專利名稱：全血乳酸濃度檢測試紙條的制作方法
技術領域：
本發(fā)明涉及利用顯色反應檢測全血中乳酸濃度的試紙條，用于定量快速測量血液乳酸水平。
背景技術：
乳酸(Lactic acid，LA)為體內糖酵解的最終產(chǎn)物。代謝性酸中毒最常見的一種類型就是乳酸升高性酸中毒。如呼吸衰竭、組織缺氧、敗血癥、惡性腫瘤導致組織耗氧量增加，糖乳病酮癥都可引起乳酸濃度升高。肝病、多種藥物反應及中毒等情況下，也可有乳酸濃度增加。
近年來，在診斷中，血液乳酸濃度的含量得到越來越多的重視。以往，血液乳酸主要在大型血液生化分析儀上進行測試。但該方法存在的問題是需要使用特殊裝置，測定所需血量較多、時間較長，價格昂貴，適合在大型醫(yī)院中能夠進行。本發(fā)明的目的在于為病人家庭和小型診所提供一種能夠方便快速測量血液乳酸含量的試紙，這種試紙與微型儀器聯(lián)用可以快速方便地測試全血中的乳酸濃度，無需依賴大型血液生化分析儀。該發(fā)明只需微量血液便可在一分鐘內測出血液乳酸的含量。
技術內容本發(fā)明的目的在于提供一種能夠在各種場所方便快速測量血液乳酸含量的試紙條。并且本發(fā)明只需微量血液便可在短時間內測出血液乳酸的含量。
本發(fā)明的全血乳酸濃度檢測試紙條，包括用于做試紙條支架的疏水基底，疏水基底上開有通孔，通孔內放有相同形狀、大小的血細胞阻隔膜，通孔外一側對應位置覆有酶膜。通孔的大小為允許所加血液樣本從該通孔流入血細胞阻隔膜和酶膜內。
所述的酶膜包括基材，基材上固定有乳酸氧化酶和過氧化物酶、顯色劑?；臑榫哂幸欢讖降哪猃埬?、醋酸纖維素膜、纖維素膜、聚偏二氟乙烯(PVDF)膜等，優(yōu)選為尼龍膜。乳酸氧化酶的含量為每平方厘米0.01-200μ活性單位，優(yōu)選為每平方厘米0.5-10μ活性單位；過氧化物酶的含量為每平方厘米0.01-200μ活性單位，優(yōu)選為每平方厘米0.2-15μ活性單位。顯色劑可以是單一組分的顯色劑或雙組分的顯色劑，其中單一組分的顯色劑包括芳香醇、芳香胺、聯(lián)苯胺等，如鄰-聯(lián)(二)茴香胺；雙組分的顯色劑典型的有3-二甲氨基苯甲酸和3-甲基-2-苯并噻唑啉酮腙鹽酸鹽(MBTH-DMAB)、3，5-二氯-2-羧基苯磺酸(DCHBS)和3-甲基-2-苯并噻唑啉酮腙鹽酸鹽(MBTH)等，優(yōu)選為3-二甲氨基苯甲酸和3-甲基-2-苯并噻唑啉酮腙鹽酸鹽(MBTH-DMAB)。
所述的疏水基底為聚氯乙烯材料。所述的血細胞阻隔膜由高分子材料制成，有一定的過濾孔徑，可以將血液中的血細胞與血漿有效分離，保證全血樣品經(jīng)過血細胞阻隔膜后，帶有顏色的血細胞被截留在細胞阻隔膜之上，只有血漿到達酶膜，參與反應。
這樣，當酶膜上的試劑與血液樣品發(fā)生反應時，生成的顏色物質在590nm處被檢測時，不會受到血細胞顏色的干擾。
在本發(fā)明中，制作該檢測試紙條的方法包括以下步驟(1)準備一個尼龍膜，該尼龍膜的帶電性可以根據(jù)溶液pH的改變而改變；(2)配置包含顯色劑3-二甲氨基苯甲酸和3-甲基-2-苯并噻唑啉酮腙鹽酸鹽的溶液，將尼龍膜浸漬在配好的上述溶液中一段時間，取出干燥；(3)配置包含乳酸氧化酶和過氧化物酶的酶液，將(2)干燥好的尼龍膜再浸入酶液中一段時間，取出干燥；
(4)將制好的酶膜粘貼在一個疏水基底1的開口處；(5)將裁好的與疏水基底1開口同樣大小的血細胞阻隔膜放入開口，與酶膜相接觸；(6)依照上述方法制好檢測試紙條后，將血液樣品滴在試紙條的開口處，樣品中的待測物乳酸通過血細胞阻隔膜后到達酶膜，與酶膜上的試劑反應，生成顏色物質，顏色物質滲透到酶膜的背面，形成顏色區(qū)；(7)用波長為590nm的光源照射顏色區(qū)，用光電轉換器接收來自顏色區(qū)的反射光，反射光的強度與顏色的深淺成反比，而顏色的深淺反應被測血液樣品中乳酸的濃度。
本發(fā)明所描述的構建試紙條的方法并不限于本發(fā)明，該方法除可用于本發(fā)明外，還可用于構建用于測量其它血液參數(shù)的試紙條，例如葡萄糖、尿酸、血酮、膽固醇等。


圖1為本發(fā)明的縱向剖面結構示意圖；圖2為本發(fā)明的一平面結構示意圖；圖3為本發(fā)明的另一平面結構示意圖；圖4為本發(fā)明一實施例測量的乳酸試紙條吸光度-濃度曲線圖。
具體實施例方式
一種用于測量全血中乳酸濃度的試紙條結構如圖1、圖2和圖3所示，包括用于做試紙條支架的疏水基底1，疏水基底上開有通孔，通孔內設有相同形狀、大小的血細胞阻隔膜3，通孔外一側對應位置覆有酶膜2。通孔的大小為允許所加血液樣本從該通孔流入血細胞阻隔膜和酶膜內。疏水基底1采用聚氯乙烯材料。血細胞阻隔膜3采用有一定過濾孔徑的高分子材料。酶膜2包括基材，基材采用具有一定孔徑的尼龍膜，上面固定有乳酸氧化酶和過氧化物酶、顯色劑。
其中，顯色劑溶液的配置在10ml 50％的乙醇溶液中加入20mg3-甲基-2-苯并噻唑啉酮腙鹽酸鹽和60mg 3-二甲氨基苯甲酸，完全溶解；酶溶液的配置在1ml磷酸鹽緩沖液(pH為6.5)中加入10活性單位的乳酸氧化酶、20活性單位的過氧化物酶和8mg的混合蛋白(主要是牛血清白蛋白)，溶解均勻。
將10cm2孔徑為的尼龍膜(孔徑0.5um)先浸漬在顯色劑溶液中，3分鐘后取出干燥，其次將干燥好的帶有顯色劑成分的尼龍膜再放入酶溶液中浸漬1分鐘，取出干燥。將最后干燥好的尼龍膜按一定的尺寸裁剪成小片粘貼到疏水基底支架上的開孔下方，然后將與疏水基底開孔大小一致的血細胞阻隔膜放入開口，與尼龍膜密切接觸，用于測試全血中乳酸濃度的基于顏色反應的試紙條即制作完成。
將濃度分別為3、4、5、6、7、8、9、10、12、14、16、20mg/dL的全血6微升分別滴加在上述方法制成的試紙條開孔反應區(qū)中，50秒后在試紙條反應區(qū)的下方通過檢測儀器測試其590nm波長處的吸光度，結果圖4所示。由此，由吸光度的大小即可反映出乳酸濃度。
權利要求
1.全血乳酸濃度檢測試紙條，包括用于做試紙條支架的疏水基底(1)，其特征在于疏水基底(1)上開有通孔，通孔內放有相同形狀、大小的血細胞阻隔膜(3)，通孔外一側對應位置覆有酶膜(2)；所述的通孔的大小允許所加血液樣本從該通孔流入血細胞阻隔膜(3)和酶膜(2)內；所述的酶膜(2)包括基材，基材上固定有乳酸氧化酶和過氧化物酶、顯色劑。
2.如權利要求1所述的全血乳酸濃度檢測試紙條，其特征在于所述的疏水基底(1)為聚氯乙烯材料。
3.如權利要求1所述的全血乳酸濃度檢測試紙條，其特征在于所述的血細胞阻隔膜(3)由高分子材料制成，有一定的過濾孔徑，可以將血液中的血細胞與血漿有效分離，保證全血樣品經(jīng)過血細胞阻隔膜(3)后，帶有顏色的血細胞被截留在細胞阻隔膜(3)之上，只有血漿到達酶膜(2)，參與反應。
4.如權利要求1所述的全血乳酸濃度檢測試紙條，其特征在于所述的乳酸氧化酶的含量為每平方厘米0.01-200μ活性單位，過氧化物酶的含量為每平方厘米0.01-200μ活性單位。
5.如權利要求1所述的全血乳酸濃度檢測試紙條，其特征在于所述的乳酸氧化酶的含量為每平方厘米0.5-10μ活性單位，過氧化物酶的含量為每平方厘米0.2-15μ活性單位。
6.如權利要求1所述的全血乳酸濃度檢測試紙條，其特征在于所述的顯色劑為3-二甲氨基苯甲酸和3-甲基-2-苯并噻唑啉酮腙鹽酸鹽(MBTH-DMAB)。
7.如權利要求1所述的全血乳酸濃度檢測試紙條，其特征在于所述的基材為具有一定孔徑的尼龍膜。
全文摘要
本發(fā)明涉及一種利用顯色反應檢測血液中乳酸濃度的試紙條，該試紙條包括疏水基底，疏水基底上開有通孔，通孔內放有相同形狀、大小的血細胞阻隔膜，通孔外一側對應位置覆有酶膜。疏水基底采用聚氯乙烯材料。血細胞阻隔膜采用有一定過濾孔徑的高分子材料。酶膜包括基材，上面固定有乳酸氧化酶和過氧化物酶、顯色劑。本發(fā)明可以快速準確地測定全血中的乳酸濃度，并可有效去除血細胞顏色對檢測的干擾。本發(fā)明使用簡便，并且只需微量血液便可在短時間內測出血液乳酸的含量。
文檔編號G01N33/66GK1456893SQ0312909
公開日2003年11月19日 申請日期2003年6月6日 優(yōu)先權日2003年6月6日
發(fā)明者管文軍, 李光, 潘敏, 陳裕泉 申請人:浙江大學