專利名稱：電泳系統(tǒng)的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及將第一和第二維凝膠包含在單一盒中進(jìn)行二維電泳的方法。
為達(dá)到2-D凝膠的真實(shí)高產(chǎn)量和再現(xiàn)性，必須盡可能地排除操作者的干擾。這可以通過(guò)在單一盒中結(jié)合第一和第二維凝膠來(lái)實(shí)現(xiàn)，因此不需要操作者人工干擾凝膠。這一人工干擾步驟既緩慢又麻煩，并且將形成操作者之間的差異，從而導(dǎo)致缺乏再現(xiàn)性。在單一盒中結(jié)合兩種凝膠的另一個(gè)優(yōu)點(diǎn)是將運(yùn)行硬件減少為一個(gè)單一設(shè)備，因此增加了自動(dòng)化的可能性。在單一盒中將凝膠放置在一起要求能將凝膠放置在彼此相隔的幾微米內(nèi)，同時(shí)直到要求蛋白質(zhì)從第一向第二維轉(zhuǎn)移時(shí)保持凝膠之間的分離。將第一和第二維凝膠結(jié)合在單一盒中具有很大的技術(shù)難度。首先，由于存在溶液，因此在兩種凝膠中的離子條件相當(dāng)不同。第一維等電子聚焦凝膠具有非常低的離子強(qiáng)度，不與高電平的鹽或緩沖劑相容。等電子聚焦是在高達(dá)10,000伏的高電壓和典型地每個(gè)凝膠小于1mA的非常低的電流下進(jìn)行的。與此相反，第二維凝膠具有通常為100-500mM范圍的高緩沖劑鹽濃度，電泳是在每個(gè)凝膠5-100mA的高電流下進(jìn)行的。因此，當(dāng)將這兩種凝膠緊密放置時(shí)必須仔細(xì)，以保證來(lái)自第二維凝膠的緩沖劑不污染第一維凝膠，這種污染會(huì)導(dǎo)致非常高的電流和第一維凝膠的隨后燃燒。
人們面對(duì)的第二個(gè)問(wèn)題是如何將樣品加載到第一維凝膠上而不允許任何樣品過(guò)早地轉(zhuǎn)移到第二維凝膠中。進(jìn)行等電子聚焦的最好方式是使用固定pH梯度(IPG)，該梯度典型地作為干燥條提供并且和樣品溶液再水合，從而將樣品分布在整個(gè)凝膠上，這樣允許高蛋白質(zhì)的負(fù)荷。當(dāng)在單一盒中結(jié)合兩種凝膠時(shí)，難以用樣品潤(rùn)濕IPG的整個(gè)表面而不允許一些樣品轉(zhuǎn)移到第二維凝膠中。
為了提供用于進(jìn)行二維電泳的結(jié)合的條凝膠和板凝膠，人們已經(jīng)進(jìn)行了很多嘗試。US 4874490公開了這樣的一種設(shè)備。然而其中提出的方法不易操作，而且不實(shí)用，并且沒(méi)有給出正在執(zhí)行和實(shí)際工作的方法的例子。隨著人們對(duì)蛋白質(zhì)領(lǐng)域越來(lái)越感興趣，必須進(jìn)行比以前更多的分離。分離，特別是二維分離，需要大量的勞動(dòng)力，在這個(gè)領(lǐng)域中增加工人生產(chǎn)率的唯一可行方式是提供易于自動(dòng)化的方法和系統(tǒng)。美國(guó)專利No.4874490中所示方法如果能在任何情況下工作，那么將會(huì)很困難，如果不能在任何情況下工作，那么將很難形成機(jī)械化。
美國(guó)專利No.5773645公開了在普通載體上進(jìn)行二維分離的另外一種設(shè)備。這份說(shuō)明書依然沒(méi)有公開使用這種設(shè)備的任何一個(gè)示例或結(jié)果。所公開的這種系統(tǒng)要形成自動(dòng)化依然很困難，并且會(huì)很昂貴。
本發(fā)明的一個(gè)目的是提供一種新方法，該方法以允許方法和系統(tǒng)自動(dòng)化的方式克服了與在單一盒中結(jié)合和運(yùn)行第一和第二維凝膠相關(guān)的技術(shù)難題。
已經(jīng)包括在本說(shuō)明書中的文獻(xiàn)、行為、材料、設(shè)備、制品等的任何討論僅用于提供本發(fā)明的環(huán)境。盡管在本申請(qǐng)每個(gè)權(quán)利要求的優(yōu)先權(quán)日期之前它們?cè)诎拇罄麃喴呀?jīng)存在，但是我們并不認(rèn)為這些內(nèi)容形成了現(xiàn)有技術(shù)基礎(chǔ)，或者是和本發(fā)明相關(guān)的領(lǐng)域內(nèi)的公知常識(shí)。

發(fā)明內(nèi)容
在第一主要方面，本發(fā)明的基本思想是提出允許第一維等電子聚焦凝膠和第二維電泳凝膠在單一盒中結(jié)合、貯存、運(yùn)輸和運(yùn)行的新方法，該方法易于自動(dòng)化。
在第二方面，本發(fā)明提供采用樣品蛋白質(zhì)或多肽的溶液再水合第一維凝膠的方法。所述再水合在盒中進(jìn)行，而樣品溶液沒(méi)有向第二維凝膠轉(zhuǎn)移。
在第三方面，本發(fā)明提供在進(jìn)行等電子聚焦時(shí)在第一和第二維凝膠之間放置電流絕緣屏蔽物的方法。屏蔽物防止兩種凝膠在盒中的脫水，另外防止樣品從第一維凝膠向第二維凝膠的任何過(guò)早轉(zhuǎn)移或緩沖劑鹽從第二維凝膠向第一維凝膠的轉(zhuǎn)移。
本發(fā)明的另一方面是除去電流絕緣屏蔽物和提供優(yōu)選一個(gè)凝膠的緩沖劑浸漬的導(dǎo)電橋接材料，以連接第一維凝膠與第二維凝膠的方法。橋接材料允許蛋白質(zhì)從第一維凝膠轉(zhuǎn)移到第二維凝膠。
本發(fā)明的又一個(gè)方面是提供電連接到第一維凝膠末端以允許進(jìn)行電泳的裝置。
在一個(gè)具體方面，提供一種由二維電泳將樣品分離成組分的方法，該方法包括a.提供包括典型地是IPG條的伸長(zhǎng)條的第一電泳分離介質(zhì)，和典型地為板的形式的第二電泳分離介質(zhì)，該介質(zhì)被隔離并在單一的通常為平面支撐的機(jī)構(gòu)上處理；b.平面支撐機(jī)構(gòu)定向在通常垂直的平面中，第一電泳分離介質(zhì)定向在從上方或下方和第二電泳分離介質(zhì)間隔一個(gè)間隙的水平平面中，在第一電泳分離介質(zhì)中進(jìn)行樣品混合物的第一維分離，同時(shí)第一和第二介質(zhì)由不導(dǎo)電液體分離，不導(dǎo)電液體具有低粘度和低揮發(fā)性，基本不可燃，基本與水不互溶，并且不能萃取出水；c.在進(jìn)行第一分離之后傾斜支撐機(jī)構(gòu)，使得第一電泳分離介質(zhì)和水平面形成一角度，并在第一電泳分離介質(zhì)和第二電泳分離介質(zhì)之間的間隙中沖洗出液體；和d.使包含橋接材料的液體緩沖劑，典型地是包含緩沖劑的瓊脂糖膠，流入間隙，以在電場(chǎng)的影響下允許樣品分子從第一電泳分離介質(zhì)轉(zhuǎn)移到第二電泳分離介質(zhì)。
在此使用的術(shù)語(yǔ)“不能萃取出水”覆蓋了完全不與水互溶和因此并不吸收或吸附任何水的液體。有許多溶劑通常描述為不與水互溶，但事實(shí)上在變飽和及形成兩層之前它們可吸收一定數(shù)量的水。這樣的溶劑一般不適用于本發(fā)明，這是由于它們?cè)谏形此柡椭皩哪z或IPG條抽出水和因此脫水成凝膠或IPG條，而如果它們飽和了，將在IPG條上進(jìn)行第一維分離的12-48小時(shí)的相對(duì)長(zhǎng)時(shí)間內(nèi)不能充分電絕緣。
第一電泳分離介質(zhì)較佳地至少部分由可除去的覆蓋物包圍，這樣允許支撐機(jī)構(gòu)為垂直方向時(shí)，典型地使用包含要分離樣品的液體使介質(zhì)再水合。
可除去的覆蓋物最優(yōu)選由金屬箔等制成。IPG條的存放期取決于它們保持的條件。如果保持完全干燥，IPG條可保存很多年。然而，空氣可引起條的氧化，大氣中存在的水蒸汽也會(huì)增加條的降解速率，因此優(yōu)選是氣密性密封。2D凝膠板的存放期典型地是一年，因此IPG上的密封需要在至少如此長(zhǎng)的時(shí)間內(nèi)保持IPG條處于良好狀態(tài)。由于它們氣密性不如金屬箔并且不可能保持IPG到要求的一年時(shí)間，因此塑料膜相反并不能提供良好的密封。
與其中支撐機(jī)構(gòu)可以水平或水平和垂直定向的現(xiàn)有技術(shù)比較，支撐機(jī)構(gòu)同樣垂直定向時(shí)可以進(jìn)行全部的二維電泳分離，因此系統(tǒng)可以實(shí)現(xiàn)機(jī)械化。
非傳導(dǎo)性液體最優(yōu)選是石蠟油，它和水互不溶合，不能萃取出水，具有較高的疏水性和相對(duì)低的粘度。由于它允許石蠟油填充在IPS條和凝膠板之間相對(duì)窄(典型地為1-4mm)和回旋的間隙內(nèi)，低粘度是有利的。根據(jù)間隙尺寸，優(yōu)選是粘度至多為30mm2/S的油，典型地使用10-25mm2/S。由于用于橋接間隙的瓊脂糖具有比IPG條和2d凝膠板兩者大的孔徑大小，這會(huì)是不利的。因此擴(kuò)散傾向于在瓊脂糖膠中發(fā)生，由于運(yùn)行時(shí)間更短和發(fā)生較小的擴(kuò)散，間隙越窄越好。


圖14A是組裝盒子另外結(jié)構(gòu)的前正視圖；和圖15A-15E是盒子另外結(jié)構(gòu)的橫向截面圖。
IPG 12在第二維凝膠頂面上距離該頂面大約2mm的間隙16，并和第二維凝膠的頂表面充分平行。在IPG 12的末端和盒子10的側(cè)面之間保持大約5mm的間隙18，以允許用于第二分離的電極橋材料插入。盡管圖中顯示的裝置使單個(gè)IPG 12平行于第二維凝膠的頂部，并距離第二維凝膠大約2mm，本領(lǐng)域技術(shù)人員很清楚地知道，這種設(shè)計(jì)的結(jié)合2-D凝膠可以以線性陣列包含一個(gè)或多個(gè)IPG，這些IPG與第二維凝膠頂部的間隔可以大于或小于2mm。
如圖3所示，在較佳實(shí)施例中，IPG固定到盒子的單一板20上。同樣如圖3所示，干燥IPG由薄金屬箔覆蓋片22覆蓋，該覆蓋片也固定到盒板上以提供可滲透液體的屏蔽物。IPG條的存放期典型地取決于保持它們的條件。如果保持完全干燥和冷凍或凝固，IPG條可保存多年。然而空氣可引起條的氧化，并且大氣中存在的水蒸汽也會(huì)增加條的降解速率，因此優(yōu)選是例如可以由金屬箔提供的氣密性密封。2D凝膠板的存放期典型地為一年，因此要求IPG的密封至少需要在如此長(zhǎng)的時(shí)間內(nèi)使IPG條保持為良好狀態(tài)。片可以由不是金屬箔的材料組成，然而它們應(yīng)當(dāng)是不透氣的。隨后連接盒子10的前板，并在盒子中鑄塑第二維凝膠14，從而形成完成的盒子。
為加載樣品，在覆蓋片116中的一個(gè)耳狀件158中制造一個(gè)小孔，并向由覆蓋物形成的圍繞IPG 12的空間中引入液體樣品。由于不被吸收的任何液體會(huì)包含蛋白質(zhì)并因此減少負(fù)載，重要的是僅引入足夠的液體來(lái)再水合IPG 12。允許干燥IPG 12再水合，直到已經(jīng)吸收所有的液體。在再水合處理之后，通過(guò)使用一個(gè)或兩個(gè)耳狀件158作為把手將覆蓋物156從盒子剝離，從而取下該覆蓋物。
或者可以如圖1中那樣在不含有IPG覆蓋物的盒中加載樣品，但這并不有利。在此實(shí)施例中，如圖1所示的盒子如圖2所示水平放置，IPG凝膠朝上或朝下，并使用注射器將再水合液體仔細(xì)放置到IPG表面上。毛細(xì)作用將再水合液體保持在IPG表面上，空氣作為IPG和第二維凝膠之間間隙中的屏蔽物，從而防止再水合液體接觸第二維凝膠。盡管圖1中所示的盒子的實(shí)施例顯示了使用空氣作為再水合處理期間凝膠之間的屏蔽物，本領(lǐng)域技術(shù)人員很清楚地知道，這種設(shè)計(jì)的結(jié)合2-D凝膠可以使用不是空氣的其他氣體，或液體、固體作為再水合期間的屏蔽物。
如圖6和7所示，在已經(jīng)再水合IPG凝膠之后，必須放置一個(gè)電極橋與IPG的每一端接觸。如圖7所示，電極橋材料32在每一端保持在盒子的變寬部分30內(nèi)。電極橋材料通常是切割到一定尺寸和由凈化水潤(rùn)濕的厚濾紙。具有變寬部分30的優(yōu)點(diǎn)在于可以使用更大更厚的濾紙片作為橋接材料。由于凝膠上施加電場(chǎng)期間，橋接材料用于吸收IPG中不希望的雜散離子材料，因此更大更厚的濾紙片是有利的。然而，電極材料可以由任何固體、惰性、非離子、吸水性材料組成。此外，在一些情況下需要在緩沖劑或例如用于IEF的樣品增溶溶液中浸泡電極材料。例如，當(dāng)在電極橋材料中要求高度增溶條件以促進(jìn)在IPG pH范圍內(nèi)不是等電的蛋白質(zhì)的脫除，可以使用IEF增溶溶液。電極材料用作凝膠和電極之間的容器，其中離子污染物和來(lái)自樣品的非等電蛋白質(zhì)可收集而不干擾分離。具有變寬部分30的優(yōu)點(diǎn)在于可以用更大更厚的濾紙片作為橋接材料，它可吸收更多的雜散離子材料。如圖6所示，電極34通常是銷形，以允許在電極橋接材料中的滲透和良好接觸。
在使用中，在插入電極橋材料之后，采用屏蔽材料填充IPG和第二維凝膠之間的間隙，以防止在IEF步驟期間IPG的再水合，并防止經(jīng)過(guò)間隙的傳導(dǎo)。此外，屏蔽物防止在IEF期間液體在第一和第二維凝膠之間的任何轉(zhuǎn)移。屏蔽材料必須與水互不溶合，并且不能萃取出水，也就是必須不吸收或吸附任何水。有許多溶劑描述為不與水互溶，但事實(shí)上它們?cè)谧冿柡图靶纬蓛蓪又翱晌找欢〝?shù)量的水。由于如果它們還沒(méi)有水飽和，以及飽和但在IPG條上進(jìn)行第一維分離的相對(duì)長(zhǎng)時(shí)間12-48小時(shí)內(nèi)沒(méi)有足夠電絕緣，它們將從凝膠或IPG條抽出水，因此這樣的溶劑一般不適用于本發(fā)明。
在較佳實(shí)施例中，屏蔽材料是輕石蠟油，例如由位于澳大利亞墨爾本春天大街1號(hào)的澳大利亞殼牌有限公司(the Shell Company of Australia Limitedof 1 Spring Street，Melbourne，VIC，3000，Australian)提供的“Shell Ondina Oil15”，它是嚴(yán)格精煉以除去任何具有任何程度化學(xué)活性的物質(zhì)的精制透明醫(yī)療石蠟油，因此是非常溫和的具有化學(xué)惰性的水透明產(chǎn)物。該產(chǎn)物在ISO粘度等級(jí)32和68中獲得，然而，在40℃下粘度典型地是15.6mm2/S的ISO 15是優(yōu)選粘度等級(jí)。但是，本領(lǐng)域技術(shù)人員清楚地知道，滿足上述特性的具有更高或更低密度的石蠟油，或其它油都可以是合適的屏蔽材料。在盒子處于圖8所示的垂直位置的情況下，使用移液管注入石蠟油。將電極放入電極橋接材料中，并在盒子處于垂直位置的情況下進(jìn)行IEF。
為在IEF之后促進(jìn)蛋白質(zhì)從IPG向第二維凝膠的轉(zhuǎn)移，IPG要求與合適的緩沖劑保持平衡。在典型的2-D凝膠中，平衡緩沖劑包含例如二硫蘇糖醇或三丁基膦的還原劑，以及結(jié)合到蛋白質(zhì)上和比較首要負(fù)電荷的表面活性劑十二烷基硫酸鈉(SDS)。負(fù)電荷允許蛋白質(zhì)根據(jù)分子量在第二維中分離。在本發(fā)明的較佳實(shí)施例中，通過(guò)用包含SDS的熔融0.5％瓊脂糖溶液和適當(dāng)緩沖劑替換石蠟油屏蔽物而進(jìn)行IPG平衡和SDS結(jié)合。在較佳實(shí)施例中，在第一維分離之前還原和烷基化蛋白質(zhì)。然而，如果已經(jīng)在第一維中以它們的還原形式分離了蛋白質(zhì)，將例如二硫蘇糖醇或三丁基膦的還原劑加入到瓊脂糖中。熔融瓊脂糖(典型地為1-5mL)溶液沖洗過(guò)第一和第二維凝膠之間的間隙，因此完全除去石蠟油。最后允許包含SDS、甘油和緩沖劑的熔融瓊脂糖在第一和第二維凝膠之間的間隙中凝固，從而橋接該間隙，并允許蛋白質(zhì)轉(zhuǎn)移。為促進(jìn)熱瓊脂糖的加入，必須使盒子處于如圖8所示的傾斜的垂直位置。當(dāng)已經(jīng)將空氣泡沖洗出間隙時(shí)，將盒子返回到圖6所示的正常的垂直位置并在室溫下靜置20分鐘，以允許瓊脂糖凝固，并允許TBP和SDS擴(kuò)散到IPG中。根據(jù)樣品和蛋白質(zhì)負(fù)載，靜置時(shí)間可以從零到大于20分鐘。由于這種系統(tǒng)簡(jiǎn)單并易于形成自動(dòng)化，因而這種系統(tǒng)得到特別推薦。
在本發(fā)明第二次佳實(shí)施例中，可以使用包含脲、SDS、還原劑、緩沖劑和甘油的普通平衡溶液代替石蠟屏蔽物沖洗間隙。允許將此平衡溶液保持在盒子中5分鐘至30分鐘和通常改變10次，然而本領(lǐng)域技術(shù)人員清楚地知道，在不背離本發(fā)明的精神或損害獲得的凝膠的情況下，可以改變平衡時(shí)間和變化次數(shù)。
根據(jù)普通程序進(jìn)行第二維凝膠的運(yùn)行和隨后染色。圖9示出了圖1所示的盒子中運(yùn)行的鼠肝的銀染色2-D凝膠。很清楚，再水合和IEF步驟執(zhí)行得很好，并且使用的屏蔽材料防止了樣品向第二維的任何過(guò)早轉(zhuǎn)移。
在一個(gè)較佳實(shí)施例中，盒子10包括前板116和背板118。如圖12和13所示，前板118含有前部面120、背部面122以及頂部、底部、左和右側(cè)邊緣124、126、128和130。在前板116的背部面122上，鄰近左和右側(cè)128和130提供了間隔條132和134。如圖10和11所示，背板118含有前部面136、背部面138以及頂部、底部、左和右側(cè)邊緣140、142、144和146。在背板118的前部面136上，鄰近左和右側(cè)142和144提供了間隔條148和150。前板可由塑料、玻璃或其它合適材料組成。優(yōu)選使用塑料，這是由于它是透明的、相對(duì)便宜并且容易制造。
將前板和背板116和118結(jié)合在一起，使背板118的前部面136朝向前板116的背部面122，間隔條132和134與間隔條148和150成一直線?？梢圆捎谜澈蟿?、超聲焊接或任何其它合適措施將前板和背板116和118結(jié)合在一起。可以采用中間安裝和/或互鎖部分配置前板116上的間隔條132和134與背板118上的間隔條148和150，以有助于排列板和將板保持在一起。在另外的構(gòu)造中，可以僅在前板116上(參見(jiàn)圖15B)，或僅在背板118上(參見(jiàn)圖15C)提供間隔片，或者可以在前板上提供在盒子一側(cè)的間隔片，在背板上提供盒子另一側(cè)的間隔片(參見(jiàn)圖15D)。此外，可以在背板上提供單獨(dú)的間隔片(參見(jiàn)圖15E)。在還有一種構(gòu)造中，可以在前板和后板之間沿它們各自的底部邊緣提供間隔片。此間隔片可以由在前板和背板上，或僅在前板或背板上的間隔條形成，或由一個(gè)單獨(dú)的片形成。然而，通常較佳的是盒子10在底部打開，以方便形成第二維凝膠14。
背板118的前部面136優(yōu)選含有用于接收和保持IPG12的壓痕或凹口152。可以采用粘合劑在壓痕或凹口152中固定IPG12，或可以提供夾子或固定器以固定IPG。在此較佳實(shí)施例中，提供與后板整體形成的彈性?shī)A子154以在凹口152中固定IPG。在IPG12上提供可除去的覆蓋物156。覆蓋物156優(yōu)選由背板118密封，但可以容易地從背板118除去。覆蓋物156保護(hù)IPG12，并能方便地再水合IPG。覆蓋物156優(yōu)選由柔性片材料制成，并且具有至少一個(gè)——優(yōu)選地是兩個(gè)——超過(guò)盒子10頂部向上延伸的“耳狀件”158，使得耳狀件可以方便地打開覆蓋物，以再水合IPG12，并因此抓緊覆蓋物，以將它從背板118拆去。這些耳狀件158優(yōu)選為閉端管的形式。覆蓋物156優(yōu)選由金屬箔制成，這樣它堅(jiān)固且柔軟，并仍然可以提供液體和氣體緊密密封。金屬箔的導(dǎo)電性也有助于對(duì)抗將降解覆蓋物和/或IPG12的局部腐蝕。金屬箔可以與例如膜或油漆的導(dǎo)電塑料層結(jié)合，這樣改進(jìn)了覆蓋物的耐腐蝕性和強(qiáng)度，從而能抵抗脫除期間的斷裂。覆蓋物156可以采用粘合劑或由超聲焊接固定。由于IPG12再水合以促進(jìn)覆蓋物156的脫除，由水分軟化的粘合劑具有弱化的優(yōu)點(diǎn)。
在圖14A所示的另外構(gòu)造中，覆蓋物156由拉環(huán)160和弱襯里162和164構(gòu)成，這樣當(dāng)拉動(dòng)拉環(huán)時(shí)，僅除去覆蓋物的中心部分，留下末端部分，這是因?yàn)樗鼈兊膶?dǎo)電性可以用作第一分離的電極。覆蓋物的其它另外構(gòu)造包括剛性覆蓋物，而不是柔性覆蓋物。
可以在背板118的前部面136中形成凹槽或槽道，以促進(jìn)插入紙電極從而接觸IPG12。
前板116含有切斷器166，這樣當(dāng)盒子10面對(duì)面結(jié)合時(shí)，在它們之間形成連接容器，用于在第一階段期間固定絕緣材料。
本領(lǐng)域技術(shù)人員應(yīng)當(dāng)理解，在不背離概括介紹的本發(fā)明的精神或范圍的情況下，可以對(duì)具體實(shí)施例所示的本發(fā)明進(jìn)行大量的修改或修正。因此本實(shí)施例在各個(gè)方面都是對(duì)發(fā)明的展示，而不是限制。
權(quán)利要求
1.一種通過(guò)二維電泳將樣品分離成組分的方法，該方法包括a.提供包括伸長(zhǎng)條的第一電泳分離介質(zhì)以及第二電泳分離介質(zhì)，所述介質(zhì)被隔離并在單一支撐機(jī)構(gòu)上處理；b.將平面支撐機(jī)構(gòu)定位在通常垂直的平面，第一電泳分離介質(zhì)定位在位于第二電泳分離介質(zhì)上方或下方并相隔一定間隙的水平平面，在第一電泳分離介質(zhì)中進(jìn)行樣品混合物的第一維分離，此時(shí)第一和第二介質(zhì)由和水充分互不相溶并且不能萃取出水的不導(dǎo)電液體分離；c.在進(jìn)行第一分離之后傾斜支撐機(jī)構(gòu)，使第一電泳分離介質(zhì)和水平面形成一角度，并從第一電泳分離介質(zhì)和第二電泳分離介質(zhì)之間的間隙沖洗出液體；和d.將包含橋接材料的液體緩沖劑流入間隙，以在電場(chǎng)的影響下允許樣品分子從第一電泳分離介質(zhì)轉(zhuǎn)移到第二電泳分離介質(zhì)。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其中當(dāng)支撐裝置處于垂直定位時(shí)，使用包含要分離的樣品的液體，用允許介質(zhì)再水合的可除去的金屬箔覆蓋物包圍至少部分第一電泳分離介質(zhì)。
3.根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的方法，其中不導(dǎo)電液體是石蠟油。
4.根據(jù)上述任何一項(xiàng)權(quán)利要求所述的方法，其中第一電泳分離介質(zhì)包括一個(gè)IPG條。
5.根據(jù)上述任何一項(xiàng)權(quán)利要求所述的方法，其中第二電泳分離介質(zhì)包括一個(gè)凝膠板。
6.根據(jù)上述任何一項(xiàng)權(quán)利要求所述的方法，其中支撐機(jī)構(gòu)包括通常為平面的支撐體。
7.根據(jù)上述任何一項(xiàng)權(quán)利要求所述的方法，其中包含橋接材料的液體緩沖劑包括含緩沖劑的瓊脂糖膠。
8.一種通過(guò)二維電泳將樣品分離成組分的裝置，該裝置包括包括一個(gè)伸長(zhǎng)條的第一電泳分離介質(zhì)；第二電泳分離介質(zhì)，所述兩種介質(zhì)被隔離并在一個(gè)通常為平面的單獨(dú)支撐機(jī)構(gòu)上處理；和包括薄膜的覆蓋物機(jī)構(gòu)，它與平面支撐機(jī)構(gòu)共同包圍伸長(zhǎng)條。
9.根據(jù)權(quán)利要求8所述的裝置，其中形成覆蓋物機(jī)構(gòu)的薄膜是導(dǎo)電的。
10.根據(jù)權(quán)利要求9所述的裝置，其中形成覆蓋物機(jī)構(gòu)的薄膜包括一個(gè)金屬箔。
11.根據(jù)權(quán)利要求8所述的裝置，其中介質(zhì)由1-4mm的間隙隔離。
12.根據(jù)權(quán)利要求8或9所述的裝置，其中固體支撐體形成含有前壁、后壁和相對(duì)的側(cè)壁的盒子的一部分，并且其中條的末端與盒子相鄰側(cè)壁間隔約5mm的間隙。
13.根據(jù)權(quán)利要求12所述的裝置，其中盒子確定了鄰近條末端的變寬的電極橋部分。
14.一種二維電泳凝膠盒，包括含有平面支撐表面的盒殼；包括支撐在平面支撐表面上的伸長(zhǎng)條的第一電泳分離介質(zhì)；包括支撐在平面表面上的板的第二電泳分離介質(zhì)；和可除去的薄膜覆蓋物，它與盒殼的平面支撐表面共同包圍第一介質(zhì)；盒殼確定在第一和第二介質(zhì)之間的液體保持空間。
15.根據(jù)權(quán)利要求14所述的盒子，其中第一介質(zhì)處于脫水狀態(tài)，并且可除去的薄膜覆蓋物可開啟，以形成在第一介質(zhì)周圍的用于再水合第一介質(zhì)的開放流體保持空間。
16.根據(jù)權(quán)利要求14所述的盒子，其中當(dāng)平面支撐體為基本垂直定位時(shí)，可除去的薄膜覆蓋物開啟以形成流體保持空間。
17.根據(jù)權(quán)利要求14所述的盒子，其中可除去的薄膜是導(dǎo)電的。
18.根據(jù)權(quán)利要求14所述的盒子，其中可除去的薄膜覆蓋物包括一個(gè)金屬箔。
19.根據(jù)權(quán)利要求14所述的盒子，其中可除去的薄膜覆蓋物包括一個(gè)導(dǎo)電的塑料箔。
20.一種二維電泳凝膠盒，包括含有平面支撐表面的盒殼；包括支撐在平面支撐表面上的伸長(zhǎng)條的第一電泳分離介質(zhì)；包括支撐在平面表面上的板的第二電泳分離介質(zhì)；和可除去的薄膜覆蓋物，它與盒殼的平面支撐表面共同包圍第一介質(zhì)；盒殼確定在第一和第二介質(zhì)之間的流體保持空間；其中已經(jīng)除去覆蓋物并且在第一和第二介質(zhì)之間的流體保持空間中布置了不導(dǎo)電液體，使得第一介質(zhì)可用于進(jìn)行電泳分離。
21.一種二維電泳凝膠盒，包括含有平面支撐表面的盒殼；包括支撐在平面支撐表面上的伸長(zhǎng)條的第一電泳分離介質(zhì)；包括支撐在平面表面上的板的第二電泳分離介質(zhì)；和可除去的薄膜覆蓋物，它與盒殼的平面支撐表面共同包圍第一介質(zhì)；盒殼確定在第一和第二介質(zhì)之間的流體保持空間；其中已經(jīng)除去覆蓋物并且第一介質(zhì)用于第一電泳分離，在第一和第二介質(zhì)之間的流體保持空間中布置了橋接材料，使得第二介質(zhì)可用于對(duì)在第一介質(zhì)中電泳分離的材料進(jìn)行電泳分離。
22.一種使用盒子通過(guò)二維電泳將樣品分離成組分的方法，盒子包括含有平面支撐表面的盒殼；包括支撐在平面支撐表面上的伸長(zhǎng)條的第一電泳分離介質(zhì)；包括支撐在平面表面上的板的第二電泳分離介質(zhì)；和可除去的薄膜覆蓋物，它與盒殼的平面支撐表面共同包圍第一介質(zhì)；該方法包括除去覆蓋物，向第一介質(zhì)中引入樣品，在第一和第二介質(zhì)之間引入不導(dǎo)電流體；使用第一介質(zhì)進(jìn)行第一電泳分離；用橋接材料替換不導(dǎo)電流體；使用第二介質(zhì)對(duì)在第一電泳分離中分離的材料進(jìn)行第二電泳分離。
23.根據(jù)權(quán)利要求22所述的方法，其中初始以脫水狀態(tài)提供第一介質(zhì)，并進(jìn)一步包括如下步驟開啟覆蓋物，以形成圍繞腔室能夠保持流體的空間，以及在空間中引入流體用于再水合第一介質(zhì)。
全文摘要
由二維電泳將樣品分離成組分的方法使用在空間上分隔并在一個(gè)通常為平面的單獨(dú)支撐裝置上處理的IPG條和凝膠板。首先將平面支撐機(jī)構(gòu)定位在通常垂直的平面，將第一電泳分離介質(zhì)定位在第二電泳分離介質(zhì)上方或下方并相隔一定間隙的水平面上。然后對(duì)條中的樣品混合物進(jìn)行第一維分離，此時(shí)條和板由基本與水互不溶合并且不能萃取出水的不導(dǎo)電液體分離。在進(jìn)行第一分離之后傾斜支撐機(jī)構(gòu)，使得第一條和水平面形成一角度，從條和板之間的間隙沖洗出石蠟。然后將包含緩沖劑的瓊脂糖膠流入間隙，以在電場(chǎng)的影響下允許樣品分子從條轉(zhuǎn)移到板。
文檔編號(hào)G01N27/447GK1466593SQ01816334
公開日2004年1月7日 申請(qǐng)日期2001年9月28日 優(yōu)先權(quán)日2000年9月29日
發(fā)明者本·赫伯特, 本 赫伯特 申請(qǐng)人:普羅托姆系統(tǒng)有限公司