專利名稱：一種檢測(cè)前哨淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明屬生物材料檢測(cè)領(lǐng)域，具體涉及一種提高前哨淋巴結(jié)病理檢查準(zhǔn)確性的方法。
術(shù)中SLN的病理檢查是乳腺癌前哨淋巴結(jié)活檢中的關(guān)鍵步驟，其意義在于能指導(dǎo)進(jìn)一步手術(shù)方案。如果術(shù)中SLN病理檢查為陰性，而術(shù)后石蠟切片發(fā)現(xiàn)淋巴結(jié)中有癌轉(zhuǎn)移，則患者需接受第二次手術(shù)，這對(duì)于身心已受到沉重打擊的乳腺癌患者來說，無疑是雪上加霜，而且兩次手術(shù)也增加了醫(yī)療費(fèi)用。如果術(shù)中SLN病理為陽性而行腋淋巴結(jié)清掃，術(shù)后石蠟切片卻未發(fā)現(xiàn)淋巴結(jié)中有癌轉(zhuǎn)移，則增加了術(shù)后上肢水腫、肩關(guān)節(jié)運(yùn)動(dòng)受限等并發(fā)癥。
前哨淋巴結(jié)術(shù)中病理檢查的方法有多種。Veronesi等報(bào)道術(shù)中SLN冰凍檢查的準(zhǔn)確率為83.2％，假陰性率為24％。Turner等術(shù)中聯(lián)合應(yīng)用冰凍切片及印片的方法對(duì)SLN進(jìn)行病理診斷，準(zhǔn)確率為93.2％，假陰性率為8.4％。當(dāng)對(duì)SLN的石蠟標(biāo)本行連續(xù)切片進(jìn)行轉(zhuǎn)移灶檢測(cè)后，此術(shù)中聯(lián)合診斷方法的假陰性率可上升到25.8％。Viale等術(shù)中對(duì)SLN行連續(xù)切片及快速免疫組化染色，雖然提高了SLN轉(zhuǎn)移的檢出率，但其缺點(diǎn)為損失了大量的淋巴結(jié)組織，而無法進(jìn)行石蠟切片的最終診斷，且延長(zhǎng)了術(shù)中的等候時(shí)間，費(fèi)用昂貴，無法在我國(guó)普及。國(guó)內(nèi)蘇逢錫等報(bào)告術(shù)中單一使用冰凍切片進(jìn)行SLN病理檢查，與石蠟病理相符率僅為91.3％。
本發(fā)明方法按下述步驟進(jìn)行1.注射示蹤劑本發(fā)明使用的放射性示蹤劑為99mTc標(biāo)記的硫膠體(99mTc-Sulphur colloid，99mTc-SC)，標(biāo)記率＞95％。使用的γ探測(cè)儀為Capintec Gammed IV，配備CdTe半導(dǎo)體探頭(Capentic，Inc.，美國(guó))。使用單光子發(fā)射斷層掃描儀(SPECT)行術(shù)前淋巴顯像，型號(hào)ELSCINTAPEX-409AG，配備低能高分辨率平行孔準(zhǔn)直器。術(shù)前10～16個(gè)小時(shí)將注射在患者腫瘤周圍的3，6，9，12點(diǎn)的乳腺組織中。每一點(diǎn)的注射量為0.5～1.0ml，放射活度為1.0～2.5mCi。2.術(shù)前淋巴顯像注射99mTc-SC后，于5、30、60、120，240分鐘以及11-16小時(shí)應(yīng)用SPECT進(jìn)行前位及前斜位淋巴顯像。3.熱點(diǎn)探測(cè)術(shù)前采用γ探測(cè)儀由注射點(diǎn)向腋窩、內(nèi)乳區(qū)、鎖骨上區(qū)及鎖骨下區(qū)反復(fù)探測(cè)放射性藥物熱點(diǎn)的分布情況。熱點(diǎn)(Hot spot)的定義為腋窩或內(nèi)乳區(qū)注射點(diǎn)以外的放射性計(jì)數(shù)最高的點(diǎn)，其10秒鐘γ-計(jì)數(shù)至少高出25點(diǎn)。找出熱點(diǎn)后在皮膚上做標(biāo)記。4.前哨淋巴結(jié)活檢連續(xù)硬膜外麻醉成功后，先切取腫塊送冰凍檢查證實(shí)診斷。而后在皮膚標(biāo)記的熱點(diǎn)附近選取前哨淋巴結(jié)活檢的切口，方向與行腋窩清掃的切口一致。術(shù)中在γ-探測(cè)儀上顯示的計(jì)數(shù)、聲音頻度的導(dǎo)引下調(diào)整方向，逐層切開，找到放射性核素濃聚的淋巴結(jié)即前哨淋巴結(jié)，予以摘除。切取淋巴結(jié)的部位以及體外放射計(jì)數(shù)均分別記錄。5.病理檢查對(duì)前哨淋巴結(jié)進(jìn)行細(xì)針穿刺后做細(xì)胞學(xué)檢查。然后其中一半淋巴結(jié)仍可進(jìn)行冰凍切片檢查，另一半可用于后續(xù)分子生物學(xué)檢測(cè)。手術(shù)結(jié)束后，所有標(biāo)本立即浸泡于福爾馬林溶液中固定，24小時(shí)內(nèi)做石蠟包埋，行常規(guī)病理檢查。
所述細(xì)針穿刺細(xì)胞學(xué)檢查的具體步驟為用一手固定前哨淋巴結(jié)，另一手持套有7號(hào)針頭的10ml一次性針筒，取前哨淋巴結(jié)上、前、左三個(gè)穿刺點(diǎn)進(jìn)行細(xì)針穿刺，每個(gè)穿刺點(diǎn)各取淺、中、深三個(gè)平面，(以1/4為界)吸取細(xì)胞，反復(fù)抽吸數(shù)次。如抽吸后針頭內(nèi)有少量血液或組織液，則可拔針；如未見液體，則出針前將針頭與針筒分離，排出筒中氣體，除去負(fù)壓后針筒與針頭相連出針，送檢，制成均勻涂片，在涂片干燥前用乙醚酒精固定液固定，以防止細(xì)胞自溶。所述固定液每100ml中含95％酒精49.5ml，醫(yī)用乙醚49.5ml，冰醋酸1ml。固定10分鐘后，用水洗去固定液，浸入蘇木素染液5分鐘，水沖洗，在顯微鏡下觀察所取細(xì)胞，其中核大、核染色深、核漿比例失調(diào)的細(xì)胞為陽性。
本發(fā)明所述的冰凍切片檢查，使用恒溫冷凍切片，切片過程在恒溫箱內(nèi)進(jìn)行。所用儀器包括組織托盤和切片刀冷凍溫度穩(wěn)定在-20℃，使用自動(dòng)貼片裝置，切片厚度為5um，組織塊大于1×1cm。
本發(fā)明聯(lián)合檢測(cè)方法的優(yōu)點(diǎn)為1.冰凍切片為組織學(xué)檢查，細(xì)針穿刺為細(xì)胞學(xué)檢查，它能不同角度、不同層面地吸取細(xì)胞，可檢測(cè)到位于其它層面的轉(zhuǎn)移灶。所述兩種檢查方法的結(jié)合，能保證有足夠的淋巴組織用于石蠟切片的檢查。2.冰凍切片與石蠟切片只能對(duì)一半SLN進(jìn)行檢查(一半用于分子生物學(xué)檢測(cè))，而細(xì)針穿刺能吸取另一半SLN的細(xì)胞而不影響其后續(xù)分子生物學(xué)的檢測(cè)。3.術(shù)中等侯時(shí)間短，冰凍切片約需20分鐘，細(xì)針穿刺約需15分鐘，兩種檢查能同時(shí)進(jìn)行。4.醫(yī)療成本低。
權(quán)利要求
1.一種檢測(cè)前哨淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的方法，采用放射性核素作為示蹤劑，術(shù)前進(jìn)行淋巴顯像，術(shù)中在γ探測(cè)儀引導(dǎo)下進(jìn)行前哨淋巴結(jié)活檢，其特征在于術(shù)中病理檢查是聯(lián)合使用冰凍切片檢查與細(xì)針穿刺檢查的方法，
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的檢測(cè)前哨淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的方法，其特征在于所述的細(xì)針穿刺檢查方法中，對(duì)前哨淋巴結(jié)進(jìn)行多角度多層面的細(xì)針穿刺后做細(xì)胞學(xué)檢查，然后，其中一半淋巴結(jié)進(jìn)行冰凍切片檢查，另一半用于后續(xù)分子生物學(xué)檢測(cè)。
3.根據(jù)權(quán)利要求1和2所述的檢測(cè)前哨淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的方法，其特征在于所述的細(xì)針穿刺檢查方法中，取前哨淋巴結(jié)上、前、左三個(gè)穿刺點(diǎn)進(jìn)行細(xì)針穿刺，每個(gè)穿刺點(diǎn)以1/4為界，各取淺、中、深三個(gè)平面吸取細(xì)胞。
4.根據(jù)權(quán)利要求1和2所述的檢測(cè)前哨淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的方法，其特征在于所述的細(xì)針穿刺檢查方法中，采用套有7號(hào)針頭的10ml一次性針筒。
5.據(jù)權(quán)利要求1所述的檢測(cè)前哨淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的方法，其特征在于所述的細(xì)針穿刺檢查方法中，吸取細(xì)胞后制成均勻涂片，在涂片干燥前用乙醚酒精固定液固定，以防止細(xì)胞自溶，所述固定液每100ml中含95％酒精49.5ml，醫(yī)用乙醚49.5ml，冰醋酸1ml。
6.根據(jù)權(quán)利要求1所述的檢測(cè)前哨淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的方法，其特征在于所述的冰凍切片檢查，使用恒溫冷凍切片，切片過程在恒溫箱內(nèi)進(jìn)行，所用儀器冷凍溫度穩(wěn)定在-20℃。
全文摘要
本發(fā)明屬生物材料檢測(cè)領(lǐng)域，具體涉及一種提高前哨淋巴結(jié)病理檢查準(zhǔn)確性的方法。本發(fā)明采用放射性核素作為示蹤劑，術(shù)前進(jìn)行淋巴顯像，術(shù)中在γ探測(cè)儀引導(dǎo)下進(jìn)行前哨淋巴結(jié)活檢，聯(lián)合使用冰凍切片與細(xì)針穿刺的方法，可從不同角度、不同層面地吸取細(xì)胞，檢測(cè)其它層面的轉(zhuǎn)移灶，并保證有足夠的淋巴組織用于后續(xù)石蠟切片和分子生物學(xué)的檢測(cè)。本方法可明顯提高術(shù)中前哨淋巴結(jié)病理檢查的準(zhǔn)確性。具有不損傷前哨淋巴結(jié)細(xì)胞結(jié)構(gòu)和術(shù)中等候時(shí)間短、醫(yī)療成本低等優(yōu)點(diǎn)。
文檔編號(hào)G01N33/60GK1412561SQ0213650
公開日2003年4月23日 申請(qǐng)日期2002年8月14日 優(yōu)先權(quán)日2002年8月14日
發(fā)明者張 杰, 沈坤煒, 尼爾馬, 沈鎮(zhèn)宙, 邵志敏, 韓企夏, 劉邦令, 莊傳經(jīng), 吳炅, 陸勁松, 柳光宇, 張家新 申請(qǐng)人:復(fù)旦大學(xué)附屬腫瘤醫(yī)院