(fā)明的實現(xiàn)在色譜餅的柱體上設(shè)置1-3個側(cè)孔，首先是將柱體、篩板、分布器、壓板依次裝配緊固形成柱體腔；其次對于直徑小于50mm的色譜餅，直接將色譜餅裝于高壓勻漿裝柱機(jī)上，按照一般的裝柱方法將色譜填料與試劑形成的勻漿液從柱體上的側(cè)孔進(jìn)行裝柱。對于直徑大于50mm的色譜餅，先用抽濾法裝柱，然后再將其裝于高壓勻漿機(jī)上按照一般高壓勻漿裝柱的方法進(jìn)行裝柱，以便介質(zhì)裝填的更緊密。柱體上的側(cè)孔還被用來補(bǔ)加色譜介質(zhì)——在色譜餅使用一段時間以后，由于色譜介質(zhì)的流失增加了色譜餅中的死體積，通過從側(cè)孔補(bǔ)加色譜介質(zhì)的方法達(dá)到消除死體積的目的。補(bǔ)加色譜介質(zhì)的方法與徑向裝柱方法相同；柱體上的側(cè)孔還被用來沖洗色譜餅——在色譜餅使用一段時間以后，在分布器和篩板上積聚了一些雜質(zhì)和未進(jìn)到色譜餅中的生物大分子物質(zhì)，這些積聚物一方面會增加色譜系統(tǒng)的壓力，另一方面會污染后續(xù)待分離的樣品，所以，需要定期沖洗色譜餅。沖洗色譜餅的方法是將側(cè)孔作為進(jìn)口，將色譜餅兩個壓板上的進(jìn)出口作為出口，通入緩沖液或水即可進(jìn)行沖洗；柱體上的側(cè)孔還被用來取出失效色譜介質(zhì)——在色譜餅使用一段時間以后，系統(tǒng)壓力顯著升高，柱效變得很低，需要更換色譜介質(zhì)，這時可將色譜餅兩個壓板上的進(jìn)出口作為進(jìn)口，側(cè)孔作為出口，通入水沖出失效的色譜介質(zhì)，用徑向裝柱法重新裝填色譜餅。
本發(fā)明的優(yōu)點和積極效果裝柱方便容易省時省力；由于檢漏后不需打開兩端的壓板而直接裝柱，能確保色譜餅不漏液、保證介質(zhì)表面的平整，有利于提高柱效；不需要打開兩端壓板，直接從色譜餅上的側(cè)孔補(bǔ)加色譜介質(zhì)，消除色譜餅中的死體積；可從色譜餅上的側(cè)孔進(jìn)溶劑沖洗分布器和篩板上的積聚物，減小色譜系統(tǒng)的壓力和對后續(xù)待分離的樣品的污染；可從色譜餅上的側(cè)孔取出失效色譜介質(zhì)，再用該方法進(jìn)行裝柱；在裝填較大的色譜餅時不需要更大的勻漿罐和另外的輔助設(shè)備，減少了生產(chǎn)成本。
權(quán)利要求
1.一種色譜餅的徑向裝柱法，其特征在于首先是將柱體、篩板、分布器、壓板依次裝配緊固形成柱腔體，其次是將色譜填料與試劑形成的勻漿液由柱體上設(shè)置的1--3個側(cè)孔任一側(cè)孔加入柱腔體，除色譜填料以外的試劑經(jīng)過篩板、分布器過濾主要是從垂直方向的流動相的進(jìn)出口排出。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的色譜餅的徑向裝柱法，其特征在于側(cè)孔與高壓勻漿裝柱機(jī)上的勻漿罐直接相連通進(jìn)行裝柱。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的色譜餅的徑向裝柱法，其特征在于直徑小于50mm的色譜餅，直接將色譜餅裝于高壓勻漿裝柱機(jī)上，按照一般的裝柱方法將色譜填料勻漿液從柱體上的側(cè)孔進(jìn)行裝柱。
4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的色譜餅的徑向裝柱法，其特征在于直徑大于50mm的色譜餅，先用抽濾法裝柱，然后再將其裝于高壓勻漿機(jī)上按照一般高壓勻漿裝柱法進(jìn)行裝柱。
5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的色譜餅的徑向裝柱法，其特征在于補(bǔ)加色譜介質(zhì)、沖洗色譜餅、更換失效色譜介質(zhì)均通過側(cè)孔來操作。
全文摘要
本發(fā)明涉及一種生物工程下游色譜餅的裝填工藝技術(shù),特別是一種用于生物大分子分離或同時復(fù)性及純化色譜餅的徑向裝柱法。其技術(shù)關(guān)鍵是:先將柱體、篩板、分布器、壓板依次裝配緊固形成柱腔體,再將色譜填料與試劑形成的勻漿液由柱體上設(shè)置的側(cè)孔加入柱腔體,除色譜填料以外的試劑經(jīng)過篩板、分布器過濾主要是從壓板的流動相進(jìn)出口排出。該方法裝柱方便容易省時省力,所裝填的色譜介質(zhì)表面平整,柱效高。
文檔編號G01N30/00GK1387038SQ0111526
公開日2002年12月25日 申請日期2001年5月18日 優(yōu)先權(quán)日2001年5月18日
發(fā)明者耿信篤, 張養(yǎng)軍 申請人:西北大學(xué)